張鐘元 劉姍姍 王凱 田怡安 陳彩云 李鞠★

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種原因不明的伴有多種自身抗體及多系統(tǒng)損害為特征的自身免疫性疾病，其臨床表現(xiàn)復(fù)雜，難以治愈。患者可出現(xiàn)不同程度的黏膜及皮膚損害，病情嚴(yán)重者可出現(xiàn)狼瘡性腦病、狼瘡性腎炎、肺栓塞、心力衰竭等，預(yù)后較差［1］。研究發(fā)現(xiàn)，目前發(fā)現(xiàn)SLE 患者體內(nèi)B 淋巴細(xì)胞高度活化，T 淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，產(chǎn)生大量抗原抗體復(fù)合物，沉積在腎小球、皮膚、關(guān)節(jié)等部位，引起發(fā)?。?］。也有研究顯示［3］，SLE 發(fā)病與外周血T 淋巴細(xì)胞亞群功能異常及TNF-α 表達(dá)異常具有密切聯(lián)系，二者在SLE 疾病發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。為明確二者在SLE 患者中的關(guān)系，本研究分析TNF-α 與T 淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系，為臨床SLE 患者病情評(píng)估提供一定參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取淮安市第一人民醫(yī)院2019 年1 月至2022年1 月收治的94 例SLE 患者（狼瘡組）及同期年齡、性別匹配的60 名健康體檢者（對(duì)照組）作為研究對(duì)象，檢測(cè)所有受試者的外周血T 淋巴細(xì)胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+）、CD4+/CD8+及血清TNF-α 表達(dá)水平。狼瘡組男性12 例，女性82 例，年齡平均（37.31±4.17）歲。對(duì)照組男8 名，女52 名，年齡（38.27±5.64）歲。狼瘡組根據(jù)SLE 活動(dòng)性指數(shù)（SLE disease activity index，SLEDAI）評(píng)分［4］，分為活動(dòng)組（53 例）和非活動(dòng)組（41 例），活動(dòng)組男7 例，女46 例，年齡（37.11±3.26）歲；非活動(dòng)組男5 例，女36 例，年齡（37.59±5.15）歲。狼瘡組與對(duì)照組、活動(dòng)組與非活動(dòng)組的一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①參考2021 年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（American College of Rheumatology，ACR）制定的關(guān)于SLE 診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］，明確診斷為SLE；②年齡在18 歲以上；③參考SLEDAI 評(píng)分［4］，SLEDAI 評(píng)分≤9 判定為非活動(dòng)性SLE，其余判定為活動(dòng)性SLE；④患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他自身免疫性疾病者；②合并心、肝、肺等重要臟器功能障礙者；③妊娠期或哺乳期女性。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 指標(biāo)檢測(cè)方法

抽取受試者外周靜脈血5 mL 于EDTA 抗凝管，使用北京新時(shí)代生產(chǎn)的北利DT5-4B 型低速臺(tái)式離心機(jī)離心（轉(zhuǎn)速3 000 r/min，半徑為10cm）10 min，分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞，取50 μL 樣本，加入CD3+、CD4+、CD8+單克隆抗體（購(gòu)自普健生物科技有限公司）20 μL，采用美國(guó)貝克曼公司生產(chǎn)的CytoFLEX 流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3+、CD4+、CD8+水平。

抽取受試者外周靜脈血5 mL，于EDTA 抗凝管，使用北京新時(shí)代生產(chǎn)的北利DT5-4B 型低速臺(tái)式離心機(jī)離心（轉(zhuǎn)速3 000 r/min，半徑為10 cm）10 min，取上清保存于冰箱待測(cè)，使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)TNF-α 水平，試劑盒購(gòu)自美國(guó)RD公司，所有操作嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料則采用率n（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，TNF-α 水平與T 淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性采用Spearman 相關(guān)性分析，構(gòu)建受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析TNF-α 水平對(duì)SLE 病情的評(píng)估價(jià)值，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 狼瘡組與對(duì)照組各指標(biāo)的比較

狼瘡組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于對(duì)照組，CD8+、TNF-α 高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 狼瘡組與對(duì)照組各指標(biāo)的比較（±s）Table 1 Comparison of each index between the SLE group and the control group（±s）

