陳 恒，劉一冰，徐 浩，藺哲廣，吉 挺

（揚(yáng)州大學(xué)動物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚(yáng)州 225009）

蜜蜂作為自然界最主要的授粉昆蟲，對經(jīng)濟(jì)發(fā)展和生態(tài)多樣性的保護(hù)具有重要價值[1]。然而自2006年以來，在美國、歐洲等多個國家和地區(qū)相繼發(fā)生蜂群崩潰失調(diào)癥（colony collapse disorder,CCD），給全球西方蜜蜂（Apis mellifera）的養(yǎng)殖造成了巨大損失。1996年，東方蜜蜂微孢子蟲（Nosema ceranae）首次在東方蜜蜂中被發(fā)現(xiàn)[2]，2006年，在西班牙的西方蜜蜂（Apis mellifera）中被發(fā)現(xiàn)，隨后在正常和患病的蜂群中多次被發(fā)現(xiàn)并報道。2007年，美國、巴西、中國、越南和8個歐盟國家也有對N.ceranae的相關(guān)報道[3-4]。Higes等[5]證明了N.ceranae和蜂群的死亡之間存在相關(guān)性，雖然此研究存在爭議，但仍有大量研究表明N.ceranae與蜂群崩潰間存在間接聯(lián)系[6-8]，并且長期的無癥狀潛伏期似乎可以解釋蜂群崩潰之前沒有明顯癥狀的原因[9]。

N.ceranae于1996年在東方蜜蜂（Apis cerana）中首次被發(fā)現(xiàn)[10]，其主要寄生在蜜蜂中腸 上皮細(xì)胞內(nèi)，以孢子的形式在宿主間傳播，目前已知可以感染A.cerana和A.mellifera，并且在A.melllifera中流行率更高，它以宿主體液為營養(yǎng)發(fā)育增殖，從而對宿主健康造成影響。新的分子證據(jù)將微孢子蟲劃分到真菌界，是一種高度特化的寄生真菌[11]。隨后，這種流行病被證實為一種跨越地理界限的病原體，并在加拿大、澳大利亞、烏拉圭、日本、智利、約旦和沙特阿拉伯等眾多國家的蜂群中均被檢測到。此外，N.ceranae也在小蜜蜂（Apis florea）、大蜜蜂（Apis dorsata）中被發(fā)現(xiàn)[12-13]，甚至在蜜蜂總科下的其他屬中也有發(fā)現(xiàn)，包括熊蜂（Bombus）、壁蜂（Osmia）、地蜂（Andrena）、無刺蜂（Melipona）[14-16]。調(diào)查發(fā)現(xiàn)N.ceranae可以適應(yīng)各種各樣的生態(tài)氣候，如西班牙的地中海氣候[2]、加拿大的溫帶氣候[17]、墨西哥的熱帶氣候[18]，以及沙特阿拉伯的高溫干旱氣候[19]。此外，N.ceranae感染的季節(jié)性流行規(guī)律似乎并不明顯，據(jù)報道在西班牙冬季[5]的感染水平最高，加拿大的夏季[20]、塞爾維亞3月份[21]以及德國的春季[22]感染水平較高，不同的地區(qū)感染嚴(yán)重的季節(jié)不同，造成這一現(xiàn)象的原因尚不明確。

作為全球范圍內(nèi)蜜蜂的主要感染病原之一，N.ceranae具有無癥狀感染潛伏期的特點，并且地理分布范圍急劇擴(kuò)大，可以跨越物種寄生以及適應(yīng)不同的氣候。本文綜述了近10年東方微孢子蟲的研究情況，包括N.ceranae的傳播途徑、對蜜蜂健康的影響、與其他病原的相互作用，旨在幫助廣大科研工作者了解N.ceranae，為對N.ceranae的防控提供新思路。

