王建東，郭亞男*，李 昕，唐玉林，閆背背，何生虎

(1.寧夏農(nóng)林科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所，寧夏銀川 750002；2.寧夏獸藥飼料監(jiān)察所，寧夏銀川 750002；3.寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，寧夏銀川 750021)

流產(chǎn)是指由各種原因引起胎兒或母體異常而導(dǎo)致妊娠的生理過(guò)程發(fā)生紊亂，或者胎兒與母體的正常關(guān)系受到破壞而使妊娠中斷的臨床病理現(xiàn)象[1]。流產(chǎn)是影響牛養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)效益的重要因素之一，流產(chǎn)不但造成胎兒夭折或發(fā)育受阻，使產(chǎn)犢間隔擴(kuò)大，增加養(yǎng)牛的飼料成本，而且會(huì)造成產(chǎn)奶量下降，嚴(yán)重者還可引起母牛繁殖障礙，影響后備牛的擴(kuò)充[2]。引起牛流產(chǎn)的因素主要分為傳染性因素和非傳染性因素，其中傳染性因素主要包括布魯氏菌病、李氏桿菌病、牛病毒性腹瀉、牛傳染性鼻氣管炎、寄生蟲(chóng)病、衣原體病和生殖器官疾病等[3-6]。非傳染性因素主要包括營(yíng)養(yǎng)缺乏(蛋白質(zhì)、維生素A、維生素E、維生素D和礦物質(zhì)等)、飼料發(fā)霉變質(zhì)和應(yīng)激等[5-6]。

寧夏養(yǎng)牛歷史悠久，是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部確定的全國(guó)肉牛優(yōu)勢(shì)產(chǎn)區(qū)之一。2020年，寧夏回族自治區(qū)將肉牛產(chǎn)業(yè)確定為九大重點(diǎn)產(chǎn)業(yè)之一，加大政策扶持，優(yōu)化區(qū)域布局，夯實(shí)產(chǎn)業(yè)基礎(chǔ)，提高規(guī)?；?，肉牛產(chǎn)業(yè)持續(xù)快速發(fā)展。寧夏地區(qū)肉牛飼養(yǎng)量192萬(wàn)頭，牛肉產(chǎn)值45.9億元，占畜牧業(yè)總產(chǎn)值的23.3%，占農(nóng)業(yè)總產(chǎn)值的7.8%[7]。但是，目前僅有對(duì)寧夏地區(qū)奶牛流產(chǎn)病原血清學(xué)調(diào)查的報(bào)道[2]，未見(jiàn)有關(guān)肉牛流產(chǎn)相關(guān)報(bào)道。因此，本研究通過(guò)采集不同地區(qū)基礎(chǔ)肉用母牛血液并分離血清開(kāi)展血清病原或抗體檢測(cè)，旨在掌握引起寧夏地區(qū)基礎(chǔ)肉用母牛流產(chǎn)的主要病原因素，為寧夏不同地區(qū)基礎(chǔ)肉用母牛提質(zhì)增效和基礎(chǔ)肉用母牛疾病防控奠定科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 牛犬新孢子蟲(chóng)抗體檢測(cè)試劑盒(ET433)、傳染性牛鼻氣管炎病毒gb抗體檢測(cè)試劑盒(S431)、布魯氏菌抗體檢測(cè)試劑盒(20009)、牛病毒性腹瀉病毒抗原檢測(cè)試劑盒(AA411)、衣原體抗體檢測(cè)試劑盒(AA911)，美國(guó)Idexx公司產(chǎn)品。

1.1.2 儀器設(shè)備 酶標(biāo)儀(SM-3)，北京天石天力公司產(chǎn)品；自動(dòng)洗板機(jī)(ST360W)，上?？迫A公司產(chǎn)品；電熱恒溫器(HH-W21-600)，天津泰斯特有限公司產(chǎn)品；離心機(jī)(TDL80-2B)，上海安亭科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 血清采集 血液樣本由牛場(chǎng)養(yǎng)殖人員和寧夏農(nóng)林科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所科研人員采集。采用非抗凝血采血器從基礎(chǔ)肉用母牛尾靜脈采集4 mL左右的血液，室溫下凝固后，4 ℃條件下保存并運(yùn)輸至寧夏農(nóng)林科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)院研究所疫病研究室。然后采用3 000 r/min離心15 min，最后吸出血清至2 mL凍存管中，置-80 ℃保存待檢。共采集血清樣本92份，其中固原市共計(jì)48份，平羅縣12份，惠農(nóng)區(qū)12份，同心縣12份，吳忠市8份。

