高仕楠

（永勝縣動物疫病預防控制中心，云南永勝 674200）

高致病性禽流感（highly pathogenic avian influenza，HPAI）是由正黏液病毒科A 型流感病毒屬流感病毒感染導致的，對家禽養(yǎng)殖威脅較大。該病會在禽類中迅速傳播，并造成大量死亡，還會對當?shù)厥称钒踩颓蓊愷B(yǎng)殖安全產(chǎn)生威脅。而科學的防控離不開實驗室的相關檢測研究，通過家禽中分離出病毒的鑒別，判定禽流感病毒的類型，并制定針對性的防范措施，需要加強獸醫(yī)實驗室的相關研究，加大研究量的同以保障基礎的安全工作，確保在轄區(qū)內(nèi)所有的相關感染抗體檢測工作更加順利。由于高致病性禽流感是人畜共患病，在檢測操作過程中要做好防護。

1 常見風險

1.1 防護風險 按照獸醫(yī)實驗室的等級和類別不同所執(zhí)行的安全方面，防護也存在一定的差異，一般在生物安全二級的獸醫(yī)實驗室開展工作時，所有核酸檢測均要在生物安全柜內(nèi)進行，且不進行相應的分離培養(yǎng)等超出安全等級范圍的各類實驗操作活動。而這一系列實驗操作都需要做好個人防護，如果個人防護達不到實際要求或出現(xiàn)質(zhì)量風險，很容易導致各類含病毒液體對操作人員的侵害，因為這一類病毒大多數(shù)經(jīng)呼吸道感染，因此實驗操作個人防護方面對飛沫和氣溶膠防護需要高度關注。在具體操作過程中要穿相應的專業(yè)工作服或防護服，佩戴口罩和手套以及護目鏡，如果實驗室條件較好或所進行的實驗等級較高，還需要佩戴防化學飛濺面罩。全過程一定要正確穿戴相應的防護用具以及穿脫過程要符合相應規(guī)范，所有用過的器具要放入特定的垃圾袋進行高壓滅菌處理才可以銷毀。如果期間存在執(zhí)行規(guī)章制度嚴格，或工作疏忽，很容易導致最終工作質(zhì)量出現(xiàn)問題，嚴重時會導致疫病傳播，威脅實驗安全和廣大受眾身體的安全，這是最為常見的一類實驗室風險之一。

1.2 樣本風險 所有用于研究的樣本都需要進行接收處理和相應的儲存轉(zhuǎn)運，如果安全防范不嚴格，出現(xiàn)密封包裝不夠嚴密，液體滲漏或摻雜其他禽類的羽毛，很容易污染空氣，帶有病毒的粉塵容易導致感染和傳播。這也是實驗室工作過程中最為常見的風險之一，因為整個樣本接收到運輸需要經(jīng)過包裝等各類處理，如果其接收轉(zhuǎn)運沒有嚴格執(zhí)行相應的安全標準，容易導致較多風險的發(fā)生，甚至成為一定的安全隱患，所以大多數(shù)樣本需要經(jīng)過專門的傳遞窗，運送到樣本保存室，在進行樣本存儲過程中也容易導致相應的風險。必須嚴格執(zhí)行實驗室操作規(guī)范。

1.3 血凝及血凝抑制試驗風險 在高致病性禽流感病毒的檢驗過程中，如果血清樣本中含有相應的病毒，檢驗結果呈現(xiàn)為陽性，如果操作不當很容易導致血清外溢，污染器械和環(huán)境，嚴重時還會對其他標本以及工作人員構成威脅。這一現(xiàn)象具備較強的普遍性，因為在檢測陽性樣本時，如果操作不當，很容易使樣本污染產(chǎn)生氣溶膠對操作臺面和各類環(huán)境產(chǎn)生污染，特別是在血清離心過程中，如果不能保障所有病毒在試管中被凝集就容易導致樣本產(chǎn)生污染。在所有實驗結束后，需要對環(huán)境等方面嚴格消毒，否則，很容易導致相應的環(huán)境污染擴大，進而引發(fā)疫情。這是實驗過程中最常見的影響因素，嚴重影響實驗的質(zhì)量和準確性，另外，核酸實驗也會容易因為各類實驗環(huán)節(jié)的不規(guī)范性而產(chǎn)生一定的風險，需要充分認識。

1.4 核酸檢測風險 根據(jù)核酸檢測所采取方法不同，在具體操作過程中，所面臨的風險也存在一定差異.目前應用廣泛的PCR 檢測還需要進行樣本處理，如果對樣本處理不規(guī)范，容易出現(xiàn)泄漏，進而導致各類問題的發(fā)生。在整個操作流程如果對陽性樣品操作不當，就容易出現(xiàn)外溢現(xiàn)象，或加入陽性核酸樣品操作不當，容易導致氣溶膠出現(xiàn)，進而污染實驗室的環(huán)境，甚至會導致其他樣本出現(xiàn)假陽性。在運輸過程中，如果試管密封不夠緊密，或質(zhì)量不好，容易導致液體的泄漏，對儀器的產(chǎn)生污染。同時，還需要對各類醫(yī)療廢物進行處理并進行實驗室的終末消毒，因此在具體操作過程中，尤其要注重以上環(huán)節(jié)，避免出現(xiàn)操作不規(guī)范，或沒有嚴格按照指導操作的現(xiàn)象，減少環(huán)境或樣本污染。

