賈海娟 許俊卿

(1.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化科，陜西 西安 710089；2.兵器工業(yè)五二一醫(yī)院病理科，陜西 西安 710065)

胃癌是一種常見的消化內(nèi)科疾病，其在發(fā)病早期多無明顯癥狀，但隨著病情進(jìn)展，可逐漸出現(xiàn)出現(xiàn)疼痛、嘔血等癥狀，并可伴隨胃穿孔、幽門梗阻等并發(fā)癥，從而嚴(yán)重降低患者的生存質(zhì)量。胃癌的發(fā)生、發(fā)展屬于一種復(fù)雜的病變過程，其多與腫瘤新生血管生成、原癌及抑癌基因的表達(dá)及調(diào)控、腫瘤的免疫耐受性等有密切關(guān)系。人表皮生長因子受體2(HER2)不僅可以調(diào)控細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡，還可促進(jìn)新生血管加速生成，進(jìn)而參與腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移[1]；程序性死亡因子1配體(PD-L1)可參與調(diào)節(jié)生理性免疫應(yīng)答反應(yīng)，且在免疫耐受維持方面具有十分重要的意義[2-3]；p53可參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程[4]；相關(guān)研究顯示，axin不僅可以影響細(xì)胞的增殖、分化及凋亡，還可能參與腫瘤轉(zhuǎn)移、浸潤過程[5]。本研究旨在探討胃癌患者HER2、PD-L1、p53、axin蛋白表達(dá)情況及其與臨床病理特征的關(guān)系。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2018年10月至2021年10月我院收治的116例胃癌患者的臨床資料，所有患者經(jīng)手術(shù)切除并病理證實(shí)，且均接受HER2、PD-L1、p53、axin蛋白表達(dá)檢查。所有胃癌患者中，男性76例，女性40例；年齡40～78歲，平均(66.37±7.36)歲；分化程度：中高分化73例，低分化43例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：否39例，是77例。診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照《胃癌》[6]中有關(guān)胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)者；經(jīng)病理學(xué)檢查確診者；臨床資料完整者；均接受HER2、PD-L1、p53、axin蛋白表達(dá)檢查者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有其他惡性腫瘤者；嚴(yán)重肝、腎等功能損傷者；胃癌復(fù)發(fā)者；術(shù)前放化療者等。本研究已通過我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2檢測(cè)方法 所有患者入院后，均接受手術(shù)切除并病理學(xué)檢查。病理、正常組織的HER2、PD-L1、p53、axin蛋白表達(dá)檢測(cè)均使用免疫組織化學(xué)染色法。HER2蛋白檢測(cè)：采用二步法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，且操作嚴(yán)格參照規(guī)范步驟。使用HER2單克隆抗體(北京中杉金橋有限公司)及其相關(guān)試劑進(jìn)行檢測(cè)。由醫(yī)師(病理科，2名及以上高年資)嚴(yán)格參照相關(guān)規(guī)定進(jìn)行病理學(xué)分析，以得出免疫組化結(jié)果。根據(jù)其顯色強(qiáng)度、陽性細(xì)胞率進(jìn)行評(píng)分：(1)顯色強(qiáng)度分為0分(未顯色)、1分(淡黃色)、2分(棕黃色)、3分(棕褐色)；(2)在400倍顯微鏡下進(jìn)行隨機(jī)選取視野(5個(gè))，陽性細(xì)胞率分為0分(<5%)、1分(5%～25%)、2分(26%～50%)、3分(51%～75%)、4分(>75%)。陰性：顯色強(qiáng)度得分陽性細(xì)胞率得分介于0～1；陽性：顯色強(qiáng)度得分陽性細(xì)胞率得分>1。PD-L1蛋白檢測(cè)：使用抗PD-L1(SP142)兔單克隆抗體以及二抗(0.2 mL，RAB-0724)及其相關(guān)試劑進(jìn)行檢測(cè)，以上儀器與試劑均源于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，由醫(yī)師(病理科，2名及以上高年資)依據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理學(xué)分析，以得出免疫組化結(jié)果。根據(jù)其顯色強(qiáng)度、陽性細(xì)胞率進(jìn)行評(píng)分：(1)顯色強(qiáng)度分為0分(無著色)、1分(淡黃色)、2分(棕黃色)、3分(棕褐色)；(2)在400倍顯微鏡下進(jìn)行隨機(jī)選取視野(5個(gè)，100個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)/視野)，陽性細(xì)胞率分為1分(≤10%)、2分(11%～50%)、3分(>50%)。陰性：顯色強(qiáng)度得分陽性細(xì)胞率得分介于0～1；弱陽性：顯色強(qiáng)度得分陽性細(xì)胞率得分≤3；強(qiáng)陽性：顯色強(qiáng)度得分陽性細(xì)胞率得分>3。p53、axin蛋白檢測(cè)：取胃癌組織及癌旁正常組織，使用甲醛固定，并常規(guī)石蠟包埋，取適量石蠟切片，使用兔SP檢測(cè)試劑盒(上海烜雅生物科技有限公司)進(jìn)行檢測(cè)p53、axin蛋白，且操作嚴(yán)格參照規(guī)范步驟。陽性對(duì)照：已知的陽性片，axin、p53蛋白陽性細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn)：axin蛋白定位于細(xì)胞漿，p53蛋白定位于細(xì)胞核，經(jīng)顯微鏡觀察，細(xì)胞(細(xì)胞核或細(xì)胞漿)中存在棕黃色顆粒沉淀便為陽性細(xì)胞，隨機(jī)選取視野(10個(gè))，對(duì)應(yīng)蛋白陽性表達(dá)：陽性染色細(xì)胞占比≥10%。