1 東方蜜蜂微孢子蟲的傳播途徑

N.ceranae重要的傳播途徑是蜜蜂個體與個體以及蜂群與蜂群之間的傳播。在已感染微孢子蟲的蜂群中，不同個體之間存在交互哺育行為和清理行為，并且患病蜜蜂可能會污染蜂糧和蜂蜜，均可增加個體與個體之間傳播的可能性[23]。蜂花粉和蜂蜜等蜂產(chǎn)品也可能被孢子污染，當(dāng)作為飼料飼喂蜂群的同時也傳播了微孢子蟲[20]。蜜蜂的飛行排泄行為可能會污染到水源及其他蜜粉源，這也促進(jìn)了蜂群與蜂群之間的傳播[24]。此外，有研究表明，N.ceranae還可以進(jìn)行垂直傳播，Roberts等[25]在雄蜂的精液中檢測到微孢子蟲，而蜂王則可能通過注入感染了微孢子蟲的雄蜂精液進(jìn)行人工受精，從而感染N.ceranae。但是在自然條件下蜜蜂的幼蟲期和蛹期未發(fā)現(xiàn)有N.ceranae感染，Eiri等[26]在實驗室條件下成功感染了西方蜜蜂幼蟲，表明了蜜蜂幼蟲也能夠被N.ceranae感染。

Fenoy等[27]測定了N.ceranae在不同溫度條件下的抗性，發(fā)現(xiàn)在60℃和35℃時具有較高的耐熱性和耐干燥性，冷凍后的存活率顯著下降，在4℃時孢子迅速退化，這表現(xiàn)出N.ceranae強(qiáng)大的生存潛力，也增加了以孢子形式傳播的多樣性。黃喉蜂虎（Merops apiaster）是一種食蜂鳥，這種鳥主要吃昆蟲，特別是蜜蜂和胡蜂，在吃了受感染的采集蜂后，可在其糞便中檢測到有活性的孢子[28]，它的遷徙行為也促進(jìn)了N.ceranae在各地區(qū)的傳播。蜂農(nóng)之間的蜂群和蜂王交易也增加了N.ceranae的傳播范圍；越來越多的商業(yè)蜜蜂作為授粉昆蟲被應(yīng)用在大棚作物中[14]，日本每年都會從國外進(jìn)口大量的授精蜂王，這些原因都增加了N.ceranae的檢出率。在中國，轉(zhuǎn)地放蜂的飼養(yǎng)方式也增大了蜂群之間的接觸，正常的蜂群很容易通過盜蜂等多種方式造成感染。

2 東方蜜蜂微孢子蟲對蜜蜂健康的影響

N.ceranae感染的主要癥狀包括對糖水的大量消耗[29]、血淋巴海藻糖的加速代謝[30]、抑制免疫反應(yīng)增加蜜蜂對其他病原體的易感性[31]、蜜蜂死亡率的上升[32]以及加速哺育蜂向采集蜂的過渡[33]。過早的采集覓食和較高的死亡率導(dǎo)致的蜂群內(nèi)工蜂數(shù)量的減少，被認(rèn)為是蜂群崩潰的主要原因之一[34]。

2.1 東方蜜蜂微孢子蟲對蜜蜂免疫系統(tǒng)的影響 昆蟲具有強(qiáng)大的免疫系統(tǒng)來抵御微生物和真核病原體的攻擊。外骨骼角質(zhì)層和消化道內(nèi)壁的包膜是昆蟲的第一道防線，它可以阻止病原體進(jìn)入體腔。作為最重要的一道防線，昆蟲的先天免疫通常被分為細(xì)胞免疫和體液免疫，如吞噬和包被作用、抗菌肽的分泌等[35]。中腸是蜜蜂重要的器官，在消化吸收、免疫防御和解毒作用方面發(fā)揮重要的作用，作為蜜蜂和N.ceranae相互作用的重要場所，當(dāng)N.ceranae被蜜蜂攝取后，在中腸腸液的刺激下，孢子萌發(fā)，通過極絲彈射的方式破壞中腸上皮細(xì)胞，并將孢子轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞胞漿內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)繁殖發(fā)展[36]。孢子在中腸內(nèi)發(fā)育成熟后，可能會隨糞便排出，亦可能繼續(xù)感染其他上皮細(xì)胞，最終破壞整個中腸上皮細(xì)胞層[37]。

