許詣，秦建品，錢丹，沈文婷

[襄陽市中心醫(yī)院（湖北文理學(xué)院附屬醫(yī)院）兒科，湖北 襄陽 441021]

病毒性腦炎是由柯薩奇病毒、EB 病毒、乙型腦炎病毒等引起的中樞系統(tǒng)感染性疾病，多發(fā)于兒童，臨床主要表現(xiàn)為頭痛、發(fā)熱、抽搐等，具有病死率高、預(yù)后差的特點(diǎn)[1]。臨床根據(jù)患兒神經(jīng)系統(tǒng)損傷程度采取針對性治療，多采用影像學(xué)檢查評估患兒神經(jīng)損傷情況，具有一定的主觀性[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，病毒性腦炎患兒受病毒侵襲，腦實(shí)質(zhì)廣泛性損傷，表現(xiàn)為神經(jīng)細(xì)胞壞死及炎癥細(xì)胞浸潤，臨床可通過檢測腦脊液神經(jīng)損傷指標(biāo)和炎癥因子評估患兒病情[3-4]。然而獲取患兒腦脊液標(biāo)本需要進(jìn)行穿刺，具有一定的創(chuàng)傷性[5]。有研究報道，神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者血液中的炎性介質(zhì)與神經(jīng)損傷程度、機(jī)體炎癥反應(yīng)有關(guān)，可通過血液炎癥因子反映患者神經(jīng)損傷及炎癥情況[6]。高遷移率族蛋白-1（high mobility group box-1,HMGB1）是一種重要的炎性介質(zhì)，存在于真核細(xì)胞中，能夠被免疫活性細(xì)胞和壞死細(xì)胞激活并釋放到細(xì)胞外，參與炎癥疾病的發(fā)生、發(fā)展，加劇機(jī)體炎癥反應(yīng)[7]。然而病毒性腦炎患兒血清HMGB1 水平與神經(jīng)損傷和炎癥反應(yīng)的關(guān)系尚不清楚。鑒于此，本研究選取襄陽市中心醫(yī)院收治的94 例病毒性腦炎患兒，探究血清HMGB1 水平與神經(jīng)損傷、炎癥反應(yīng)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年10 月—2021 年10 月襄陽市中心醫(yī)院收治的94 例病毒性腦炎患兒作為研究組。其中男性52 例，女性42 例；年齡1～13 歲，平均（5.81±0.95）歲。另取同期本院健康體檢兒童86 例作為對照組。其中男性48 例，女性38 例；年齡1～12 歲，平均（5.69±0.87）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)（上冊）》[8]病毒性腦炎診斷標(biāo)準(zhǔn)；②首次發(fā)病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①顱腦手術(shù)史；②心肝腎功能障礙；③血液性系統(tǒng)疾??；④合并其他中樞神經(jīng)感染；⑤合并腦脊髓炎；⑥合并其他系統(tǒng)或全身感染性疾?。虎咦陨砻庖咝约膊?。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（No：襄醫(yī)190017），患者家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

根據(jù)研究組神經(jīng)損傷程度細(xì)分為輕度組37 例，中度組31 例，重度組26 例。神經(jīng)損傷程度采用改良Rankin 評分量表評定，1～2 分為輕度，3～4 分為中度，5 分為重度[9]。

入院后清晨空腹采集患者靜脈血3 mL，3 500 r/min 離心15 min，離心半徑10 cm，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血清HMGB1、白細(xì)胞介素1β（Interleukin-1β,IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平，采用放射免疫法測定血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE）、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein,MBP）水平，試劑盒均購自上海博亞生物技術(shù)有限公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，比較用t檢驗或方差分析，進(jìn)一步兩兩比較用SNK-q檢驗；計數(shù)資料以構(gòu)成比表示，比較用χ2檢驗；相關(guān)性分析用Pearson 法；繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲線。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清HMGB1、NSE、MBP、IL-1β、TNF-α水平比較

