周美云，錢元原，張 凡，王 娜

（南通大學(xué)附屬婦幼保健院兒科，南通 226018）

過敏性紫癜（Henoch-Sch?nlein purpura,HSP）是一種常見的兒童自身免疫性疾病，是以小血管炎為主要病變的全身炎癥性疾病，3～15 歲多見，四季均有發(fā)病，但以秋冬季多見，可累及多個(gè)系統(tǒng)，且易復(fù)發(fā)，部分患兒可累及腎臟導(dǎo)致預(yù)后不良[1]。該病確切的發(fā)病原因及機(jī)制尚未完全闡明，目前認(rèn)為機(jī)體細(xì)胞及體液免疫功能失衡導(dǎo)致炎癥因子釋放在其發(fā)病中占據(jù)重要作用[2]，故進(jìn)一步探討HSP 患兒免疫功能變化，明確發(fā)病機(jī)制，對(duì)于該病的診治十分重要。輔助性T 淋巴細(xì)胞-9（helper T lymphocyte,Th9）作為一種新型的CD4+效應(yīng)T 細(xì)胞，被證實(shí)在多種炎癥性疾病及自身免疫性疾病中具有重要的調(diào)節(jié)作用。本文通過檢測(cè)HSP 患兒血清Th9 細(xì)胞及IL-9 的表達(dá)變化，了解對(duì)疾病的臨床價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象及分組 選取2019 年1 月—2020 年6 月在南通大學(xué)附屬婦幼保健院住院的初發(fā)且未經(jīng)治療的HSP 患兒60 例作為HSP 組，男36 例，女24例，年齡5～14 歲；隨機(jī)選取同期體檢兒童60 例作為對(duì)照組，男33 例，女27 例，年齡4～14 歲。將HSP 組分為過敏性紫癜腎炎（Henoch Sch?nlein purpura nephritis,HSPN）組及非HSPN（non-HSPN,NHSPN）組，其中HSPN 組18 例，男10 例，女8 例，年齡4～13 歲；NHSPN 組42 例，男26 例，女16 例，年齡6～14 歲。隨訪6 個(gè)月，根據(jù)患兒是否有病情反復(fù)分為復(fù)發(fā)組及非復(fù)發(fā)組，復(fù)發(fā)組共24 例，男14 例，女10例，年齡5～12 歲。非復(fù)發(fā)組36 例，男22 例，女14例，年齡4～14 歲。各組性別、年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），具有可比性。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) HSP 患兒符合第八版諸福棠《實(shí)用兒科學(xué)》HSP 的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且4 周內(nèi)均未使用過免疫抑制劑及糖皮質(zhì)激素進(jìn)行治療，無(wú)過敏性疾病及其他類型免疫性疾病。HSPN 患兒診斷依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)2009 年制訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，并排除其他引起蛋白尿和血尿的腎臟病。急性期：所有HSP患兒初診且未經(jīng)治療，入院時(shí)有皮膚紫癜、腹痛、關(guān)節(jié)腫痛、血尿、血便等1 種或多種癥狀。恢復(fù)期：所有患兒經(jīng)正規(guī)治療4 周后，皮疹、關(guān)節(jié)疼痛、腹部疼痛等臨床癥狀消失，并無(wú)血尿、蛋白尿。出院后定期隨訪，專業(yè)指導(dǎo)，避免接觸過敏原，隨訪6 個(gè)月內(nèi)在臨床癥狀緩解停止治療后再次出現(xiàn)相應(yīng)臨床癥狀為復(fù)發(fā)。本研究取得南通大學(xué)附屬婦幼保健院倫理委員會(huì)審批及患兒家長(zhǎng)知情同意。