蜜蜂基因組分析結(jié)果顯示，相對于其他獨居性昆蟲，蜜蜂免疫相關(guān)基因的數(shù)量只有獨居性昆蟲的三分之一[38]，然而在自然界中蜜蜂卻體現(xiàn)出對一些病原的有效防控，這依賴于蜜蜂的社會 性免疫[39]可以彌補(bǔ)個體免疫的先天不足。Antúnez等[40]通過對蜜蜂個體免疫水平的檢測發(fā)現(xiàn)，N.ceranae感染后，一些免疫相關(guān)基因如abaecin、hymenoptaecin表達(dá)顯著下調(diào)，免疫相關(guān)酶、葡萄糖脫氫酶（glucose dehydrogenase,GLD）和卵黃原蛋白表達(dá)水平也明顯下調(diào)， 表明N.ceranae感染可以抑制蜜蜂的免疫防御機(jī)制，隨后的大量研究也證明了這一點，如defensin、apidecin、serine protease 40、catalase等[41-42]多個免疫相關(guān)基因均下調(diào)表達(dá)。蜜蜂感染N.ceranae會引起的復(fù)雜免疫反應(yīng)，不僅表現(xiàn)在抗菌肽的下調(diào)[43]，還可以抑制Toll和Imd信號通路以及模式識別受體相關(guān)基因的表達(dá)，且隨著感染時間的推移而抑制增強(qiáng)[44]。Schwarz等[45]在對腸道不同部位的分析結(jié)果顯示中，蜜蜂在感染N.ceranae數(shù)小時內(nèi)就會產(chǎn)生免疫反應(yīng)，隨后會快速增強(qiáng)Toll和Imd信號，并增加細(xì)胞識別分子Dscam和defensin 2的表達(dá)。這可能是免疫信號通路在不同的組織細(xì)胞間存在特異性，表達(dá)程度和方式均不同，如defensin 2僅在直腸組織中參與，表明腸道不同區(qū)域?qū)纳x的免疫具有特定作用。

此外，N.ceranae感染可以抑制細(xì)胞信號傳導(dǎo)和腸道細(xì)胞自我更新相關(guān)基因的能力[32,46]和抑制凋亡基因中的IAP家族基因上調(diào)[47]。有趣的是，中腸作為N.ceranae與蜜蜂的主要互作部位，被N.ceranae感染后反而會抑制中腸上皮細(xì)胞的凋亡[48]，這可能是N.ceranae為了避免宿主產(chǎn)生免疫防御的一種策略。

2.2 東方蜜蜂微孢子蟲對蜜蜂新陳代謝的影響 N.ceranae感染的蜜蜂會表現(xiàn)出與行為和生理變化相關(guān)的能量壓力。在正常蜂群中，抑制脂肪酸合成以及饑餓可以使蜜蜂在生命中更早地開始覓食[49-50]，并且受饑餓脅迫的蜜蜂會改變它們的行為，提高采集出勤率，保證能量供應(yīng)。Mayack等[30]首次表明，為了應(yīng)對N.ceranae感染，蜜蜂感染后會增加食物消耗并表現(xiàn)出更強(qiáng)的饑餓程度。這些受感染的工蜂表現(xiàn)出攝入過多的碳水化合物[51]，可能是病原體為促進(jìn)自身的繁殖與發(fā)展，利用宿主的能量代謝，使宿主滿足自身能量需求不足，從而產(chǎn)生旺盛的能量代謝活動。也有可能是N.ceranae在蜜蜂中腸的生存策略，通過提高宿主能量代謝需求而減少免疫系統(tǒng)的防御，利于其發(fā)展。Li等[52]報道，N.ceranae感染的蜜蜂被檢測到脂質(zhì)的快速流失，表明脂質(zhì)也可用作由于感染引起的代謝需求增加的能量來源。此外，Vidau等[53]通過對感染后10 d的工蜂中腸進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，參與能量供應(yīng)的4種蛋白MRJP1、MRJP2、MRJP3和α-葡萄糖苷酶Ⅲ在感染N.ceranae的中腸中較少。同樣，氣相色譜-質(zhì)譜分析顯示，與果糖、L-脯氨酸、山梨醇和甘油等各種生化途徑有關(guān)的大多數(shù)碳水化合物和氨基酸都有所減少。以上的多種新陳代謝的改變可以對下游生理功能造成影響，促進(jìn)了蜜蜂工蜂的早熟現(xiàn)象，從而加速了蜂群的崩潰。