表1 狼瘡組與對(duì)照組各指標(biāo)的比較（±s）Table 1 Comparison of each index between the SLE group and the control group（±s）

組別對(duì)照組狼瘡組t 值P 值n 60 94 CD3+（%）73.02±6.71 62.56±5.04 10.354＜0.001 CD4+（%）43.96±6.22 31.02±4.62 14.769＜0.001 CD8+（%）32.51±5.57 37.62±5.17-5.804＜0.001 CD4+/CD8+1.41±0.43 0.96±0.22 9.440＜0.001 TNF-α（pg/mL）1.45±0.13 4.53±1.09-27.735＜0.001

2.2 活動(dòng)組與非活動(dòng)組各指標(biāo)的比較

活動(dòng)組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于非活動(dòng)組，CD8+、TNF-α 高于非活動(dòng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 活動(dòng)組與非活動(dòng)組各指標(biāo)的比較（±s）Table 2 Comparison of the indicators of active vs inactive groups（±s）

表2 活動(dòng)組與非活動(dòng)組各指標(biāo)的比較（±s）Table 2 Comparison of the indicators of active vs inactive groups（±s）

組別活動(dòng)組非活動(dòng)組t 值P 值n 53 41 CD3+（%）59.26±2.99 66.83±3.80-10.828＜0.001 CD4+（%）27.92±3.04 35.02±2.92-11.407＜0.001 CD8+（%）40.79±4.16 33.52±3.01 9.442＜0.001 CD4+/CD8+0.89±0.10 1.05±0.13-14.090＜0.001 TNF-α（pg/mL）4.95±0.95 3.99±1.02 4.714＜0.001

2.3 TNF-α 水平與T 淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性分析

TNF-α 與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān)，r值分別為-0.586、-0.611、-0.656（P＜0.05），TNF-α 與CD8+呈正相關(guān)，r值為0.564（P＜0.05）。

2.4 TNF-α 對(duì)SLE 病情的評(píng)估價(jià)值

構(gòu)建TNF-α 評(píng)估SLE 病情嚴(yán)重程度的ROC 曲線，結(jié)果顯示TNF-α 評(píng)估活動(dòng)性SLE與非活動(dòng)性SLE 的曲線下面積（AUC）為0.758，95%CI（0.659～0.840），最 佳 截 點(diǎn) 為4.35（pg/mL），此時(shí)診斷敏感度為81.13%，特異性為65.85%。見(jiàn)圖1。

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curve

3 討論

SLE 臨床表現(xiàn)復(fù)雜，疾病早期患者可出現(xiàn)血管功能異常，隨著病情進(jìn)展，可出現(xiàn)腎臟、心臟等多臟器受損，患者預(yù)后不佳。目前尚未完全闡明SLE 發(fā)病機(jī)制，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為［6-7］，其發(fā)病與T 淋巴細(xì)胞亞群功能紊亂及機(jī)體TNF-α 表達(dá)水平的異常關(guān)系密切。

多數(shù)研究顯示［8-9］，在SLE 患者中TNF-α 表達(dá)水平顯著升高，在患者腎臟組織中TNF-α 表達(dá)水平更高，且與患者腎功能關(guān)系密切。研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α 信號(hào)網(wǎng)絡(luò)紊亂是SLE 免疫病理學(xué)基礎(chǔ)之一，SLE 中免疫復(fù)合物刺激單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α，直接或通過(guò)其他促炎癥因子如IL-1、IL-6等的表達(dá)促進(jìn)炎癥及繼發(fā)性組織損傷［10］。同時(shí)TNF-α 誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)可能是SLE 的動(dòng)脈粥樣硬化和高甘油三酯血癥的關(guān)鍵因素［11］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型小鼠表現(xiàn)出抑郁樣行為，腦小膠質(zhì)細(xì)胞明顯激活，促炎細(xì)胞因子明顯增加。體外實(shí)驗(yàn)表明TNF-α 通過(guò)上調(diào)NF-κB 信號(hào)通路和促炎細(xì)胞因子激活小膠質(zhì)細(xì)胞。NF-κB 抑制劑，可有效降低TNF-α 介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥信號(hào)傳導(dǎo)。這些結(jié)果提示TNF-α誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化在SLE 伴抑郁的神經(jīng)炎癥中起重要作用［12］。本研究結(jié)果顯示，狼瘡組的TNF-α 表達(dá)水平高于對(duì)照組，活動(dòng)組的TNF-α表達(dá)水平高于非活動(dòng)組，提示TNF-α 與SLE 發(fā)病及病情嚴(yán)重程度具有一定關(guān)系，通過(guò)監(jiān)測(cè)TNF-α水平對(duì)病情進(jìn)行評(píng)估進(jìn)而指導(dǎo)臨床治療具有一定可行性。

