楊 月，劉夢(mèng)夢(mèng)，張 媛，伍鵬霖，董卉林，吳昌健，陳 蕊，朱懷遠(yuǎn)，曹 毅

江蘇中煙工業(yè)有限責(zé)任公司，南京市建鄴區(qū)興隆大街29 號(hào) 210019

為滿足消費(fèi)者對(duì)煙草制品感官舒適性方面的需求，卷煙工業(yè)企業(yè)通常采用賦甜的方式增強(qiáng)煙草制品的甜味感，使煙氣更加柔和、細(xì)膩，從而提高煙草制品的感官品質(zhì)。其中，在接裝紙上施加甜味成分是較為常見的賦甜方式［1］。研究表明，卷煙抽吸過程中口腔感受到的甜味能夠增加甜潤感和生津感，使煙氣柔和細(xì)膩，有效降低刺激性，改善卷煙感官質(zhì)量，從而給消費(fèi)者帶來愉悅感和舒適性［2］。人體唾液是由口腔腺體分泌產(chǎn)生的混合液，具有潤滑、輔助消化和抗菌等諸多作用。唾液中包含DNA、RNA和蛋白質(zhì)信息、代謝產(chǎn)物以及多種微生物，對(duì)于口腔疾病、腫瘤以及其他系統(tǒng)疾病的診斷具有巨大的應(yīng)用價(jià)值［3］。由于各種生理病理狀態(tài)均有相關(guān)蛋白的參與，因此對(duì)唾液蛋白的功能及其分泌的分子機(jī)制研究有利于生理狀態(tài)和各種疾病的診斷［4］。

近年來，蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展為唾液蛋白質(zhì)的鑒定奠定了基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)組學(xué)（Proteomics）是以蛋白質(zhì)為研究對(duì)象，高通量系統(tǒng)化解析蛋白質(zhì)組成、功能及相互作用的科學(xué)。蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的承擔(dān)者，蛋白質(zhì)組學(xué)能夠從蛋白水平上揭示研究對(duì)象的生理狀態(tài)、病理狀態(tài)等過程的作用機(jī)制［5］。隨著質(zhì)譜儀器的發(fā)展，基于質(zhì)譜技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)定量技術(shù)得到了廣泛應(yīng)用，目前蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在煙草領(lǐng)域主要應(yīng)用于煙草中蛋白質(zhì)表達(dá)差異的分析［6-8］，但是尚未有通過唾液蛋白質(zhì)組差異評(píng)價(jià)抽吸卷煙后人體感官感受方面的研究。為此，本研究中采用基于二級(jí)譜（MS2）定量的串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)簽（Tandem mass tag，TMT）標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)接裝紙賦甜卷煙及同規(guī)格未賦甜卷煙抽吸前后的差異蛋白進(jìn)行鑒定，旨在從分子水平客觀評(píng)價(jià)卷煙賦甜技術(shù)對(duì)人體產(chǎn)生的生理影響。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

接裝紙不含甜味劑的卷煙，同規(guī)格（葉組配方、香精香料以及卷煙輔材均一致）接裝紙施加甜味劑的卷煙（江蘇中煙工業(yè)有限責(zé)任公司提供）。

尿素（≥98%）、乙二胺四乙酸（≥98.5%）、三氟乙酸（≥99%）、蔗糖（99%）、氯化鉀（99%）、碘乙酰胺（≥99%）和氫氧化鈉（≥98%）（德國Sigma公司）；十二烷基硫酸鈉（95%）、羥甲基氨基甲烷（99%）、二硫蘇糖醇（≥97%）、甘氨酸（＞99%）、丙烯酰胺凝膠（30%）和丙烯酰胺凝膠促凝劑（≥99%）（北京索萊寶科技有限公司）；鹽酸、丙酮（AR，北京化工廠有限責(zé)任公司）；二維蛋白定量試劑盒（美國GE Healthcare公司）；TMT試劑盒（美國Pierce公司）。