蜜蜂卵黃原蛋白（Vitellogenin,Vg）是一種雌性特異性蛋白質(zhì)，大小為180 kDa，由脂肪體合成并釋放到血淋巴中，在工蜂發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用，如蜂王漿的合成、促進(jìn)免疫和抗應(yīng)激，并且被報道與保幼激素（Juvenile hormone,JH）共同調(diào)節(jié)蜜蜂的行為[54]。幼年成蜂體脂組織Vg轉(zhuǎn)錄水平高，血淋巴JH滴度低，而外出采集覓食開始后，老年工蜂Vg轉(zhuǎn)錄水平低，JH滴度高[55]。Goblirsch等[8]通過N.ceranae感染實驗發(fā)現(xiàn)處理組工蜂的Vg轉(zhuǎn)錄水平較低，而JH滴度較高。Vg/JH平衡的這種改變被認(rèn)為是導(dǎo)致感染N.ceranae的工蜂過早出房采集和壽命縮短的原因[8]。有趣的是，Dussaubat等[56]發(fā)現(xiàn)，N.ceranae感染可以提高油酸乙酯（ethyl oleate,EO）的水平。EO是蜜蜂工蜂中的一種引物信息素，它用于調(diào)節(jié)工蜂的行為成熟，即抑制執(zhí)行巢內(nèi)任務(wù)的哺育蜂向執(zhí)行覓食任務(wù)的采集蜂轉(zhuǎn)變。EO水平的上升可能擾亂蜂群的正常分工，誤導(dǎo)蜂群中的實際采集蜂的數(shù)量，蜂群社會分工的需求使得哺育蜂過早的轉(zhuǎn)變?yōu)椴杉?，增大了蜂群?nèi)成蜂的損耗，導(dǎo)致蜂群內(nèi)蜜蜂大量減少，最終群勢衰落，整個蜂群崩潰。

3 東方蜜蜂微孢子蟲與其他病原體的相互作用

在宿主內(nèi)部，僅被一種寄生蟲自然感染是罕見的，多重感染比較普遍，不同病原之間對宿主的相互作用可以影響疾病的嚴(yán)重程度和流行病學(xué)。

3.1 東方蜜蜂微孢子蟲與蜜蜂微孢子蟲的相互作用 蜜蜂微孢子蟲（Nosema apis）感染的季節(jié)性規(guī)律比較明顯：夏季感染水平較低，秋天到達(dá)低峰，冬季感染數(shù)量緩慢上升，春季感染率最高，在潮濕和寒冷的氣候條件下出房采集，感染水平將迅速上升[57]。

過去的研究認(rèn)為N.apis是感染A.melllifera的唯一一種孢子蟲，而在2006年后的研究中，人們發(fā)現(xiàn)N.ceranae流行的范圍越來越大，同時這些地區(qū)內(nèi)的報告中沒有N.apis的感染情況，由此推測，N.ceranae已經(jīng)從原始宿主A.cerana轉(zhuǎn)移到A.mellifera，并有取代N.apis生態(tài)位的趨勢。然而，通過對歷史樣本的研究發(fā)現(xiàn)，早在1975年美國洛杉磯A.melllifera的工蜂樣本就已經(jīng)有感染N.ceranae的記錄，并且同時感染N.ceranae和N.apis，在調(diào)查的30個樣本中N.ceranae的感染率為80%，N.apis的感染率為73.3%[13]。N.ceranae的全球感染優(yōu)勢也被證明并不是因為孢子增殖能力或者感染性的差異[58]。

Forsgren等[59]利用qPCR技術(shù)，研究了兩種微孢子蟲在宿主間的共同感染競爭關(guān)系，實驗結(jié)果表明，兩種微孢子蟲在感染劑量和增殖速度上存在微小差異，N.ceranae相對于N.apis并沒有在宿主內(nèi)競爭效應(yīng)中顯示出任何明顯的競爭優(yōu)勢。Natsopoulou等[60]的研究也發(fā)現(xiàn)當(dāng)兩種病原體同時引入時，沒有觀察到相互作用，但當(dāng)N.ceranae是首先感染時，存在優(yōu)先效應(yīng)，可顯著抑制N.apis的生長。不過目前尚不清楚共同感染情況下，對蜜蜂中微孢子蟲的流行病學(xué)有何影響。此外，對于N.ceranae是否比N.apis更具致病性，也存在一些爭議[22,58-59]，因為這在不同的研究中似乎差別很大，可能這與接種孢子蟲的劑量和時間有著重要的關(guān)聯(lián)。

