秦志清 梁 萍 林建斌 高蘇蕊 邱曼麗 李學(xué)貴 劉銀華 賴銘勇 吳 斌

(福建省淡水水產(chǎn)研究所，福州350002)

黑脊倒刺鲃(Spinibarbuscaldwelli)，又稱光倒刺鲃，屬鯉形目(Cypriniformes)，鯉科(Cyprinidae)，鲃亞科(Barbinae)，倒刺鲃屬(Spinibarbus)，主要分布于錢塘江、閩江、珠江等，其肉質(zhì)鮮美，且有一定的藥用價值，為重要的淡水經(jīng)濟魚類[1-2]。該魚生長速度較快、善跳、喜歡集群、不耐低氧、非?？謶譁喫⑾矚g陰涼環(huán)境，是一種淡水中下層的廣溫性魚類[3]。目前黑脊倒刺鲃已成為池塘和水庫網(wǎng)箱養(yǎng)殖的優(yōu)質(zhì)品種，受到了廣大養(yǎng)殖戶的青睞。

蛋白質(zhì)作為魚類生長發(fā)育過程中必需的營養(yǎng)物質(zhì)，不僅用于魚體組織的更新和修復(fù)，而且是構(gòu)成機體內(nèi)各種激素和酶類的重要成分，為魚類的生長和代謝提供能量，在其生命活動中發(fā)揮著不可替代的作用[4-5]。同時蛋白質(zhì)也是影響飼料成本的一個關(guān)鍵因素，飼料蛋白質(zhì)水平過高，會增加魚類消化系統(tǒng)負擔(dān)，降低其對營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，同時增加飼料成本，破壞養(yǎng)殖水體環(huán)境；飼料蛋白質(zhì)水平過低，則會導(dǎo)致魚類營養(yǎng)不足、生長緩慢，影響經(jīng)濟效益[6]。因此，研究養(yǎng)殖魚類對蛋白質(zhì)的需要量既有利于掌握魚類對飼料蛋白質(zhì)的吸收狀況，也是設(shè)計成本合理、蛋白質(zhì)均衡飼料配方的重要環(huán)節(jié)[7]。黑脊倒刺鲃作為我國特有的淡水經(jīng)濟魚類，目前還沒有該魚的全價配合飼料，有關(guān)黑脊倒刺鲃營養(yǎng)方面的研究，主要見于對其肌肉[8-9]、魚皮和魚鱗[10]營養(yǎng)成分的研究，而對于其主要營養(yǎng)參數(shù)的研究鮮有報道。因此，本試驗應(yīng)用蛋白質(zhì)水平梯度法設(shè)計6組等能飼料，探討飼料中不同蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚生長性能、消化酶活性、血清生化指標(biāo)、蛋白質(zhì)代謝關(guān)鍵酶活性及腸道形態(tài)的影響，以期明確黑脊倒刺鲃幼魚飼料中蛋白質(zhì)的適宜需要量，旨在為確定黑脊倒刺鲃幼魚的蛋白質(zhì)營養(yǎng)標(biāo)準和開發(fā)低成本、高效益的飼料配方提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗用魚

試驗用黑脊倒刺鲃幼魚為福建省淡水水產(chǎn)研究所榕橋中試基地(黑脊倒刺鲃良種場)自繁培育而成，平均體重為(8.4±0.1) g。

1.2 試驗設(shè)計和試驗飼料

選擇黑脊倒刺鲃幼魚450尾，隨機分為6組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)25尾。以進口紅魚粉和豆粕為主要蛋白質(zhì)源，配制蛋白質(zhì)水平分別為29.83%、33.96%、38.52%、42.43%、46.33%、50.67%(干物質(zhì)基礎(chǔ))的6種等能飼料，試驗飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表1項目Items飼料蛋白質(zhì)水平 Dietary protein levels/%29.8333.9638.5242.4346.3350.67磷酸二氫鈣 Ca(H2PO4)21.001.001.001.001.001.00合計 Total100.00100.00100.00100.00100.00100.00營養(yǎng)水平 Nutrient levels2)粗灰分 Ash8.739.6211.0812.4113.7815.29粗蛋白質(zhì) CP29.8333.9638.5242.4346.3350.67粗脂肪 EE5.585.766.046.857.377.59總能 GE/(kJ/g)15.3015.2615.2315.2015.1515.10

