陳燦球 林培義 余丹媛

（清遠(yuǎn)市公安局刑事警察支隊(duì)，廣東 清遠(yuǎn) 511500）

死亡時(shí)間（postmortem interval，PMI）在法醫(yī)學(xué)上指機(jī)體死后經(jīng)歷的時(shí)間（the time since death），即尸體檢驗(yàn)時(shí)間距死亡發(fā)生的時(shí)間間隔。死亡時(shí)間推斷（estimation of time of death）是法醫(yī)病理學(xué)研究的熱點(diǎn)問題，在刑事、民事和行政案件中均有重要應(yīng)用。根據(jù)死亡發(fā)生后的尸體現(xiàn)象和法醫(yī)學(xué)的實(shí)踐要求，死亡時(shí)間推斷可分為早期死亡時(shí)間推斷（estimation of short postmortem period）和晚期死亡時(shí)間推斷（estimation of long postmortem period），一般以死亡是否超過24h，以及尸體表現(xiàn)是否出現(xiàn)明顯腐敗區(qū)別二者。近年來，死后尸溫變化、早期尸體征象、現(xiàn)場客觀信息、死后玻璃體液成分、核酸和蛋白質(zhì)的降解研究均有相關(guān)研究及進(jìn)展，早期死亡時(shí)間推斷可分為現(xiàn)場推斷和需要后續(xù)實(shí)驗(yàn)室檢測的推斷，本文就這些方法進(jìn)行分類探討，供死亡現(xiàn)場勘查參考。

1 現(xiàn)場推斷早期死亡時(shí)間的方法

在公安工作中，現(xiàn)場勘查時(shí)如能在初次勘查過程中推斷尸體大致死亡時(shí)間，能幫助公安找到勘查的重點(diǎn)和難點(diǎn)，從而提高勘查的效率。

1.1 尸體溫度變化

人死后代謝停止，不再產(chǎn)生熱量維持機(jī)體體溫，當(dāng)環(huán)境溫度低于體溫時(shí)，體表內(nèi)能以熱輻射和熱傳遞的方式不斷減少，同時(shí)尸體內(nèi)部內(nèi)能也不斷向體表進(jìn)行熱傳遞，尸體的溫度不斷下降，直到與環(huán)境溫度相同。尸溫的下降有一定的規(guī)律，并且在死亡現(xiàn)場容易測量，因此廣泛用于死亡時(shí)間的推斷。Davy 在1839 年首次使用溫度計(jì)測量尸溫來推斷死亡時(shí)間，隨后1863 年Taylor 和Wilks 測量了100 例尸體溫度來研究尸溫和死亡時(shí)間的相關(guān)性。尸體的溫度又分為尸表溫度和內(nèi)部溫度，尸表溫度容易受環(huán)境以及死者衣著情況影響，其與死亡時(shí)間PMI 的相關(guān)性受多種因素影響；內(nèi)部溫度受到皮膚、皮下脂肪、肌肉組織的保護(hù)，其與死亡時(shí)間的相關(guān)性較好。因此，尸體內(nèi)部溫度常用于死亡時(shí)間的推斷。

1.1.1 直腸溫度

目前有許多法醫(yī)學(xué)者檢測腦室溫度、肝臟溫度與直腸溫度來推測死亡時(shí)間，在廣州地區(qū)尸體肛溫推斷死亡時(shí)間的應(yīng)用研究以及581 例非正常死亡尸體直腸溫度與死亡時(shí)間關(guān)系的研究中，直腸溫度與死亡時(shí)間均表現(xiàn)出了良好的相關(guān)性［1］。直腸溫度在公安工作中容易測量，在死亡現(xiàn)場勘查中可快速用于推斷大致死亡時(shí)間。

較為成熟的二項(xiàng)指數(shù)直腸溫度變化模型最早可以追溯到20 世紀(jì)60 年代，隨后該模型由德國學(xué)者Henβge 完善，建立了早期死亡時(shí)間PMI 推斷算法表。該模型包括尸體實(shí)測溫度，環(huán)境溫度和尸體初始溫度三個(gè)重要參數(shù)。在引入了尸體的年齡、性別、衣著情況、環(huán)境通風(fēng)情況、接觸介質(zhì)、保溫情況和所屬地區(qū)等參數(shù)后，采用多重線性回歸建立數(shù)學(xué)模型，其計(jì)算結(jié)果預(yù)測值與實(shí)際值誤差＜3h 可達(dá)90%以上［2］。