1.3 外周血Th9 細(xì)胞及IL-9 測(cè)定 HSP 組急性期、恢復(fù)期及對(duì)照組各采集靜脈血5 mL，取2 mL 使用離心機(jī)以2 000 r／min 離心20 min，吸取上清液，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫珽LISA 檢測(cè)血清IL-9，嚴(yán)格按照IL-9 試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）說明進(jìn)行操作。剩余血液使用淋巴細(xì)胞分離液通過密度梯度離心方法將單個(gè)核細(xì)胞分離出來(lái)，在顯微鏡下查看細(xì)胞形態(tài)并計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106個(gè)／mL，分別以抗人CD3 抗體和CD8 抗體各5 μL 實(shí)施熒光抗體染色，然后依次進(jìn)行細(xì)胞的固定、破膜、細(xì)胞內(nèi)的染色，經(jīng)PBS洗滌2 次，固定并應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th9 細(xì)胞比例，嚴(yán)格按照說明書（美國(guó)BD 公司）步驟進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 17.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料使用表示，樣本之間的比較采用t 檢驗(yàn)或方差分析檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用SNK-q檢驗(yàn)方法，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HSP組與對(duì)照組外周血Th9 細(xì)胞及細(xì)胞因子IL-9 水平比較 HSP 組急性期與恢復(fù)期的外周血Th9 細(xì)胞及IL-9 水平均高于對(duì)照組，且HSP 組急性期高于恢復(fù)期（均P<0.05），見表1。

表1 HSP 組與對(duì)照組外周血中Th9 細(xì)胞及IL-9 水平比較（）

表1 HSP 組與對(duì)照組外周血中Th9 細(xì)胞及IL-9 水平比較（）

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05；與恢復(fù)期相比，#P<0.05。

2.2 HSPN 組與NHSPN 組外周血中Th9 細(xì)胞及細(xì)胞因子IL-9 水平比較 HSPN 組急性期及恢復(fù)期外周血Th9 細(xì)胞和IL-9 水平均高于同期NHSPN 組（均P<0.05），見表2。

表2 HSPN 組與NHSPN 組急性期及恢復(fù)期外周血中Th9 細(xì)胞及IL-9 水平比較（）

表2 HSPN 組與NHSPN 組急性期及恢復(fù)期外周血中Th9 細(xì)胞及IL-9 水平比較（）

2.3 復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組外周血中Th9 細(xì)胞及細(xì)胞因子IL-9 水平比較 復(fù)發(fā)組急性期外周血Th9 細(xì)胞和IL-9 水平與非復(fù)發(fā)組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），而復(fù)發(fā)組恢復(fù)期均高于非復(fù)發(fā)組（均P<0.05），見表3。

表3 復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組急性期及恢復(fù)期外周血中Th9 細(xì)胞及IL-9 水平比較（）

表3 復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組急性期及恢復(fù)期外周血中Th9 細(xì)胞及IL-9 水平比較（）

3 討論

HSP 是兒科臨床上常見的一種自身免疫性小血管炎癥性疾病，可能是在感染，食物、花粉過敏，疫苗等多種因素作用下，機(jī)體形成IgA 循環(huán)免疫復(fù)合物，沉積于毛細(xì)血管壁，并激活補(bǔ)體，致使毛細(xì)血管及周圍組織產(chǎn)生炎癥反應(yīng)[4]，可累及皮膚、關(guān)節(jié)、消化道、腎臟等器官，臨床上出現(xiàn)皮膚紫癜、腹部疼痛、關(guān)節(jié)腫痛以及蛋白尿、血尿等單一或多種混合表現(xiàn)。HSP患兒大部分預(yù)后良好，但該病易復(fù)發(fā)，且腎臟損害是其最嚴(yán)重的并發(fā)癥，影響長(zhǎng)期預(yù)后，部分可遷延不愈，最終進(jìn)展為腎功能不全[5]。該病的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與細(xì)胞、體液免疫有關(guān)，T 細(xì)胞及細(xì)胞因子在HSP 的免疫機(jī)制中起關(guān)鍵作用。Th9 細(xì)胞是一種新型CD4+T 細(xì)胞，主要分泌IL-9 發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，可在多種組織與炎癥細(xì)胞中產(chǎn)生作用，改變組織周圍微環(huán)境，導(dǎo)致相應(yīng)病理變化[6]。IL-9 作為一種新型的細(xì)胞因子，促進(jìn)多種炎癥因子及趨化因子釋放，在多種炎癥性疾病、自身免疫性疾病及過敏性疾病中發(fā)揮作用[7]，參與機(jī)體炎癥與免疫反應(yīng)等病理生理過程[8]。而目前關(guān)于IL-9 與HSP 的關(guān)系鮮有報(bào)道。

