龍立活 陸永梅何佳 高紅偉 奉建芳 唐紅珍

（1.廣西藥用植物園， 廣西 南寧530012； 2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)， 廣西 南寧530200）

子宮肌瘤是良性子宮腫瘤最常見的形式，臨床主要治療策略以手術(shù)干預(yù)和激素調(diào)控為主，存在患者依從性差、藥物副作用多以及疾病復(fù)發(fā)率高等問題，嚴(yán)重影響女性的身心健康，也對(duì)全球衛(wèi)生保健服務(wù)和成本具有深遠(yuǎn)的影響［1?4］。因此，亟需尋找和發(fā)掘兼得有效緩解疾病癥狀和不影響生育功能的治療藥物。

祛瘀散結(jié)膠囊是由白花蛇舌草、白英、山慈菇、夏枯草、三七等15 味中藥制成的膠囊劑，多用于治療瘀血阻絡(luò)引起的乳房脹痛、乳腺增生病、乳癖等疾病，因其具有祛瘀消腫、散結(jié)止痛等功效，臨床上也被應(yīng)用于子宮肌瘤治療，已取得良好治療效果，具有廣泛應(yīng)用前景，但因其成分復(fù)雜，目前仍未見其干預(yù)子宮肌瘤的有效成分及機(jī)制報(bào)道［5?6］。

中藥復(fù)方是一個(gè)復(fù)雜的多成分?多靶點(diǎn)交互體系，它的藥效不是簡(jiǎn)單的藥味加和，而是各藥味間相互影響，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在揭示中藥復(fù)方的復(fù)雜成分及治病機(jī)理時(shí)，不僅需要對(duì)復(fù)方中各藥物成分進(jìn)行獨(dú)立分析，還要對(duì)藥物間的關(guān)系進(jìn)行綜合性討論［7］。本研究擬通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)探討方劑?藥物?成分?靶點(diǎn)?通路?疾病間的聯(lián)系，采用相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證，旨在為研究祛瘀散結(jié)膠囊治療子宮肌瘤的作用機(jī)制提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 祛瘀散結(jié)膠囊活性成分及靶點(diǎn)收集 采用ETCM（http：／／www.tcmip.cn／ETCM／index.php／Home／）、TCMSP（https：／／tcmsp?e.com／user／login／index.html）等數(shù)據(jù)庫及相關(guān)文獻(xiàn)，以“白花蛇舌草”“白英（白毛藤）”“山慈菇”“夏枯草”“三七”“土鱉蟲”“蜈蚣”“山楂”“枳殼”“仙鶴草”“苦楝皮”“冰片”“黃芪”“麥芽”“甘草”為關(guān)鍵詞，對(duì)祛瘀散結(jié)膠囊中各藥味的成分信息及相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行收集，將所得成分在TCMSP 中按照口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%、類藥性（drug?likeness，DL）≥0.18 的藥物動(dòng)力學(xué)（absorption，distribution，metabolism and excretion，ADME）參數(shù)條件進(jìn)行初篩，獲取主要活性成分，采用Uniport（https：／／www.uniprot.org／）及 NCBI Gene（https：／／www.ncbi.nlm.nih.gov／gene）對(duì)所得蛋白和其基因信息標(biāo)準(zhǔn)化為相應(yīng)基因簡(jiǎn)稱。

1.2 疾病靶點(diǎn)預(yù)測(cè)及交互靶點(diǎn) 以“Uterine fibroide”“Uterine fibroids”“fibroid”作為檢索詞納入人類基因數(shù)據(jù)庫（GeneCards）（https：／／www.genecards.org／）進(jìn)行高級(jí)檢索，獲得子宮肌瘤相關(guān)靶點(diǎn)，再采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)蛋白交集Venny 2.1.0（https：／／bioinfogp.cnb.csic.es／tools／venny）在線工具獲得“祛瘀散結(jié)膠囊”與“子宮肌瘤”交集的“中藥?疾病”交互蛋白靶點(diǎn)，并繪制韋恩圖。