多項(xiàng)研究顯示［13-14］，SLE 發(fā)生發(fā)展與T 淋巴細(xì)胞亞群功能紊亂有關(guān)，T 淋巴細(xì)胞可介導(dǎo)B 細(xì)胞的增殖及高度活化，大量B 細(xì)胞提呈抗原，可產(chǎn)生大量的抗原抗體復(fù)合物及細(xì)胞因子，使機(jī)體免疫功能進(jìn)一步紊亂，導(dǎo)致發(fā)病。T 淋巴細(xì)胞亞群根據(jù)表面CD 分子的表達(dá)不同主要分為CD3+T 細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞及CD8+T 細(xì)胞，其中CD4+T 稱(chēng)為輔助性T 細(xì)胞，其可輔助機(jī)體體液免疫及細(xì)胞免疫，反應(yīng)機(jī)體免疫功能。研究顯示［15］，在SLE 患者中CD4+T 細(xì)胞出現(xiàn)異常凋亡，其產(chǎn)生的多種細(xì)胞因子通過(guò)炎癥因子及細(xì)胞接觸，可作用于靶細(xì)胞及靶器官，在SLE 患者機(jī)體損傷中具有重要作用。國(guó)外研究顯示［16］，CD4+T 細(xì)胞的數(shù)量下降通常提示SLE 患者疾病活動(dòng)，預(yù)后不良。CD8+T 細(xì)胞是一種免疫抑制細(xì)胞，其可促進(jìn)機(jī)體免疫抑制因子的釋放，近年來(lái)研究顯示［17］，在SLE 患者中CD8+T 細(xì)胞數(shù)量顯著升高，同時(shí)可觀察到CD4+/CD8+的降低。本研究中對(duì)SLE 患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示對(duì)照組及非活動(dòng)組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+高于狼瘡組及活動(dòng)組，CD8+、TNF-α低于狼瘡組及活動(dòng)組，提示在SLE 患者中存在明顯的T 淋巴細(xì)胞亞群功能紊亂，尤其在活動(dòng)期患者中更為明顯。SLE 中T 細(xì)胞異常引起B(yǎng) 細(xì)胞多克隆激活，同時(shí)引起機(jī)體體液免疫異常，介導(dǎo)疾病的發(fā)生。本研究中對(duì)SLE 患者的TNF-α 水平及T 淋巴細(xì)胞亞群水平進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示TNF-α 與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān)，TNF-α與CD8+呈正相關(guān)，提示TNF-α 水平與SLE 患者的免疫功能紊亂關(guān)系密切。進(jìn)一步對(duì)TNF-α 評(píng)估SLE 患者病情嚴(yán)重程度進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，TNF-α評(píng)估活動(dòng)性SLE 與非活動(dòng)性SLE 的曲線下面積（AUC）為0.758，診斷敏感度為81.13%，特異性為65.85%。結(jié)果表明TNF-α 水平和狼瘡病情活動(dòng)度相關(guān)，其特異度較低表明TNF-α 水平可能與狼瘡本身原發(fā)病之外的因素如器官累及、年齡、是否合并感染等因素相關(guān)。本研究表明TNF-α 和SLE 淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)，一定程度上可以反映病情活動(dòng)度，從而更好地指導(dǎo)臨床治療。

綜上所述，SLE 患者存在TNF-α 及T 淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)異常，在疾病活動(dòng)期患者中，異常程度更明顯，且SLE 患者中TNF-α 表達(dá)水平與T 淋巴細(xì)胞亞群水平關(guān)系密切，通過(guò)檢測(cè)TNF-α 水平，可從一定程度上評(píng)估SLE 患者疾病嚴(yán)重程度。