張雷鳴，劉煒，2，茆健強，裴雪瑩，代雅凡，謝冰，周國勤*

（1.南京市水產(chǎn)科學(xué)研究所，江蘇 南京 210036；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，武漢 湖北 430000）

雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”（GS-02-001-2018），于2018 年經(jīng)全國水產(chǎn)原種和良種審定委員會審定為新品種，是以選育二代的瓦氏黃顙魚為父本、選育三代的黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco）為母本雜交獲得[1-2]。該品種攝食旺盛，飼料利用率高，規(guī)格整齊，成活率高，市場前景廣闊，目前已成為我國重要的優(yōu)質(zhì)養(yǎng)殖水產(chǎn)品種。苗種安全越冬是雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”養(yǎng)殖中的關(guān)鍵一環(huán)。冬季水溫低，苗種攝食量減少，免疫力降低，在第二年春天養(yǎng)殖過程中易發(fā)生水霉、腐皮和小瓜蟲等病害。因此冬季對苗種病害的預(yù)防和管理是成魚養(yǎng)殖成功的關(guān)鍵，飼料的營養(yǎng)成分顯得尤為重要。

隨著人們飲食理念的提升和環(huán)保意識的增強，高效、健康、綠色的飼料添加劑備受養(yǎng)殖戶青睞。有研究表明，飼料中添加植物蛋白，能夠促進(jìn)魚類的生長，同時可提高飼料的利用率[3]。小球藻繁殖能力強，蛋白質(zhì)含量高，細(xì)胞中含有的“酸性多糖體”可誘使生物體產(chǎn)生大量干擾素，干擾素可刺激機體免疫功能，可增強抗病能力[4-5]。用小球藻作為飼料添加劑，可顯著提高鯽[6]（Carassius auratus）、三疣梭子蟹[7]（Portunus trituberculatus）等水生動物的生長和免疫能力。

現(xiàn)以雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”為研究對象，探究飼料中小球藻添加量對其越冬期間生長性能及抗氧化能力的影響，旨在為養(yǎng)殖雜交黃顙魚“黃優(yōu)1號”安全越冬提供參考。

1 材料與方法

1.1 飼料及制作

試驗所用小球藻購于中國科學(xué)院水生生物研究所藻種庫，基礎(chǔ)飼料購置于南山飼料淮安有限公司。將基礎(chǔ)飼料粉碎后過孔徑為0.178 mm 篩，并添加小球藻粉，攪拌混勻后，由擠條機制成直徑為2.0 mm 長條，于70 ℃烘干，剪切成1.5～2.0 mm長的顆粒飼料。

1.2 試驗設(shè)計

雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”苗種來自南京市水產(chǎn)科學(xué)研究所祿口基地。挑選體格健壯、無外傷、體質(zhì)量為（45±0.48）g 的雜交黃顙魚750 尾。試驗在南京市水產(chǎn)科學(xué)研究所祿口基地實驗室長方形水缸（75 cm×45 cm×45 cm）內(nèi)進(jìn)行。

根據(jù)飼料中小球藻添加量不同，將雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”分為5 組，分別為對照組G0（0.00%）和處理組G1（2.50%）、G2（5.00%）、G3（7.50%）、G4（10.00%），每組3 個平行，每個平行50 尾魚。對照組投喂基礎(chǔ)飼料，處理組分別投喂小球藻不同添加量的飼料。每天分別于09：00 和16：00 各投喂1 次，投喂量為魚體質(zhì)量的3%～5%，每天記錄飼料投喂量。投喂30 min 后，將剩餌立即撈出。試驗周期為56 d。

1.3 樣品采集與分析

在養(yǎng)殖的第28 和56 天，每組隨機抽取10 尾雜交黃顙魚，用2 mL 注射器從尾靜脈取血，轉(zhuǎn)移至1.5 mL 離心管中，于4 ℃靜置并過夜，離心15 min后收集上層血清，存放于-80 ℃冰箱備用。過氧化氫酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化氫酶和丙二醛等指標(biāo)，均采用南京建成生物科技有限公司的試劑盒進(jìn)行檢測。在養(yǎng)殖的第28 和56 天，每組隨機抽取10 尾雜交黃顙魚，測定其體質(zhì)量，解剖后測量肝的質(zhì)量，用于計算生長指標(biāo)。

1.4 計算公式

生長指標(biāo)計算公式：

式中：SGR 為特定生長率，%；Wt為終末體質(zhì)量，g；W0為初始體質(zhì)量，g；FCR 為飼料系數(shù)；F 為飼料投喂量，g；HSI 為肝體指數(shù)，%；Wg為肝臟質(zhì)量，g；t 為試驗時間，d；WGR：體質(zhì)量增加率，%。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗結(jié)果以（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）表示。采用SPSS18.0 進(jìn)行單因素方差分析和顯著性分析，P＜0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料中小球藻不同添加量雜交黃顙魚“黃優(yōu)1號”生長指標(biāo)

