左永剛 溫玉清 王 璇 馬明德

乳腺癌為女性常見惡性腫瘤，臨床患病率較高，且近年隨著人們生活方式變化及生活壓力的增加，臨床發(fā)病率呈明顯升高趨勢，且逐漸趨于年輕化，嚴重威脅女性群體身心健康及生命安全[1-2]。臨床針對乳腺癌的診治措施已獲得明顯進步，而復發(fā)與轉移仍是該病患者總生存率未得到明顯提高的關鍵所在[3-4]。CD133為腫瘤干細胞的特征性表面標志物之一，但在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的機制尚未明晰[5]。PANTR1被發(fā)現參與胃癌、結直腸癌等腫瘤細胞的惡性表型的調節(jié)[6]。因此，明確CD133與PANTR1在乳腺癌組織內的表達特征與其同細胞體外增殖和侵襲能力之間的關系，對于臨床及時了解乳腺癌病情嚴重程度、制定科學規(guī)范化治療措施、提高患者生存率具有重要意義?；诖?，本研究以380例乳腺癌患者為研究對象，探究CD133與PANTR1在乳腺癌中的表達及其臨床意義。報告示下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年10月至2020年10月本院診治的380例女性乳腺癌患者為研究對象。納入標準：患者均經病理檢查證實為乳腺癌；患者病歷有關資料齊全；患者納入遵照自愿原則，依從性較高，且簽署知情同意書。排除標準：存在神經疾患者；合并免疫系統(tǒng)病癥者；合并血液系統(tǒng)疾病者；存有精神疾患、視聽障礙或難以進行正常交流者；存在全身性感染者；存有嚴重的腦器質性疾病者；合并嚴重的腦器質性疾病者。所有患者年齡31～57歲，平均年齡(40.67±4.35)歲；體重指數18.6～27.1 kg/m2，平均體重指數(23.89±0.64)kg/m2。

1.2 方法

1.2.1 標本采集與檢測 于術中取所有患者的癌組織(癌組織組)與癌旁正常組織(癌旁正常組織組)，以逆轉錄聚合酶鏈式反應(PT-PCR)法檢測2組的CD133與PANTR1表達，即取乳腺癌組織與各組細胞總RNA，取RNA 1 μg施以逆轉錄反應，設定3個重復樣本，以GAPDH為內參，之后以2-ΔΔCt法計算CD133與PANTR1 RNA相對表達量。

1.2.2 細胞體外增殖能力 取相對數生長期的MCF-7細胞，以每孔5×105個密度接種在6孔細胞培養(yǎng)板中，并劃分成對照組、CD133過表達組、PANTR1過表達組、CD133抑制組以及PANTR1抑制組，對照組予以Lipofectamine 2000轉染，CD133過表達組予以Lipofectamine 2000以及CD133序列，PANTR1過表達組給予Lipofectamine 2000以及PANTR1序列，CD133抑制組予以Lipofectamine 2000以及si-CD133序列，PANTR1抑制組給予Lipofectamine 2000以及si-PANTR1序列；之后以1%FBS培養(yǎng)基重懸細胞，調節(jié)細胞密度為每孔3×104個，設置0、24、48、72、96 h時間點，各組設定5個重復樣本，加入1/10體積CCK-8試劑，測定450 nm處的光密度值，以0 h為基值計算96 h細胞增殖倍數，以此為細胞相對增殖能力。

1.2.3 細胞侵襲能力 以1%FBS培養(yǎng)基重懸細胞，調整細胞密度為每孔3×104個，接種至存有Matri-gel基質膠的Transwell小室中，下室置入10%FBS培養(yǎng)基，24 h后固定細胞，0.1%結晶紫染色，400×光鏡拍照并計數，各組選5個隨機視野并予以細胞計數。

1.3 觀察指標

(1)癌組織及癌旁組織中CD133與PANTR1表達情況。(2)對照組與CD133過表達組、PANTR1過表達組、CD133抑制組以及PANTR1抑制組CD133與PANTR1表達情況。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 2組CD133與PANTR1表達對比

癌組織組的CD133與PANTR1 mRNA相對表達量均高于癌旁正常組織組，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。見表1。

表1 2組CD133與PANTR1表達對比

2.2 對照組與CD133過表達組、PANTR1過表達組MCF-7細胞生長情況對比

CD133、PANTR1過表達組MCF-7細胞增殖倍數與侵襲細胞數均高于對照組，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。見表2。