本研究發(fā)現(xiàn)，HSP 患兒急性期血清Th9 細(xì)胞及IL-9 的水平高于對(duì)照組，且HSP 組急性期高于恢復(fù)期，提示Th9 細(xì)胞及其細(xì)胞因子IL-9 參與了HSP 的發(fā)生發(fā)展，且隨著疾病的緩解，炎癥反應(yīng)減弱。IL-9作為Th9 細(xì)胞的效應(yīng)因子，能增加機(jī)體嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目，使肥大細(xì)胞表面IgE 受體表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)炎癥因子的釋放，進(jìn)而誘導(dǎo)變態(tài)反應(yīng)性炎癥的產(chǎn)生，導(dǎo)致機(jī)體全身小血管壁的滲透及損傷，引起HSP 的發(fā)生[9]。經(jīng)過相應(yīng)抗過敏、抗炎治療后，患兒臨床癥狀改善，免疫功能較前好轉(zhuǎn)，抗炎因子釋放，抑制機(jī)體的促炎性反應(yīng)，炎性因子組織浸潤(rùn)減少，故HSP 恢復(fù)期Th9 細(xì)胞及IL-9 的水平較急性期下降。

90%以上的HSP 患兒有不同程度的腎臟損害，且其損害程度將影響HSP 的遠(yuǎn)期預(yù)后[10]，然而早期腎損傷輕微，很少出現(xiàn)相關(guān)的臨床癥狀。本研究發(fā)現(xiàn)，HSPN 組急性期及恢復(fù)期外周血Th9 細(xì)胞和IL-9水平均高于NHSPN 組，提示腎臟受累的HSP 患兒在急性期IL-9 水平更高，Th9 細(xì)胞的功能增強(qiáng)，可能是導(dǎo)致機(jī)體小血管炎性改變的部分病因，IL-9 不僅參與了HSP 的發(fā)病，且在疾病早期引起機(jī)體免疫功能紊亂，其高表達(dá)可能更易引起腎臟受累，可作為HSPN 早期診斷的一個(gè)指標(biāo)。

M.POHL[11]認(rèn)為，約有1／3 的HSP 患兒會(huì)復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)次數(shù)越多預(yù)后越差，從而增加腎臟損傷的風(fēng)險(xiǎn)。HSP 復(fù)發(fā)可能與機(jī)體免疫失衡及接觸致敏物質(zhì)誘發(fā)等有關(guān)[12]。本研究顯示復(fù)發(fā)組急性期外周血Th9 細(xì)胞和IL-9 水平與非復(fù)發(fā)組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而恢復(fù)期復(fù)發(fā)組高于非復(fù)發(fā)組，即恢復(fù)期復(fù)發(fā)組HSP 患兒臨床癥狀雖緩解，但體內(nèi)免疫失衡狀態(tài)尚未完全恢復(fù)正常，小血管炎未全部消失，其病理?yè)p傷仍存在，致使疾病易于復(fù)發(fā)，而非復(fù)發(fā)組癥狀消失，血管炎癥基本消失，故不易復(fù)發(fā)。

綜上所述，Th9 細(xì)胞及效應(yīng)因子IL-9 是引起HSP 免疫失衡的重要因素，也是疾病反復(fù)遷延的原因，在其發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用，且可作為HSP 患兒病情活動(dòng)性的指標(biāo)，通過監(jiān)測(cè)其變化可更好地評(píng)價(jià)HSP 患兒病情，對(duì)疾病的預(yù)后有預(yù)警價(jià)值。IL-9調(diào)整免疫失衡可能會(huì)為HSP 免疫方面的治療提供一個(gè)新的思路，為臨床工作提供指導(dǎo)，以期減少疾病復(fù)發(fā)，改善預(yù)后。然而本研究樣本數(shù)較小，期待更多樣本進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果。