趙唯年，潘新波，趙麗娟，王艷紅，劉玉婷，賈忠，.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070；.蘭州市第二人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730046

菟絲子為旋花科植物南方菟絲子Cuscuta australisR.Br.或菟絲子Cuscuta ChinensisLam.的干燥成熟種子，味辛、甘，性平，歸肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)益肝腎、固精縮尿、安胎、明目、止瀉功效，用于肝腎不足、陽(yáng)痿遺精、遺尿尿頻等[1-2]。菟絲子質(zhì)堅(jiān)實(shí)，不易粉碎，有效成分不易溶出，臨床多用其炮制品。歷代菟絲子炮制方法較多，如鹽炙、酒炙、清炒、制餅等。2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》收載的菟絲子炮制品為鹽菟絲子。菟絲子主要含有酚酸、黃酮、多糖、生物堿、甾醇、氨基酸及微量元素等[3-5]，其中黃酮類和酚酸類化合物是其主要有效成分[6-7]。黃酮類和多糖是菟絲子中研究較多的化學(xué)成分，其中金絲桃苷、紫云英苷、槲皮素、異鼠李素等具有多種藥理活性，菟絲子總黃酮具有改善實(shí)驗(yàn)性心肌缺血、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、刺激內(nèi)分泌等多種功能[7-8]，菟絲子多糖具有降血糖、保護(hù)腦組織及抗衰老等作用，是發(fā)揮補(bǔ)益作用的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[8-9]。目前相關(guān)研究主要集中在質(zhì)量控制、不同炮制品中有效成分含量測(cè)定、提取工藝及藥理作用的利用與開(kāi)發(fā)[10-14]，而不同炮制方法對(duì)菟絲子炮制品整體質(zhì)量評(píng)價(jià)及炮制前后化學(xué)成分差異變化研究報(bào)道較少。本試驗(yàn)測(cè)定菟絲子不同炮制品醇提物中總黃酮、總多糖及7種主要藥效成分綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、紫云英苷、槲皮素、山柰酚和異鼠李素的含量，建立菟絲子生品及炮制品（清炒品、酒炙品、鹽炙品、制餅品）HPLC指紋圖譜，結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)，分析菟絲子炮制前后化學(xué)成分的變化規(guī)律及差異性，為菟絲子及炮制品的質(zhì)量控制評(píng)價(jià)及炮制機(jī)理研究提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 高效液相色譜儀（G1311C 四元泵，G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A柱溫箱，G1315D DAD檢測(cè)器），美國(guó)Agilent公司；Agilent openLAB control panel化學(xué)工作站，美國(guó)Agilent公司；752Pro紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海棱光技術(shù)有限公司；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；XPE105十萬(wàn)分之一電子天平，瑞士METTLER TOLEDO 公司；TH-600BQG數(shù)控超聲波清洗機(jī)，濟(jì)寧天華超聲電子儀器有限公司。

對(duì)照品綠原酸（批號(hào)B20782）、蘆?。ㄅ?hào)B20771）、金絲桃苷（批號(hào)B20631）、紫云英苷（批號(hào)B21704）、槲皮素（批號(hào)B20527）、山柰酚（批號(hào)B21126）、異鼠李素（批號(hào)B21554），上海源葉生物科技有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%。菟絲子藥材，蘭州安泰堂中藥飲片有限公司，符合2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）規(guī)定；乙腈、甲醇均為色譜純，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

2.1.1 樣品預(yù)處理

取菟絲子原藥材，除雜，干凈干燥，菟絲子藥材分為5組，每組約100.0 g，密閉備用。

2.1.2 生品

稱取凈制菟絲子藥材，密閉保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.3 清炒品

稱取凈制菟絲子藥材，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至表面微黃，有爆裂聲，取出放涼，密閉保存?zhèn)溆肹15]。

2.1.4 鹽炙品

稱取凈制菟絲子藥材，加鹽水拌勻，悶潤(rùn)2 h，待鹽水吸盡后，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至略鼓起，微有爆裂聲，香氣溢出時(shí)，取出放涼，密閉備用[15]。

2.1.5 酒炙品

稱取凈制菟絲子藥材，加黃酒拌勻，悶透2 h，待黃酒吸盡后，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至表面微變黃，取出放涼，密閉備用[15]。

