雷棽 熊磊群 陳瑋媛 王翠碧 張萍萍 呂小英

作者單位：361015 福建廈門，復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院廈門醫(yī)院輸血科

為避免輸血反應(yīng)，不規(guī)則抗體篩查已成為輸血前的常規(guī)檢測項目，但自身抗體的存在常會干擾對不規(guī)則抗體的鑒別［1-3］，特別是某些自身抗體具有類似不規(guī)則抗體的特異性，該類抗體被稱為類同種特異性自身抗體［4-5］。復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院廈門醫(yī)院完成1 例有輸血史患者產(chǎn)生不規(guī)則抗體合并類同種特異性自身抗體的鑒定，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 患者為41 歲女性，因膀胱結(jié)石和膀胱陰道瘺于2021 年10 月12 日入院，妊娠6 次，流產(chǎn)1 次。入院前曾在外院輸血5 次，共計輸注懸浮紅細胞12 U和血漿1 200 mL，均無輸血不良反應(yīng)，末次輸血日期為2021 年7 月1 日，住院期間未服用引起免疫血液學(xué)檢測結(jié)果異常的藥物。本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標準，已通過本院倫理委員會審批（審批號：G2022-005）。

1.2 血清學(xué)檢查

1.2.1 儀器與試劑 單克隆抗A 和抗B（批號：

20210304），反定型ABO 紅細胞、抗C、抗c、抗E、抗e、抗人球蛋白（anti-human globulin，AHG）、抗IgG、抗C3（批號：20225318、20213002、20223101、20223202、20223301、20205001、20215102、20225201）均購自上海血液生物醫(yī)藥有限公司；抗Jka、抗Jkb、抗Lea、抗Leb（批號：8000261569、8000256767、8000451442、8000258240）購自荷蘭Sanquin 公司；抗體篩選細胞（批號：20227022），進口譜細胞（匈牙利Resgents Kft公司，批號：732103），酸放散試劑（上海申型醫(yī)學(xué)科技有限公司，批號：20212103），微柱凝膠抗人球蛋白卡（瑞士DiaMed 公司，批號：50531.72.34），聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）試劑為自制試劑，制備方法如下：20 g 聚乙二醇粉劑加入100 mL pH 7.4的磷酸緩沖液，充分溶解后于4 ℃保存。

1.2.2 血型鑒定與抗體篩查 患者紅細胞在室溫下用鹽水洗滌3 次，配制成3%的紅細胞懸液。ABO血型結(jié)果以試管法于室溫下判讀。Rh、Kidd 及Lewis血型系統(tǒng)采用對應(yīng)的單抗血清試劑，在室溫下記錄立即離心15 s 和重復(fù)多次離心15 s 的實驗結(jié)果。同時根據(jù)譜細胞格局表，分別選擇Rh CCEE、Jk（a+b+）、Lewis（a+b+）、Rh ccee、Jk（a-b-）、Lewis（a-b-）細 胞作為陽性和陰性對照。分別于試管及微柱凝膠抗球蛋白卡中判讀患者血清與抗體篩選細胞結(jié)果。

1.2.3 直接抗人球蛋白實驗（direct antiglobulin test,DAT） 采用AHG、抗IgG、抗C3d 抗球蛋白試驗，試管法立即離心，于室溫下判讀結(jié)果。

1.2.4 患者血清及放散液抗體鑒定 使用1 mL 患者壓積紅細胞，利用酸放散試劑進行放散，收取放散液。選擇進口譜細胞，將患者血清和放散液以微柱凝膠抗球蛋白卡法進行鑒定。

1.2.5 吸收放散實驗 利用譜紅細胞格局表選擇O型Rh 表型為CCDee、Kidd 表型為Jk（a-b+）、Lewis表型為Le（a-b-）的壓積紅細胞對患者血清進行吸收。取500 μL 患者血清加入500 μL 壓積紅細胞，充分混勻，于37 ℃孵育30 min，每10 min 吹打混勻1 次，離心棄上清。使用4 ℃鹽水洗滌6 次后用酸放散試劑進行放散，利用經(jīng)吸收后的放散液再與進口譜細胞進行抗體鑒定。

1.2.6 PEG 增強實驗 試管中分別加入50 μL 放散液、經(jīng)選擇后的鑒定譜細胞以及100 μL PEG 試劑，充分混勻，于37 ℃孵育15 min，室溫鹽水洗滌3 次，最后一次揮干后，加入50 μL 鹽水混勻，吸取30 μL加入微柱凝膠抗球蛋白卡，離心10 min 判讀結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 血型鑒定與抗體篩查結(jié)果 患者ABO 正反定型及抗篩結(jié)果見表1。因抗篩細胞試管鹽水介質(zhì)中未見凝集，凝膠卡中自身細胞及1號、3號細胞凝集，證明無IgM 型抗體，存在IgG 型抗體和自身抗體?；颊逺h 表型結(jié)果見表2。