1.1.2 其他尸體溫度

除直腸溫度外，眼溫模型和耳溫模型在近年也取得了進(jìn)展。眼溫模型與直腸溫度模型相比，其受尸體體型、載體介質(zhì)、衣著、年齡和性別等因素的影響相對較小，但是眼溫模型的劣勢在于眼球位于體表，其熱傳導(dǎo)規(guī)律受環(huán)境溫度、眼瞼閉合情況以及閉合過程的影響較大，出現(xiàn)比尸體核心溫度更大的變異。目前眼溫模型預(yù)測值與實(shí)際值誤差大于直腸模型，仍需要進(jìn)一步研究，完善相關(guān)的影響參數(shù)，提高預(yù)測值的準(zhǔn)確性。

1.1.3 尸體溫度在現(xiàn)場勘查中的應(yīng)用

尸體溫度是法醫(yī)在死亡現(xiàn)場中容易測量與獲取的一項(xiàng)數(shù)據(jù)，各地工作經(jīng)驗(yàn)豐富的法醫(yī)可結(jié)合當(dāng)?shù)氐臍夂?、?dāng)時(shí)的季節(jié)、天氣以及死者的衣著情況、死后所處環(huán)境的因素，快速推斷死者的死亡時(shí)間范圍，從而為后續(xù)的勘查取證工作（如監(jiān)控的調(diào)取、嫌疑人排查等）劃定有效范圍。

1.2 早期尸體現(xiàn)象

尸斑、尸僵、超生反應(yīng)、肌肉情況、眼組織形態(tài)和性狀的改變等早期尸體現(xiàn)象仍然是公安工作中常用的PMI 推斷方法。

1.2.1 尸斑

利用尸斑的顏色以及按壓的顏色變化情況推斷尸斑處于三個(gè)時(shí)期（墜積期、擴(kuò)散期和浸潤期）中的哪一期，從而進(jìn)一步推斷大致的死亡時(shí)間。但尸斑顏色、按壓時(shí)間、按壓力度容易受到檢驗(yàn)者主觀方面的影響。為了更加客觀地用尸斑推斷死亡時(shí)間，Romanelli 等采用顏色計(jì)量學(xué)的方法，統(tǒng)計(jì)了101 具尸體按壓強(qiáng)度、按壓時(shí)間、尸斑恢復(fù)時(shí)間和按壓前后顏色的顏色值，在這個(gè)基礎(chǔ)上建立模型，提高了尸斑推斷死亡時(shí)間的準(zhǔn)確性，同時(shí)有助于尸斑實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的跨實(shí)驗(yàn)室交流［3］。

1.2.2 超生反應(yīng)

生物體死亡后，其某些器官、組織或細(xì)胞仍保持某些活動功能或?qū)ν饨绱碳ぷ龀鲆欢ǚ磻?yīng)的能力稱為超生反應(yīng)（supravital reaction）。超生反應(yīng)具有受環(huán)境溫度影響較小的優(yōu)點(diǎn)。目前已知的超生反應(yīng)包括肌肉對刺激的興奮性、瞳孔反應(yīng)、發(fā)汗反應(yīng)、纖毛運(yùn)動和精子運(yùn)動等。人死后4h 內(nèi)，向瞳孔內(nèi)注入阿托品或毛果蕓香堿可出現(xiàn)對應(yīng)的散瞳或縮瞳現(xiàn)象。骨骼肌反應(yīng)，一般認(rèn)為死后2h 內(nèi)骨骼肌受到刺激均能出現(xiàn)收縮，隨著時(shí)間的推移，骨骼肌反應(yīng)的檢出率逐漸下降。根據(jù)Sophie 等的報(bào)道，骨骼肌反應(yīng)可以持續(xù)13h，且檢出率與PMI 呈負(fù)相關(guān)［4］。

1.2.3 其他早期尸體現(xiàn)象

肌肉松弛，人死后肌張力消失，肌肉變軟，稱為肌肉松弛（muscular flaccidity）。肌肉松弛是人體死亡后最早出現(xiàn)的現(xiàn)象，可在瀕死期出現(xiàn)或死亡后立即出現(xiàn)，待尸僵出現(xiàn)后消失?？杀憩F(xiàn)為瞳孔散大、面部表情消失、肢體生理性彎曲消失和大小便失禁等。

尸僵的出現(xiàn)、消失以及在僵直（人為破壞尸僵，尸僵很快再恢復(fù)的現(xiàn)象）可以推斷PMI所處的時(shí)間段。尸僵一般在死亡后1 ～3h 先在小肌群出現(xiàn)；4 ～6h 擴(kuò)散到全身，在此期間破壞尸僵容易出現(xiàn)再僵直，但再僵直弱于原尸僵；6 ～8h 內(nèi)則不容易出現(xiàn)再僵直；12 ～15h 達(dá)到頂峰；24 ～48h 開始緩解。在夏季尸僵一般不超過48h，但在冬季尸僵可以持續(xù)超過72h。

