陳愛(ài)蓮 馬小宏

根據(jù)紅細(xì)胞表面抗原A和抗原B的有無(wú)，人的血型分為A型、B型、O型和AB型，統(tǒng)稱為ABO血型系統(tǒng)[1]。針對(duì)抗原A和B的抗體也被稱為規(guī)則抗體，通常產(chǎn)生于生命的早期階段，也稱為天然抗體。在正常條件下人體內(nèi)不會(huì)產(chǎn)生不規(guī)則抗體；然而在某些條件下，如輸血、孕婦的母嬰血型不相容及血液產(chǎn)品的免疫刺激等，可刺激人體產(chǎn)生不規(guī)則抗體。不規(guī)則抗體檢測(cè)（irregular antibody detection，IAD）主要用于檢測(cè)血液中除人類ABO血型系統(tǒng)抗體以外的所有抗體[2]。目前，ABO血型不合引起的快速溶血反應(yīng)的發(fā)生率顯著降低[3]，而臨床輸血反應(yīng)的主要原因是不規(guī)則抗體的存在[4]。不規(guī)則抗體可能引發(fā)新生兒溶血病，造成血型鑒定困難，并導(dǎo)致臨床交叉配型結(jié)果無(wú)法判斷[5]，同時(shí)不規(guī)則抗體也與流產(chǎn)和死產(chǎn)有關(guān)[6]。因此，篩選不規(guī)則抗體是非常重要的?；诖?，本研究以本院2019年1月—2020年1月需接受輸血的患者4 202例為研究對(duì)象，探討和分析輸血前不規(guī)則抗體的檢測(cè)對(duì)患者輸血安全性的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究以本院2019年1月—2020年1月需接受輸血的患者4 202例為研究對(duì)象，其中男2 325例，女1 877例，年齡為3 d~79歲，平均年齡（38.65±9.27）歲。按照計(jì)算機(jī)隨機(jī)分配結(jié)果，將研究對(duì)象中的2 100例作為對(duì)照組，2 102例作為試驗(yàn)組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者具備急性出血、嚴(yán)重失代償性貧血等明確輸血適應(yīng)證；（2）患者心肺功能正常，一般情況良好；（3）患者臨床資料完整；（4）患者或其家屬知曉輸血后相關(guān)并發(fā)癥，并自愿進(jìn)行輸血者。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡超過(guò)80歲的患者。本研究已經(jīng)獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)與患者或患者家屬的知情同意。對(duì)照組和試驗(yàn)組年齡、性別、輸血次數(shù)、妊娠史、輸血史比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)組與對(duì)照組的一般資料對(duì)比

表1 （續(xù)）

1.2 方法

（1）基本信息：在本院電子病歷系統(tǒng)中獲取患者的基本信息，如年齡、性別、輸血史、輸血次數(shù)、妊娠史、入住科室等。（2）對(duì)照組：對(duì)其輸血前行一般常規(guī)輸血檢測(cè)（如ABO血型檢測(cè)），但不施行IAD。（3）試驗(yàn)組：在常規(guī)檢測(cè)基礎(chǔ)上，采用微柱凝膠抗人球蛋白法施行IAD。在凝膠卡上標(biāo)記Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，并在每個(gè)凝膠卡的微孔中加入50 μL濃度為0.8%的相對(duì)應(yīng)不規(guī)則抗體篩選/鑒定試劑（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號(hào)篩選紅細(xì)胞稀釋液）和25 μL患者血清，輕輕震蕩使其均勻混合。將凝膠卡放置于孵育器中，在37℃條件下孵育15 min，使患者血清中的抗體與紅細(xì)胞上的抗原充分發(fā)生反應(yīng)，形成抗原抗體結(jié)合物。將凝膠卡離心10 min，在離心過(guò)程中使致敏紅細(xì)胞聚集于凝膠中形成獨(dú)特的凝集模式。將凝膠卡放置于照明良好的觀察箱上，肉眼觀察凝集反應(yīng)，判斷檢測(cè)結(jié)果。陰性結(jié)果為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號(hào)凝膠柱中紅細(xì)胞全部沉積于膠底。陽(yáng)性結(jié)果為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號(hào)任何一種膠柱中出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集顆粒懸浮于凝膠中。對(duì)于陽(yáng)性患者，進(jìn)一步采用譜細(xì)胞進(jìn)行抗體特異性鑒定。（4）兩組患者輸血后均進(jìn)行必要看護(hù)與護(hù)理，觀察患者輸血后不良反應(yīng)。如發(fā)生輸血后不良反應(yīng)（如過(guò)敏反應(yīng)、非溶血性發(fā)熱反應(yīng)、溶血反應(yīng)、休克等），立即采取適當(dāng)措施。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用IBM公司SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件（22.0版本）進(jìn)行所有的統(tǒng)計(jì)分析。使用（）表示連續(xù)型正態(tài)分布的的計(jì)量資料；使用n（%）表示計(jì)數(shù)資料。計(jì)量資料組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不良輸血反應(yīng)

