余潔麗 陳火國 劉志良 胡繼龍 黃 燦 銀天驕

胃癌是一種惡性腫瘤，位于胃黏膜上皮，主要發(fā)生在50歲以上的人群，尤其是男性患者[1]。胃癌在我國的發(fā)病率具有一定的差異性，西北地區(qū)比南方要高。胃癌的發(fā)病原因主要與飲食結(jié)構(gòu)、工作原因、幽門螺旋桿菌感染等原因具有一定的關(guān)系[2]。胃癌在任何胃部都有可能發(fā)病，大多數(shù)發(fā)病于胃竇部和胃大、小彎處。大多數(shù)的胃癌屬于腺癌，早期無任何的表現(xiàn)癥狀，與胃炎、胃潰瘍等具有一定的相似性，因此，往往不能引起足夠的重視[3]。由于現(xiàn)在生活方式的加快，胃癌發(fā)病趨于年輕化，且大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)確診時(shí)病灶已經(jīng)轉(zhuǎn)移，5年生存率為20%左右，因此我們要早期診斷來提高預(yù)后[4]。程序性死亡受體(PD1)可以與配體相互作用誘發(fā)T細(xì)胞的凋亡，具有調(diào)控效應(yīng)的作用，因此本研究對胃癌患者的PD1水平進(jìn)行檢測，探討其臨床價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2021年12月到2022年3月到本院就診的胃癌患者30例作為研究組，并選擇相同時(shí)間健康體檢人員作為對照組。研究組男性18例、女性12例，年齡32～55歲，平均(45.2±1.8)歲；對照組男性25例，女性5例，年齡35～53歲，平均(49.3±1.6)歲。2組患者的一般資料進(jìn)行對比，具有可比性。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)[5]：①未進(jìn)行任何化療藥物治療的患者；②未合并其他腫瘤和惡性疾病的患者；③資料健全的患者；④病灶無深部轉(zhuǎn)移的患者；⑤知情同意，自愿參加；⑥配合良好的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)[6]：①有接受化療藥物治療的患者；②合并其他腫瘤或惡性疾病的患者；③合并有其他慢性病或心臟病、肝腎功能障礙的患者；④依從性較差的患者。

1.3 方法[7]

分別采集研究組癌組織和對照組的正常組織，并采用免疫組織化學(xué)二步法對標(biāo)本組織進(jìn)行染色并檢測PD1的表達(dá)。將標(biāo)本進(jìn)行制備成4 μm的切片，脫蠟和水化，在溫室內(nèi)滴入3%的過氧化氫并放置10 min，再用PBS沖洗3次，每次5 min，并用pH值為6.0的檸檬酸鹽緩沖液用微波爐加熱20 min進(jìn)行抗原修復(fù)，待冷卻后再用PBS進(jìn)行沖洗3次，每次5 min，滴入PD1抗體并放置于4 ℃溫度下進(jìn)行孵化過夜，再次使用PBS進(jìn)行沖洗3次，每次5 min，在標(biāo)本切片上滴入50 μl二抗試劑并放置室溫下進(jìn)行孵化大約20 min，并用PBS進(jìn)行沖洗3次，每次5 min,在標(biāo)本切片上加入100 μl DAB顯色劑在顯微鏡下進(jìn)行顯色3～5 min后，用蒸餾水進(jìn)行終止顯色，最后進(jìn)行封片。

1.4 結(jié)果判定

PD1陽性表現(xiàn)為細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜出現(xiàn)黃色到黃褐色顆粒。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組PD1表達(dá)率對比

對照組為健康人群，在胃黏膜組織中PD1無表達(dá)；研究組胃癌組織中，PD1表達(dá)陽性有26例，陽性表達(dá)率為86.7%，2組結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=45.882，P<0.05)。

2.2 PD1表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

通過數(shù)值分析，發(fā)現(xiàn)PD1與臨床病理特征沒有直接的相關(guān)性(P>0.05)。見表1。

3 討論

胃癌是一種惡性程度高的腫瘤，浸潤性和轉(zhuǎn)移能力較強(qiáng)，以手術(shù)治療和化療為主，治療雖可以改善患者一定的生存期，但是晚期胃癌預(yù)后仍然不理想。目前對胃癌的發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚，沒辦法研制出治療胃癌特異性的藥物[8-9]，因此對于胃癌的早期診斷顯得尤為重要。分子生物學(xué)的發(fā)展在惡性腫瘤中發(fā)揮著重要的作用，可提升癌癥的治療效果。