2.1.6 制餅品

稱取凈制菟絲子藥材，加適量水（6倍量）煮至開(kāi)裂，不斷攪拌，待水吸盡后，全部呈黏絲稠粥狀時(shí)，取出，放置過(guò)夜，壓餅，干燥，密閉備用。

2.1.7 樣品提取

分別精密稱取上述菟絲子生品及炮制品各約50.0 g，加60%乙醇500 mL，水浴回流提取2次，第1次45 min，第2次30 min，抽濾，合并，濃縮蒸干，得浸膏備用，分別計(jì)算各樣品的醇提浸膏得率。結(jié)果顯示，菟絲子生品、鹽炙品、清炒品、酒炙品、制餅品醇提浸膏得率分別為7.82%、10.12%、9.30%、9.32%、10.77%，表明炮制方法對(duì)菟絲子醇提物中化學(xué)成分的溶出具有促進(jìn)作用。

2.2 總黃酮含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液制備

精密稱定蘆丁對(duì)照品適量，加60%乙醇制成濃度為0.981 mg/mL的對(duì)照品溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液制備

精密稱取各菟絲子生品及炮制品干燥浸膏約0.1 g，置100 mL錐形瓶中，精確加入60%乙醇50 mL完全溶解，稱定質(zhì)量，超聲提?。üβ?50 W，頻率30 kHz）1 h，冷卻至室溫，用60%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，即得。

2.2.3 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下蘆丁對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置于10 mL具塞試管中，加入5%NaNO2溶液0.5 mL，混勻靜置，加入5%Al(NO3)3溶液0.5 mL，混勻靜置6 min，加入4%NaOH溶液4.0 mL，用60%乙醇定容至10 mL，放置15 min，于波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定吸光度值。以蘆丁質(zhì)量（mg）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=1.017 3X-0.007 2（r=0.999 6），結(jié)果顯示，蘆丁對(duì)照品在0.098 1～0.981 mg范圍內(nèi)與吸光度值線性關(guān)系良好。

2.2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取1.0 mL菟絲子生品供試品溶液6份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果顯示吸光度RSD=0.84%，表明該方法精密度良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取1.0 mL 菟絲子生品供試品溶液，按“2.2.3”項(xiàng)下方法，分別于0、10、20、40、60、90 min測(cè)定，結(jié)果顯示吸光度RSD=2.54%，表明供試品溶液在90 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

分別精確稱取菟絲子生品各6份，按“2.1.7”項(xiàng)下方法提取，所得干燥浸膏按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示吸光度RSD=2.55%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.7 加樣回收率試驗(yàn)

分別精確稱取6份菟絲子生品醇提物浸膏適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別吸取1.0 mL已知含量供試品溶液置具塞試管中，分別加入0.3 mL蘆丁對(duì)照品溶液，按“2.2.3”項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果顯示，平均回收率為97.62%，RSD=2.01%。

2.2.8 樣品測(cè)定

精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下各供試品溶液1.0 mL，按“2.2.3”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，平行3次，計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果菟絲子生品、鹽炙品、清炒品、酒炙品、制餅品的總黃酮含量分別為0.828 6%、0.869 0%、1.110 9%、1.330 5%、1.174 1%。與生品比較，各炮制品中總黃酮含量明顯較高，依次為酒炙品>制餅品>清炒品>鹽炙品>生品，酒炙品總黃酮含量約為生品的1.6倍。表明各炮制方法對(duì)菟絲子醇提物中總黃酮的溶出具有促進(jìn)作用。

2.3 總多糖含量測(cè)定

2.3.1 對(duì)照品溶液制備

精密稱定無(wú)水葡萄糖對(duì)照品適量，加蒸餾水制成濃度為0.001 049 g/mL對(duì)照品溶液。

2.3.2 供試品溶液配制

精密稱取菟絲子生品及炮制品干燥浸膏約1.0 g，置于250 mL錐形瓶，使含醇量達(dá)80%。靜置過(guò)夜，離心后將沉淀用蒸餾水溶解，按Sevage法（氯仿∶正丁醇=4∶1）除蛋白，重復(fù)以上操作3次。離心后將沉淀用20 mL蒸餾水溶解，吸取1 mL溶液定容至50 mL容量瓶中，即得。