Ultimate RSLCnano 3000超高效液相色譜儀（美國 Dionex 公 司）；Sep-Pak C18色 譜 柱（美 國Phenomenex 公司）；Q Exactive HF 四極桿軌道阱質(zhì)譜儀、Pico21 常溫離心機(jī)（美國Thermo Scientific 公司）；LC20AD 高效液相色譜儀（日本Shimadzu 公司）；5430R 冷凍離心機(jī)（德國Eppendorf 公司）；1645050 型垂直板電泳儀（美國Bio-rad 公司）；PB-10pH 計(jì)、BSA224S-CW 電子天平（感量0.000 1 g）（德國Sartorius 公司）；Biopette 微量移液器（10、100和1 000 μL，美國Labnet公司）；WD-2102A全自動(dòng)酶標(biāo)儀（北京六一生物科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 唾液樣本的采集與處理

（1）唾液樣本的采集。分別采集6名35～55歲之間被試者（沒有糖尿病、自身免疫性疾病或暴露于放射或化學(xué)療法的病史）［9］在自然狀態(tài)下不抽煙（對(duì)照組，KB）、抽吸賦甜卷煙（賦甜卷煙組，SK-A）后5 min 以及抽吸同規(guī)格未賦甜卷煙（未賦甜卷煙組，SK-B）后5 min 的唾液樣本2 mL，樣品依次標(biāo)記為KB-1～KB-6、SK-A1～SK-A6、SK-B1～SK-B6。 抽吸賦甜卷煙和未賦甜卷煙時(shí)間間隔2 h，期間被試人員保持靜息狀態(tài)，所有唾液樣本均在-20 ℃下保存。

（2）唾液蛋白的提取及酶解。向樣品中加入裂解液［2.5%十二烷基硫酸鈉，0.1 mol/L 羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽（Tris-HCl，用鹽酸調(diào)節(jié)0.1 mol/L 羥甲基氨基甲烷至溶液pH=8.0），1%蛋白酶抑制劑混合物］充分混合均勻，冰水浴超聲10 min，4 ℃條件下14 000 r/min 離心10 min，取上清液。利用丙酮沉淀法沉淀蛋白，向沉淀中加入8 mol/L 尿素溶液（pH=8.0）溶解沉淀，然后加入二硫蘇糖醇至終濃度為15 mmol/L，37 ℃孵育1 h。隨后加入碘乙酰胺至終濃度為30 mmol/L，室溫避光進(jìn)行烷基化反應(yīng)。Bradford法對(duì)蛋白定量，并進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)。向樣品中加入0.1 mol/L Tris-HCl 溶液（pH=8.0），將尿素濃度稀釋至2 mol/L以下，按m胰蛋白酶：m蛋白=1∶50加酶，37 ℃孵育過夜。接著加入三氟乙酸終止反應(yīng)，并將溶液pH 值調(diào)至6.0左右，12 000 r/min 離心15 min，取上清液經(jīng)Sep-Pak C18柱進(jìn)行脫鹽處理，收集濾液并用離心濃縮儀將溶劑完全揮發(fā)，干物質(zhì)在-20 ℃下保存。

1.2.2 TMT標(biāo)記及LC-MS/MS分析檢測(cè)

取等量的樣品進(jìn)行TMT 標(biāo)記（詳細(xì)步驟參照TMT 生產(chǎn)廠家說明書）。將等量混合標(biāo)記后的樣品于14 000 r/min 條件下離心5 min，將上清液上樣至Sep-Pak C18柱上，并利用高pH反相色譜分離法對(duì)混合樣品進(jìn)行分級(jí)分離，最終合并為15個(gè)組分，真空干燥后在-80 ℃下保存。測(cè)定前將每個(gè)樣本溶于0.1%甲酸中，14 000 r/min 離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至色譜瓶中進(jìn)行LC-MS/MS 分析。分析條件：