1.2.4 早期尸體現(xiàn)象在現(xiàn)場勘查中的應(yīng)用

利用早期尸體死亡現(xiàn)象在現(xiàn)場中推斷PMI的優(yōu)點(diǎn)在于其不需要特別的測量工具，以尸斑、尸僵和肌肉松弛等可以直接獲得的信息，綜合快速推斷早期PMI，同時(shí)結(jié)合在尸表檢驗(yàn)過程中獲得的信息，快速推斷死亡時(shí)間的范圍，從而為案件的偵查提供線索。早期尸體現(xiàn)象雖然便于現(xiàn)場使用，但其存在主觀性較強(qiáng)的缺點(diǎn)，如尸斑的顏色、尸僵的強(qiáng)度等都存在一定的主觀性。因此，早期尸體現(xiàn)象用于推斷PMI，要求法醫(yī)有豐富的工作經(jīng)驗(yàn)，不斷提高自身理論知識在現(xiàn)場勘查中的應(yīng)用，并減少主觀因素對推斷的影響。

1.3 現(xiàn)場客觀信息

現(xiàn)場是復(fù)雜而多變的，死亡時(shí)間推斷如果單單局限于尸體上的信息，往往不夠準(zhǔn)確。利用現(xiàn)場勘查中一些能夠反映時(shí)間資訊的客觀信息，如水電表、門禁系統(tǒng)、報(bào)紙、掛歷等客觀信息，有助于死亡時(shí)間輔助推斷。這些信息通常不會被偽裝、較難變動，即使偽裝，也容易有瑕疵。同時(shí)隨著社會的發(fā)展及通訊的便捷，電子產(chǎn)品（如手機(jī)、電腦、電子手表等）的廣泛應(yīng)用，現(xiàn)場勘驗(yàn)中收集電子設(shè)備中的信息、時(shí)間，有助于法醫(yī)輔助推斷案發(fā)時(shí)間或者死亡時(shí)間。也有通過一些生活常識來輔助推斷死亡時(shí)間［5］，比如有案例報(bào)道勘驗(yàn)人員通過一只雞每天最多下一只蛋，農(nóng)戶正常情況下會每天拾取雞籠中的雞蛋這一生活規(guī)律確定死亡時(shí)間；也有報(bào)道根據(jù)現(xiàn)場食物腐敗的程度及天氣變化輔助推斷死亡時(shí)間；甚至還有報(bào)道根據(jù)嫌疑人作案行為推斷死亡時(shí)間。

利用現(xiàn)場客觀信息輔助推斷早期死亡時(shí)間，需要勘驗(yàn)人員仔細(xì)觀察生活小細(xì)節(jié)，累積生活經(jīng)驗(yàn)，掌握當(dāng)?shù)氐纳罴?xì)節(jié)變化，才能在需要時(shí)及時(shí)發(fā)現(xiàn)異常，快速判斷。

2 實(shí)驗(yàn)室推斷早期死亡時(shí)間的方法

在一些尸體破壞較嚴(yán)重的死亡現(xiàn)場，如碎尸等，法醫(yī)可能難以通過尸溫和早期尸體現(xiàn)象等方法去推斷PMI。在這種情況下，法醫(yī)工作者需要在現(xiàn)場勘查中注意收集可以推斷PMI 的生物檢材，利用早期生化指標(biāo)推斷更加精確的PMI，為后續(xù)的偵查、調(diào)查、復(fù)勘等工作提供思路。

2.1 核酸和蛋白質(zhì)

人體死亡后，代謝停止，細(xì)胞無法獲取所需的氧氣、糖和氨基酸等，細(xì)胞內(nèi)環(huán)境開始紊亂，隨后溶酶體破裂，釋放其中的水解酶、核酸酶和蛋白酶等各種酶，細(xì)胞膜破裂后釋放到內(nèi)環(huán)境中導(dǎo)致組織細(xì)胞溶解。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，核酸和蛋白質(zhì)的降解被發(fā)現(xiàn)和PMI 有一定的規(guī)律。但就目前來說，因基層公安缺乏實(shí)驗(yàn)室條件，核酸和蛋白質(zhì)能為法醫(yī)在現(xiàn)場勘查中提供的線索與偵查方向較為有限；且核酸和蛋白質(zhì)用于推斷早期死亡時(shí)間還不夠準(zhǔn)確，現(xiàn)勘人員只能盡可能提取更多生物證據(jù)，待實(shí)驗(yàn)室檢測有相關(guān)結(jié)論后，為現(xiàn)場的二次勘查提供方向。