2.3.3 線性關(guān)系考察

分別吸取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL對(duì)照品溶液，用蒸餾水補(bǔ)足至1.0 mL，置具塞試管中，加入5%苯酚溶液0.5 mL，混勻后迅速加入2.5 mL濃硫酸振蕩，充分混合后將試管置于沸水浴中反應(yīng)15 min。于波長(zhǎng)490 nm處測(cè)吸光度，以無(wú)水葡萄糖質(zhì)量（g）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=1 420.6X-0.013 2（r=0.999 5），結(jié)果顯示，無(wú)水葡萄糖在0.000 104 9～0.001 049 g范圍內(nèi)與吸光度值線性關(guān)系良好。

2.3.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取1.0 mL菟絲子生品供試品溶液6份，按“2.3.3”項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果顯示吸光度RSD=1.22%，表明該方法精密度良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取1.0 mL 菟絲子生品供試品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下方法，分別于0、10、20、40、60、90 min測(cè)定，結(jié)果顯示吸光度RSD=1.98%，表明供試品溶液在90 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

分別精確稱取菟絲子生品各6份，按“2.1.7”項(xiàng)下提取，所得干燥浸膏按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果顯示吸光度RSD=2.02%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.7 加樣回收率試驗(yàn)

分別精確稱取6份菟絲子生品醇提物浸膏適量，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別吸取1.0 mL已知含量供試品溶液置具塞試管中，分別加入0.1 mL無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果顯示，平均回收率為103.33%，RSD=2.56%。

2.3.8 樣品測(cè)定

精密吸取“2.3.2”項(xiàng)下各供試品溶液1.0 mL，按“2.3.3”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，平行3次，計(jì)算總多糖含量。結(jié)果菟絲子生品、鹽炙品、清炒品、酒炙品、制餅品的總多糖含量分別為1.160 1%、3.296 1%、2.343 6%、2.515 6%、3.589 3%。與生品比較，各炮制品中總多糖含量明顯較高，依次為制餅品>鹽炙品>酒炙品>清炒品>生品，制餅品總多糖含量約為生品的3.1倍。表明各炮制方法對(duì)菟絲子醇提物中總多糖的溶出具有促進(jìn)作用。

2.4 7種成分含量測(cè)定

2.4.1 對(duì)照品溶液制備

分別精密稱取綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、紫云英苷、槲皮素、山柰酚、異鼠李素對(duì)照品適量，用甲醇配制成濃度分別為0.013 845、0.039 3、0.251 2、0.001 94、0.030 3、0.000 49、0.000 195 mg/mL的混合對(duì)照品溶液，搖勻，即得，4 ℃保存，備用。

2.4.2 供試品溶液制備

精密稱取“2.1”項(xiàng)下制備的菟絲子清炒品醇提浸膏約0.1 g，置100 mL錐形瓶中，加入50%甲醇50 mL溶解，超聲（250 W，30 kHz）提取20 min，冷卻至室溫，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，即得，4 ℃保存。

2.4.3 色譜條件

采用Phenonmenex Luna C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈（A）-0.1%磷酸水（B），梯度洗脫（0～20 min，17%～23%A；20～40 min，23%～40%A；40～60 min，40%～60%A），柱溫30 ℃，流速1 mL/min，進(jìn)樣量10.0μL，檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm，理論塔板數(shù)5 000。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 菟絲子清炒品醇提物HPLC圖

2.4.4 線性關(guān)系考察

取混合對(duì)照品溶液，依次進(jìn)樣0.5、5、10、15、25、35 μL，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、紫云英苷、槲皮素、山柰酚和異鼠李素的回歸方程及線性范圍，見(jiàn)表1。

表1 7種成分線性關(guān)系考察結(jié)果

2.4.5 精密度試驗(yàn)

吸取混合對(duì)照品溶液適量，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定各對(duì)照品峰面積和保留時(shí)間。結(jié)果顯示，綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、紫云英苷、槲皮素、山柰酚和異鼠李素峰面積RSD分別為0.08%、0.13%、0.16%、0.20%、0.09%、0.14%、0.10%，保留時(shí)間RSD 分別為0.11%、0.15%、0.10%、0.10%、0.08%、0.13%、0.07%，表明儀器精密度良好。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

吸取“2.4.2”項(xiàng)下菟絲子清炒品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24、48 h測(cè)定峰面積并計(jì)算。結(jié)果顯示，供試品溶液中綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、紫云英苷、槲皮素、山柰酚和異鼠李素的峰面積RSD 分別為2.16%、1.77%、1.01%、1.88%、0.73%、0.69%、0.94%，表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn)