飼料中小球藻添加量雜交黃顙魚“黃優(yōu)1號”生長指標(biāo)見表1。由表1 可見，試驗第28 和56 天，雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”的WGR、SGR 隨著飼料中小球藻添加量的增加呈上升趨勢，其中G4 組雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”的WGR 和SGR 最高，并顯著高于其他試驗組和對照組（P＜0.05）。此外，G4 組的FCR 顯著低于G0 組（P＜0.05）。第28 和56 天，各試驗組HSI 均無顯著差異（P＞0.05）。

表1 飼料中小球藻不同添加量雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”生長指標(biāo)① %

2.2 飼料中小球藻不同添加量雜交黃顙魚“黃優(yōu)1號”抗氧化指標(biāo)

飼料中小球藻不同添加量雜交黃顙魚肝臟和血清過氧化氫酶活性見表2。由表2 可見，飼料中添加小球藻能提高雜交黃顙魚肝臟和血清中過氧化氫酶活性。

表2 飼料中小球藻不同添加量雜交黃顙魚肝臟和血清過氧化氫酶活性①U/mg

隨著飼料中小球藻添加量的增加，試驗第28和56 天，雜交黃顙魚肝臟中過氧化氫酶活性不斷升高，最高值出現(xiàn)在G4 組，且G4 組的過氧化氫酶活性顯著高于G0 組（P＜0.05）；第28 和56 天，雜交黃顙魚血清中過氧化酶活性隨小球藻添加量增加不斷提高，第28 天各組差異不顯著（P＞0.05），第56 天G3 組和G4 組顯著高于其他試驗組和對照組（P＜0.05）。

飼料中小球藻不同添加量雜交黃顙魚肝臟和血清超氧化物歧化酶活性見表3。由表3 可見，飼料中添加小球藻能提高雜交黃顙魚肝臟和血清中超氧化物歧化酶活性。試驗第28 天，G3 組和G4 組肝臟中超氧化物歧化酶活性顯著升高，較G0 組分別提高了29.46%和33.56%（P＜0.05）；試驗第56 天時，G3 組和G4 組的肝臟中超氧化物歧化酶顯著高于G0 組（P＜0.05），分別提高了21.32%和41.37%；試驗第28 和56 天，隨著小球藻含量的增加，雜交黃顙魚血清中超氧化物歧化酶活性不斷提高，且G3 組和G4 組血清中超氧化物歧化酶活性顯著高于G0—G2 組（P＜0.05）。

表3 飼料中小球藻不同添加量雜交黃顙魚肝臟和血清超氧化物歧化酶活性U/mg

飼料中小球藻不同添加量雜交黃顙魚肝臟和血清谷胱甘肽過氧化氫酶活性見表4。由表4 可見，飼料中添加小球藻能提高雜交黃顙魚肝臟和血清中谷胱甘肽過氧化氫酶活性。試驗第28 和56 天，G4 組肝臟中的谷胱甘肽過氧化氫酶活性顯著高于G0組（P＜0.05），較G0 組分別提高了180.25%和76.64%，G1—G3 組之間無顯著性差異（P＞0.05）；試驗第28 天，G1—G4 組血清中的胱甘肽過氧化氫酶活性均顯著高于G0 組（P＜0.05），最大值出現(xiàn)在G4 組，較G0 組谷胱甘肽過氧化氫酶活性提高了526.81%；試驗第56 天，G1—G4 組血清中的谷胱甘肽過氧化氫酶活性顯著高于G0 組（P＜0.05），最大值出現(xiàn)在G3 組，較G0 組谷胱甘肽過氧化氫酶活性提高了155.64%，G1—G4 組之間無顯著差異（P＞0.05）。

表4 飼料中小球藻不同添加量雜交黃顙魚肝臟和血清谷胱甘肽過氧化氫酶① mg/L

飼料中小球藻不同添加量雜交黃顙魚肝臟和血清丙二醛含量見表5。由表5 可見，飼料中添加小球藻可降低雜交黃顙魚肝臟和血清中丙二醛的含量。試驗第28 和56 天，G1—G4 組肝臟丙二醛含量均顯著低于G0 組（P＜0.05），且最小值均出現(xiàn)在G4組；試驗第28 和56 天，G1—G4 血清中丙二醛含量均顯著低于G0 組（P＜0.05），且最小值也均出現(xiàn)在G4 組，其中第56 天，G1—G4 血清中丙二醛含量差異不顯著（P＞0.05）。