3.2 東方蜜蜂微孢子蟲與蜜蜂殘翅病病毒的相互作用蜜蜂殘翅病病毒（Deformed wing virus,DWV）是蜜蜂中的一種常見病毒，它可以引起成年工蜂翅膀殘缺等癥狀。微孢子蟲能夠?qū)χ心c上皮細(xì)胞造成破壞，這可以增加病毒病原體通過腸壁進(jìn)入血淋巴的機(jī)會[61]，也有研究表明N.ceranae可以抑制蜜蜂的免疫反應(yīng)[41]，從而使受感染的蜜蜂更容易被病毒感染。

Costa等[62]首次報道N.ceranae和DWV在蜜蜂不同身體部位的相互作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在中腸中N.ceranae孢子數(shù)量和DWV存在負(fù)相關(guān)性，而在其他組織沒有這種關(guān)系，表明DWV和N.ceranae可能主要在蜜蜂中腸相互作用，通過競爭宿主細(xì)胞或特定細(xì)胞功能維持活性。然而，Martin等[63]在夏威夷的調(diào)查并沒有發(fā)現(xiàn)N.ceranae孢子數(shù)量和DWV存在任何相關(guān)性。在另一項研究中，研究人員在實驗室條件下對DWV和N.ceranae共同感染的蜜蜂不同時期進(jìn)行取樣，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在DWV感 染的早期階段，N.ceranae可以以劑量依賴的方式加速受感染蜜蜂的DWV復(fù)制，此外該研究還表明營養(yǎng)對病毒的感染也有著一定影響，飼喂花粉的蜜蜂中N.ceranae對DWV滴度的影響要比只飼喂糖水的蜜蜂要強(qiáng)[64]。前人的研究表明，N.ceranae和DWV的協(xié)同作用可能受劑量和營養(yǎng)作用，兩種病原菌之間的協(xié)同作用可能影響蜜蜂群體的損失。

3.3 東方蜜蜂微孢子蟲與農(nóng)藥感染的相互作用 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中農(nóng)藥的大量使用，在有效防控害蟲的同時，也會對非靶標(biāo)的授粉昆蟲造成一定的危害[65]。蜜蜂作為自然界重要的授粉昆蟲，會接觸到殘留在花朵及空氣中的農(nóng)藥殘留，增大了蜜蜂與農(nóng)藥接觸的概率，農(nóng)藥和N.ceranae的相互作用被認(rèn)為是導(dǎo)致蜂群死亡率增加的重要原因之一，困此也得到了更多人的關(guān)注。

新煙堿類殺蟲劑（neonicotinoid insecticides）具有高效、高選擇、對哺乳動物低毒的特點而被廣泛的應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，已有研究證明其通過對昆蟲的神經(jīng)毒害作用達(dá)到效果，亞致死劑量的新煙堿類殺蟲劑會對蜜蜂的行為、生理代謝以及免疫系統(tǒng)造成影響[66-67]。微孢子蟲與新煙堿類殺蟲劑的相互作用會對蜜蜂健康造成顯著的影響，同時感染微孢子蟲和田間濃度的吡蟲啉（Imidacloprid）會增加成年蜜蜂死亡率，并且會使葡萄糖氧化酶（glucose oxidase）活性顯著降低，葡萄糖氧化酶可以對蜂群和蜂糧消毒從而參與社會免疫[68]。此外，殺蟲劑脅迫已經(jīng)感染N.ceranae的蜜蜂，會對N.ceranae的增殖造成影響，Vidau等[69]的感染結(jié)果顯示，相比只感染N.ceranae的蜜蜂，同時感染氟蟲腈（Fipronil）的蜜蜂感染孢子量顯著降低，而同時感染噻蟲啉（Thiazoline）的蜜蜂感染孢子量顯著增強(qiáng)。同樣有研究也表明，亞致死劑量的吡蟲啉會增加蜜蜂感染孢子量[70]。這種相互作用并不僅限于新煙堿類殺蟲劑，有一項調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在采集到的所有花粉樣本中，殺菌劑的含量最高，雖然殺菌劑通常被認(rèn)為對蜜蜂是相當(dāng)安全的，但在該調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，百菌清（Chlorothalonil）和蜂農(nóng)用來控制瓦螨感染的殺真菌劑對蜜蜂抵抗寄生蟲感染的能力有顯著影響[71]。而在另一項研究中，沒有發(fā)現(xiàn)殺螨劑和N.ceranae同時脅迫會對蜜蜂死亡率以及蜜蜂免疫相關(guān)基因有影響，在亞致死劑量的香豆素或 氟胺氰菊酯感染的情況下，N.ceranae在蜜蜂中的孢子含量也沒有顯著變化[72]。