對(duì)肽段樣品通過自動(dòng)進(jìn)樣器取樣并結(jié)合至C18捕獲柱，洗脫至分析柱（75 μm × 250 mm，粒徑2 μm，孔徑100 ?，Acclaim PepMap C18柱）進(jìn)行分離。利用兩個(gè)流動(dòng)相（流動(dòng)相A：0.1%甲酸；流動(dòng)相B：0.1%甲酸+80%乙腈）建立100 min 的分析梯度（5%B 0 min，5% ～23%B 65 min，23% ～52%B 20 min，52% ～80%B 1 min，80%B 4 min，80% ～5%B 0.1 min，5%B 9.9 min），液相流速為300 μL/min。數(shù)據(jù)依賴型串聯(lián)質(zhì)譜（DDA，Data dependent acquisition）模式分析時(shí)，每個(gè)掃描循環(huán)中包含一個(gè)MS全掃描（R=60 K，AGC=106，max IT=50 ms，質(zhì)量掃描范圍350 ～1 800 amu），以及隨后的 20 個(gè) MS/MS 掃描（R=30 K，AGC =5×104，max IT=200 ms）。碰撞能量設(shè)置為26 eV。四極桿的篩選窗口設(shè)置為1.2 Da。離子重復(fù)采集的動(dòng)態(tài)排除時(shí)間設(shè)置為40 s。

1.2.3 生物信息學(xué)分析

以人的蛋白質(zhì)組（Homo_sapiens_9606_UP_20210128.fasta）作為參考數(shù)據(jù)庫對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行檢索，以蛋白和肽段水平1% 偽發(fā)現(xiàn)率（FDR，F(xiàn)alse discovery rate）為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選。根據(jù)差異倍數(shù)＞1.2 或＜0.83 篩選差異蛋白，并進(jìn)行T 檢驗(yàn)（P＜0.05），得到組間顯著差異的蛋白質(zhì)。利用Gene Ontology（GO）數(shù)據(jù)庫（www.geneontology.org）對(duì)鑒定到的蛋白質(zhì)進(jìn)行功能注釋和富集分析，GO 分為分子功能、細(xì)胞組分和生物過程［10］。利用真核生物亞細(xì)胞定位軟件WoLF PSORT 對(duì)差異蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)。利用Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）數(shù)據(jù)庫（www.genome.jp/kegg/）確定差異蛋白參與的代謝通路［11］。

2 結(jié)果與分析

2.1 差異蛋白的鑒定

自然狀態(tài)下未抽吸對(duì)照組、抽吸賦甜卷煙以及抽吸同規(guī)格未賦甜卷煙3 個(gè)組的唾液，每組6 個(gè)樣本，共計(jì)18個(gè)樣本。通過數(shù)據(jù)庫檢索對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定，從表1可見，共獲得764 583個(gè)二級(jí)譜圖，鑒定肽段匹配得到的譜圖共29 481個(gè)，總肽段數(shù)有8 440個(gè)，特異肽段數(shù)有1 033個(gè)，蛋白質(zhì)總數(shù)2 099個(gè)。從KB、SK-A和SK-B組中均鑒定到了2 042個(gè)蛋白質(zhì)組分。

表1 唾液樣品蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果Tab.1 Protein identification results from saliva samples

根據(jù)差異倍數(shù)＞1.2 或＜0.83 且 P＜0.05 為標(biāo)準(zhǔn)篩選差異蛋白（顯著上調(diào)表達(dá)蛋白和顯著下調(diào)表達(dá)蛋白）。如圖1a所示，與自然狀態(tài)下對(duì)照組唾液中的蛋白相比，賦甜卷煙組中鑒定到的差異蛋白數(shù)為5個(gè)，其中，上調(diào)表達(dá)蛋白4個(gè)，下調(diào)表達(dá)蛋白1個(gè)；與對(duì)照組相比，未賦甜卷煙組中鑒定到的差異蛋白數(shù)為107個(gè)，其中，上調(diào)表達(dá)蛋白102 個(gè)，下調(diào)表達(dá)蛋白5 個(gè)?？梢姡x甜卷煙組唾液中鑒定到的差異蛋白數(shù)量明顯減少。同時(shí)對(duì)鑒定到的差異蛋白進(jìn)行比較，得到1個(gè)在兩組中同時(shí)上調(diào)表達(dá)的蛋白，1個(gè)共同下調(diào)表達(dá)的蛋白以及在各組中特異表達(dá)的蛋白。另外，分析未賦甜卷煙組與賦甜卷煙組差異蛋白，共鑒定到59個(gè)，其中，上調(diào)表達(dá)蛋白55個(gè)，下調(diào)表達(dá)蛋白4個(gè)（圖1b），說明賦甜卷煙組和未賦甜卷煙組唾液蛋白存在較大差異。以上結(jié)果表明口腔受到未賦甜卷煙煙氣的刺激后，引起較多蛋白的快速表達(dá)以響應(yīng)口腔環(huán)境的變化；而抽吸賦甜卷煙后，甜味的攝入減弱了人體對(duì)煙氣的刺激性感受，從而唾液中蛋白質(zhì)組的變化較小，人體的感官感受更加舒適。