分別精確稱取菟絲子清炒品醇提物各0.1 g，平行6份，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果顯示，6份菟絲子清炒品醇提物供試品溶液中綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、紫云英苷、槲皮素、山柰酚和異鼠李素峰面積RSD分別為1.66%、2.05%、1.77%、1.54%、2.02%、1.88%、1.03%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.8 加樣回收率試驗(yàn)

按“2.1”項(xiàng)下方法制備6份菟絲子清炒品醇提物，精密稱取0.1 g置100 mL錐形瓶，分別按各成分100%濃度加入綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、紫云英苷、槲皮素、山柰酚和異鼠李素對(duì)照品溶液，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果顯示，綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、紫云英苷、槲皮素、山柰酚和異鼠李素的平均回收率分別為97.20%、99.05%、103.55%、100.11%、98.82%、104.41%、 99.09%，RSD 分別為 1.01%、1.82%、1.42%、1.36%、2.34%、0.75%、1.05%。

2.4.9 樣品含量測(cè)定

精密稱取菟絲子生品及各炮制品醇提物各約0.1 g，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備各供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。各炮制品中綠原酸、蘆丁、金絲桃苷和槲皮素含量與菟絲子生品差異明顯，各炮制品中綠原酸、槲皮素及山柰酚含量均較生品有所增加；清炒品中蘆丁含量明顯降低，但槲皮素含量明顯高于生品，這一現(xiàn)象可能與清炒過(guò)程中蘆丁隨溫度升高分解成槲皮素有關(guān)。鹽炙品、酒炙品和制餅品中除紫云英苷外，綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、槲皮素、山柰酚含量均高于生品。鹽炙品和酒炙品中上述7種成分的含量高于其他炮制品，表明二者具有促進(jìn)有效成分溶出的作用。

表2 菟絲子生品及不同炮制品醇提物中7種成分含量（mg/g，n=3）

2.5 指紋圖譜建立與分析

2.5.1 共有峰標(biāo)定及相似度計(jì)算

按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，將圖譜導(dǎo)入國(guó)家藥典委員會(huì)《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2012A版）進(jìn)行分析，選取重復(fù)性和穩(wěn)定性好、分離度高的色譜峰進(jìn)行匹配，共標(biāo)定17個(gè)共有峰，見(jiàn)圖2。經(jīng)與對(duì)照品譜圖比對(duì)，指認(rèn)1～7號(hào)峰分別為綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、紫云英苷、槲皮素、山柰酚和異鼠李素。指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)結(jié)果見(jiàn)表3。菟絲子生品與炮制品相似度均不小于0.9，表明不同炮制品化學(xué)組成一致性較好。

圖2 菟絲子生品及不同炮制品醇提物HPLC指紋圖譜

表3 菟絲子生品及炮制品醇提物指紋圖譜相似度分析（r）

2.5.2 化學(xué)計(jì)量學(xué)分析

2.5.2.1 主成分分析

采用SPSS20.0軟件對(duì)指紋圖譜17個(gè)共有峰峰面積進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理后，進(jìn)行主成分分析（PCA），主成分特征值、累計(jì)貢獻(xiàn)率見(jiàn)表4。共提取2個(gè)特征值>1的主成分，累計(jì)方差貢獻(xiàn)率為92.074%，表明前2個(gè)主成分可代表指紋圖譜共有峰中大部分化學(xué)成分信息和差異信息。主成分載荷矩陣見(jiàn)表5，第1主成分主要反映了10、9、8、11、14、17、15、13、紫云英苷、金絲桃苷、蘆丁的峰信息，第2主成分中12、異鼠李素、16、蘆丁、13、金絲桃苷、17、15號(hào)峰的載荷因子較高。因子得分系數(shù)矩陣見(jiàn)表6，紫云英苷和異鼠李素分別在第1、2主成分中因子得分系數(shù)最高。將上述標(biāo)準(zhǔn)化處理后的17個(gè)共有峰峰面積數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA14.1軟件，PCA得分散點(diǎn)圖和載荷圖見(jiàn)圖3?？梢钥闯?，菟絲子不同炮制品區(qū)分度較為明顯，表明不同炮制方法對(duì)菟絲子中化學(xué)成分影響較大，且PCA結(jié)果與指紋圖譜分析結(jié)果較為一致。