續(xù)表

3 討論

3.1 飼料中小球藻不同添加量對雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”生長的影響

小球藻作為地球上最古老的單細(xì)胞藻類，體內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、不飽和脂肪酸、維生素及礦物質(zhì)，營養(yǎng)均衡豐富，因此小球藻被廣泛應(yīng)用于飼料添加劑。崔青曼等[8]在南美白對蝦（Litopenaeus Vannamei）飼料中添加0.5%～2.0%的小球藻粉，發(fā)現(xiàn)其可顯著提高南美白對蝦的存活率和特定生長率；何海生等[9]研究蛋白核小球藻對南美白對蝦生長的影響時發(fā)現(xiàn)，蛋白核小球藻不僅能改善養(yǎng)殖南美白對蝦水質(zhì)，還能顯著提高南美白對蝦的存活率和SGR；秦璐等[10]研究發(fā)現(xiàn)，小球藻對羅非魚（Tilapiasp.）生長有促進(jìn)作用；石西等[6]研究發(fā)現(xiàn)，隨著小球藻替代魚粉量的增加，鯽WGR 呈上升趨勢，F(xiàn)CR 呈降低趨勢。

本研究結(jié)果顯示，飼料中添加小球藻能促進(jìn)雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”的生長，且隨小球藻添加量的增加，其WGR 和SGR 均有所提高，F(xiàn)CR 則呈下降趨勢。小球藻添加量為10%時，雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”生長速度最快，餌料系數(shù)最低，這與上述研究結(jié)論類似。小球藻含有獨特的小球藻生長因子（CGF），CGF 主要含有核酸、多肽、蛋白、氨基酸、維生素、多糖等功能性成分[11]，可滿足雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”生長需求，可促進(jìn)其生長并提高飼料的利用率。與飼養(yǎng)4 周相比，飼養(yǎng)8 周的雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”WGR 和SGR 較高，這說明小球藻長期投喂的效果更好。

3.2 飼料中小球藻不同添加量對雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”抗氧化能力的影響

過氧化氫酶是魚體細(xì)胞內(nèi)分解過氧化氫和氫氧自由基的酶[12]，超氧化物歧化酶是一種重要的抗氧化酶，兩種酶均可清除機體內(nèi)多余的自由基[13]。自由基在體內(nèi)積累過多，就會作為一種具有毒性的氧化劑，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致組織損傷，從而引發(fā)疾病[14]，因此過氧化氫酶和超氧化物歧化酶活性是魚體抗氧化能力的重要指標(biāo)。本試驗結(jié)束時，飼料中添加小球藻的雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”其肝臟和血清中的過氧化氫酶和超氧化物歧化酶活性，顯著高于對照組（P＜0.05），且隨著小球藻添加量的增加其活性提高。這與崔青曼等[8]、闕江龍等[15]和張寶龍等[16]研究的小球藻對南美白對蝦、草魚（Ctenopharyngodon idella）和鯉（Cyprinus carpio）抗氧化能力的影響結(jié)果相一致。因此，飼料中添加小球藻，能有效提高雜交黃顙魚“黃優(yōu)1 號”的抗氧化能力。

谷胱甘肽過氧化氫酶廣泛存在于動植物中，是抵抗氧化應(yīng)激的第一道屏障[17]，能及時清除細(xì)胞內(nèi)過量的氧自由基，維持魚體細(xì)胞內(nèi)的氧化還原態(tài)的穩(wěn)定，在水生動物的免疫功能中發(fā)揮著重要作用[18]。本研究中，在飼料中添加小球藻，能夠顯著提高黃顙魚肝臟和血清中的谷胱甘肽過氧化氫酶活性，這與吳丹等[19]對褶紋冠蚌（Cristaria plicata）的研究結(jié)果相一致。這可能是飼料中添加的小球藻自身存在具有解毒功能的谷胱甘肽[20]，可補充魚體內(nèi)的谷胱甘肽過氧化氫酶，增加其活性，以更好地清除魚體內(nèi)過量的氧自由基，維持魚體氧化還原態(tài)的穩(wěn)定。

丙二醛是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物，其含量的大小反映機體損傷程度的大小[21]，是其毒性和保護(hù)作用的綜合表現(xiàn)。吳凡等[22]和王雅慧等[23]分別在吉富羅非魚（Genetic Improvement of Farmed Tilapia）和大菱鲆（Scophthalmus maximus）的飼料中添加維生素C 和姜黃素，發(fā)現(xiàn)飼料添加劑能顯著提高吉富羅非魚和大菱鲆血清中的超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性，同時降低丙二醛含量。本試驗也證實了上述學(xué)者的研究結(jié)論。隨著小球藻含量增加，雜交黃顙魚血清和肝臟中超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性顯著提高，丙二醛含量顯著降低，說明飼料中添加小球藻，降低了雜交黃顙魚機體脂質(zhì)過氧化水平，減少對細(xì)胞組織的損傷。