曾佑成，周彥倫，曹國棟，林靚，郭立春，趙宇含，程青虹，3

(1.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院，石河子 832061；2.南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院，衡陽 421200；3.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，石河子 832061)

膿毒癥心肌病(sepsis-induced cardiomyopathy，SIC)是由膿毒癥導(dǎo)致的可逆性心功能障礙疾病，若不能得到及時有效的治療，可導(dǎo)致患者死亡。由于其居高不下的病死率，SIC是研究者們重點(diǎn)關(guān)注的疾病之一[1-2]。目前，已知的膿毒癥心肌功能障礙的機(jī)制包括循環(huán)中介質(zhì)改變、細(xì)胞形態(tài)功能異常、線粒體功能障礙等[3]。近年來，鐵死亡作為一種鐵依賴性的新的細(xì)胞死亡形式，逐步走入研究者們的視野，已有研究表明它參與了心肌缺血-再灌注損傷、糖尿病心肌病、阿奇霉素誘導(dǎo)的心肌病等多種心血管疾病的發(fā)生[4-5]，但其在SIC中的發(fā)病機(jī)制、信號傳導(dǎo)通路等尚未完全闡明。白藜蘆醇是研究最多的具有二苯乙烯結(jié)構(gòu)的多酚，主要存在于毛葉藜蘆、虎杖、葡萄等植物中，具備免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗炎等多種生物學(xué)效應(yīng)，且具有心肌保護(hù)作用[6-8]。有研究發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇可以通過調(diào)節(jié)鐵死亡影響疾病結(jié)局[9]。針對病因復(fù)雜的SIC，白藜蘆醇具有多靶點(diǎn)和多環(huán)節(jié)的治療優(yōu)勢，基于鐵死亡探索白藜蘆醇抗SIC的作用機(jī)制具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動物 無特定病原體(SPF)級雄性SD大鼠48只，6～8周齡，體質(zhì)量(200±20)g。購自新疆醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心[生產(chǎn)許可證編號：SYXK(新)2011-010101]，實(shí)驗(yàn)大鼠在石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院動物中心進(jìn)行飼養(yǎng)[動物許可證編號：SYXK(新)2011-0002]，SPF級飼養(yǎng)環(huán)境下由專人添加食物與水，相對溫度為20～25 ℃，相對濕度為50%～70%，室內(nèi)通風(fēng)良好，進(jìn)食、飲水及籠內(nèi)活動不設(shè)限。本實(shí)驗(yàn)的動物實(shí)驗(yàn)方案均得到石河子大學(xué)動物保護(hù)與使用委員會的批準(zhǔn)(批號：A2018-018-01)。

1.1.2藥物與試劑 白藜蘆醇購自上海麥克林生物科技有限公司，批號：817263，含量≥99%；Ex527(SIRT1抑制劑)購自上海羅恩試劑公司，批號：312666，含量≥98%；SIRT1(貨號：ab32441)、FTH-1(貨號：ab183781)購自美國Abcam公司；GPX4(貨號：T56959)購自上海Abmart公司；RIPA組織裂解液(貨號：R0010)、Alexa Fluor 594標(biāo)記的羊抗兔IgG熒光二抗(貨號：K1034G-AF594)購自北京索萊寶生物技術(shù)公司；DHE染色試劑盒(貨號：D1008)購自蘇州宇恒生物技術(shù)公司；辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠二抗(貨號：GB23301)、山羊抗兔二抗(貨號：GB23303)、抗β-actin抗體(貨號：GB11001)均購自武漢賽維爾生物技術(shù)有限公司；高敏型ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒(貨號：E412-01/02)均購自南京諾唯贊生物科技股份有限公司；乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒(貨號：A0202-2)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase-myocardial band，CK-MB)試劑盒(貨號：H197-1～2)、還原型谷胱甘肽(GSH)測定試劑盒(貨號：A006-2-1)、丙二醛(MDA)測定試劑盒(貨號：A003-1～2)購自南京建成生物工程研究所；鐵離子比色法檢測試劑盒(貨號：E1042)購自北京普利萊生物公司。