2 預防策略

2.1 強化個人防護 個人防護是在實驗室安全之中最為核心的一部分內(nèi)容，檢測人員自身保障安全才可以保證實驗活動的精準開展，同時也可以讓其后續(xù)的各類實驗操作更加精準，有效避免出現(xiàn)各類風險問題?，F(xiàn)階段開展實習工作時，要嚴格執(zhí)行手衛(wèi)生的相關消毒等各類制度，同時做好防護服的穿脫等相應培訓，在執(zhí)行特殊實驗活動過程中，特別是應對高度疑似高致病性禽流感的陽性樣本時，要注重對各類一次性防護服緊密性等方面的檢查，佩戴防飛濺面罩。所有進行操作之后，脫下的各類防護用品要集中放入垃圾袋進行封口，對其滅菌處理后再度進行銷毀。防護服中的工作服可以在紫外線燈下消毒，對實驗室環(huán)境要及時檢查，定期檢查其各類儲備的消毒試劑以及急救設施是否在有效期內(nèi)，確保其相應的安全檢查等工作符合實際要求。

有效的個人防護是保障后續(xù)所有操作安全的關鍵性前提，還需要對其重要性充分認識，并根據(jù)現(xiàn)有實驗室的等級加以貫徹落實，按照相關指導意見在具體應用時做出實驗室特點的傾向性調(diào)整，才能夠取得更滿意的效果。

2.2 樣本接收處理 樣本接收到轉(zhuǎn)運處理的每一個環(huán)節(jié)都需要進行針對性進行質(zhì)量和安全等方面的管控，這些工作很重要，在具體開展工作時，從樣本的接收到轉(zhuǎn)運處理的每一個過程都需要嚴格地按照相關原則要求，接收時需要放置在固定的樣本接收室，對其進行相應處理。樣本接收式根據(jù)每一實驗室的特點不同，大多數(shù)都要設定在固定的位置，進行樣本接收后，通過專門的傳遞窗口傳遞到樣品的保存室。這一傳遞窗口需要嚴格的根據(jù)相應使用需求進行紫外線消毒殺菌而進行樣本制備的過程中，必須要在生物安全柜內(nèi)進行操作，并對其進行定期的滅菌等處理進行檢測后做好詳細記錄，然后將樣本放置于4 ℃的冰箱內(nèi)保存留樣。如果是用來留樣的樣本，也要對容器進行密封，擰緊之后放置在零下20 ℃以下的冰箱內(nèi)加以保存，操作所有樣本結束之后還需要用含氯消毒劑對安全柜和周圍環(huán)境進行擦拭，這樣可以保證其操作的安全性，避免出現(xiàn)質(zhì)量方面的隱患。

2.3 血凝及血凝抑制試驗處理 由于血凝和血凝抑制試驗全過程會涉及樣本的提取等相關操作，因此在操作過程中，要確保稀釋樣本時移液器操作力度適當，避免由于操作不當而導致的氣溶膠生成。所有的操作要確保離心管在實驗結束之后管蓋擰緊閉合，才能避免對周圍環(huán)境污；進行相應實驗之后，還需要使用消毒液擦拭臺面和地面，而常用的移液器則需要放置在紫外線燈下進行照射消毒。對一些消耗性的各類材料，比如96 孔U 型反應板等耗材，都需要在實驗之后立刻廢棄裝入到黃色垃圾袋進行高壓滅菌消毒，經(jīng)過消毒后才可以帶出實驗室，進行后續(xù)處理。全過程要正確掌握高壓消毒的方法，處理后才可以開展后續(xù)的操作，避免出現(xiàn)質(zhì)量方面的風險。由于其操作具備較強的特殊性和專業(yè)性的規(guī)范要求，因此還需要對相應的具體方法充分認識，才可以開展后續(xù)的實際安全管理等相關工作，避免各類風險的出現(xiàn)。

2.4 核酸檢測管理 核酸檢測是目前實驗室最為常用的一類檢測手段，在具體操作過程中，所有樣本在漩渦震蕩2～3 min，期間要著重觀察有無管蓋松動的現(xiàn)象，避免對樣本或環(huán)境產(chǎn)生污染。要注重對操作時每一個環(huán)節(jié)的管控，開蓋進行下一步操作之前需要進行安全防護等方面的檢查，像高速冷凍離心機還需要檢查其配平的相關情況，確保安全蓋蓋緊，研磨組織樣本則需要在生物安全柜內(nèi)進行相應的操作。所有試管必須要雙手開關，盡可能減少手套與樣本的接觸風險。對相應的器械也需要進行檢查，按期對器械進行表面的消毒，離心機在操作之前還需要進行配平。所有運行等相關操作要嚴格按照標準規(guī)范而開展工作，避免出現(xiàn)工作方面的問題或者是操作方面的不足。實驗室內(nèi)常規(guī)消毒，以含氯消毒劑為主，室內(nèi)消完毒之后還需要由內(nèi)向外再度進行一次噴灑，實驗間隙可以選擇紫外線燈為主的消毒方法，通過相應的綜合性管理之后，最終的安全性可以得到提高，操作的規(guī)范性也可以得到優(yōu)化，極大程度上避免各類風險出現(xiàn)。

3 結束語

目前對高致病性禽流感，在實驗室進行相應操作的過程中仍然面臨著個人防控等方面的風險，因此還需要強化個人防護，注重樣本接收處理以及血凝抑制實驗等相關處理，強化核酸檢測的管理。