2.3 對照組與CD133抑制組以及PANTR1抑制組MCF-7細胞生長情況對比

CD133、PANTR1抑制組的MCF-7細胞增殖倍數與侵襲細胞數均低于對照組，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。見表3。

表2 對照組與CD133過表達組、PANTR1過表達組MCF-7細胞生長情況對比

表3 對照組與CD133抑制組以及PANTR1抑制組MCF-7細胞生長情況對比

3 討論

乳腺癌為嚴重危害女性生命健康的常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率及病死風險均較高[7]。盡管乳腺癌的診斷與治療取得長足進展，然而乳腺癌細胞易于脫落，其復發(fā)、轉移及死亡率未有明顯的改善。相關研究表明，乳腺癌內存有具有干細胞特性的細胞，此類細胞可能是乳腺癌進展、復發(fā)的根本所在，臨床應加以重視[8-9]。

腫瘤是由存在不同增殖潛能的異質細胞組合而成，此類細胞雖數目較少，但可通過移植進而產生腫瘤，故被稱作腫瘤干細胞[10-11]。CD133作為腫瘤干細胞標志之一，屬于Prominin家族成員，含有5次跨膜結構，分子量為120 kb，其首次發(fā)現于白血病患者中[12-13]。但臨床關于CD133在乳腺癌組織內的表達尚未明晰。本研究結果顯示，癌組織組的CD133[(0.023±0.002)]高于癌旁正常組織組[(0.006±0.001)]，提示在乳腺癌患者癌灶組織內CD133表達水平明顯升高。CCK-8與Transwell試驗檢測細胞的增殖能力與侵襲能力研究結果顯示，CD133過表達組細胞增殖倍數[(10.54±1.45)]與侵襲細胞數[(43.88±3.69)個]均高于對照組[(6.84±0.69)]，而CD133抑制組的細胞增殖倍數[(5.23±0.25)]與侵襲細胞數[(18.35±1.64)個]均低于對照組[(6.84±0.69)、(23.25±2.15)個]，可見CD133參與乳腺癌的復發(fā)與轉移，其過高表達對于乳腺癌細胞增殖、侵襲能力具有增強作用。而PANTR1基因為處在人染色體2q12上的長鏈非編碼RNA(LncRNA)，在胃癌等不同種類的腫瘤組織內均高度表達，在多種惡性腫瘤內發(fā)揮促癌作用[14-15]。本研究結果顯示，癌組織組的PANTR1 mRNA相對表達量[(0.018±0.002)]高于癌旁正常組織組[(0.005±0.001)]，表明PANTR1在乳腺癌組織內呈高表達。CCK-8與Transwell試驗檢測細胞的增殖能力與侵襲能力分析結果顯示，PANTR1過表達組細胞增殖倍數[(10.26±1.13)]與侵襲細胞數[(45.67±4.28)個]高于對照組[(6.84±0.69)、(23.25±2.15)個]，而PANTR1抑制組的細胞增殖倍數[(5.17±0.34)]與侵襲細胞數[(18.13±1.22)個]低于對照組[(6.84±0.69)、(23.25±2.15)個]，表明PANTR1與乳腺癌患者癌細胞的增殖、侵襲能力密切相關。根據上述結果，可見CD133與PANTR1在乳腺癌組織內呈異常表達狀態(tài)，其高表達會增強癌細胞的增殖與侵襲能力，促使病情惡化，進而危及患者生命安全。其原因為CD133與PANTR1可通過促進乳腺癌細胞Pum1/E2F3的表達，而E2F3可通過與miR-125b與miR-432-5p等多種蛋白與RNA相互作用，進而增強癌細胞增殖與侵襲能力，影響乳腺癌的惡性行為。而Pum1則可當成E2F3的上游基因，可促使E2F3的表達。但仍需注意的是，臨床現階段對于CD133、PANTR1與Pum1蛋白的相互作用尚未完全明晰，后續(xù)還需不斷完善試驗設計，進一步分析CD133、PANTR1與Pum1蛋白相互作用，為CD133、PANTR1作為乳腺癌診治的新靶點提供研究基礎。

綜上所述，CD133、PANTR1在乳腺癌組織內呈異常表達，且與癌細胞的增殖與侵襲能力密切相關。