1.1.3儀器 Z323K低溫離心機(jī)(德國HERMILE公司)，多功能酶標(biāo)儀Elx-800(美國Bio-Bad公司)，石蠟包埋機(jī)、輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)(德國LEICA公司)，光學(xué)顯微鏡(日本OPAGmpus公司)，全自動化學(xué)發(fā)光成像儀5200(中國上海天能公司)。

1.2方法

1.2.1分組與模型處理 48只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按照體質(zhì)量分層隨機(jī)法分為假手術(shù)組、模型對照組、白藜蘆醇組、Ex527組(每組12只)。模型對照組、白藜蘆醇組、Ex527組采用盲腸結(jié)扎穿孔法制作大鼠膿毒癥模型[10]，具體方法：術(shù)前禁食12 h，不禁水，麻醉后仰臥位固定。備皮，消毒后行腹中線切口，長度 1～1.5 cm，尋找到盲腸后，移出腹腔，在距根部1/4處用4號絲線結(jié)扎，用18號針對穿腸壁刺兩次，擠出少量內(nèi)容物，將腸管回納入腹腔，使得腸內(nèi)容物持續(xù)溢出，逐層關(guān)腹，術(shù)后立即皮下注射乳酸鈉林格液 50 mL·kg-1，所有大鼠經(jīng)靜脈給予營養(yǎng)支持。假手術(shù)組小鼠用同樣的方法處理，但不結(jié)扎和穿孔盲腸，不使用抗菌藥物或類似物，術(shù)后大鼠放回籠中，禁止攝入食物，可以自由獲得水。觀察造模前和造模后大鼠的肛溫、呼吸頻率、心率、反應(yīng)、飲食情況和有無豎毛、腹瀉及出血等情況，評價模型是否成功。

1.2.2藥物處理 選取造模成功大鼠納入實(shí)驗(yàn)，模型對照組：采用盲腸結(jié)扎穿孔法制備SIC大鼠模型，術(shù)后0.5 h予以腹腔注射等同溶劑對照劑量的0.9%氯化鈉溶液；白藜蘆醇組：CLP術(shù)后0.5 h予以腹腔注射白藜蘆醇(50 mg·kg-1)；Ex527組：CLP術(shù)前0.5 h腹腔注射Ex527(5 mg·kg-1)，術(shù)后0.5 h予以腹腔注射白藜蘆醇(50 mg·kg-1)；假手術(shù)組：術(shù)后0.5 h予以腹腔注射等同溶劑對照劑量的0.9%氯化鈉溶液[11-13]。待術(shù)后各組大鼠實(shí)驗(yàn)觀察點(diǎn)結(jié)束，即術(shù)后24 h后麻醉取腹主動脈血4 mL，3000 r·min-1離心15 min(離心半徑6 cm)，取血清分裝后存放于-80 ℃冰箱，用于后續(xù)檢測。各組大鼠處死后，留取心臟標(biāo)本，制作染色病理切片及用于后續(xù)檢測。

1.2.3心肌組織蘇木精-伊紅(HE)染色 手術(shù)取出心臟組織后洗凈殘余血液，置于4%多聚甲醛緩沖液中固定保存48 h后行石蠟包埋，使用切片機(jī)將組織切片厚度5 μm，60 ℃烤片30 min進(jìn)行脫蠟，水洗后行HE染色，梯度乙醇脫水，透明，滴加適量中性樹膠后加蓋玻片封片，待切片干燥后光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照保存。

1.2.4透射電鏡觀察 透射電子顯微鏡采用武漢賽維爾生物技術(shù)公司的標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行。大鼠處死后3 min內(nèi)取樣，心臟組織取下后洗凈切片面積2 mm×2 mm，投入電鏡固定液內(nèi)室溫固定2 h，再轉(zhuǎn)移至4 ℃冷藏保存運(yùn)輸。之后使用1%瓊脂糖包埋細(xì)胞，脫水，用超微切片機(jī)切割成超薄切片(厚度70 nm)。切片用乙醇配制的醋酸鈾染色15 min，然后用檸檬酸鉛染色15 min。使用透射電子顯微鏡(HT7700，HITACHI)拍攝圖像，每組至少拍攝圖像5張。

