杜秀利，王廣成，許艷秋

[1.瀘定縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全(質(zhì)量檢測)中心，四川 瀘定 626100；2.四川省農(nóng)藥檢定所，成都 610041]

草銨膦(glufosinate-ammonium)，化學(xué)名稱4-[羥基(甲基)膦?；鵠-D,L-高丙氨酸，最早于20 世紀(jì)80 年代由德國赫斯特公司開發(fā)，是一種廣譜、高效、低毒的有機(jī)磷類滅生性除草劑。與傳統(tǒng)除草劑百草枯和草甘膦相比，草銨膦具有更優(yōu)良的性能[1]。近年來由于我國百草枯的禁用和抗草銨膦轉(zhuǎn)基因作物及多抗轉(zhuǎn)基因作物的推廣應(yīng)用等原因，草銨膦成為全球市場增長最快的非選擇性除草劑，而中國是草銨膦的生產(chǎn)大國和出口大國[2]。

目前我國登記的草銨膦原藥產(chǎn)品有60 個，母藥產(chǎn)品有9 個。由于生產(chǎn)加工工藝和技術(shù)指標(biāo)的要求不同，在生產(chǎn)過程中對母藥中外來物質(zhì)和雜質(zhì)要求不如原藥高，母藥中可能含有少量添加劑和稀釋劑[3]，使得采用相同的分析方法檢測原藥及原藥加工的制劑和母藥及母藥加工的制劑會有一定的差異。

目前草銨膦的檢測方法一般以含有少量甲醇的磷酸二氫鉀水溶液或純磷酸二氫鉀水溶液作為流動相，采用液相色譜進(jìn)行檢測[4-6]。但實際工作中發(fā)現(xiàn)采用標(biāo)準(zhǔn)方法檢測草銨膦原藥及原藥加工的制劑時效果良好，但檢測母藥和母藥加工的制劑時，會出現(xiàn)無法與草銨膦有效分離的雜質(zhì)峰，影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，本文研究并優(yōu)化了新的試驗條件，用于檢測草銨膦母藥及母藥加工而成的制劑產(chǎn)品中草銨膦，可以排除雜質(zhì)的干擾。該方法方便、高效、準(zhǔn)確，是一種理想的分析方法，可用于草銨膦母藥、母藥加工的制劑和其他草銨膦產(chǎn)品的檢測。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑和試劑

草銨膦標(biāo)準(zhǔn)品[質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.0%，國家農(nóng)藥質(zhì)檢中心(沈陽)]；50%草銨膦母藥；200 g/L 草銨膦水劑；磷酸二氫鉀(分析純，天津市津東天正精細(xì)化學(xué)試劑廠)；磷酸(85%，成都市科隆化學(xué)品有限公司)；超純水(自制)。

1.2 主要儀器

安捷倫1260 高效液相色譜儀(配DAD 檢測器，美國安捷倫科技有限公司)；AB204-S 電子天平(瑞士梅特勒-托利多集團(tuán))；過濾器：濾膜孔徑0.45 μm。

1.3 色譜檢測條件

ZORBAX SAX 不銹鋼色譜柱[5.0 μm，250 mm ×4.6 mm(i.d.)]；流動相：磷酸+磷酸二氫鉀(質(zhì)量比約1.96∶1)的水溶液；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：195 nm；進(jìn)樣體積：10 μL。采用外標(biāo)法，峰面積定量。在該色譜條件下，草銨膦的保留時間約為6.5 min。典型色譜圖如圖1 所示。

圖1 相同條件下草銨膦標(biāo)樣、草銨膦母藥和草銨膦水劑的液相色譜圖

1.4 檢測步驟

1.4.1 流動相配制

準(zhǔn)確稱取磷酸溶液(3.34±0.01)g，磷酸二氫鉀(1.7±0.01)g，溶解于1 000 mL 超純水中，超聲脫氣后備用。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取草銨膦標(biāo)準(zhǔn)品約0.05 g(精確至0.000 2 g)，置于50 mL 的容量瓶，用水溶解，超聲至完全溶解后，放置至恢復(fù)室溫后稀釋至刻度，搖勻備用。

1.4.3 試樣溶液配制

準(zhǔn)確稱取一定量(折算草銨膦含量約0.05 g)的草銨膦母藥或水劑樣品(精確至0.000 2 g)，置于50 mL的容量瓶，用水溶解，超聲至完全溶解后，放置至恢復(fù)室溫后稀釋至刻度，搖勻備用。