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗在福建省淡水水產(chǎn)研究所榕橋中試基地循環(huán)水系統(tǒng)中進行。停食24 h后，從苗種培育池挑選規(guī)格基本一致、健康無傷的黑脊倒刺鲃幼魚，放入室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng)中(試驗桶直徑1.0 m，水深0.8 m)，每桶25尾。試驗分6個組，每組3個重復(fù)。試驗用水為曝氣后的自來水，試驗期間水溫25～30 ℃，溶解氧濃度≥5.0 mg/L，pH 6.9～7.2。循環(huán)效率為2 h/全循環(huán)，每隔1星期排污1次。投餌采取飽食投喂法，每天2次(08:00—09:00，13:00—14:00)，以30 min內(nèi)攝食完為準。試驗期56 d，從2021年7月16日至2021年9月9日。

1.4 樣品采集和指標(biāo)測定

1.4.1 生長指標(biāo)

在養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，禁飼24 h，計數(shù)各桶黑脊倒刺鲃數(shù)量并稱量總重。統(tǒng)計5個生長指標(biāo)：增重率(weight gain rate，WGR)、特定生長率(specific growth rate，SGR)、飼料系數(shù)(feed conversion ratio，F(xiàn)CR)、蛋白質(zhì)效率(protein efficiency ratio，PER，%)、成活率(survival rate，SR)；4個形態(tài)學(xué)指標(biāo)：腸長指數(shù)(intestinal length index，ILI)、臟體指數(shù)(viscera-somatic index，VSI)、肝體指數(shù)(hepato-somatic index，HSI)、肥滿度(condition factor，CF)。相關(guān)指標(biāo)計算方法如下：

WGR(%)=100×(終末體重-初始
體重)/初始體重；
SGR(%/d)=100×(ln終末體重-ln初始體重)/
試驗天數(shù)；
FCR=攝食量/(終末體重-初始體重)；
PER(%)=(終末體重-初始體重)/(攝食量×
飼料粗蛋白質(zhì)含量)；
SR(%)=100×終末尾數(shù)/初始尾數(shù)；
ILI(%)=100×腸長度/體長度；
VSI(%)=100×內(nèi)臟重/體重；
HSI(%)=100×肝胰臟重/體重；
CF(%)=100×體重/體長3。

1.4.2 血清生化指標(biāo)

飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，取禁飼24 h后的試驗魚，尾靜脈采血，將血樣于室溫靜置2 h，3 000 r/min離心10 min，取上清液分裝，并于-80 ℃超低溫冰箱(MDF-193，Panasonic公司，日本)保存。采用全自動生化分析儀(Chemray 800，深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司)測定血清總蛋白(TP)、尿素氮(UN)、氨(ammonia)含量和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ATL)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(ASL)活性。

1.4.3 腸道消化酶和肝胰臟轉(zhuǎn)氨酶活性測定

將試驗魚解剖，取出內(nèi)臟，置于操作臺上分別分離出肝胰臟和腸道，剔除肝胰臟表面的脂肪塊和腸道內(nèi)容物，用濾紙吸干水分后稱重，加入10倍體積的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)，冰水浴條件下，機械勻漿，制備成10%的勻漿液，3 000 r/min離心10 min，取上清液進行測定。試驗魚腸道和肝胰臟的ɑ-淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LPS)和胰蛋白酶(TPS)活性，以及肝胰臟的ATL和ASL活性均采用試劑盒(南京建成生物工程研究所)分別測定，具體方法參照試劑盒使用說明書。

1.4.4 腸道組織切片固定和測定

腸道均取試驗魚的中腸，經(jīng)4%多聚甲醛固定后，進行修剪、脫水、包埋、切片、染色及封片。用顯微鏡(Eclipse Ci-L，Nikon公司，日本)進行圖像采集，成像完成后使用Image-Pro Plus 6.0分析軟件，以毫米作為標(biāo)準單位，于40倍視野下，分別測量每張切片中5處皺襞高度、肌層厚度；100倍視野下，分別測量中腸上皮細胞高度和杯狀細胞數(shù)量。

知識經(jīng)濟時代的來臨以及20世紀80年代非理性主義管理思潮的出現(xiàn)和興起，為教育管理注入了新鮮的血液和鮮活的動力。他們提倡進行管理革命，即以“人”為中心“發(fā)掘出一種新的以活生生的人為重點的帶有感情色彩的管理模式”[2]。從此，人性化的管理理念逐漸滲透到教育領(lǐng)域中來，教育管理者開始關(guān)注和追求人性的回歸，開始意識到堅持“以人為本”的管理理念和管理模式才能成功地促進人性的發(fā)展，有效地提高教育質(zhì)量，體現(xiàn)教育的終極關(guān)懷。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)運用SPSS 21.0軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，若差異顯著則進行Duncan氏法多重比較檢驗。結(jié)果以平均值±標(biāo)準差(mean±SD)表示，P<0.05表示差異顯著。使用Excel 2019軟件繪圖。