1.3 交互靶點(diǎn)蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將“1.2”項(xiàng)下得到的交互靶標(biāo)導(dǎo)入STRING（https：／／string?db.org／）數(shù)據(jù)庫，選擇Multiple Protenin，限定物種Homo sapiens，最低要求互動(dòng)分?jǐn)?shù)為“medium confidence”（＞0.4），其余設(shè)置均遵循系統(tǒng)默認(rèn)，構(gòu)建蛋白互作（protein protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)圖。

1.4 交互靶點(diǎn)GO 和KEGG 富集分析 將交集靶標(biāo)導(dǎo)入STRING 數(shù)據(jù)庫中，設(shè)置條件為閾值P＜0.05，物種來源為Homo sapiens，進(jìn)行基因功能富集分析和KEGG 通路富集分析，從細(xì)胞組成（cellular component，CC）、分子功能（molecular function，MF）、生物過程（biological process，BP）及KEGG 信號(hào)通路等方面提供基因功能的詳細(xì)注釋。

1.5 交互靶點(diǎn)分子對(duì)接 從PubChem 數(shù)據(jù)庫（https：／／pubchem.ncbi.nlm.nih.gov／）獲取主要活性成分sdf 格式的2D 結(jié)構(gòu)，用ChemBio3D 能量最小化轉(zhuǎn)化為三維結(jié)構(gòu)，保存為mol2 格式；從RCSB PDB 數(shù)據(jù)庫（https：／／www.rcsb.org）獲取PDB 號(hào)下載下載靶標(biāo)蛋白的3D 結(jié)構(gòu)，并使用PyMol 軟件刪除水分子和原配體。以蛋白作為受體，以小分子作為配體，根據(jù)靶蛋白復(fù)合物中配體的坐標(biāo)確定分子對(duì)接的活性位點(diǎn)，采用AutoDock Vina 進(jìn)行分子對(duì)接，用PyMol 進(jìn)行相關(guān)作圖。

1.6 試劑與藥物 祛瘀散結(jié)膠囊（批號(hào)Z20026689），購自廣西圣康制藥有限公司。苯甲酸雌二醇注射液［2 mg／mL，批號(hào)（2016）110252511］、黃體酮注射液（10 mg／mL，批號(hào)110251670），均購自寧波第二激素廠；米非司酮（陽性藥，批號(hào)M830038），購自上海麥克林生化科技有限公司；大鼠雌二醇（E2）ELISA 試劑盒（批號(hào)MM?0575R1）、大鼠雌激素受體（ER）ELISA 試劑盒（批號(hào)MM?0567R1）、大鼠孕激素受體（P）ELISA 試劑盒（批號(hào)MM?0551R1），均購自江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司。

1.7 儀器 OHAUS 1／1000 型電子天平，購自奧豪斯儀器（上海）有限公司；BCD?143KA1 型電冰箱，購自TCL 科技集團(tuán)股份有限公司；PM?10AD 型顯微鏡、BX?60 型病理圖像分析儀，均購自日本Olympus 公司；MP60 型顯微照相系統(tǒng)、RM2125 型切片機(jī)，均購自德國(guó)Leica 公司；5425R 型低溫高速離心機(jī)，購自德國(guó)Eppendorf 公司；Synergy H1 型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，購自美國(guó)BioTek 公司；TP?24 型組織研磨機(jī)，購自杰靈儀器制造（天津）有限公司。

1.8 動(dòng)物 雌性SD 大鼠，未孕，體質(zhì)量200～220 g，購自浙江維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（浙）2019?0001，飼養(yǎng)條件為室溫（25±2）℃，相對(duì)濕度40%～70%，自然明暗周期，自由飲食。本實(shí)驗(yàn)獲得廣西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（編號(hào)DW20210621?035）。

