汪 晶 施佳君 潘永明 朱科燕 陳 誠 陳民利 陳方明#

1 杭州市第一人民醫(yī)院城北院區(qū) 浙江 杭州 310022

2 浙江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥科學(xué)院 浙江 杭州 310053

3 浙江省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心 浙江 杭州 310007

胰島素抵抗（IR）被證實(shí)是糖尿病患者心血管疾病的重要觸發(fā)因素之一[1]。臨床資料顯示，IR對(duì)心血管疾病的促進(jìn)作用比糖尿病本身的危險(xiǎn)更大，是肥胖、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病和代謝綜合征共同的病理基礎(chǔ)[2]。冠心寧片是丹參、川芎按1∶1配伍組成的復(fù)方制劑，具有活血化瘀、通脈養(yǎng)心之功效，用于治療冠心病穩(wěn)定型勞累性心絞痛，臨床療效確切，安全性高[3，4]，具有降低血黏度、抗血小板聚集、抗血栓形成、擴(kuò)血管、抗炎、抗氧化應(yīng)激和抗心肌缺血等多途徑、多靶點(diǎn)的作用[5-7]，而其中重要的活性成分丹酚酸B和阿魏酸被證實(shí)具有降低2型糖尿病大鼠模型的血糖，調(diào)節(jié)血脂，改善IR的作用[8，9]，故推測冠心寧片對(duì)心血管疾病的防治作用與其改善IR的功能有關(guān)。豬的心血管系統(tǒng)和脂質(zhì)代謝結(jié)構(gòu)與人類極為相似，西藏小型豬在高脂誘導(dǎo)下可產(chǎn)生慢性炎癥和胰島素抵抗[10，11]。因此，本實(shí)驗(yàn)擬通過高脂飼料誘導(dǎo)的西藏小型豬IR模型，觀察冠心寧片對(duì)西藏小型豬IR模型的干預(yù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：普通級(jí)4～5月齡雄性西藏小型豬，體重為8～14kg，16只，購自南方醫(yī)科大學(xué)[SCXK（粵）2011-0015]。飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心普通級(jí)小型豬實(shí)驗(yàn)室[SYXK(浙)2013-0184]，環(huán)境溫度（22±2）℃，相對(duì)濕度：40%～65%，光照：12h/12h明暗交替；自由飲水；并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的“3R”原則給以人道主義關(guān)懷。

1.2 藥物：冠心寧片，國藥準(zhǔn)字：Z20150028，性狀：薄膜片劑，橘黃色，規(guī)格：0.38g/片（相當(dāng)于冠心寧浸膏粉0.27g），由正大青春寶藥業(yè)有限公司提供。

1.3 檢測試劑：血糖（GLU）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）；由德賽診斷系統(tǒng)（上海）有限公司生產(chǎn)。胰島素（INS）、脂聯(lián)素（Adiponectin）、瘦素（Leptin）、超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）等ELISA試劑盒，均購于南京建成生物工程研究所。

1.4 造模和分組：取健康4～5月齡雄性西藏小型豬16只，按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組4只、IR模型組12只，進(jìn)行高脂飼料（1.5%膽固醇、15%油脂、10%蛋黃粉、73.5%基礎(chǔ)飼料）飼喂，造模后8周時(shí)根據(jù)空腹血糖均勻分成模型對(duì)照組和冠心寧片組，每組6只，冠心寧片組每日給予81mg/kg的冠心寧片，連續(xù)給藥8周。除正常對(duì)照組飼喂普通飼料外，其他組繼續(xù)飼喂高脂飼料。所有動(dòng)物日糧均按體重的2.5%飼喂，1日2次，每2周調(diào)整飼喂量。

1.5 指標(biāo)檢測：給藥結(jié)束后，①禁食12小時(shí)，取前腔靜脈血，分離血漿檢測 TC、TG、HDL-C、LDL-C、空腹血糖（FBG）；并取1mL乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝血，在全自動(dòng)血液分析儀上測定白細(xì)胞（WBC）、單核細(xì)胞（MONO）、中性粒細(xì)胞（NEUT）；ELISA法檢測血漿INS、Leptin、hs-CRP。利用穩(wěn)態(tài)模型指數(shù)計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）和胰島素敏感指數(shù)（HOMA-IS），計(jì)算公式為HOMA-IR=FBG×INS/22.5，HOMA-IS=1/（FBG×INS）。②禁食16小時(shí)，靜脈內(nèi)注射50%葡萄糖注射液1mL/kg，2min內(nèi)注射完畢，取血測定給糖前（0min）、給糖后5min、15min、30min、60min、90min、120min時(shí)的血糖，同時(shí)計(jì)算血糖曲線下面積（AUC）。

2 結(jié)果

2.1 冠心寧片對(duì)IR模型西藏小型豬血脂血糖的影響：見表1。模型對(duì)照組GLU、TC、HDL-C和LDL-C均顯著上升（P＜0.05，P＜0.01），連續(xù)8周給予冠心寧片后，血糖和血脂指標(biāo)均呈下降趨勢（P＞0.05）。

表1 冠心寧片對(duì)IR模型西藏小型豬血糖和血脂的影響（±s,mmol/L）

表1 冠心寧片對(duì)IR模型西藏小型豬血糖和血脂的影響（±s,mmol/L）

注：與正常對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組冠心寧片組LDL-C（mmol/L）0.91±0.13 7.15±0.77##5.51±0.79例數(shù)4 6 6 GLU（mmol/L）4.52±0.30 5.84±0.35#4.98±0.32 TC（mmol/L）1.91±0.20 11.50±1.13##9.25±1.14 TG（mmol/L）0.20±0.05 0.19±0.04 0.12±0.04 HDL-C（mmol/L）0.80±0.12 2.53±0.23##2.44±0.13