2 結(jié) 果

2.1 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚生長性能的影響

飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃生長性能的影響見表2。隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加，終末體重、WGR和SGR呈先上升后下降的趨勢，在46.33%蛋白質(zhì)水平組達到最高值；其中，46.33%蛋白質(zhì)水平組終末體重、WGR和SGR顯著高于29.83%、33.96%、38.52%和50.67%蛋白質(zhì)水平組(P<0.05)，但與42.43%蛋白質(zhì)水平組無顯著差異(P>0.05)。隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加，F(xiàn)CR呈先下降后上升的趨勢，在42.43%蛋白質(zhì)水平組達到最低值；其中，42.43%、46.33%和50.67%蛋白質(zhì)水平組FCR顯著低于29.83%、33.96%和38.52%蛋白質(zhì)水平組(P<0.05)。隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加，PER呈上升后下降的趨勢，在42.43%蛋白質(zhì)水平組達到最高值；其中，42.43%蛋白質(zhì)水平組PER顯著高于其他各組(P<0.05)。各組試驗魚的SR均為100%。

表2 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚生長性能的影響

在形體指標(biāo)方面，29.83%蛋白質(zhì)水平組ILI均顯著低其他各組(P<0.05)，其他各組之間無顯著差異(P>0.05)。各組之間VSI和HIS無顯著差異(P>0.05)。隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加，CF呈上升后下降的趨勢，在46.33%蛋白質(zhì)水平組達最高值；其中，38.52%、42.43%、46.33%和50.67%蛋白質(zhì)水平組CF顯著高于29.83%和33.96%蛋白質(zhì)水平組(P<0.05)。

由圖1和圖2可見，通過對SGR和FCR與飼料蛋白質(zhì)水平擬合折線模型進行回歸分析，得到黑脊倒刺鲃幼魚對飼料蛋白質(zhì)的適宜需要量分別為42.10%和42.71%。

圖1 特定生長率與飼料蛋白質(zhì)水平的回歸分析

圖2 飼料系數(shù)與飼料蛋白質(zhì)水平的回歸分析

2.2 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚消化酶活性的影響

飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚消化酶的影響見表3。隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加，肝胰臟和腸道TPS活性呈上升后下降的趨勢，且均在42.43%蛋白質(zhì)水平組達到最高值；其中，42.43%蛋白質(zhì)水平組肝胰臟TPS活性顯著高于其他各組(P<0.05)，38.52%、42.43%、46.33%和50.67%蛋白質(zhì)水平組腸道TPS活性顯著高于29.83%和33.96%蛋白質(zhì)水平組(P<0.05)。隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加，肝胰臟和腸道LPS活性呈上升趨勢；其中，50.67%蛋白質(zhì)水平組肝胰臟LPS活性顯著高于29.83%和33.96%蛋白質(zhì)水平組(P<0.05)，46.33%和50.67%蛋白質(zhì)水平組腸道LPS活性顯著高于29.83%蛋白質(zhì)水平組(P<0.05)。隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加，肝胰臟和腸道AMS活性呈下降趨勢；其中，46.33%和50.67%蛋白質(zhì)水平組肝胰臟AMS活性顯著低于29.83%、33.96%和38.52%蛋白質(zhì)水平組(P<0.05)，46.33%和50.67%蛋白質(zhì)水平組腸道AMS活性顯著低于其他各組(P<0.05)。

表3 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚消化酶活性的影響

2.3 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚血清生化指標(biāo)的影響

飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚血清生化指標(biāo)的影響見表4。隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加，血清UN、TP和氨含量呈上升趨勢；其中，42.43%、46.33%和50.67%蛋白質(zhì)水平組血清UN和氨含量顯著高于29.83%和33.96%蛋白質(zhì)水平組(P<0.05)，42.43%、46.33%和50.67%蛋白質(zhì)水平組血清TP含量顯著高于29.83%、33.96%和38.52%蛋白質(zhì)水平組(P<0.05)。

表4 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚血清生化指標(biāo)的影響

2.4 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚蛋白質(zhì)代謝關(guān)鍵酶活性的影響

飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚蛋白質(zhì)代謝關(guān)鍵酶活性的影響見表5。隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加，血清ALT和AST活性呈先下降后上升的趨勢；其中，50.67%蛋白質(zhì)水平組血清ALT和AST活性顯著高于29.83%、33.96%和38.52%蛋白質(zhì)水平組(P<0.05)。隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加，肝胰臟ALT和AST活性呈先下降后上升再下降的趨勢，且均在46.33%蛋白質(zhì)水平組達到最高值；其中，46.33%蛋白質(zhì)水平組肝胰臟ALT活性顯著高于50.67%蛋白質(zhì)水平組(P<0.05)，46.33%蛋白質(zhì)水平組肝胰臟AST活性顯著高于33.96%和38.52%蛋白質(zhì)水平組(P<0.05)。

表5 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚蛋白質(zhì)代謝關(guān)鍵酶活性的影響

2.5 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚腸道形態(tài)的影響

表6 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚腸道形態(tài)的影響

A、B、C、D、E、F分別表示29.83%、33.96%、38.52%、42.43%、46.33%和50.67%蛋白質(zhì)水平組。FH：皺襞高度；MT：肌層厚度；EH：上皮細胞高度；GC：杯狀細胞。

3 討 論

3.1 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚生長性能的影響

水生動物的生長本質(zhì)上是體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，外在體現(xiàn)為體長和體重的增加，內(nèi)在表現(xiàn)為組織體積重量的增加、細胞數(shù)量的增多以及營養(yǎng)物質(zhì)和能量的積累[11]。飼料蛋白質(zhì)水平是決定水生動物生長的關(guān)鍵因素，其水平過低或過高均會對水生動物的生長產(chǎn)生不利影響。飼料蛋白質(zhì)水平過低難以滿足魚體的最低生長需求，導(dǎo)致生長緩慢；而飼料蛋白質(zhì)水平過高又會增加魚體自身的代謝負擔(dān)，導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)利用率下降，飼料成本增加，甚至?xí)鸢敝卸綶12]。本試驗中，不同飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚的SR無顯著影響，說明黑脊倒刺鲃幼魚對不同蛋白質(zhì)水平飼料耐受性較強。黑脊倒刺鲃幼魚的WGR、SGR和PER均隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加先升高后下降，說明幼魚生長階段對蛋白質(zhì)需求量較高，提高飼料蛋白質(zhì)水平有助于促進其快速生長[13]；但過高的飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚的生長貢獻值降低。在低蛋白質(zhì)水平下，魚體生長緩慢，F(xiàn)CR較高；隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加，F(xiàn)CR在42.43%蛋白質(zhì)水平組達到最低值，說明在該蛋白質(zhì)水平下黑脊倒刺鲃幼魚對飼料的轉(zhuǎn)化率最高。

ILI經(jīng)常用來反映魚類食性的主要特征。一般來說，肉食性魚類的腸道較短，而草食性和雜食性魚類的腸道較長，可達其體長的2～5倍[14-15]。從ILI來看，黑脊倒刺鲃有雜食性魚類特征，除29.83%低蛋白質(zhì)水平組顯著低于其他各組外，其他各組之間均無顯著差異，說明黑脊倒刺鲃幼魚在達到最低蛋白質(zhì)需求量后，ILI趨于穩(wěn)定。肝胰臟被視為脂肪和糖原沉積的主要場所，VSI和HSI通常也被視為肝胰臟或內(nèi)臟中脂肪或者糖原蓄積的表觀指標(biāo)，因此可以在一定程度上反映魚類的營養(yǎng)狀況[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚的VSI和HSI無顯著影響，說明飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚的肝胰臟和內(nèi)臟質(zhì)量影響不大，這與李成等[17]對光倒刺鲃和孫瑞健等[18]對大黃魚上研究結(jié)果一致。CF通常用來作為評價魚類生長狀況和漁產(chǎn)品優(yōu)劣的指標(biāo)，CF的變化可能預(yù)示著魚體本身營養(yǎng)狀態(tài)的改變[19]。在本研究中，黑脊倒刺鲃幼魚的CF隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加呈先升高后降低的趨勢，42.43%和46.33%蛋白質(zhì)水平組CF顯著高于29.83%和33.96%蛋白質(zhì)水平組，說明較高蛋白質(zhì)水平的飼料會使魚體質(zhì)量增長更快。此外，由于本研究中的飼料蛋白質(zhì)水平是通過飼料中魚粉的添加水平進行調(diào)節(jié)的，可能會造成各試驗飼料之間的氨基酸組成產(chǎn)生細微的差異。