圖1 未賦甜卷煙組和賦甜卷煙組唾液差異蛋白比較Fig.1 Differential proteins in saliva samples between groups smoking cigarettes with unsweetened tipping paper and sweetened tipping paper

2.2 差異蛋白的富集分析

2.2.1 GO 富集分析以及亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)

將賦甜卷煙組和未賦甜卷煙組中鑒定的差異蛋白進(jìn)行GO 富集分析，主要包括生物過程、分子功能和細(xì)胞組分方面。SK-B vs SK-A 中59 個(gè)差異蛋白的GO 富集分析結(jié)果（圖2）顯示，在細(xì)胞組分方面這些差異蛋白主要位于內(nèi)膜系統(tǒng)、膜封閉腔、細(xì)胞器腔、非膜界細(xì)胞器以及胞外域等組分中。在分子功能方面主要與酸類物質(zhì)、離子等的結(jié)合相關(guān)，分為金屬離子結(jié)合、DNA 結(jié)合、鋅離子結(jié)合、羧酸結(jié)合、有機(jī)酸結(jié)合以及微管結(jié)合等方面。在生物學(xué)過程方面主要與免疫、物質(zhì)運(yùn)輸以及響應(yīng)外界刺激相關(guān)，分為免疫系統(tǒng)過程、免疫響應(yīng)、正調(diào)節(jié)細(xì)胞過程、囊泡介導(dǎo)的運(yùn)輸、細(xì)胞對(duì)化學(xué)刺激的響應(yīng)以及細(xì)胞分泌等方面。賦甜卷煙組和未賦甜卷煙組中鑒定的差異蛋白在生物過程、分子功能和細(xì)胞組分方面均存在較大的差異，表明在接裝紙上施加甜味劑能夠顯著改善人體抽吸卷煙時(shí)唾液中應(yīng)激蛋白的表達(dá)及組成。

圖2 未賦甜卷煙組和賦甜卷煙組差異蛋白的GO富集分析Fig.2 GO enrichment analysis of differential proteins in groups smoking cigarettes with unsweetened tipping paper and sweetened tipping paper

亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，未賦甜卷煙組與賦甜卷煙組中59 個(gè)差異蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)（48%）、胞外（19%）、線粒體（18%）、核（13%）以及細(xì)胞骨架（3%）部位（圖3）。

圖3 未賦甜卷煙組和賦甜卷煙組差異蛋白的亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)結(jié)果Fig.3 Predicted subcellular localizations of differential proteins in groups smoking cigarettes with unsweetened tipping paper and sweetened tipping paper

2.2.2 KEGG 富集分析

分別將賦甜卷煙組和未賦甜卷煙組鑒定的59個(gè)差異蛋白進(jìn)行KEGG（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，京都基因和基因組數(shù)據(jù)庫）代謝通路分析。如圖4 所示，這些差異蛋白主要參與代謝途徑、次生代謝物的生物合成、不同環(huán)境下的微生物代謝、藥物代謝其他酶、松弛素信號(hào)通路、嘌呤代謝以及趨化因子信號(hào)通路等代謝通路。KEGG代謝通路分析結(jié)果表明，未賦甜卷煙組與賦甜卷煙組唾液中鑒定的差異蛋白參與到不同代謝通路中。

圖4 未賦甜卷煙組和賦甜卷煙組差異蛋白的KEGG 通路分析Fig.4 KEGG pathway analysis of differential proteins in groups smoking cigarettes with unsweetened tipping paper and sweetened tipping paper