大量的研究證明，亞致死劑量的農(nóng)藥可以增加N.ceranae對宿主的危害程度，然而針對農(nóng)藥與N.ceranae的相互作用，仍存在很多爭論，需要更多的研究來證明蜜蜂在哪種條件下、哪種相互作用會對蜂群的健康受到影響。

4 總結(jié)與展望

大量的研究表明N.ceranae地理分布及感染的物種類別呈現(xiàn)多樣性，其對蜜蜂的健康如行為、壽命、定向等造成的影響成為研究的熱點，研究發(fā)現(xiàn)N.ceranae是引起CCD的重要因素之一。然而，其流行規(guī)律的不明顯、傳播途徑的多樣性均給防治工作帶來了困難。到目前為止，從煙曲霉（Aspergillus fumigatus）中分離的煙曲霉素（Fumagillin）是少數(shù)已知具有抗微孢子蟲活性的藥物之一[73]，雖然在實驗室條件下效果較好，但在野外條件下紫外線的輻射會加快化合物的降解，并且在歐洲大部分地區(qū)使用抗生素進(jìn)行治療是不合法的。此外，寄生蟲廣泛存在于自然界，目前已知的1400種微孢子蟲中有8個屬14個種被發(fā)現(xiàn)能夠感染人類[74]，鳥類攜帶的瘧原蟲（Plasmodium）、隱孢子蟲（Cryptosporidium）可通過遷徙飛翔、籠養(yǎng)等方式傳播，對人類健康造成威脅[75]，但關(guān)于蜜蜂攜帶的N.ceranae能否影響人類健康尚不清楚。

N.ceranae感染的蜜蜂，會造成授粉效率降低、早熟覓食和受感染蜜蜂壽命縮短。但在不同的實驗中，劑量、環(huán)境、時間的影響在宿主中體現(xiàn)出不同的狀態(tài)，實驗室條件下雖然可以盡量避免其他因素的干擾，但蜜蜂作為一種群居的社會性昆蟲，其免疫系統(tǒng)和生理代謝體現(xiàn)出復(fù)雜的多樣性，需要我們充分考慮田間條件的各種影響因子，全面的考量其免疫、代謝、能量應(yīng)激等與早熟的采集行為之間的聯(lián)系，以及更好的理解寄生蟲-宿主之間的動態(tài)關(guān)系，以更好地模擬其生存環(huán)境。

盡管現(xiàn)在的研究已經(jīng)揭示了N.ceranae對蜜蜂個體及群體造成的損傷，但有關(guān)蜜蜂不同發(fā)育時期N.ceranae感染造成的影響卻鮮有報道，并且目前普遍認(rèn)為，單一的影響因素并不是造成蜂群崩潰的主要因素，仍需要我們更好地去探索N.ceranae與其他病原如病毒和農(nóng)藥的相互作用。在研究和評估蜂群健康的同時，應(yīng)注意N.ceranae孢子數(shù)的多少不宜單獨作為蜂群健康與否的指標(biāo)[76]。此外，對于N.ceranae的原始寄主A.cerana的抗性機(jī)制以及對N.ceranae的種群遺傳結(jié)構(gòu)研究，有助于為微孢子蟲的防治提供思路，為蜂群的健康發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)，更好的促進(jìn)蜂產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。