1.2.2 檢測(cè)方法及判斷標(biāo)準(zhǔn) 嚴(yán)格按照牛犬新孢子蟲(chóng)抗體檢測(cè)試劑盒、傳染性牛鼻氣管炎病毒gB抗體檢測(cè)試劑盒、布魯氏菌抗體檢測(cè)試劑盒、牛病毒性腹瀉病毒抗原檢測(cè)試劑盒和衣原體抗體檢測(cè)試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行血清樣本抗原或抗體檢測(cè)，結(jié)果采用北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司提供的數(shù)據(jù)分析軟件(xChek)計(jì)算平均值、S/P值或S-N值并結(jié)合說(shuō)明書(shū)中的陰性和陽(yáng)性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行樣品陰陽(yáng)性判斷。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)分析 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)樣品中的陰性、陽(yáng)性數(shù)據(jù)均采用IBM SPASS Statistics 26 統(tǒng)計(jì)分析軟件中的卡方檢驗(yàn)進(jìn)行差異性分析，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 寧夏不同地區(qū)5種流產(chǎn)相關(guān)病原抗體/抗原檢測(cè)結(jié)果

通過(guò)ELISA對(duì)寧夏不同地區(qū)5種流產(chǎn)相關(guān)病原抗體/抗原檢測(cè)并分析，結(jié)果如表1所示。布魯氏菌平均抗體陽(yáng)性率為30.43%(28/92)，平羅縣陽(yáng)性率最高，為100.00%(12/12)，同心縣陽(yáng)性率最低，為16.67%(2/12)；平羅縣與固原市、平羅縣、惠農(nóng)區(qū)、同心縣和吳忠市相比差異極顯著(P<0.01)，其他各地區(qū)之間差異不顯著(P>0.05)。牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)抗原陽(yáng)性率為0。

表1 寧夏不同地區(qū)肉?；A(chǔ)母牛5種流產(chǎn)相關(guān)病原抗體/抗原檢測(cè)結(jié)果

牛傳染性鼻氣管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV)平均抗體陽(yáng)性率為69.57%(64/92)，其中固原市抗體陽(yáng)性率最高，為93.75%(45/48)，吳忠市最低，為0；固原市與同心縣差異不顯著(P>0.05),固原市和同心縣與平羅縣、惠農(nóng)區(qū)和吳忠市相比差異極顯著(P<0.01),吳忠市與固原市、平羅縣、惠農(nóng)區(qū)和同心縣相比差異極顯著(P<0.01)。

犬新孢子蟲(chóng)平均抗體陽(yáng)性率為82.61%(76/92)，其中平羅縣和同心縣抗體陽(yáng)性率最高，為100.00%(12/12)；吳忠市抗體陽(yáng)性率最低，為12.50%。固原市、平羅縣、惠農(nóng)區(qū)和同心縣與吳忠市相比差異極顯著(P<0.01)，固原市與平羅縣和同心縣相比差異顯著(P<0.05)。

衣原體平均抗體陽(yáng)性率為44.57%(41/92)，其中惠農(nóng)區(qū)和吳忠市抗體陽(yáng)性率最高，均為100.00%(12/12)，固原市抗體陽(yáng)性率最低，為22.92%(11/92)?；蒉r(nóng)區(qū)和吳忠市與平羅縣、同心縣和固原市相比差異極顯著(P<0.01)，同心縣與固原市和平羅縣相比差異顯著(P<0.05)。

2.2 5種流產(chǎn)相關(guān)病原抗體/抗原感染情況分析

92份樣品中，陰性率為1.09%(1/92)，5種病原抗原/抗體檢測(cè)陽(yáng)性率為98.91%(91/92)，其中單一病原抗體/抗原陽(yáng)性率占15.22%(14/92)，IBR和衣原體感染率最高，為6.52%；2種病原抗體混合陽(yáng)性率占50.00%(46/92)，IBR+犬新孢子蟲(chóng)陽(yáng)性率最高，為28.26%(26/92)；3種病原抗體混合陽(yáng)性率占22.83%(21/92)，IBR+犬新孢子蟲(chóng)+衣原體陽(yáng)性率最高，為14.13%(13/92)；4種病原抗體混合陽(yáng)性率占10.87%(10/92)，為布魯氏菌+IBR+犬新孢子蟲(chóng)+衣原體混合抗體陽(yáng)性(表2)。