3 討論

利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定賦甜卷煙組唾液和未賦甜卷煙組唾液中的差異表達(dá)蛋白，有助于從分子生物學(xué)的角度解析接裝紙賦甜技術(shù)對(duì)消費(fèi)者抽吸卷煙后感官的影響。本研究中通過對(duì)抽吸賦甜卷煙唾液和抽吸同規(guī)格未賦甜卷煙唾液中的差異蛋白進(jìn)行鑒定和分析，結(jié)合GO 富集分析和功能注釋，進(jìn)一步解析賦甜卷煙對(duì)人體的影響。從生物學(xué)過程的角度，在抽吸未賦甜卷煙和賦甜卷煙消費(fèi)者唾液中共鑒定到與刺激響應(yīng)相關(guān)的差異蛋白9個(gè)，差異蛋白的詳細(xì)信息如表2所示。這些蛋白所表現(xiàn)的刺激響應(yīng)類別主要有刺激響應(yīng)、非生物刺激響應(yīng)、外部刺激響應(yīng)、細(xì)胞刺激響應(yīng)和對(duì)外部刺激響應(yīng)的調(diào)節(jié)等。這些刺激響應(yīng)蛋白在未賦甜卷煙組唾液中顯著上調(diào)表達(dá)，在賦甜卷煙組唾液中表達(dá)量顯著降低，表明在接裝紙上施加甜味劑能夠顯著減少抽吸卷煙時(shí)煙氣對(duì)口腔的刺激。這種生物功能上的刺激既包括卷煙感官評(píng)價(jià)方法中的煙氣刺激性，也包括煙氣對(duì)人體產(chǎn)生的輕松感、滿足感以及舒適感。研究表明，甜味感知取決于舌頭上的兩個(gè)G 蛋白偶聯(lián)亞基受體T1R2和T1R3［12-13］，人通過攝入富含甜味劑的飲食刺激這些受體，就會(huì)產(chǎn)生愉悅感［14-15］。同理，消費(fèi)者在抽吸接裝紙賦甜卷煙時(shí)，口腔可直接感受甜味劑帶來的甜感，弱化因煙氣刺激、干燥以及收斂所帶來的口腔不適，從而感覺更加愉悅和舒適。這種分子生物學(xué)上的差異也從客觀上佐證了卷煙接裝紙賦甜有利于提升卷煙的感官品質(zhì)。

從分子功能的角度分析，與抽吸賦甜卷煙相比，抽吸未賦甜卷煙組唾液中的3 個(gè)上調(diào)表達(dá)蛋白（O00602、P05109和P06702）表現(xiàn)出與有機(jī)酸結(jié)合的特性（圖2），其中，P05109和P06702與刺激響應(yīng)相關(guān)（表2）。有機(jī)酸與卷煙吸味品質(zhì)密切相關(guān)，煙氣中的有機(jī)酸一方面能夠產(chǎn)生酸香香韻，另一方面與卷煙煙氣的口感特征如收斂感和干燥感密切相關(guān)［16］。在乳清蛋白飲料中，pH過低會(huì)引起口腔明顯的收斂感［17］，這種收斂感的產(chǎn)生主要是酸性物質(zhì)與唾液蛋白形成不溶沉淀物，導(dǎo)致口腔潤滑性降低［18］。未賦甜卷煙組和賦甜卷煙組差異蛋白與有機(jī)酸結(jié)合的同時(shí)也能響應(yīng)刺激，表明煙氣中的有機(jī)酸可能會(huì)導(dǎo)致口腔的收斂感和刺激感增強(qiáng)，而這2個(gè)差異蛋白在未賦甜卷煙組唾液中顯著上調(diào)表達(dá)，在賦甜卷煙組唾液中表達(dá)顯著降低，表明接裝紙上施加的甜味劑能夠明顯減少由有機(jī)酸引起的口腔刺激。