表1 1 例合并類E 自身抗體患者的ABO 血型正定型鑒定及抗篩結(jié)果

表2 1 例合并類E 自身抗體患者的Rh 表型結(jié)果

2.2 直接抗人球蛋白實驗 患者直接抗人球蛋白試驗結(jié)果見表3。患者紅細胞與多抗試劑及抗IgG單抗試劑呈3+凝集，與抗C3d 和AB 型血漿均無凝集，證明該患者紅細胞被IgG 抗體致敏。

表3 1 例合并類E 自身抗體患者的抗球蛋白試驗結(jié)果

2.3 血清及放散液抗體鑒定 血清抗體鑒定完全符合抗E 格局，結(jié)合紅細胞表面Rh 抗原分型確定該患者存在不規(guī)則抗E 抗體。見表4。放散液微柱凝集抗球蛋白卡法強陽性結(jié)果（2、4、9 號細胞）符合抗E 劑量效應(yīng)，E 抗原陰性細胞大部分出現(xiàn)2+以上凝集，考慮均由自身抗體引起。8、10 號細胞劑量效應(yīng)與其他細胞相差較大，僅呈±凝集，懷疑存在除抗E 外的抗Jka、抗Leb抗體，進行Kidd、Lewis血型表面抗原分型鑒定，抗Jka、抗Lea、抗Leb結(jié)果為陰性，抗Jkb出現(xiàn)2+凝集，說明該患者Kidd、Lewis血型為Jk（a-b+），Lewis（a-b-）。

表4 1 例合并類E 自身抗體患者的血清及放散液抗體鑒定格局

2.4 吸收放散及PEG 增強試驗 放散液鑒定結(jié)果部分符合抗E 劑量效應(yīng)，懷疑存在類抗E 自身抗體，選用CCee、Jk（a-b+）、Le（a-b-）Rh 表型的壓積紅細胞進行吸收放散試驗，以確定是否存在類抗E 自身抗體。吸收后的放散液經(jīng)篩選后的譜紅細胞（EE、Ee、ee）進行PEG 增強試驗，EE 細胞1+凝集，Ee 細胞正負凝集，ee 細胞陰性，證實存在類抗E 自身抗體。

3 討論

類抗體于1977 年被發(fā)現(xiàn)，具有同種抗體的特異性［5］。此類抗體能與具有相應(yīng)抗原的紅細胞強凝集，與相應(yīng)抗原陰性的紅細胞弱凝集，其產(chǎn)生與相應(yīng)抗原是否存在無直接關(guān)系［6］。Rh 血型系統(tǒng)的類抗體較常見，如類抗C、類抗D、類抗e 及類抗E，其中類Ce 抗體最常見［7］。此外也發(fā)現(xiàn)了針對Fya、Fyb、Jka、Jkb等的類抗體［8-10］。類抗體的本質(zhì)仍是自身抗體，其產(chǎn)生機制至今尚未明確［11］。

本例患者檢出抗E 不規(guī)則抗體，放散液中部分符合抗E 抗體格局的劑量效應(yīng)。PEG 試驗促進抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)，有助于檢出較弱抗體。選擇Rh表型為CCee、Kidd 表型為Jk（a-b+）、Lewis 表型為Le（a-b-）的紅細胞進行吸收放散實驗以證實除抗E、抗Jka及抗Leb外是否存在特異性自身抗體，吸收后放散液PEG 微柱凝膠法證實存在類E 自身抗體。結(jié)合患者病史、末次輸血時間和血清學(xué)實驗結(jié)果，排除輸血反應(yīng)［12］，證實該患者存在不規(guī)則抗E 抗體合并類E 特異性自身抗體。因紅細胞上無E 抗原，類E 抗體與自身紅細胞發(fā)生弱凝集，臨床未出現(xiàn)嚴重貧血反應(yīng)［13］。

患者自身抗體陽性會影響臨床交叉配血試驗，血清中的自身抗體無明顯特異性，可使紅細胞發(fā)生自凝或在交叉配血中與供血者紅細胞發(fā)生非特異性凝集，對此類患者應(yīng)選用凝集強度較弱的獻血者血液；但如可通過試驗確認類抗體，則可輸注相應(yīng)抗原陰性的血制品以保證療效［14］。有研究表明，類抗體的半衰期較短，當(dāng)同時存在同種抗體和類抗體時，可等類抗體減弱或消失后再進行輸血治療，如遇緊急輸血，應(yīng)首先規(guī)避同種抗體，避免發(fā)生嚴重的輸血反應(yīng)，保證輸注安全與療效［15］。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突