1.2.5生化指標(biāo)檢測 取大鼠腹主動脈血3 mL離心血清，分別檢測LDH和CK-MB的變化水平。通過研磨取左心室心肌組織勻漿上清液檢測GSH和MDA的變化水平。操作步驟均按照對應(yīng)試劑盒說明書方法操作。

1.2.6心臟組織鐵離子濃度檢測 采用亞鐵嗪比色法定量檢測鐵離子濃度。心臟組織稱質(zhì)量后使用RIPA組織裂解液冰上裂解30 min。設(shè)置空白對照管、標(biāo)準(zhǔn)品管和樣品管，加入鐵離子檢測劑30 μL，混勻，室溫孵育30 min。樣品在波長 550 nm 處讀取吸光度(A值)，以標(biāo)準(zhǔn)曲線取值。

1.2.7DHE染色檢測組織活性氧自由基(realtive axygen species，ROS) 采用新鮮組織冰凍切片進(jìn)行DHE染色。取下心臟后，使用含乙醇-干冰的OCT化合物包埋心臟組織，待冰凍切片機(jī)至最佳切割溫度，將其切成切片厚度5 μm，并置于載玻片上，儲存在-80 ℃冰箱。在每個組織切片上滴加DHE(10 mol·L-1)，37 ℃避光濕盒中30 min，熒光顯微鏡觀察和拍攝紅色發(fā)射圖像，ROS陽性細(xì)胞在整個核區(qū)被染成紅色(激發(fā)波長為490 nm，發(fā)射波長為610 nm)。

1.2.8Western blotting檢測心肌SIRT1、GPX4、FTH-1蛋白表達(dá) 心肌組織冰上研磨至勻漿，加入RIPA組織裂解液裂解30 min，12 000 r·min-1離心(離心半徑6 cm)，取上清液，測定蛋白濃度。蛋白加上樣緩沖液后煮沸上樣，進(jìn)行凝膠電泳，使用濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜后，BSA封閉液封閉2 h，使用SIRT1、GPX4、FTH-1(1：1000)4 ℃孵育過夜，TBST洗3次，每次5 min，對應(yīng)二抗室溫孵育1 h，TBST洗3次，每次5 min，滴加ECL發(fā)光液與膜作用后進(jìn)行顯影。

2 結(jié)果

2.1HE染色心臟病理組織結(jié)果 見圖1。大鼠心肌HE結(jié)果顯示，24 h后所有假手術(shù)組大鼠心肌細(xì)胞排列整齊有序，未見明顯異常。模型對照組心肌細(xì)胞水腫、變性，部分橫紋肌模糊(黑色箭頭所示)，間質(zhì)纖維結(jié)構(gòu)紊亂(紅色箭頭所示)，炎性細(xì)胞浸潤(綠色箭頭所示)。與模型對照組比較，白藜蘆醇組偶見炎癥細(xì)胞浸潤，病理損傷程度明顯減輕。而Ex527組損傷程度較白藜蘆醇組明顯加重。

A.假手術(shù)組；B.模型對照組；C.白藜蘆醇組；D.Ex527組。圖1 4組大鼠心臟組織HE染色結(jié)果 A.sham group；B.model control group；C.resveratrol group；D.Ex527 group.Fig.1 HE staining results of heart tissues in four groups of rats

2.2線粒體形態(tài)觀察 見圖2。鐵死亡典型的形態(tài)學(xué)改變?yōu)榧?xì)胞膜破裂伴隨同質(zhì)異形的小線粒體(嵴減少，膜凝聚，外膜破裂)[4]。圖2中，假手術(shù)組心肌細(xì)胞線粒體膜和嵴結(jié)構(gòu)清晰完整，排列整齊。與假手術(shù)組比較，模型對照組心肌線粒體結(jié)構(gòu)出現(xiàn)外膜破裂、空泡樣改變、嵴溶解斷裂、肌纖維排列紊亂等改變。白藜蘆醇組仍可見正常線粒體結(jié)構(gòu)，僅小部分線粒體膜和嵴結(jié)構(gòu)缺如。Ex527組類似模型對照組改變，可見線粒體膜凝聚、嵴減少。

