杜劍波

【摘 要】目的 探討再生美Wnt-5ARor2信號通路的軟骨細胞增殖方法。方法 配置軟骨細胞的培養(yǎng)基，制備與培養(yǎng)軟骨細胞，分析不同濃度細胞增殖制劑對軟骨細胞生長的影響，同時添加兩種增殖制劑對軟骨細胞生長的影響，采用WESTERN檢測蘆薈大黃素和咖啡酸對于細胞增殖的信號途徑。結果 將相應濃度的蘆薈大黃素及咖啡酸添加培養(yǎng)基中能夠促進軟骨細胞的培養(yǎng)，其增殖效果優(yōu)于其他培養(yǎng)基。結論 再生美能夠通過對Wnt-5ARor2信號通路進行抑制的途徑調控IL-1β誘導軟骨細胞增殖及再生。

【關鍵詞】再生美；Wnt-5ARor2信號通路；軟骨細胞增殖

中圖分類號：R68 文獻標識碼：A 文章編號：1004-4949（2023）02-0011-03

Chondrocyte Proliferation Method of REBORN Wnt-5ARor2 Signaling Pathway

DU Jian-bo

（Regenerative Beauty Medical Technology Development Co.， Ltd.， Shanghai 200000， China）

【Abstract】Objective To investigate the method of chondrocyte proliferation in REBORN Wnt-5ARor2 signaling pathway. Methods The culture medium of chondrocytes was prepared to prepare and culture chondrocytes. The effects of different concentrations of cell proliferation preparations on the growth of chondrocytes were analyzed. At the same time， the effects of two proliferation preparations on the growth of chondrocytes were added. WESTERN was used to detect the signal pathways of aloe-emodin and caffeic acid on cell proliferation. Results The addition of aloe-emodin and caffeic acid at the corresponding concentration could promote the culture of chondrocytes， and its proliferation effect was better than other media. Conclusion REBORN can regulate IL-1β-induced chondrocyte proliferation and regeneration by inhibiting Wnt-5ARor2 signaling pathway.

【Key words】REBORN； Wnt-5ARor2 signaling pathway； Chondrocyte proliferation

軟骨細胞（chondrocyte）是在軟骨中發(fā)現(xiàn)的唯一一種細胞。雖然成軟骨細胞仍被經常用來描述不成熟的軟骨細胞，但在技術上是不準確的叫法，原因在于軟骨細胞的前體（間充質干細胞）還能分化為成骨細胞[1，2]。軟骨細胞在軟骨里的組織排列因軟骨的種類和位置不同而異，一是為了對軟骨細胞表型進行改善或維持，二是為了對體內培養(yǎng)模式進行模擬[3-5]。本研究選用DMEM培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，配制軟骨細胞的培養(yǎng)基，制備軟骨細胞，旨在探討再生美Wnt-5ARor2信號通路的軟骨細胞增殖方法。

1 材料與方法

1.1 材料 基礎培養(yǎng)基：DMEM培養(yǎng)基（GIBCO，貨號：SH30022.01，規(guī)格：500 ml）。

1.2 方法

1.2.1 軟骨細胞的培養(yǎng)基的配制 培養(yǎng)基1：基礎培養(yǎng)基+10%胎牛血清（對照）。培養(yǎng)基2：培養(yǎng)基1+蘆薈大黃素。培養(yǎng)基3：培養(yǎng)基1+咖啡酸。培養(yǎng)基4：培養(yǎng)基2+咖啡酸。培養(yǎng)基2-1、2-2、2-3分別為基礎培養(yǎng)基+6%胎牛血清+40 μmol/L蘆薈大黃素、60 μmol/L蘆薈大黃素、80 μmol/L蘆薈大黃素。

1.2.2 軟骨細胞的制備方法 使用95%乙醇消毒處理人關節(jié)軟骨組織10 min，先在37 ℃的溫度下充分利用0.5%胰蛋白酶進行處理2 h，使用磷酸緩沖液洗滌，再使用0.08% Ⅱ型膠原酶進行消化；在培養(yǎng)基1中離心洗滌，將原代人軟骨細胞獲取。

1.2.3 Wnt-5A蛋白表達檢測 采用Western-blot法：定量蛋白，使用BCA蛋白濃度測定試劑盒進行操作。TBST洗膜后將兔抗人Wnt-5A、tublin一抗（1∶1000稀釋）加入，在4 ℃的溫度下過夜雜交，洗膜后再將二抗（1∶3000稀釋）加入，室溫雜交1 h，洗膜后以ECL化學發(fā)光，暗室拍照，以tublin為內標蛋白，從而計算蛋白表達水平。

2 結果

2.1 不同濃度細胞增殖制劑對軟骨細胞生長的影響 將相應濃度的蘆薈大黃素及咖啡酸添加培養(yǎng)基中能夠將有利條件提供給培養(yǎng)軟骨細胞，見圖1、圖2、圖3。

2.2 同時添加兩種增殖制劑對軟骨細胞生長的影響 將相應濃度的蘆薈大黃素及咖啡酸同時添加在培養(yǎng)基中的增殖效果更優(yōu)，見圖4、圖5。

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編輯 扶田