研究組與對照組血清HMGB1、NSE、MBP、IL-1β、TNF-α 水平比較，經(jīng)t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），研究組高于對照組。見表1。

表1 研究組與對照組血清HMGB1、NSE、MBP、IL-1β、TNF-α水平比較（）

表1 研究組與對照組血清HMGB1、NSE、MBP、IL-1β、TNF-α水平比較（）

2.2 不同嚴(yán)重程度患兒血清HMGB1、NSE、MBP、IL-1β、TNF-α水平比較

不同嚴(yán)重程度患兒血清HMGB1、NSE、MBP、IL-1β、TNF-α 水平比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），重度組高于中度組和輕度組（P<0.05），中度組高于輕度組（P<0.05）。見表2。

表2 不同嚴(yán)重程度患兒血清HMGB1、NSE、MBP、IL-1β、TNF-α水平比較（）

表2 不同嚴(yán)重程度患兒血清HMGB1、NSE、MBP、IL-1β、TNF-α水平比較（）

注：①與輕度組比較，P <0.05；②與中度組比較，P<0.05。

2.3 病毒性腦炎患兒血清HMGB1 水平與NSE、MBP、IL-1β、TNF-α水平的相關(guān)性

Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，病毒性腦炎患兒血清HMGB1 水平與NSE、MBP、IL-1β、TNF-α 水平呈正相關(guān)（r=0.445、0.391、0.354 和0.386，P=0.000、0.000、0.002 和0.000）。

2.4 病毒性腦炎患兒血清HMGB1 水平對重度神經(jīng)損傷的診斷效能

ROC 曲線分析結(jié)果顯示，病毒性腦炎患兒血清HMGB1 水平評估重度神經(jīng)損傷的最佳截斷點(diǎn)為20.28 ng/mL，敏感性為88.46%（95% CI：0.698，0.976），特異性為94.12%（95% CI：0.856，0.984），AUC 為0.948（95% CI：0.882，0.983）。見圖1。

圖1 病毒性腦炎患兒血清HMGB1水平評估重度神經(jīng)損傷的ROC曲線

3 討論

病毒性腦炎是由各種病毒感染引起的炎癥性腦病，病毒感染后可誘發(fā)免疫性腦損傷，病變影響大腦實(shí)質(zhì)，進(jìn)而破壞血腦屏障[10-11]。臨床研究表明，神經(jīng)系統(tǒng)損傷可導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞發(fā)生炎癥、壞死，多種炎癥因子和酶釋放進(jìn)入血液，引發(fā)一系列病理改變[12-13]。病毒性腦炎患兒機(jī)體病毒與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞相互作用，誘導(dǎo)產(chǎn)生大量IL-1β、TNF-α 等炎癥因子，使腦組織發(fā)生炎癥改變[14]。此外，NSE、MBP 等神經(jīng)損傷指標(biāo)釋放進(jìn)入腦脊液和血液，可作為反映神經(jīng)元受損的生化指標(biāo)[15]。有研究指出，血清HMGB1 水平與神經(jīng)系統(tǒng)損傷患者神經(jīng)損傷指標(biāo)及炎癥因子水平有關(guān)，在神經(jīng)系統(tǒng)損傷及炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[16]。