A.假手術(shù)組；B.模型對照組；C.白藜蘆醇組；D.Ex527組。圖2 4組大鼠心肌電子顯微鏡結(jié)果 A.sham group；B.model control group；C.resveratrol group；D.Ex527 group.Fig.2 Electron microscopic results of myocardium in four groups of rats

2.3LDH、CK-MB檢測結(jié)果 見圖3。與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠血清中LDH和CK-MB均顯著升高(P<0.01)，表明模型對照組大鼠心肌功能受損。造模后使用白藜蘆醇腹腔注射，該組大鼠LDH和CK-MB均顯著降低(P<0.01)。與白藜蘆醇組比較，Ex527組LDH和CK-MB均顯著升高(P<0.01)。

A.假手術(shù)組；B.模型對照組；C.白藜蘆醇組；D.Ex527組；①與假手術(shù)組比較，t=10.71，26.60，P<0.01；②與模型對照組比較，t=10.98，25.95，P<0.01；③與白藜蘆醇組比較，t，5.18～6.36，P<0.01。圖3 4組大鼠血清中LDH、CK-MB水平A.sham group；B.model control group；C.resveratrol group；D.Ex527 group；①Compared with sham group，t=10.71，26.60，P<0.01；②Compared with model control group，t=10.98，25.95，P<0.01；③Compared with resveratrol group，t=5.18，6.36，P<0.01.Fig.3 LDH and CK-MB levels in the serum of rats in four

2.4GSH、MDA檢測結(jié)果 見圖4。與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠GSH含量顯著降低，MDA含量顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，白藜蘆醇組大鼠的GSH含量顯著升高，MDA含量顯著降低(P<0.01)。與白藜蘆醇組比較，Ex527組GSH水平明顯降低，而MDA明顯升高(P<0.05)。

A.假手術(shù)組；B.模型對照組；C.白藜蘆醇組；D.Ex527組；①與假手術(shù)組比較，t=11.13，17.83，P<0.01；②與模型對照組比較，t=7.52，8.70，P<0.01；③與白藜蘆醇組比較，t=4.51，6.35，P<0.05。圖4 4組大鼠心肌組織中GSH、MDA水平A.sham group；B.model control group；C.resveratrol group；D.Ex527 group；①Compared with sham group，t=11.13，17.83，P<0.01；②Compared with model control group，t=7.52，8.70，P<0.01；③Compared with resveratrol group，t=4.51，6.35，P<0.05.Fig.4 GSH and MDA levels in myocardial tissue of rats in four

2.5鐵離子濃度檢測結(jié)果 見圖5。與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠心肌細(xì)胞中鐵離子含量顯著升高(P<0.01)。在使用白藜蘆醇干預(yù)后，該組大鼠鐵離子含量顯著降低(P<0.01)。與白藜蘆醇組比較，Ex527組鐵離子含量明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

A.假手術(shù)組；B.模型對照組；C.白藜蘆醇組；D.Ex527組；①與假手術(shù)組比較，t=13.20，P<0.01；②與模型對照組比較，t=6.59，P<0.01；③與白藜蘆醇組比較，t=2.74，P<0.05。圖5 4組大鼠心肌組織鐵離子濃度 A.sham group；B.model control group；C.resveratrol group；D.Ex527 group；①Compared with sham group，t=13.20，P<0.01；②Compared with model control group，t=6.59，P<0.01；③Compared with resveratrol group，t=2.74，P<0.05.Fig.5 Concentration of iron ions in myocardial tissue of rats in four groups

2.6檢測組織ROS結(jié)果 見圖6。與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠心肌ROS表達(dá)顯著升高(P<0.01)。與模型對照組比較，白藜蘆醇組ROS表達(dá)受到抑制(P<0.01)。在使用Ex527之后，ROS表達(dá)水平明顯升高(P<0.05)。

A.假手術(shù)組；B.模型對照組；C.白藜蘆醇組；D.Ex527組；①與假手術(shù)組比較，t=12.21，P<0.01；②與模型對照組比較，t=14.41，P<0.01；③與白藜蘆醇組比較，t=8.94，P<0.05。圖6 4組大鼠心肌ROS染色結(jié)果(×400) A.sham group；B.model control group；C.resveratrol group；D.Ex527 group；①Compared with sham group，t=12.21，P<0.01；②Compared with model control group，t=14.41，P<0.01；③Compared with resveratrol group，t=8.94，P<0.05.Fig.6 ROS staining results of rat myocardium in four groups(×400)