1.9 造模、分組及給藥 SD 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，采用雌激素負(fù)荷法造模，除正常組外，各組大鼠每天均給予肌肉注射苯甲酸雌二醇（0.5 mg／kg），隔天每只大鼠增加注射黃體酮（1 mg／kg），連續(xù)注射9周，每天稱定體質(zhì)量1次，并根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整造模藥物用量，經(jīng)大鼠子宮病理學(xué)顯示腺體增生及肌纖維明顯增生，提示造模成功。造模成功的大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為5組，每組8只，米非司酮組每天腹腔注射米非司酮1.25 mg／kg，祛瘀散結(jié)膠囊各劑量組灌胃給予0.3、0.6、0.9 g／kg 祛瘀散結(jié)膠囊，正常組及模型組每天灌胃給予等量生理鹽水。在正常情況下，大鼠子宮質(zhì)量與體質(zhì)量的比值，即子宮系數(shù)恒定；當(dāng)子宮受損發(fā)生充血、水腫或增生肥大等狀態(tài)后，子宮系數(shù)增大，數(shù)值越大表示受損程度越重。

1.10 檢測(cè)指標(biāo)

1.10.1 子宮病理學(xué)檢查 給藥期間觀察各組大鼠行為學(xué)狀態(tài)，給藥4 周后打開大鼠腹腔，觀察子宮和肌瘤形態(tài)，沿子宮膀胱連接處剪取子宮，剝離脂肪，拍照，稱定質(zhì)量，計(jì)算子宮系數(shù)；將新鮮病變組織于多聚甲醛溶液中固定，行HE 染色。

1.10.2 雌二醇（E2）、孕酮（P）、雌激素受體（ER）水平檢測(cè) 大鼠腹腔麻醉后腹主動(dòng)脈取血，收集全血于無抗凝采集管中，室溫放置30 min，4 ℃、3 000 r／min 離心20 min，分離得血清，分裝后保存于－80 ℃待測(cè)；精密稱取剩余子宮組織100 mg，加冰生理鹽水0.9 mL，使用組織研磨機(jī)研磨，4 ℃、10 000 r／min 離心10 min，取上清液待測(cè)，按相應(yīng)試劑盒說明書檢測(cè)血清及子宮組織中雌二醇（E2）、孕酮（P）、雌激素受體（ER）水平。

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過GraphPad Prism 7 軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

2.1.1 祛瘀散結(jié)膠囊活性成分篩選 通過ETCM、TCMSP數(shù)據(jù)庫檢索共獲得祛瘀散結(jié)膠囊1 015 種成分，按照TCMSP 中設(shè)定的ADME 參數(shù)條件篩選并去除無靶點(diǎn)化合物，刪除重復(fù)靶點(diǎn)后得到活性成分為132個(gè)，共計(jì)268 個(gè)靶標(biāo)，具體見表1。其中，潛在靶標(biāo)個(gè)數(shù)較多的活性成分有槲皮素、山柰酚、木犀草素、芒柄花黃素、β?谷甾醇等，其靶標(biāo)個(gè)數(shù)分別為148、62、56、45、38。

表1 祛瘀散結(jié)膠囊包含的化合物和對(duì)應(yīng)潛在靶標(biāo)個(gè)數(shù)（個(gè)）

2.1.2 子宮肌瘤靶點(diǎn)預(yù)測(cè)及“祛瘀散結(jié)膠囊?子宮肌瘤”交互靶點(diǎn)篩選 通過GeneCards 數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)，以“fibroid”“Hysteromyoma”“Uterine fibroid”作為檢索詞收集得到子宮肌瘤治療相關(guān)靶點(diǎn)共計(jì)996 個(gè)。通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)蛋白交集Venny 2.1.0（https：／／bioinfogp.cnb.csic.es／tools／venny）在線工具獲取“祛瘀散結(jié)膠囊”與“子宮肌瘤”交集的“中藥?疾病”交互靶點(diǎn)共52個(gè)，為ESR1、PTGS2、NCOA2、PGR、BCL2、BAX、CASP3、MAP2、PPARG、MMP3、NOS3、RELA、EGFR、CCND1、CDKN1A、PLAU、MMP2、MMP9、IL10、TNF、CDKN2A、TP53、XDH、MMP1、HIF1A、ERBB2、GJA1、CYP1A1、VCAM1、PRKCB、BIRC5、CYP1B1、PLAT、THBD、PTEN、MPO、NFE2L2、COL3A1、CHEK2、INSR、SPP1、ERBB3、GSTM1、ESR2、CDK2、FASN、CYP19A1、PPARA、ADIPOQ、PCNA、EDN1、PLA2G4A，韋恩圖見圖1。