2.2 冠心寧片對(duì)西藏小型豬IR模型WBC、MONO和NEUT的影響：見表2。模型對(duì)照組西藏小型豬WBC、MONO和NEUT水平均顯著上升（P＜0.05，P＜0.01）；連續(xù)8周給予冠心寧片后，WBC與 MONO顯著下降（P＜0.05，P＜0.01），且NEUT水平亦有下降趨勢（P＞0.05）。

表2 冠心寧片對(duì)IR模型西藏小型豬血液學(xué)影響（±s，109/L）

表2 冠心寧片對(duì)IR模型西藏小型豬血液學(xué)影響（±s，109/L）

注：與正常對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型對(duì)照組相比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

NEUT 2.29±0.08 8.22±1.74#5.79±1.20組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組冠心寧片組例數(shù)4 6 6 WBC 13.83±1.45 19.42±1.36#16.08±0.39*MONO 0.39±0.07 1.02±0.07##0.73±0.02**

2.3 冠心寧片對(duì)IR模型西藏小型豬hs-CRP和瘦素的影響：見圖1。模型對(duì)照組西藏小型豬血漿hs-CRP顯著上升（P＜0.05），連續(xù)8周給予冠心寧片后，hs-CRP顯著下降（P＜0.05），且血漿瘦素也有下降趨勢（P＞0.05）。

圖1 冠心寧片對(duì)IR西藏小型豬hs-CRP和瘦素的影響（±s）

2.4 冠心寧片對(duì)西藏小型豬IR模型糖耐量的影響：模型對(duì)照組在注射50%葡萄糖注射液后5min、15min和30min時(shí)血糖顯著上升（P＜0.05），且AUC顯著增加（P＜0.05）；連續(xù)8周給予冠心寧片后，在注射50%葡萄糖注射液后各時(shí)間點(diǎn)的血糖呈下降趨勢（P＞0.05），AUC亦有降低趨勢（P＞0.05），見圖2。

圖2 冠心寧片對(duì)IR模型西藏小型豬糖耐量的影響（±s）

2.5 冠心寧片對(duì)IR模型西藏小型豬胰島素水平和胰島素敏感性的影響：模型對(duì)照組血漿胰島素水平和HOMA-IR指數(shù)顯著升高（P＜0.01），HOMA-IS指數(shù)顯著降低（P＜0.01）。連續(xù)8周給予冠心寧片后，胰島素含量及HOMA-IR指數(shù)均顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），HOMA-IS指數(shù)顯著升高（P＜0.01），見表3。

表3 冠心寧片對(duì)IR模型西藏小型豬胰島素水平及HOMA指數(shù)的影響（±s）

表3 冠心寧片對(duì)IR模型西藏小型豬胰島素水平及HOMA指數(shù)的影響（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

HOMA-IS 13.81±0.95 4.40±0.54##9.65±1.21**組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組冠心寧片組例數(shù)4 6 6 INS(ng/mL)17.36±1.11 44.44±6.04##22.53±2.30**HOMA-IR 3.26±0.21 11.22±1.91##5.00±0.65*

3 討論

IR是一種復(fù)雜的代謝異常性疾病，影響外周組織對(duì)胰島素的利用能力，使胰島素敏感性降低，從而影響葡萄糖的利用，導(dǎo)致高血糖或代償性高胰島素血癥的發(fā)展[12]。高脂飲食會(huì)降低胰島素相關(guān)靶組織的胰島素敏感性[13]，并導(dǎo)致血脂異常，而血脂紊亂是IR的重要病理特征。長期高脂飲食會(huì)使β細(xì)胞受到損害，抑制胰島素釋放，是誘導(dǎo)IR的常用方法。本實(shí)驗(yàn)通過高脂誘導(dǎo)后，模型組血脂代謝和糖耐量異常，血糖、胰島素水平及HOMA-IR顯著升高，HOMA-IS顯著降低，說明高脂誘導(dǎo)后西藏小型豬出現(xiàn)明顯的胰島素抵抗。而連續(xù)8周給予冠心寧片后，血糖和胰島素水平及HOMA-IR顯著下降，HOMA-IS顯著提高，脂質(zhì)代謝得到改善，表明冠心寧片具有抗胰島素抵抗的作用。

炎癥因子是觸發(fā)IR的主要因素，在IR的病理發(fā)展中起到了重要的媒介作用。炎癥與IR相互聯(lián)系，加速病變進(jìn)程，且細(xì)胞因子引起的炎性反應(yīng)可能介導(dǎo)糖尿病患者中INS、FBG等指標(biāo)的變化[14]。hs-CRP是一種公認(rèn)的炎癥標(biāo)志物，在2型糖尿病患者中發(fā)現(xiàn)hs-CRP的水平隨著血糖的升高而持續(xù)上升，與胰島素分泌水平呈正相關(guān)[15]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)模型組hs-CRP和WBC、MONO和NEUT水平顯著上升，說明炎癥因子大量參與到IR病理過程中。炎性反應(yīng)與糖脂代謝紊亂相互促進(jìn)形成惡性循環(huán)，加重IR[16]。hs-CRP水平顯著下降，并顯著降低WBC與MONO水平，表明冠心寧片具有抗炎作用。

綜上所述，高脂誘導(dǎo)能使西藏小型豬產(chǎn)生明顯的胰島素抵抗；而冠心寧片能通過調(diào)控脂質(zhì)代謝、增加胰島素敏感性、改善糖耐量異常和抑制炎癥等途徑，改善IR，但具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。