從KEGG 通路角度，抽吸未賦甜卷煙組唾液中的 5 個(gè) 上 調(diào) 表 達(dá) 蛋 白（P06733、A0A024R7R1、A0A140VK56、B4DFP1 和 V9HVZ4）參與不同環(huán)境下的微生物代謝通路（表2，表3）。而賦甜卷煙因在接裝紙中施加了甜味劑，也有可能影響口腔微生物的代謝。目前已有研究報(bào)道煙氣對(duì)口腔微生物環(huán)境的影響［19-20］，但對(duì)于接裝紙中甜味劑的施加是否能夠改善微生物種群結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步研究。

表3 不同環(huán)境下的微生物代謝通路相關(guān)差異蛋白的鑒定和分析Tab.3 Identification and analysis of differential proteins in the pathway of microbial metabolism in diverse environments

賦甜卷煙組和未賦甜卷煙組的差異蛋白中，A8MX94 屬于谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（GSTP1），定位于細(xì)胞質(zhì)，具有谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶活性，參與谷胱甘肽代謝過程（表4）。有報(bào)道表明，在急性社會(huì)心理壓力后口腔唾液中的谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)明顯升高［21-22］，GSTP1在未賦甜卷煙組唾液表達(dá)顯著升高，在賦甜卷煙組表達(dá)降低，說明抽吸賦甜接裝紙卷煙在舒緩情緒、減少心理壓力方面效果顯著。另外，在這些差異蛋白中，P05109、P06702 和 P80511 分別是S100-A8、S100-A9 和 S100-A12 蛋白（表 2），屬于S100家族的Ca2+結(jié)合蛋白，在調(diào)節(jié)炎癥和免疫反應(yīng)中起重要作用［23］，有越來越多的研究［24-26］表明社會(huì)心理因素會(huì)影響S100 蛋白的水平。一項(xiàng)臨床前小鼠模型的研究發(fā)現(xiàn)，腎上腺素、去甲腎上腺素、皮質(zhì)醇和血清素等應(yīng)激激素可誘導(dǎo) S100-A8 和S100-A9 的快速釋放［24］；另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者的焦慮、抑郁和社會(huì)幸福感得分與唾液S100-A8和S100-A9水平顯著負(fù)相關(guān)［25］。未賦甜卷煙組唾液S100-A8、S100-A9 和 S100-A12 的表達(dá)水平顯著高于賦甜卷煙組，同樣也說明卷煙接裝紙中甜味劑的釋放對(duì)吸煙者的情緒能夠起到較好的舒緩作用，使之處于一種輕松的狀態(tài)，從而有效提升吸煙者的愉悅感。

表2 與未賦甜卷煙組和賦甜卷煙組刺激響應(yīng)相關(guān)的差異蛋白Tab.2 Differential proteins associated with stimulus response in groups smoking cigarettes with unsweetened tipping paper and sweetened tipping paper

表4 未賦甜卷煙組和賦甜卷煙組差異蛋白A8MX94 的鑒定和分析Tab.4 Identification and analysis of differential protein A8MX94 in groups smoking cigarettes with unsweetened tipping paper and sweetened tipping paper

4 結(jié)論

①通過TMT標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，在未賦甜卷煙組和賦甜卷煙組中鑒定的差異蛋白多達(dá)59個(gè)，在GO條目中刺激響應(yīng)相關(guān)的生物過程以及與有機(jī)酸結(jié)合的分子功能等顯著富集；②在抽吸未賦甜卷煙過程中，煙氣中有機(jī)酸類等物質(zhì)對(duì)口腔產(chǎn)生刺激，引起與有機(jī)酸結(jié)合相關(guān)蛋白的顯著上調(diào)表達(dá)，表明其對(duì)口腔的刺激較為明顯；③在抽吸接裝紙賦甜卷煙時(shí)，口腔可直接感受甜味劑帶來的甜感，弱化因煙氣刺激、干燥以及收斂所帶來的口腔不適，因此該組唾液中差異蛋白的數(shù)量顯著減少，刺激響應(yīng)相關(guān)蛋白的表達(dá)水平顯著降低，從而感覺更加愉悅和舒適，從分子生物學(xué)角度客觀反映了接裝紙賦甜技術(shù)有利于提升卷煙感官品質(zhì)。