1.4.4 進(jìn)樣分析

按1.3 節(jié)所述的儀器條件運行液相色譜儀，觀察至基線平穩(wěn)、無明顯波動后，對標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析，當(dāng)連續(xù)2 次進(jìn)樣的草銨膦檢測信號值變化小于1.5%后，視為儀器完全穩(wěn)定，可進(jìn)行樣品的測定。按照標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液各1 針的順序檢測其中草銨膦的含量。

1.4.5 結(jié)果計算

利用工作站對草銨膦峰進(jìn)行積分，并分別將標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液的峰面積平均，待測樣中草銨膦質(zhì)量分?jǐn)?shù)w(%)計算公式如下：

式中：A1為標(biāo)準(zhǔn)溶液銨膦峰面積平均值；A2為試樣溶液草銨膦峰面積平均值；m1為稱取草銨膦標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量；m2為稱取草銨膦待測樣品的質(zhì)量(g)；ws為標(biāo)準(zhǔn)品中草銨膦的純度(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

采用二極管陣列檢測器(DAD)在190～400 nm吸收波長范圍內(nèi)觀察草銨膦的紫外吸收曲線，掃描結(jié)果如圖2 所示。從圖2 可知，在掃描范圍內(nèi)草銨膦的最大吸收波長為190nm，結(jié)合出峰峰形及干擾峰情況，最終選擇195 nm 作為本方法的檢測波長。

圖2 草銨膦的紫外吸收光譜圖

2.2 流動相的選擇

目前國標(biāo)和行標(biāo)方法檢測草銨膦采用的流動相是將磷酸二氫鉀在水中溶解后，加入少量的甲醇配制而得，磷酸二氫鉀的摩爾濃度為0.05 mol/L。但在實際試驗操作中發(fā)現(xiàn)，在該流動相條件下，草銨膦母藥和部分草銨膦制劑(推測為草銨膦母藥而非原藥加工而成)中出現(xiàn)了更多的雜質(zhì)峰，部分雜質(zhì)峰與草銨膦峰的出峰位置接近甚至重疊，無法達(dá)到良好的分離效果，從而影響檢測結(jié)果的可靠性(圖3)。因此本文優(yōu)化了流動相條件，采用磷酸和磷酸二氫鉀的緩沖體系作為流動相對草銨膦和雜質(zhì)進(jìn)行有效分離。試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，將含有1.7 g 磷酸二氫鉀的1 000 mL超純水(0.012 5 mol/L)中加入2.84 g 磷酸作為流動相，所得色譜圖顯示能夠?qū)⒉蒌@膦和雜質(zhì)進(jìn)行更好地分離，且峰形更好(圖1)，因此本試驗選用該體系作為流動相。

圖3 采用國標(biāo)方法測定草銨膦母藥和制劑的液相色譜圖

2.3 分析方法的線性相關(guān)性

分別配制濃度為0.215 3、0.837 1、1.132 6、1.315 5、2.391 8 mg/mL 的草銨膦標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3 節(jié)所述色譜條件進(jìn)行測定。以草銨膦的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，擬合線性回歸方程，結(jié)果如圖4所示。在選定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，草銨膦的質(zhì)量濃度與峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(R2)為0.999 8，線性方程為y=506.57x-1.882 7。

圖4 線性相關(guān)試驗的線性回歸圖

2.4 分析方法精密度

對同一草銨膦母藥和水劑進(jìn)行5 次平行測定，測得草銨膦的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，用以計算方法的精密度，試驗結(jié)果見表1。由表1 可見，草銨膦母藥的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.081 0，變異系數(shù)為0.16%，草銨膦水劑的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.018 8，變異系數(shù)為0.10%，結(jié)果明顯低于horwitz 公式計算的理論變異系數(shù)，說明該方法的精密度符合分析要求。

表1 精密度計算數(shù)據(jù)

2.5 方法準(zhǔn)確度

稱取已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的草銨膦母藥和草銨膦水劑樣品5 份，分別加入一定量的草銨膦標(biāo)準(zhǔn)品，混勻后按照前文所示方法檢測溶液中草銨膦的含量，計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗結(jié)果

由表2 可知，該方法用于測定草銨膦母藥和草銨膦水劑中草銨膦的平均回收率分別為100.44%和99.69%，符合CIPAC 的基本要求。

3 結(jié) 論

本文采用高效液相色譜儀建立了一種檢測草銨膦母藥和水劑有效成分的定量分析方法，其用于測定草銨膦母藥和水劑中草銨膦的含量，能夠有效避免雜質(zhì)干擾，同時具有簡便快速、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高及分離效果好的優(yōu)點，是草銨膦母藥和母藥加工的制劑中有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的有效檢測方法，適用于此類產(chǎn)品的質(zhì)量控制和檢測。