2.1.1 DNA 的變化規(guī)律與PMI 的相關(guān)性

2002 年陳玉川等利用改良Feulgen 染色及計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)對離體人胸骨DNA 含量進(jìn)行定量檢測，發(fā)現(xiàn)在較長PMI 范圍內(nèi)，人胸骨骨髓DNA 含量仍呈下降規(guī)律［6］；Di Nunno等利用流式細(xì)胞儀技術(shù)研究了人死后肝、脾和血液中DNA 含量變化，發(fā)現(xiàn)肝組織DNA 的降解與PMI 幾乎呈線性關(guān)系，并認(rèn)為肝組織是進(jìn)行死后DNA 含量變化分析較理想的器官［7］；Johnson 等利用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)也發(fā)現(xiàn)了相似的變化規(guī)律。雖然采用方法不相同，但是均得出了機(jī)體死亡后DNA 含量與PMI 的關(guān)系［8］。需要注意的是，不用組織器官DNA 的變化規(guī)律與PMI 的關(guān)系不相同，用于推斷PMI 需要繼續(xù)校準(zhǔn)。

2.1.2 RNA 的變化規(guī)律與PMI 的相關(guān)性

在過去，由于RNA 的不穩(wěn)定和自然界普遍存在RNA 降解的作用，一般認(rèn)為RNA 不適合用于PMI 的推斷。但在實(shí)際的檢驗(yàn)工作中發(fā)現(xiàn)，mRNA 具有一定的穩(wěn)定性，而且其變化規(guī)律與PMI 具有相關(guān)性［9-10］。目前檢測RNA 與PMI相關(guān)性的主要方法包括RT-PCR 和實(shí)時(shí)熒光定量PCR。RT-PCR 檢測大鼠腦組織、心肌和膈肌等的mRNA 和rRNA 擴(kuò)增產(chǎn)物均隨PMI 延長而下降，環(huán)境溫度高時(shí)擴(kuò)增產(chǎn)物減少，提示與環(huán)境溫度相關(guān)［11-12］。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測SD 大鼠腦組織中mRNA 也提示mRNA 含量與PMI 有相關(guān)性［13］。

2.1.3 蛋白質(zhì)的變化規(guī)律與PMI 的相關(guān)性

在機(jī)體死亡后，在各種水解酶以及細(xì)菌、真菌、食腐生物的作用下蛋白質(zhì)逐漸降解，最終消失。隨著免疫組化、傅里葉紅外光譜等技術(shù)的發(fā)展，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)肌鈣蛋白、甲狀腺球蛋白的死后降解與時(shí)間的線性相關(guān)，有用于推斷PMI 的可能［14-15］。

由于核酸和蛋白質(zhì)的降解受到多種因素的影響，其中某一項(xiàng)都難以為PMI 的推斷提供可靠依據(jù)，需要綜合參考才能作為推斷早期PMI的方法。因此，目前核酸蛋白質(zhì)作為推斷PMI的實(shí)際應(yīng)用較少。

2.2 玻璃體液

除眼睛直接受損的情況，一般認(rèn)為玻璃體液比血液和腦脊液受外界影響更小，發(fā)生污染和腐敗的概率更小，因此玻璃體液也是良好的檢材。

研究表明，玻璃體液中的鉀離子濃度與PMI 呈正相關(guān)，機(jī)體死亡后玻璃體液中的鉀離子濃度約每小時(shí)升高0.17mmol/L，應(yīng)用鉀離子濃度推斷早期死亡時(shí)間較為準(zhǔn)確［16］。

玻璃體液在取材過程中的污染，以及潛在出血污染會影響使用鉀離子濃度推斷PMI 的準(zhǔn)確性［17］。玻璃體液尿酸陽性可作為指標(biāo)，判斷玻璃體液是否潛血污染。在玻璃體液污染時(shí)，玻璃體液次黃嘌呤濃度推斷PMI 更加準(zhǔn)確，但需要注意，不同的玻璃體液前處理方法，如離心分離法、酶解法和加熱法等，會導(dǎo)致次黃嘌呤濃度檢測結(jié)果不同，這是測定不準(zhǔn)確的主要原因［18］。

玻璃體液成分雖然不能在缺乏實(shí)驗(yàn)條件的案件現(xiàn)場中直接應(yīng)用于死亡時(shí)間推斷，但其在缺乏其他條件去推斷早期死亡時(shí)間時(shí)能夠作為輔助手段較準(zhǔn)確地推斷死亡時(shí)間，或者修正其他因素推斷的早期死亡時(shí)間，為后續(xù)的二次勘查提供線索。

3 展望

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，推斷PMI 的方法也越來越多，但是目前難以用于各種環(huán)境的死亡現(xiàn)場。在公安工作中，早期尸體現(xiàn)象和尸溫仍然是死亡現(xiàn)場勘查過程中快速推斷死亡時(shí)間最重要的方法，同時(shí)善于利用現(xiàn)場客觀信息，輔助死亡時(shí)間推斷。隨著近年計(jì)算數(shù)序機(jī)建模和算法的發(fā)展，有望不斷完善尸溫、尸僵和尸斑等的PMI 推斷模型，不斷提高早期死亡時(shí)間推斷的精確度，為查清案件事實(shí)提供線索，為案件偵破提供有效證據(jù)。