表1 胃癌患者PD1表達(dá)與臨床病理的關(guān)系/例

PD1是一種免疫抑制的分子，可以在淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)。有研究指出PD1在抗腫瘤、感染、自身免疫系統(tǒng)等方面具有很好的免疫調(diào)節(jié)作用。PD1可以調(diào)解CD4和CD8細(xì)胞分子的功能，可以使活化的細(xì)胞凋亡，在免疫系統(tǒng)疾病中發(fā)揮著重要的作用，Anti-PD1或anti-PDL1抗體通過阻斷PD1與PDL1的相互作用，以達(dá)到增強(qiáng)抗腫瘤活性。有研究者指出[10]，PD1的抗體能夠?qū)淋巴細(xì)胞的功能有一定的恢復(fù)作用，進(jìn)而對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行識別和增強(qiáng)免疫。也有研究者表明PD1與腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸具有一定的關(guān)系，PD1更廣泛地負(fù)調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，其表達(dá)上調(diào)可增強(qiáng)腫瘤的免疫逃逸[11]。也有研究者認(rèn)為PD1在惡性實(shí)體瘤和血液惡性腫瘤中的水平也會升高，如結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌等[12]。PD1是細(xì)胞表面受體亞家族的成員之一，在T淋巴細(xì)胞上進(jìn)行表達(dá)，具有一定的負(fù)向調(diào)節(jié)，能抑制淋巴細(xì)胞的增殖和因子的產(chǎn)生，降低T淋巴細(xì)胞的分泌穿孔素和顆粒酶，停滯細(xì)胞周期。有研究者通過研究發(fā)現(xiàn)PD1的免疫功能可以通過酪氨酸磷脂酶2的介導(dǎo)抑制[13]。程序性死亡配體(PD-L1)與PD1結(jié)合對淋巴細(xì)胞有一定的抑制效果，PD-L1表達(dá)水平與T細(xì)胞的活性有直接關(guān)系，與PD1結(jié)合繼而影響在腫瘤環(huán)境中的T細(xì)胞活性，發(fā)揮一定的抑制作用。PD1的信號通路對T細(xì)胞的抑制作用可以通過多種途徑進(jìn)行。近年來，很多研究者對于PD1在癌組織中的表達(dá)水平與臨床診斷關(guān)系的研究越來越深入，PD1的表達(dá)水平在黑色素瘤組織中的TILs具有較高的水平，會對T細(xì)胞造成一定的阻礙，耗竭T細(xì)胞的效應(yīng)，對腫瘤免疫具有一定的拮抗。也有文獻(xiàn)說明[14-15]，PD1對腫瘤細(xì)胞的免疫抑制功能可以通過阻斷通路實(shí)現(xiàn)。國外研究者指出，PD1在免疫細(xì)胞上能夠表達(dá)，也能在異種移植物受體小鼠上表達(dá)，我們通過對胃癌患者進(jìn)行PD1的檢測，可以發(fā)現(xiàn)PD1在胃癌細(xì)胞中具有較高的表達(dá)情況。

在此次研究中，我們通過對胃癌患者和健康人群進(jìn)行PD1水平檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)健康人群胃黏膜組織中PD1無表達(dá)，胃癌患者癌組織中PD1陽性表達(dá)率為86.7%，兩者結(jié)果納入統(tǒng)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)(P<0.05)。通過數(shù)值分析，發(fā)現(xiàn)PD1與臨床病理特征未有直接的相關(guān)性(P>0.05)。這說明PD1對胃癌具有很高的檢測價(jià)值，與多重研究結(jié)果一致。但也有學(xué)者對少量的胃癌患者進(jìn)行PD1水平檢測，但選擇樣本較少，未能得到很好的結(jié)果。因此，對于PD1表達(dá)在胃癌中的更深入的臨床意義還需要進(jìn)一步研究探討。

綜上所述，PD1表達(dá)水平可作為胃癌組織的診斷指標(biāo)，具有很高的診斷價(jià)值。