圖3 菟絲子指紋圖譜共有峰PCA得分散點(diǎn)圖和載荷圖

表4 菟絲子指紋圖譜共有峰主成分特征值及方差貢獻(xiàn)率

表5 菟絲子指紋圖譜共有峰主成分載荷矩陣

表6 菟絲子指紋圖譜共有峰主成分因子得分系數(shù)矩陣

2.5.2.2 正交偏最小二乘-判別分析

將17個(gè)共有峰峰面積數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA14.1軟件，進(jìn)行正交偏最小二乘-判別分析（OPLS-DA），得分散點(diǎn)圖及載荷圖見(jiàn)圖4。結(jié)果顯示各炮制品差異明顯，區(qū)分度高。變量重要性投影（VIP）見(jiàn)圖5。以VIP>1.0為條件，篩選出7個(gè)差異標(biāo)志物，依次為山柰酚>異鼠李素>綠原酸>12號(hào)峰>16號(hào)峰>金絲桃苷>紫云英苷，上述化合物對(duì)區(qū)分菟絲子不同炮制品影響較大。OPLSDA結(jié)果與PCA及指紋圖譜具有較高一致性。

圖4 菟絲子指紋圖譜共有峰OPLS-DA得分散點(diǎn)圖和載荷圖

圖5 菟絲子不同炮制品醇提物共有峰OPLS-DA VIP圖

3 討論

目前菟絲子主要炮制加工方法有鹽炙、清炒、酒炙及制餅等。近年來(lái)研究表明，菟絲子生品與其炮制品中的化學(xué)成分有較大差異[8，13-14]。本研究結(jié)合前期預(yù)試驗(yàn)，從整體性角度出發(fā)，測(cè)定菟絲子發(fā)揮藥理作用的總黃酮、總多糖含量，并以7種主要藥效物質(zhì)分析評(píng)價(jià)不同炮制方法的影響，結(jié)果顯示菟絲子炮制后可提高醇提物浸膏得率，總黃酮和總多糖含量均高于生品。各炮制品中綠原酸、蘆丁、金絲桃苷和槲皮素含量變化與菟絲子生品差異明顯，鹽炙和酒炙對(duì)菟絲子中7種成分的溶出具有促進(jìn)作用。

預(yù)試驗(yàn)比較了水和乙醇（40%、60%、80%）作為提取溶劑對(duì)菟絲子總黃酮、總多糖及特征性成分含量測(cè)定的影響，結(jié)果表明60%乙醇的總提取效率最高，故選擇60%乙醇作為提取溶劑。

菟絲子主要含有黃酮和酚酸類化合物，依據(jù)其性質(zhì)，本研究分別考察了不同流動(dòng)相體系、流速、檢測(cè)波長(zhǎng)、柱溫條件下，對(duì)色譜峰峰形、分離度的影響，結(jié)果以乙腈-0.1%磷酸水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm，流速1 mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)行梯度洗脫，色譜圖基線平穩(wěn)，色譜峰吸收值較大，干擾最少，分離度高。

與生品比較，菟絲子清炒品中蘆丁含量明顯降低，槲皮素含量明顯升高，可能與炒制過(guò)程中使蘆丁、金絲桃苷等黃酮類分解有關(guān)；炮制品中綠原酸含量明顯升高，鹽炙、清炒、酒炙和制餅過(guò)程中，溫度在短時(shí)間內(nèi)快速升高，從而使綠原酸相對(duì)穩(wěn)定，增大了在醇溶液中的溶解度；鹽炙品和酒炙品中黃酮類成分含量均升高，且酒炙品黃酮類成分含量稍高于鹽炙品，上述含量分析結(jié)果與肖嵐等[16]研究結(jié)果具有一致性，可為相關(guān)研究提供印證參考。

通過(guò)對(duì)菟絲子生品及炮制品HPLC指紋圖譜分析，共識(shí)別標(biāo)定17個(gè)共有峰，鑒別指認(rèn)7種化合物。相似度分析結(jié)果表明，菟絲子炮制前后整體化學(xué)成分具有較好的一致性，但藥效化學(xué)成分含量有顯著差異。PCA和OPLS-DA表明，不同炮制方法對(duì)菟絲子中山柰酚、異鼠李素、綠原酸、12號(hào)峰、16號(hào)峰、金絲桃苷、紫云英苷7個(gè)差異標(biāo)志物影響較大。

本研究建立了菟絲子不同炮制品醇提物中多成分含量測(cè)定方法，通過(guò)分析菟絲子不同炮制品HPLC指紋圖譜，可為菟絲子及炮制品的質(zhì)量評(píng)價(jià)和探討菟絲子炮制前后化學(xué)成分的變化規(guī)律提供參考。