2 結(jié) 果

2.1HER2、PD-L1、p53、axin蛋白表達(dá)在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況 與癌旁組織相比，胃癌組織的HER2、PD-L1、p53蛋白表達(dá)陽性率較高，而axin蛋白表達(dá)陽性率較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 HER2、PD-L1、p53、axin蛋白表達(dá)在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況比較[n(%)]

2.2胃癌組織中HER2、PD-L1、p53、axin蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 胃癌組織中，低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PD-L1、HER2、p53蛋白陽性表達(dá)率高于陰性表達(dá)率，而axin蛋白陽性表達(dá)率低于陰性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，同時(shí)PD-L1、HER2、p53蛋白的陽性表達(dá)率分別與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)；axin蛋白陽性表達(dá)率與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 胃癌組織中HER2、PD-L1、p53、axin蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 [n(%)]

3 討 論

胃癌主要是由環(huán)境、不良飲食習(xí)慣、遺傳等因素導(dǎo)致胃黏膜上皮畑胞發(fā)生惡性腫瘤病變的一種病癥。相關(guān)研究表明，即便胃癌患者獲得了較為理想的治療，但其5年內(nèi)生存率仍處于較低水平，因此探究與胃癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的標(biāo)志物具有重要的臨床意義[7]。

HER2屬于一種原癌基因，其可通過產(chǎn)生異源或同源二聚體，以激活磷脂酰肌醇3激酶等通路，進(jìn)而加速新生血管的形成，同時(shí)調(diào)控細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步加速腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，在健康人體內(nèi)，HER2表達(dá)多處于非激活狀態(tài)，但當(dāng)機(jī)體受到外界有害因素(如致癌等)刺激后，該因子將被激活，表達(dá)水平顯著升高[8-9]；在部分炎癥介質(zhì)的刺激下，PD-L1可誘導(dǎo)多種細(xì)胞類型表達(dá)，以抑制免疫傳遞信號(hào)，使得腫瘤細(xì)胞逃過機(jī)體的免疫監(jiān)視及殺傷系統(tǒng)，進(jìn)而增加腫瘤的免疫耐受性，加速患者病情惡化，因此，在在惡性腫瘤細(xì)胞組織中，PD-L1可表現(xiàn)為高表達(dá)[10-11]；p53具有半衰期短的特點(diǎn)，因此在正常細(xì)胞組織中，多處于較低水平，但當(dāng)p53水平升高時(shí)，則可提示p53蛋白基因已發(fā)生突變，進(jìn)而可參與惡性腫瘤細(xì)胞的增殖，加快細(xì)胞分化，推動(dòng)胃癌的發(fā)生和病情進(jìn)展[12]；axin可通過與p53結(jié)合，以參與p53信號(hào)通路，使得p53產(chǎn)物磷酸化，進(jìn)而提高抑癌基因p53的轉(zhuǎn)錄活性，發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用，因此，axin的高表達(dá)可抑制胃癌的發(fā)生與發(fā)展[13]。本研究結(jié)果顯示，與癌旁組織相比，胃癌組織的HER2、PD-L1、p53蛋白表達(dá)陽性率較高，而axin蛋白表達(dá)陽性率較低，表明胃癌組織中HER2、PD-L1、p53蛋白表達(dá)升高，axin蛋白表達(dá)降低，與沙金平等[14]研究結(jié)果基本一致。分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均可作為胃癌臨床病理特征指標(biāo)，其中低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移則表明患者的病情越嚴(yán)重，而HER2、PD-L1、p53、axin蛋白有可參與胃癌的發(fā)生與發(fā)展，故胃癌臨床病理特征指標(biāo)與HER2、PD-L1、p53、axin蛋白水平間可存在密切的關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中，低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PD-L1、HER2、p53蛋白陽性表達(dá)率高于陰性表達(dá)率，而axin蛋白陽性表達(dá)率低于陰性表達(dá)率

(P<0.05)，同時(shí)PD-L1、HER2、p53蛋白的陽性表達(dá)率分別與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)；axin蛋白陽性表達(dá)率與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，表明胃癌患者HER2、PD-L1、p53、axin蛋白表達(dá)水平與臨床病理特征指標(biāo)間可存在密切的關(guān)系，與趙玲娜等[15]研究結(jié)果基本一致。

綜上，胃癌組織中HER2、PD-L1、p53蛋白表達(dá)升高，axin蛋白表達(dá)降低，且HER2、PD-L1、p53、axin蛋白表達(dá)水平與臨床病理特征指標(biāo)間可存在密切的關(guān)系，值得臨床后期推廣應(yīng)用。