對(duì)照組不良輸血反應(yīng)發(fā)生率為1.43%（30/2 100），試驗(yàn)組不良輸血反應(yīng)發(fā)生率為0.43%（9/2 102）。試驗(yàn)組的不良發(fā)生率明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 對(duì)照組與試驗(yàn)組輸血不良反應(yīng)比較

2.2 不規(guī)則抗體的篩查情況

試驗(yàn)組中共篩查出不規(guī)則抗體26例（26/2 102，1.24%）。如圖1（1）所示，在26例含有不規(guī)則抗體的患者血清中，Rh血型系統(tǒng)抗體最多見(jiàn)，占比42.31%（11/26）。Rh血型系統(tǒng)中患者不規(guī)則抗體產(chǎn)生的頻率依次為抗E 7例，抗D 3例，抗C 1例。同時(shí)，還檢出其他多種血型系統(tǒng)的抗體：MNSs 5例（19.23%），Lewis 3例（11.54%），P 2例（7.69%），Kidd 2例（7.69%），Duffy 2例（7.69%），不明系統(tǒng)（other）1例（3.85%）。如圖1（2）所示，在所有檢出不規(guī)則抗體的患者中，來(lái)自內(nèi)科的標(biāo)本最多，共有7例（26.92%），此外為外科5例（19.23%），急診科4例（15.38%）、婦產(chǎn)科4例（15.38%），血液科2例（7.69%），皮膚燒傷科2例（7.69%），腫瘤科2例（7.69%）。

圖1 不規(guī)則抗體類型系統(tǒng)及標(biāo)本來(lái)源分布

在試驗(yàn)組中，比較檢出不規(guī)則抗體患者與未檢出不規(guī)則抗體患者的年齡、性別、妊娠史、輸血史，檢出組患者輸血史、妊娠史的比例高于未檢出組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 試驗(yàn)組不同不規(guī)則抗體檢測(cè)情況患者的一般資料比較

3 討論

人體內(nèi)的紅細(xì)胞上附著有許多不同的抗原，其中最常見(jiàn)的就是抗原A和B，同時(shí)也可能存在其他多種抗原（如Rh血型系統(tǒng)抗原、MNSs/Lewis/P/Kidd/Duffy血型系統(tǒng)抗原等）[7]。不規(guī)則抗體就是人體血液中除ABO血型系統(tǒng)抗體以外的所有抗體[8]。不規(guī)則的抗體可存在于獻(xiàn)血者/輸血患者的血清/血漿中，它們具有生物功能，當(dāng)與人類紅細(xì)胞抗原接觸時(shí)可與紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)，導(dǎo)致紅細(xì)胞的破壞和溶血。20世紀(jì)90年代后，微柱凝膠技術(shù)常被用于篩選和鑒定不規(guī)則抗體。這種檢測(cè)方法不僅操作簡(jiǎn)便、省時(shí)，而且易于標(biāo)準(zhǔn)化和閱讀，已成為各國(guó)輸血科實(shí)驗(yàn)室中最常用的技術(shù)[9]。

輸血在臨床上是一種重要的治療手段，常被用于搶救急性出血患者[10]。此外，輸血對(duì)慢性貧血、慢性消耗性疾病、嚴(yán)重感染、出血性疾病等有重要的治療作用。為了提高輸血的安全性，在輸血前，實(shí)驗(yàn)室人員往往會(huì)對(duì)獻(xiàn)血者/受血者進(jìn)行一系列篩查，包括ABO血型鑒定、不規(guī)則抗體篩查、血液傳播疾病的篩查等?？傮w來(lái)說(shuō)，輸血相關(guān)不良事件的發(fā)生率較低，由于獻(xiàn)血者/受血者血液中不規(guī)則抗體存在而引起的輸血反應(yīng)更為少見(jiàn)[11]。在本次研究中，不規(guī)則抗體的檢出率為1.24%（26/2 102），然而，當(dāng)輸入大量此類血漿或全血時(shí)，可能會(huì)引起溶血性輸血反應(yīng)（大量紅細(xì)胞的加速破壞），嚴(yán)重時(shí)甚至可以危及患者生命。因此，對(duì)受血者/獻(xiàn)血者進(jìn)行IAD是輸血前檢測(cè)的重要部分。同時(shí)，在本次研究中，筆者發(fā)現(xiàn)進(jìn)行IAD的試驗(yàn)組中患者輸血后不良事件的發(fā)生率顯著低于未進(jìn)行IAD的對(duì)照組，說(shuō)明輸血前IAD的實(shí)施，可有效降低輸血后不良反應(yīng)的發(fā)生率，從而提高臨床輸血安全[12]。若IAD檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，還應(yīng)進(jìn)行特異性抗體的鑒定。