3.2 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚消化酶活性的影響

消化酶是反映魚類消化生理機能的一項重要指標(biāo)，水產(chǎn)動物攝食后，飼料中的營養(yǎng)物質(zhì)成為消化酶的作用底物，從而影響消化酶的分泌[20]，進而直接影響飼料利用效率，因此研究水產(chǎn)動物消化酶活性對研究魚類配合飼料和其消化吸收機理有重要意義[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚的消化酶活性具有顯著影響；腸道TPS活性高于肝胰臟TPS活性，這是由于肝胰臟雖然作為蛋白酶的主要分泌器官，但TPS需要在腸黏膜分泌的腸致活酶作用下才能激活為有活性的蛋白酶[22]。黑脊倒刺鲃腸TPS活性隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加而呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，與刺鲃幼魚[23]的腸道蛋白酶活性在飼料蛋白質(zhì)水平超過40%后顯著下降結(jié)果一致。這說明蛋白酶活性與一定范圍內(nèi)的飼料蛋白質(zhì)水平呈正相關(guān)，可改善魚類生長性能；但過高飼料蛋白質(zhì)水平在經(jīng)過魚體內(nèi)代謝后會產(chǎn)生較多有毒的含氮物質(zhì)，使魚類對蛋白酶的分泌產(chǎn)生負反饋調(diào)節(jié)(分泌抑制)[24]，繼而表現(xiàn)為蛋白酶活性降低、消化負擔(dān)增加、生長減緩。

有研究發(fā)現(xiàn)，魚類的肝胰臟可能是AMS的主要分泌器官，而腸道則是AMS的主要消化場所[25]。本試驗中黑脊倒刺鲃腸道AMS活性因飼料蛋白質(zhì)水平升高而持續(xù)下降，這可能是由于低蛋白質(zhì)水平的飼料中碳水化合物水平相對較高，使得AMS活性較高，這與對刺鲃(Barbudescaldwell)[23]的研究結(jié)論一致。魚類的LPS主要由肝胰臟分泌，且屬于底物依賴型酶[26]。本研究中，黑脊倒刺鲃幼魚的肝胰臟和腸道LPS活性隨著試驗飼料脂肪水平的增加而逐步升高，說明其活性與魚類飼料脂肪水平呈正相關(guān)[27-28]。

3.3 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚血清生化指標(biāo)的影響

食物中的蛋白質(zhì)經(jīng)消化分解產(chǎn)生氨基酸，其中部分氨基酸經(jīng)過脫氨基作用產(chǎn)生氨和尿素等，因此血清氨和UN含量可以較準確反映動物體內(nèi)蛋白質(zhì)分解代謝情況[29]。本研究中，隨飼料蛋白質(zhì)水平的升高，黑脊倒刺鲃血清UN和氨含量均呈上升趨勢，與在克林雷氏鯰(Rhamdiaquelen)[30]和歐洲鱸魚(Dicentrarchuslabrax)[31]上研究結(jié)果一致。分析認為，隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高，魚類消化吸收進入體內(nèi)的蛋白質(zhì)含量增加，同時在腸道菌群作用下，用于分解供能的蛋白質(zhì)增加，導(dǎo)致血清氨和UN含量增加，進而增加魚體代謝產(chǎn)物，造成養(yǎng)殖水體污染。血清TP含量的變化在一定程度上可以反映飼料中蛋白質(zhì)的營養(yǎng)水平及魚體對蛋白質(zhì)的代謝程度。本研究發(fā)現(xiàn)，血清TP含量隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高而逐步增加，當(dāng)飼料蛋白質(zhì)水平達到42.43%后趨于穩(wěn)定。這說明在一定范圍內(nèi)黑脊倒刺鲃吸收進入血液的蛋白質(zhì)會隨飼料蛋白質(zhì)水平的升高而不斷增加，但當(dāng)飼料蛋白質(zhì)水平超過其代謝能力時，無法被魚體有效地消化吸收，多余的蛋白質(zhì)可能以氨等形式排出體外，進而污染養(yǎng)殖水體。

3.4 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚蛋白質(zhì)代謝關(guān)鍵酶活性的影響

