王玉文，宋宗義，趙云龍，劉建民

肥大細(xì)胞呈圓形或卵圓形，細(xì)胞核較小，位于細(xì)胞中央，胞質(zhì)充滿大小一致的異染性顆粒。其廣泛分布于皮膚及內(nèi)臟黏膜下的微血管周圍，可分泌多種細(xì)胞因子，參與機(jī)體創(chuàng)傷修復(fù)、Ⅰ型超敏反應(yīng)等生物學(xué)行為[1-2]。肥大細(xì)胞染色劑種類較多，其中甲苯胺藍(lán)最為常用，肥大細(xì)胞的細(xì)胞核可以被甲苯胺藍(lán)染成藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)異染性顆粒被染成紫紅色。在肥大細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)在配置好的甲苯胺藍(lán)水溶液中加入過飽和的碳酸鋰，極大提高了甲苯胺藍(lán)的染色能力，縮短了染色時(shí)間。本科室選用兩種甲苯胺藍(lán)染色液進(jìn)行對(duì)比，并對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行分析，收到良好效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料選取我院病理科存檔的喉、肺組織活檢標(biāo)本各10例，標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，脫水后包埋成組織蠟塊，每個(gè)蠟塊3 μm厚連續(xù)切片。

1.2 方法

1.2.1甲苯胺藍(lán)硫酸混合染色法 A液(0.5%甲苯胺藍(lán)染色液)：稱取0.5 g甲苯胺藍(lán)溶解于100 mL純水中。B液(3%硫酸水溶液)：取適量濃硫酸按比例稀釋成3%的水溶液。染色時(shí)取0.5 mL A液和20 μL B液混合成工作液(pH 1.90)，石蠟切片脫蠟復(fù)水，用工作液染色30 min，水洗晾干或冷風(fēng)吹干，中性樹膠封固[3]。

1.2.2甲苯胺藍(lán)硼酸鹽染色法 試劑購自Phygene公司，甲苯胺藍(lán)染色液中含有1%硼酸鈉(pH 3.10)。石蠟切片脫蠟復(fù)水后染色10 min，染色較深時(shí)可用醋酸分化液分化，水洗晾干或冷風(fēng)吹干，中性樹膠封固。

1.2.3甲苯胺藍(lán)飽和碳酸鋰染色法 A液(0.5%甲苯胺藍(lán)染色液)：稱取0.5 g甲苯胺藍(lán)溶解于100 mL純水中。B液(醋酸分化液)：取0.5 mL冰醋酸加入99.5 mL純水中。染色時(shí)取20 mL A液加入過量的碳酸鋰使染色液達(dá)到飽和狀態(tài)，此為工作液。石蠟切片脫蠟復(fù)水后用工作液染色1～5 min后水洗，B液分化20～30 s，水洗晾干或冷風(fēng)吹干，中性樹膠封固。

甲苯胺藍(lán)飽和碳酸鋰染色液pH 10.13，為了探討碳酸鋰在染色液中的作用，用氫氧化鈉將A液pH調(diào)至10.13，配制為甲苯胺藍(lán)堿性染色液，染色方法同上。

2 結(jié)果

本組對(duì)喉、肺組織活檢標(biāo)本各10例進(jìn)行3種方法染色，結(jié)果顯示：(1)甲苯胺藍(lán)硫酸混合染色法中組織著色最淺，肥大細(xì)胞異染性顆粒被染成紫藍(lán)色，與其它組織對(duì)比不夠清晰。(2)甲苯胺藍(lán)硼酸鹽染色法將異染性顆粒染成紫紅色。(3)甲苯胺藍(lán)飽和碳酸鋰染色法將異染性顆粒染成清晰的紫紅色，與細(xì)胞核對(duì)比十分明顯，最易觀察。本組結(jié)果提示甲苯胺藍(lán)飽和碳酸鋰法染色效果最佳(表1、2，圖1、2)。

3 討論

甲苯胺藍(lán)屬于醌亞胺堿性染料，含有2個(gè)發(fā)色團(tuán)：胺基、醌型苯環(huán)。此外，甲苯胺藍(lán)還含有兩個(gè)助色團(tuán)，其促使染料電離成鹽類，幫助染料與被染物質(zhì)結(jié)合，使組織上色[4]。肥大細(xì)胞胞質(zhì)中含有嗜堿性顆粒，顆粒內(nèi)含有肝素、組胺和5-羥色胺，屬于硫酸酯，具有異染性，可被甲苯胺藍(lán)染成紫紅色。