HMGB1 作為炎性介質(zhì)，通過與晚期糖基化終產(chǎn)物受體、Toll 樣受體等細(xì)胞表面受體結(jié)合促進(jìn)炎癥因子產(chǎn)生，破壞血腦屏障，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞壞死和凋亡[17]。HMGB1 具有廣泛的生物活性，維持核小體結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、參與DNA 重組等功能，腦組織炎癥損傷后，HMGB1 可以快速轉(zhuǎn)位到細(xì)胞質(zhì)并釋放，直接作用于神經(jīng)元表面受體和膠質(zhì)細(xì)胞表面受體，促進(jìn)炎癥因子釋放[18]。動物實(shí)驗研究發(fā)現(xiàn)，抑制HMGB1 活性或阻斷相關(guān)炎癥反應(yīng)通路，可以減輕腦組織的炎癥損傷[19]。NSE 存在于神經(jīng)元、神經(jīng)細(xì)胞及神經(jīng)纖維中，能夠與神經(jīng)元特異結(jié)合，腦損傷時從胞漿中釋放進(jìn)入腦脊液；MBP 是中樞神經(jīng)髓鞘膜中重要成分，具有神經(jīng)組織特異性[20]。本研究中研究組血清HMGB1、NSE、MBP、IL-1β、TNF-α 水平高于對照組，說明病毒性腦炎患兒神經(jīng)損傷及炎癥反應(yīng)導(dǎo)致血清HMGB1、NSE、MBP、IL-1β、TNF-α 水平異常升高。分析其原因為病毒侵襲直接導(dǎo)致病毒性腦炎患兒腦組織受損，由于患兒自身免疫功能較差，進(jìn)而引起神經(jīng)細(xì)胞炎癥反應(yīng)，多種炎癥因子透過血腦屏障進(jìn)入血液，神經(jīng)系統(tǒng)組成物質(zhì)NSE、MBP參與腦損傷病理過程，隨著血腦屏障受損釋放進(jìn)入血液。HMGB1 通過多種通路參與機(jī)體炎癥反應(yīng)，與腦水腫、帕金森、癲癇等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[21-23]。HMGB1 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中可以與其受體結(jié)合，進(jìn)而調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和血腦屏障通透性，將HMGB1 注入小鼠腦組織后，能夠損傷腦血管內(nèi)皮細(xì)胞，破壞血腦屏障，促進(jìn)IL-1β、TNF-α 等炎癥因子釋放，加重腦神經(jīng)系統(tǒng)損傷[24]。病毒性腦炎患兒神經(jīng)元損傷、壞死，早期HMGB1 由神經(jīng)元釋放加劇腦損傷，隨著病情進(jìn)展，由星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放誘導(dǎo)細(xì)胞毒性反應(yīng)[25]。本研究中重度組血清HMGB1 高于中度組和輕度組，中度組血清HMGB1高于輕度組，說明病毒性腦炎患兒血清HMGB1 水平隨著病情進(jìn)展，其水平逐漸升高。Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，病毒性腦炎患兒血清HMGB1 水平與NSE、MBP、IL-1β、TNF-α 水平呈正相關(guān)，說明病毒性腦炎患兒血清HMGB1 水平與神經(jīng)損傷和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。HMGB1 作為促炎因子，能夠主動分泌或被動釋放，通過與多種內(nèi)源性分子結(jié)合，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，隨著炎癥反應(yīng)加劇，誘發(fā)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，加劇中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷[26]。HMGB1 能夠維持并放大炎癥反應(yīng)，細(xì)胞因子、內(nèi)毒素等感染因素，以及創(chuàng)傷、缺血等非感染因素均可促進(jìn)HMGB1 釋放，而HMGB1 進(jìn)一步誘導(dǎo)多種促炎介質(zhì)的表達(dá)和釋放，進(jìn)而活化蛋白激酶信號通路和核轉(zhuǎn)錄因子κB 的核移位[27]。ROC 曲線分析結(jié)果顯示，病毒性腦炎患兒血清HMGB1 水平評估重度神經(jīng)損傷的最佳截斷點(diǎn)為20.28 ng/mL，AUC 為0.948，臨床可通過動態(tài)監(jiān)測病毒性腦炎患兒血清HMGB1 水平變化，了解神經(jīng)損傷程度，對指導(dǎo)臨床治療具有重要參考價值。此外，血清學(xué)指標(biāo)檢測方便、快捷，可重復(fù)性強(qiáng)，且對患兒創(chuàng)傷較小[28]。

綜上所述，病毒性腦炎患兒血清HMGB1 水平與神經(jīng)損傷和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，血清HMGB1 水平可作為評估患兒神經(jīng)損傷的敏感指標(biāo)。然而，本研究納入患兒有限，統(tǒng)計結(jié)果可能存在一定偏差，仍需擴(kuò)大樣本驗證研究結(jié)果。