ALT與AST是水產(chǎn)動物體內(nèi)發(fā)揮氨基酸轉(zhuǎn)運功能的2種重要的酶類，在魚體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝方面發(fā)揮重要關(guān)鍵作用[32]。正常情況下，肝臟中轉(zhuǎn)氨酶活性較高，而血清中轉(zhuǎn)氨酶活性較低，當(dāng)魚體營養(yǎng)不良或者受到脅迫作用，尤其是肝胰臟受損時，這2種酶會大量釋放到血清中，造成血清的轉(zhuǎn)氨酶活性升高，因此可以作為衡量肝功能健康與否的重要評價指標(biāo)[33-34]。本研究中，肝胰臟的ALT和AST活性均呈現(xiàn)隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加而先下降后上升再下降的趨勢，說明黑脊倒刺鲃在攝食低蛋白質(zhì)水平飼料時，其肝胰臟通過升高轉(zhuǎn)氨酶活性來促進體內(nèi)氨基酸代謝，提高機體對蛋白質(zhì)的吸收利用；隨著飼料蛋白質(zhì)水平的升高，肝功能慢慢恢復(fù)正常，ALT和AST活性有逐漸升高的趨勢，說明飼料蛋白質(zhì)水平的升高會使氨基酸分解增加，從而作為糖異生作用的底物進而轉(zhuǎn)化為能量[30]；但當(dāng)飼料蛋白質(zhì)水平過高時，長期的高蛋白質(zhì)攝入量會對魚體肝胰臟代謝產(chǎn)生壓力，可能導(dǎo)致肝細胞受損或細胞膜的通透性加大，使大量ALT和AST滲入血清中，因此出現(xiàn)50.67%蛋白質(zhì)水平組血清ALT和AST活性顯著高于29.83%、33.96%和38.52%蛋白質(zhì)水平組的現(xiàn)象。

3.5 飼料蛋白質(zhì)水平對黑脊倒刺鲃幼魚腸道形態(tài)的影響

腸道是魚類食物消化吸收的重要場所，其組織結(jié)構(gòu)的完整性對于魚類的生長發(fā)育非常重要。腸道皺壁高度和上皮細胞高度是反映魚類腸道生長發(fā)育和吸收能力的重要標(biāo)志[35]。投喂高蛋白質(zhì)水平的飼料可促進魚體腸道皺壁增高，進而增加腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收面積[14]。肌層厚度則反映腸壁肌肉收縮能力，收縮能力越強越有利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和運輸[36]。本研究中，隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加，腸道皺壁高度、肌層厚度呈先上升后下降的趨勢，均在42.43%蛋白質(zhì)水平組達到最高值，這與王建等[37]對于拉薩裸裂尻幼魚的研究結(jié)果一致；且42.43%蛋白質(zhì)水平組黑脊倒刺鲃幼魚腸道TPS活性最高，說明該蛋白質(zhì)水平飼料可促進黑脊倒刺鲃幼魚腸道組織的生長和分化，提高消化吸收能力[36]。但當(dāng)飼料蛋白質(zhì)水平高于42.43%時，其皺壁高度與肌層厚度又降低，推測可能與飼料蛋白質(zhì)水平超過了魚體本身消化吸收上限，進而抑制了腸道形態(tài)正常發(fā)育有關(guān)。

杯狀細胞可分泌大量的黏蛋白，這種黏蛋白具有豐富的絲氨酸、蘇氨酸等，其形成的黏液層使得杯狀細胞在腸黏膜中抵御外源細菌和腸道固有微生物侵襲時發(fā)揮重要作用[38]。因此，杯狀細胞數(shù)量對維持腸道穩(wěn)態(tài)有重要作用，可作為腸道屏障功能和腸道發(fā)育的重要判斷指標(biāo)。本試驗結(jié)果表明，適當(dāng)增加飼料蛋白質(zhì)水平可提高腸道中杯狀細胞數(shù)量，但當(dāng)飼料蛋白質(zhì)水平達到42.43%時，其增加趨于平緩。這可能是由于飼料蛋白質(zhì)水平過高使腸道組織抗氧化能力降低，部分杯狀細胞因氧化損傷而凋亡。

4 結(jié) 論

飼料蛋白質(zhì)水平過低時，黑脊倒刺鲃幼魚生長緩慢，TPS活性低，腸道形態(tài)發(fā)育不良；而過高的飼料蛋白質(zhì)水平則會影響黑脊倒刺鲃肝胰臟功能和腸道發(fā)育。在本試驗條件下，以SGR和FCR為評價指標(biāo)，得出黑脊倒刺鲃幼魚飼料適宜蛋白質(zhì)水平為42.10%～42.71%。