蘇木精與甲苯胺藍(lán)同為堿性核染料，在配制蘇木精染色液時(shí)，乙酸的加入量對(duì)蘇木精染色性有較大影響。乙酸加入量過多、pH較低時(shí)，染色液選擇性增強(qiáng)，但是染色能力減弱。反之，乙酸加入量不足、pH較高時(shí)，染色液選擇性減弱，染色能力增強(qiáng)，細(xì)胞核、質(zhì)均上色，需要進(jìn)行分化。

甲苯胺藍(lán)染色液也有類似的現(xiàn)象，甲苯胺藍(lán)硫酸混合染色法染色液pH約為1.90時(shí)，甲苯胺藍(lán)染色能力較弱，染色時(shí)間需要30 min；但是甲苯胺藍(lán)選擇能力較強(qiáng)，細(xì)胞質(zhì)幾乎不著色，細(xì)胞核被染成藍(lán)色，肥大細(xì)胞異染性顆粒被染成紫藍(lán)色，染色結(jié)果與丁桂齡等[5]報(bào)道一致。甲苯胺藍(lán)硼酸鹽染色法染色液pH約為3.10時(shí)，甲苯胺藍(lán)染色能力有所增強(qiáng)，染色時(shí)間縮短；但是選擇能力有所降低，細(xì)胞質(zhì)也會(huì)著色，細(xì)胞質(zhì)著色較深時(shí)可以用醋酸分化。

甲苯胺藍(lán)飽和碳酸鋰染色法染色液pH最高(約為10.13)，此時(shí)甲苯胺藍(lán)染色能力最強(qiáng)，但是選擇能力較弱。切片染色1 min組織即可上色，但細(xì)胞質(zhì)著色較重，需用醋酸分化。醋酸分化后，細(xì)胞質(zhì)藍(lán)色大部分被脫去，細(xì)胞核呈藍(lán)色，肥大細(xì)胞內(nèi)異染性顆粒呈紫紅色，對(duì)比非常明顯，利于觀察鑒別。

表1 喉組織的3種不同甲苯胺藍(lán)染色比較

表2 肺組織的3種不同甲苯胺藍(lán)染色比較

①A①B①C②A②B②C

許多研究認(rèn)為，酸性染液可增強(qiáng)肥大細(xì)胞胞質(zhì)顆粒的異染性，染液配制時(shí)應(yīng)選用酸性試劑[1,3]。酸性條件雖然可以增加染色液的選擇性，但是pH過低會(huì)削弱染色液的染色能力，染色時(shí)間大大延長，切片對(duì)比效果不明顯。

甲苯胺藍(lán)飽和碳酸鋰染色法為堿性染色液，與前兩種酸性染色液有較大不同，卻得到了較好的染色結(jié)果。通過氫氧化鈉將甲苯胺藍(lán)水溶液的pH值調(diào)高到甲苯胺藍(lán)飽和碳酸鋰染色液相同的pH值，獲得同樣的染色效果，證明碳酸鋰只是為甲苯胺藍(lán)提供堿性的溶液條件，其并未參與染色反應(yīng)。甲苯胺藍(lán)在堿性條件下染色能力為何會(huì)大幅增強(qiáng)，作者推測(cè)：甲苯胺藍(lán)分子含有2個(gè)助色團(tuán)，堿性條件促進(jìn)了助色團(tuán)的電離，充分電離的助色團(tuán)增強(qiáng)了甲苯胺藍(lán)與組織的親和力，使組織快速著色。

甲苯胺藍(lán)硫酸混合染色法和甲苯胺藍(lán)硼酸鹽染色法是酸性染色液，這兩種染色液更加注重染色液的選染性。甲苯胺藍(lán)飽和碳酸鋰染色法是堿性染色液，該染色液的染色能力更加突出，染色時(shí)間短，符合手術(shù)冷凍切片的染色要求，并且配制方法簡單，值得推廣應(yīng)用。