表2 5種流產(chǎn)相關(guān)病原抗體/抗原統(tǒng)計(jì)結(jié)果

3 討論

近年來(lái)，寧夏地區(qū)堅(jiān)持“優(yōu)質(zhì)+高端”肉牛品種改良技術(shù)路線，以西門(mén)塔爾、安格斯牛為主體的良種母牛存欄比例達(dá)75%，已成為全國(guó)重要的優(yōu)質(zhì)肉牛繁育基地。同時(shí)，依托區(qū)域資源稟賦和產(chǎn)業(yè)發(fā)展基礎(chǔ)，形成以中南部地區(qū)為核心的優(yōu)質(zhì)肉牛產(chǎn)區(qū)。主產(chǎn)區(qū)肉牛飼養(yǎng)量達(dá)121.2 萬(wàn)頭，占全區(qū)肉牛飼養(yǎng)量的62.9%[7]。寧夏地區(qū)肉牛主要養(yǎng)殖地區(qū)分別為固原市(隆德縣、西吉縣、涇源縣、彭陽(yáng)縣)、同心縣、平羅縣、惠農(nóng)區(qū)，其他地區(qū)主要為奶牛產(chǎn)業(yè)為主。因此,本研究針對(duì)以上地區(qū)開(kāi)展肉用母牛流產(chǎn)相關(guān)病原血清流行病學(xué)研究，為寧夏地區(qū)肉用母牛繁殖疾病防控技術(shù)研究提供科學(xué)依據(jù)。

臨床上引起懷孕母牛流產(chǎn)的病因很多，但以傳染性因素為主導(dǎo)，如布魯氏菌、BVDV、IBRV、衣原體、牛沙門(mén)氏菌、李氏桿菌、牛彎曲菌、中山病原、赤羽病原、新孢子蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)等病原。一般情況下，妊娠奶牛有3%～8%的流產(chǎn)率是正常現(xiàn)象[2,8-10]。在檢測(cè)的92份樣品中，僅有1頭基礎(chǔ)母牛未檢出相關(guān)病原，檢測(cè)的5種病原抗原/抗體檢測(cè)陽(yáng)性率為98.91%(91/92)。布魯氏菌平均抗體陽(yáng)性率30.43%(28/92)，IBRV平均抗體陽(yáng)性率為69.57%(64/92)，犬新孢子蟲(chóng)平均抗體陽(yáng)性率為82.61%(76/92)，衣原體平均抗體陽(yáng)性率為44.57%(41/92)，未檢出BVDV抗原。研究結(jié)果表明，目前犬新孢子蟲(chóng)感染肉用母牛的占比最大，IBRV次之，布魯氏菌和衣原體感染狀況也較為嚴(yán)重。

在對(duì)混合感染狀況分析中發(fā)現(xiàn)，單一病原抗體/抗原陽(yáng)性率占15.22%(14/92)，IBR和衣原體感染率最高，為6.52%；2種病原抗體混合陽(yáng)性率占50.00%(46/92)，IBR+犬新孢子蟲(chóng)陽(yáng)性率最高，為28.26%(26/92)；3種病原抗體混合陽(yáng)性率占22.83%(21/92)，IBR+犬新孢子蟲(chóng)+衣原體陽(yáng)性率最高，為14.13%(13/92)；4種病原抗體混合陽(yáng)性率占10.87%(10/92)，為布魯氏菌+IBR+犬新孢子蟲(chóng)+衣原體混合抗體陽(yáng)性。本研究表明了寧夏地區(qū)引發(fā)肉用母牛流產(chǎn)的病原主要以混合感染為主，其中IBRV和犬新孢子蟲(chóng)比例最大，本研究與郭亞男等[10]研究結(jié)果一致。原因可能是因?yàn)槟壳叭馀ｐB(yǎng)殖過(guò)程中基礎(chǔ)母牛流產(chǎn)相關(guān)疫苗除了布魯氏菌會(huì)用疫苗兩次預(yù)防外，IBR雖有疫苗但是目前僅在規(guī)?；膛?chǎng)進(jìn)行了推廣應(yīng)用，而其他病原尚未有相應(yīng)的商品化疫苗。因此，針對(duì)以上病原感染情況的調(diào)查表明，在肉用母牛養(yǎng)殖過(guò)程中，應(yīng)加強(qiáng)以上病原的檢疫并采取相應(yīng)的防控措施，尤其是犬新孢子蟲(chóng)和IBRV的防控，做好相應(yīng)的疫苗免疫預(yù)防工作。