圖1 祛瘀散結(jié)膠囊與子宮肌瘤交互靶點(diǎn)韋恩圖

2.1.3 “祛瘀散結(jié)膠囊?子宮肌瘤”交互靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 利用STRING 數(shù)據(jù)庫對(duì)交互靶點(diǎn)進(jìn)行蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析，繪制PPI 網(wǎng)絡(luò)圖（圖2），圖中網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)為52個(gè)，相互作用連線有527條，平均度值為20.3。節(jié)點(diǎn)表示由此蛋白質(zhì)編碼基因位點(diǎn)單獨(dú)產(chǎn)生的所有蛋白，顏色表示聚類，大小反應(yīng)度值；節(jié)點(diǎn)間的連線則表示連線兩端的蛋白存在直接或間接的相互作用；顏色反應(yīng)作用類型和相互關(guān)系判定來源。

圖2 交互靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)圖

2.1.4 “祛瘀散結(jié)膠囊?子宮肌瘤”交互靶點(diǎn)富集分析 從STRING 生物信息在線數(shù)據(jù)庫中確定GO 條目1 118條，生物學(xué)過程1 008條，主要涉及對(duì)含氧化合物、有機(jī)物質(zhì)、化學(xué)品、脂質(zhì)的反應(yīng)，細(xì)胞對(duì)化學(xué)刺激、有機(jī)物質(zhì)、含氧化合物的反應(yīng)，調(diào)節(jié)細(xì)胞群增殖，對(duì)細(xì)胞過程的積極調(diào)節(jié)，生物過程的積極調(diào)節(jié)等；細(xì)胞組成33條，涉及子宮內(nèi)膜系統(tǒng)、宿主細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、蛋白復(fù)合物、細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶全酶復(fù)合物、蛋白激酶復(fù)合物、細(xì)胞外空間、膜結(jié)合細(xì)胞器、胞內(nèi)細(xì)胞器及細(xì)胞外區(qū)域等；分子功能77條，與信號(hào)受體、蛋白質(zhì)、酶、同蛋白、過渡金屬離子、DNA 結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子、RNA 聚合酶Ⅱ特異性DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)錄因子等結(jié)合及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合等密切相關(guān)，以上分析均根據(jù)顯著性選取排名前十的條目作圖，具體見圖3。KEGG 富集信號(hào)通路137條，主要涉及癌癥通路、癌癥microRNA 通路、糖尿病并發(fā)癥AGE?RAGE 信號(hào)通路、液體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化信號(hào)通路、內(nèi)分泌抵抗信號(hào)通路、癌癥中的蛋白聚糖、HIF?1 信號(hào)通路等，根據(jù)其顯著性選取排名前20 的通路作圖，具體見圖4。

圖3 交互靶點(diǎn)GO 功能富集分析

圖4 KEGG 通路富集分析結(jié)果

2.1.5 分子對(duì)接 為了進(jìn)一步驗(yàn)證祛瘀散結(jié)膠囊有效化學(xué)成分的潛在靶標(biāo)，將主要活性成分與潛在靶標(biāo)進(jìn)行分子對(duì)接。將交互靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)圖的TSV 文件導(dǎo)入Cytoscape 3.6.0 中分析節(jié)點(diǎn)信息，篩選出前6 個(gè)核心調(diào)控基因靶點(diǎn)，結(jié)果見表2。以主要活性成分中潛在靶標(biāo)數(shù)最多的槲皮素（quercetin）作為代表性成分，與TP53、TNF、CASP3、ESR1、MMP9 和INS 進(jìn)行分子對(duì)接分析驗(yàn)證，結(jié)果見圖5。

