馬春艷， 段 瓊， 平惠娟， 孟 珊， 封淑華

(河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊 050200)

酞酸酯被稱(chēng)為塑化劑、增塑劑，在塑料工業(yè)中大量使用, 成為全球性的主要環(huán)境污染物[1]，故不能添加在食物中，也不允許用于食品包裝材料，并且該成分在乙醇中有良好的溶解性，在藥酒及保健酒生產(chǎn)、加工、儲(chǔ)藏過(guò)程中很容易溶解到酒中。保健酒是使用蒸餾酒浸提藥食兩用藥材(海馬、鹿茸、人參等)而制得的澄清透明的液體制劑，含有大量糖分、色素、酯類(lèi)、醇類(lèi)，會(huì)造成酞酸酯的提取困難。

目前，酞酸酯類(lèi)的檢測(cè)方法有氣相色譜法[2]、液相色譜法[3-5]、氣質(zhì)聯(lián)用法[6-14]、液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法[15-17]。本實(shí)驗(yàn)采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜(UPLC-Q-TOF-MS/MS)法，基于一級(jí)母離子的精確質(zhì)量數(shù)、同位素豐度比、二級(jí)碎片離子、保留時(shí)間對(duì)保健酒中16種酞酸酯進(jìn)行快速篩查，以期保證其安全性。

1 材料

Triple TOF 5600+高分辨質(zhì)譜儀(美國(guó)AB Sciex公司)；LC-30AD超高效液相色譜儀(日本島津公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司)；加熱板(美國(guó)Thermo公司)；Kinetex Biphenyl色譜柱(50 mm×3.0 mm，2.6 μm，美國(guó)菲羅門(mén)公司)；Milli-Q超純水裝置(美國(guó)Millipore公司)。

甲酸(德國(guó)Sigma公司)；甲醇、乙腈(美國(guó)Fisher公司)；鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二異丁酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯、鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯、鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯、鄰苯二甲酸二戊酯、鄰苯二甲酸二己酯、鄰苯二甲酸丁基芐基酯、鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯、鄰苯二甲酸二苯酯、鄰苯二甲酸二正辛酯、鄰苯二甲酸二壬酯均購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司。25批保健酒均購(gòu)于市場(chǎng)。

2 方法

2.1 色譜條件 Kinetex Biphenyl色譜柱(50 mm×3.0 mm，2.6 μm)；流動(dòng)相0.1%甲酸(A)-乙腈(含0.1%甲酸)(B)，梯度洗脫(0～1 min，50%B；1～3.5 min，50%～60%B；3.5～7 min，60%～75%B；7～10 min，75%～100%B；10～11 min，100%B)；體積流量0.3 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量5 μL。

2.2 質(zhì)譜條件 Turbo V離子源；電噴霧電壓5 500 V；去簇電壓80 V；離子源溫度550 ℃；霧化氣(GS1)3.4×105Pa；脫溶劑氣(GS2)3.4×105Pa；氣簾氣2.0×105Pa；TOF-MS一級(jí)正離子質(zhì)譜全掃描，掃描范圍m/z100～650；一級(jí)碰撞能量10 V；基于信息觸發(fā)采集模式二級(jí)質(zhì)譜全掃描模式，掃描范圍m/z100～650，二級(jí)碰撞能量40 V。

2.3 供試品溶液制備 精密稱(chēng)取樣品5.0 g，置于25 mL具塞磨口瓶中，沸水浴中加熱去除乙醇后加入5 mL蒸餾水，精密加入5 mL正己烷，劇烈振搖2 min，靜置分層，取上清液1 mL，N2吹干，精密加入1 mL乙腈溶解，即得。

3 結(jié)果

3.1 提取條件選擇 考察不同體積分?jǐn)?shù)乙醇的提取效果，發(fā)現(xiàn)不含乙醇時(shí)最好，可能是因?yàn)樘狨ピ谠撊軇┲械娜芙庑暂^好，萃取時(shí)在有機(jī)溶劑、乙醇-水兩相中都有分配。再對(duì)沸水浴加熱、減壓旋蒸、氮吹、電熱板直接加熱進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)沸水浴加熱去除乙醇操作簡(jiǎn)單，速度快，提取回收率較高。

3.2 色譜條件優(yōu)化 考察流動(dòng)相甲醇、乙腈、甲酸、醋酸銨，發(fā)現(xiàn)有機(jī)相為甲醇時(shí)各酞酸酯能得到良好的分離，但峰形較差；為乙腈時(shí)色譜峰峰形尖銳，但普通C18色譜柱分離效果不好，當(dāng)選用Kinetex Biphenyl色譜柱，并選擇0.1%甲酸、乙腈作為流動(dòng)相, 此時(shí)各酞酸酯具有理想的峰形和分離效果，提取離子流圖見(jiàn)圖1。

3.3 質(zhì)譜條件優(yōu)化 對(duì)各酞酸酯正負(fù)離子掃描模式、碰撞能量進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)在正離子掃描模式、CE碰撞能量40 V時(shí)響應(yīng)靈敏度高，參數(shù)見(jiàn)表1。

表1 各酞酸酯質(zhì)譜參數(shù)

3.4 匹配度分析 樣品總離子流圖及鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二異丁酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯提取離子圖見(jiàn)圖2，四者二級(jí)質(zhì)譜圖(圖3)與對(duì)應(yīng)對(duì)照品二級(jí)質(zhì)譜圖進(jìn)行比對(duì)，匹配度分別達(dá)99.5%、98.1%、97.6%、98.9%。

3.5 方法學(xué)考察 空白基質(zhì)配制5、10、20、50、100、200 ng/mL對(duì)照品溶液，在“2.1”“2.2”項(xiàng)條件下進(jìn)樣測(cè)定，以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行回歸，并以信噪比(S/N)大于3為檢出限，大于10為定量限，結(jié)果見(jiàn)表2，可知鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯在10～200 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r>0.990 0)，其余14種酞酸酯在5～100 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r>0.990 0)。在空白樣品中加入50 ng/mL對(duì)照品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1”“2.2”項(xiàng)條件下各進(jìn)樣測(cè)定6次，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各酞酸酯線性關(guān)系及加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

3.6 樣品含量測(cè)定 按上述方法對(duì)25批樣品進(jìn)行酞酸酯快速篩查，發(fā)現(xiàn)普遍存在鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯，其中12批鄰苯二甲酸二丁酯含量超過(guò)0.3 mg/kg，有1批高達(dá)4.3 mg/kg。國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委發(fā)布d1白酒產(chǎn)品中塑化劑風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，指出鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯、鄰苯二甲酸二丁酯含量分別在5、1 mg/kg以下時(shí)對(duì)飲酒者的健康風(fēng)險(xiǎn)處于可接受水平。按目前食品容器、包裝材料用添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯遷移到食品中的最大量不得超過(guò)1.5 mg/kg，鄰苯二甲酸二丁酯不得超過(guò)0.3 mg/kg。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),鄰苯二甲酸二丁酯含量超過(guò)1 mg/kg的現(xiàn)象，說(shuō)明企業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中可能存在污染，應(yīng)進(jìn)一步調(diào)查原因。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)基于一級(jí)母離子的精確質(zhì)量數(shù)、二級(jí)碎片離子、保留時(shí)間，采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜(UPLC-Q-TOF-MS/MS)法快速篩查保健酒中酞酸酯，該方法簡(jiǎn)便快速，靈敏度高，檢出限低，精密度好，可滿足相關(guān)準(zhǔn)確定性要求。