2.7Western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見圖7。與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠心肌中SIRT1、GPX4、FTH-1顯著降低(P<0.05)。與模型對照組比較，白藜蘆醇給藥組能顯著提高SIRT1、GPX4、FTH-1蛋白表達(dá)水平(P<0.05)。在使用Ex527之后，SIRT1、GPX4、FTH-1蛋白表達(dá)水平明顯減少(均P<0.05)。

A.假手術(shù)組；B.模型對照組；C.白藜蘆醇組；D.Ex527組；①與假手術(shù)組比較，t=16.48，7.32，3.80，P<0.05；②與模型對照組比較，t=13.75，9.84，5.03，P<0.05；③與白藜蘆醇組比較，t=7.74，4.90，6.17，P<0.05。圖7 4組大鼠心肌組織SIRT1、GPX4、FTH-1蛋白表達(dá)水平 A.sham group；B.model control group；C.resveratrol group；D.Ex527 group；①Compared with sham group，t=16.48，7.32，3.80，P<0.05；②Compared with model group，t=13.75，9.84，5.03，P<0.05；③Compared with control resveratrol group，t=7.74，4.90，6.17，P<0.05.Fig.7 Expression levels of SIRT1，GPX4 and FTH-1 protein in myocardial tissue of rats in four groups

3 討論

SIC是嚴(yán)重膿毒癥常見的并發(fā)癥，其發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性增加了臨床治療的難度，目前仍沒有有效的治療方式來早期干預(yù) SIC 的進(jìn)展[14-15]。鐵死亡作為一種新的細(xì)胞死亡方式，有研究表明鐵蛋白自噬參與的鐵死亡介導(dǎo)了SIC的發(fā)生[16]。鐵死亡在形態(tài)學(xué)、遺傳學(xué)和生物化學(xué)等方面均不同于以往的細(xì)胞凋亡、焦亡或壞死等細(xì)胞死亡方式，它受多種代謝途徑調(diào)控，有兩大特征：一是鐵依賴性，各種原因所致細(xì)胞內(nèi)亞鐵離子增多可致ROS生成增加，進(jìn)一步與細(xì)胞內(nèi)蛋白、核酸等發(fā)生反應(yīng)；二是脂質(zhì)過氧化物過度累積，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)(Cystine/GSH/GPX4)活性下調(diào)后，多不飽和脂肪酸長鏈與過多的ROS反應(yīng)，生成丙二醛(malondialdelyde，MDA)、4-羥基壬烯醛(4-hydroxynonenal，4-HNE)等氧化產(chǎn)物，最后造成細(xì)胞膜破裂[17-19]。本研究采用線粒體形態(tài)學(xué)觀察、鐵死亡標(biāo)志物檢測、過氧化產(chǎn)物測定，多類別多層次證實(shí)鐵死亡是SIC的發(fā)生機(jī)制之一，并進(jìn)一步研究了天然多酚類藥物白藜蘆醇通過SIRT1/GPX4通路途徑提供心肌保護(hù)作用。