圖5 槲皮素與關(guān)鍵靶點(diǎn)分子對(duì)接的模式圖

表2 祛瘀散結(jié)膠囊治療子宮肌瘤關(guān)鍵靶點(diǎn)拓?fù)鋵W(xué)分析

2.2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 祛瘀散結(jié)膠囊對(duì)大鼠行為學(xué)的影響 造模前各組大鼠性情溫和，毛色潤(rùn)澤柔順，進(jìn)食飲水良好；造模3 周后，大鼠出現(xiàn)毛色發(fā)黃、皮毛凌亂狀態(tài)，部分大鼠還有脫毛癥狀，且隨造模時(shí)間推移，脫毛大鼠數(shù)量增多，脫毛面積增大，且大鼠處于易激怒狀態(tài)，喜斗毆，善攻擊；祛瘀散結(jié)膠囊及米非司酮給藥后，大鼠情況有所改善，毛色有恢復(fù)跡象，情緒漸漸恢復(fù)穩(wěn)定。

2.2.2 祛瘀散結(jié)膠囊對(duì)大鼠子宮形態(tài)的影響 如圖6A 所示，正常組子宮組織質(zhì)地均勻，顏色鮮亮，兩側(cè)子宮對(duì)稱，呈Y形，未見結(jié)節(jié)或囊腫；模型組大鼠子宮根部明顯增粗，顏色黯淡，并可觸摸到有不同程度米粒大小腫塊；祛瘀散結(jié)膠囊各劑量組和米非司酮組大鼠子宮質(zhì)地均勻，顏色較淡，未見明顯的囊腫、結(jié)節(jié)及腫脹，增生程度明顯減輕。如圖6B所示，與正常組比較，模型組大鼠子宮系數(shù)增加（P＜0.01）；與模型組比較，米非司酮組和祛瘀散結(jié)膠囊各劑量組大鼠子宮系數(shù)降低（P＜0.01），并呈劑量依賴性。結(jié)果提示，祛瘀散結(jié)膠囊對(duì)大鼠子宮肌瘤具有顯著的治療作用。

圖6 祛瘀散結(jié)膠囊對(duì)大鼠子宮形態(tài)的影響（，n＝8）

2.2.3 祛瘀散結(jié)膠囊對(duì)大鼠子宮組織病理變化的影響 正常組大鼠子宮平滑細(xì)胞排列整齊、緊密，形態(tài)正常，色澤均一，肌層未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，未出現(xiàn)增生；模型組大鼠子宮平滑肌增厚，細(xì)胞邊界不清晰，細(xì)胞核出現(xiàn)扁圓形狀，肌纖維排列紊亂無序，可見明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；米非司酮組和祛瘀散結(jié)膠囊各劑量組大鼠子宮平滑細(xì)胞排列較為整齊，色澤均一，形態(tài)正常，肌層炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少，病理狀態(tài)明顯改善，見圖7。

圖7 各組大鼠子宮組織HE 染色（×100）

2.2.4 祛瘀散結(jié)膠囊對(duì)大鼠血清E2、P、ER 水平的影響 如圖8 所示，與正常組比較，模型組大鼠血清E2、P、ER 水平均升高（P＜0.01）；與模型組比較，祛瘀散結(jié)膠囊低劑量組血清ER 水平降低（P＜0.05），E2、P 水平無明顯變化（P＞0.05），米非司酮組和祛瘀散結(jié)膠囊中、高劑量組血清E2、P、ER 水平均降低（P＜0.05）。

圖8 祛瘀散結(jié)膠囊對(duì)大鼠血清E2、P、ER 水平的影響（，n＝8）

2.2.5 祛瘀散結(jié)膠囊對(duì)大鼠子宮組織E2、P、ER 水平的影響 如圖9 所示，與正常組比較，模型組大鼠子宮組織E2、P、ER 水平均升高（P＜0.01）；與模型組比較，米非司酮組和祛瘀散結(jié)膠囊各劑量組大鼠子宮組織E2、P、ER 水平均降低（P＜0.01）。