同時(shí)，筆者研究表明最常見(jiàn)的不規(guī)則抗體是Rh血型系統(tǒng)抗體，其次是MNSs抗體。人類有300多種血型，但只有少數(shù)血型會(huì)引起臨床上顯著的輸血反應(yīng)。在臨床實(shí)踐中最重要的兩個(gè)系統(tǒng)是ABO和Rh系統(tǒng)。有文獻(xiàn)[13]報(bào)道約有85%的北歐白人為RhD陽(yáng)性，幾乎100%的中國(guó)人為RhD陽(yáng)性。Rh血型是血型系統(tǒng)中最復(fù)雜的血型之一，其中D抗原被認(rèn)為是所有抗原中最具免疫原性的抗原。D抗原只存在于RhD陰性的人中，當(dāng)RhD陰性患者被輸注了RhD陽(yáng)性的紅細(xì)胞，或者RhD陰性的婦女懷有RhD陽(yáng)性的嬰兒時(shí)，IgG抗D抗體可引起急性或延遲的溶血性輸血反應(yīng)，并可能引起新生兒溶血病[14]。避免RhD陰性的患者/有生育潛力的婦女輸入RhD陽(yáng)性的紅細(xì)胞輸血可有效避免此類現(xiàn)象的發(fā)生，因此對(duì)有妊娠史或育齡婦女輸血前的Rh系統(tǒng)不規(guī)則抗體的篩查至關(guān)重要。為了檢測(cè)此類抗體，建議在懷孕早期采集孕婦血樣，在懷孕10~16周時(shí)可進(jìn)行ABO和RhD分型，并篩查是否存在其他紅細(xì)胞不規(guī)則抗體。當(dāng)抗體篩查為陽(yáng)性時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行檢測(cè)，以確定抗體的特異性和意義?？笵是引起胎兒溶血病的最常見(jiàn)的抗體，如果檢測(cè)到抗D陽(yáng)性，常常需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)漠a(chǎn)前干預(yù)。同時(shí)，在本次研究中檢出的Rh抗體患者中，抗E最常見(jiàn)，通常不會(huì)引起新生兒溶血病或引起輕微的新生兒溶血。筆者研究結(jié)果證實(shí)在有輸血史和妊娠史的患者中更易檢出不規(guī)則抗體，這與文獻(xiàn)報(bào)道的輸血和懷孕可能會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生不規(guī)則抗體相符[15]。不規(guī)則抗體可在紅細(xì)胞輸注或在懷孕/分娩期間接觸胎兒紅細(xì)胞時(shí)的后天刺激下產(chǎn)生不規(guī)則抗體，這類抗體通常屬于IgG類，如抗D和抗C等，能夠穿過(guò)胎盤(pán)，可能造成胎兒溶血。有研究表明，不規(guī)則抗體的大量出現(xiàn)與患者的輸血次數(shù)有關(guān)，在接受輸血的病人身上發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體的頻率較高，最常見(jiàn)的抗體是Rh和Kell系統(tǒng)，輸血后Rh抗體與Kell可能在留在體內(nèi)數(shù)月后消失[16]。這些抗體中大多數(shù)具有重要意義的是Rh、Kell、Duffy和Kidd，而臨床意義不大的是MNSs系統(tǒng)。因此，對(duì)于有輸血史和妊娠史的患者，輸血前有必須要進(jìn)行IAD，尤其是Rh血型系統(tǒng)抗體的篩查，可能會(huì)發(fā)現(xiàn)具有臨床意義的不規(guī)則抗體，避免不良輸血反應(yīng)的發(fā)生。

綜上所述，IAD是對(duì)血液中所有非ABO抗體的檢查，這種檢測(cè)手段表現(xiàn)出重要的臨床意義，對(duì)于安全輸血和減少受血者輸血反應(yīng)至關(guān)重要。IAD是對(duì)ABO血液鑒定的補(bǔ)充，建議將IAD作為輸血前基本檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方案中的一部分，特別是針對(duì)有輸血史和妊娠史的患者。此文的研究結(jié)果為臨城輸血指南后期標(biāo)準(zhǔn)制定提供了借鑒內(nèi)容。