白藜蘆醇可通過抗炎、抗氧化、調(diào)控免疫、凋亡等多種生物途徑改善不同類型的心肌病變，進(jìn)而對心血管系統(tǒng)起到保護(hù)作用。白藜蘆醇被認(rèn)為是強(qiáng)有力的羥基自由基、超氧化物和金屬誘導(dǎo)基團(tuán)的分子清除劑，可減輕ROS引起的細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化和DNA損傷[20]。研究發(fā)現(xiàn)，通過白藜蘆醇膳食干預(yù)可逆轉(zhuǎn)肝病小鼠中的FoxO1的乙?；?，增加SIRT1水平，減輕鐵代謝異常所致肝損傷和慢性肝病發(fā)展[21]。MO等[22]用聚合納米顆粒封裝白藜蘆醇，其良好的生物相容性提高了白藜蘆醇的生物利用度，結(jié)果表明封裝后的白藜蘆醇能夠抑制由erastin誘導(dǎo)的HT22小鼠海馬細(xì)胞的鐵死亡，但LEE等[23]在頭頸部腫瘤的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化研究中，使用SIRT1基因沉默或Ex527藥物處理可減輕細(xì)胞鐵死亡，從而抑制腫瘤的上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，使用白藜蘆醇和SIRT誘導(dǎo)劑SRT1720可增加細(xì)胞鐵死亡。目前的研究并未完全闡明白藜蘆醇對鐵死亡的調(diào)控機(jī)制，因此本研究構(gòu)建SIC大鼠模型，并在該模型中進(jìn)一步探究白藜蘆醇在鐵死亡進(jìn)展過程中所扮演的角色。此外，白藜蘆醇是SIRT1的天然激動劑[24]，SIRT1作為依賴NAD+的去乙?；?，能修飾轉(zhuǎn)錄因子和DNA修復(fù)蛋白等在內(nèi)的50多個非組蛋白靶標(biāo)，在維持組織的代謝平衡中發(fā)揮著重要功能，已被證明在膿毒癥所致的肝、腎、腦等多臟器功能障礙中起到保護(hù)作用[25-27]。在該SIC模型中，與假手術(shù)組比較，模型組SIRT1蛋白表達(dá)顯著減少，但是在CLP術(shù)后予以白藜蘆醇處理后，SIRT1蛋白表達(dá)增加，鐵死亡信號降低，心臟損傷程度也得以減輕。此外，在使用SIRT1的特異性抑制劑Ex527預(yù)處理大鼠后，白藜蘆醇對大鼠SIC的保護(hù)作用明顯減弱，這也證實(shí)SIRT1激活參與白藜蘆醇對大鼠SIC的保護(hù)機(jī)制，這可能與SIRT1能抑制鐵死亡通路相關(guān)。

谷胱甘肽過氧化酶-4(GPX4)在鐵死亡進(jìn)展過程中起重要作用，它的失活可導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化物的積累并導(dǎo)致鐵死亡[28]。鐵重鏈蛋白-1(FTH-1)表達(dá)降低說明細(xì)胞內(nèi)鐵離子儲存減少，而增多的鐵離子可能通過芬頓反應(yīng)產(chǎn)生ROS，進(jìn)而影響正常的細(xì)胞代謝活動。因此，GPX4和FTH-1可以一定程度上反映心肌組織鐵死亡的程度。本研究中，CLP模型組心肌GPX4、FTH-1蛋白表達(dá)均受到抑制，鐵死亡的相關(guān)信號——GSH消耗、ROS增加、脂質(zhì)過氧化也都被觀察到，這與參考文獻(xiàn)[29-30]中的結(jié)果一致。此外在實(shí)驗(yàn)過程中，CLP模型組予以白藜蘆醇腹腔注射后，鐵死亡相關(guān)的信號受到抑制，線粒體損傷明顯減輕。之后使用SIRT1抑制劑(Ex527)阻斷SIRT1信號表達(dá)，大鼠的心臟鐵死亡程度增加，心肌損傷明顯加重。以上結(jié)果表明，鐵死亡參與了SIC的進(jìn)展，且白藜蘆醇引起的SIRT1的激活可使GPX4蛋白表達(dá)水平明顯上升，起到抑制鐵死亡，減少心肌損傷的作用。

綜上所述，白藜蘆醇可以通過調(diào)節(jié)SIRT1/GPX4信號通路抑制心肌鐵死亡，改善CLP誘導(dǎo)的SIC，其分子機(jī)制可能與上調(diào)GPX4蛋白表達(dá)、減少ROS積累，減輕線粒體損傷有關(guān)。本研究也存在一定局限性，第一，上述討論機(jī)制可能是白藜蘆醇對大鼠SIC的治療作用的一方面，與其他細(xì)胞死亡死亡形式，如自噬、凋亡、焦亡等協(xié)同作用值得深入研究；第二，未使用細(xì)胞或者基因敲減等方法進(jìn)一步驗(yàn)證加強(qiáng)證據(jù)鏈，是否存在其他的中間調(diào)控靶點(diǎn)參與SIRT1對鐵死亡的調(diào)控也需進(jìn)一步闡明。