圖9 祛瘀散結(jié)膠囊對(duì)大鼠子宮組織E2、P、ER 水平的影響（，n＝8）

3 討論

本研究根據(jù)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)得到，祛瘀散結(jié)膠囊治療子宮肌瘤有6 個(gè)核心調(diào)控基因，包括TP53、TNF、CASP3、ESR1、MMP9 和PTGS2。TP53 是最重要的抑瘤基因之一，已有研究發(fā)現(xiàn)子宮肌瘤患者p53 呈高表達(dá)［8?9］；TNF?α 參與炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答，子宮肌瘤清除手術(shù)術(shù)前TNF?α 水平偏高的患者術(shù)后復(fù)發(fā)率更高［10］；子宮肌層的CASP3 是子宮靜止期的潛在調(diào)節(jié)因子；ESR1 編碼雌激素受體，對(duì)子宮肌瘤的生長(zhǎng)有著重要影響［11?12］；MMP9 是人體最重要的蛋白酶之一，可降解腫瘤周邊基質(zhì)和血管基底膜，促進(jìn)腫瘤突破包裹增殖［13］；PTGS2 是前列腺素類生物合成途徑中的限速酶，在炎癥反應(yīng)中起特殊作用［14］。KEGG 信號(hào)通路富集分析得到，祛瘀散結(jié)膠囊治療子宮肌瘤主要涉及癌癥通路、糖尿病并發(fā)癥中AGE?RGE 通路、液體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化通路、內(nèi)分泌抵抗、HIF?1 通路等信號(hào)通路，祛瘀散結(jié)膠囊中活性成分對(duì)應(yīng)的核心調(diào)控基因富集于癌癥通路。有研究表明，子宮肌瘤是一種性激素依賴性疾病，高雌激素長(zhǎng)期刺激引起子宮肌層異常增殖，產(chǎn)生子宮肌瘤病灶；孕激素激活病灶處肌瘤細(xì)胞表面雌激素受體，促進(jìn)肌瘤細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖，二者共同促進(jìn)肌瘤生長(zhǎng)。因此，激素相關(guān)的內(nèi)分泌抵抗信號(hào)通路，是治療子宮肌瘤的重要途徑［15?17］。本研究發(fā)現(xiàn)，祛瘀散結(jié)膠囊能抑制子宮肌瘤模型大鼠血清與子宮組織中E2、P、ER 水平，降低子宮系數(shù)，減少肌瘤數(shù)量和大小，改善子宮病理狀態(tài)。癌癥通路和內(nèi)分泌抵抗通路可能為祛瘀散結(jié)膠囊治療子宮肌瘤的關(guān)鍵通路。

槲皮素為祛瘀散結(jié)膠囊中多味藥物共有的活性成分，分子對(duì)接結(jié)果 顯示，槲皮素與 TP53、TNF、CASP3、MMP9、PTGS2 等關(guān)鍵靶標(biāo)蛋白對(duì)接良好。已有研究表明，槲皮素具有良好的抗腫瘤作用，可下調(diào)PI3K?Akt 信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖與侵襲［18］；在SCG7901 細(xì)胞中，上調(diào)p53 的表達(dá)可抑制其增殖與遷移［19］；下調(diào)MMP9 蛋白的表達(dá)可實(shí)現(xiàn)對(duì)SiHa 細(xì)胞遷移和侵襲能力的抑制［20］。槲皮素還可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制物（Cdkn1a）、半胱天冬酶3（caspase 3）等與細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)，提高β 細(xì)胞在高糖條件下的存活率［21］，抑制炎性介質(zhì)TNF?α、PTGS2 的表達(dá)和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的生成［22］。槲皮素可能作為祛瘀散結(jié)膠囊中關(guān)鍵藥效分子參與治療子宮肌瘤。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)祛瘀散結(jié)膠囊可能通過多靶點(diǎn)、多通路治療子宮肌瘤，為其后續(xù)研究和臨床使用提供了新思路和理論基礎(chǔ)。但本研究仍存在一定的局限性，未對(duì)祛瘀散結(jié)膠囊具體作用機(jī)制作出深入探討，因此祛瘀散結(jié)膠囊的有效活性成分及完整調(diào)控機(jī)制仍需進(jìn)一步研究來探討驗(yàn)證。