李琳 鐘森杰 李欣春 胡志希

〔摘要〕 目的 采用高通量代謝組學(xué)技術(shù)和生物信息學(xué)方法探討益氣養(yǎng)陰法對(duì)高血壓心衰的作用機(jī)制，構(gòu)建代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。方法 采用Dahl鹽敏感大鼠給予高鹽飲食復(fù)制高血壓心衰大鼠模型，同時(shí)采用益氣養(yǎng)陰法代表方參麥注射液干預(yù)模型，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（gas chromatography-mass spectrometer， GC-MS）檢測(cè)對(duì)照（control， CON）組，模型（hypertensive heart failure， H-HF）組，參麥注射液（Shenmai Injection， SMI）組3組大鼠心肌組織代謝產(chǎn)物，每組6只，通過(guò)對(duì)不同組之間代謝產(chǎn)物含量的變化進(jìn)行主成分分析，偏最小二乘法分析，篩選高血壓心衰生物標(biāo)志物，使用MetaboAnalyst在線數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行代謝通路分析并構(gòu)建代謝網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果 與CON組比較，H-HF組大鼠血清N末端腦鈉肽前體（N-terminal-pro-brain-natriuretic-peptide， NT-pro BNP）、血管緊張素Ⅱ（angiotensin Ⅱ， Ang Ⅱ）、內(nèi)皮素-1（endothelin-1， ET-1）濃度顯著升高（P<0.01），超聲心動(dòng)圖左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction， LVEF）、左室短軸縮短率（left ventricular fractional shortening， LVFS）顯著下降（P<0.05），SMI治療后，血清NT-pro BNP、Ang Ⅱ、ET-1濃度明顯下降，超聲心動(dòng)圖LVFS值顯著上升（P<0.05），LVEF呈上升趨勢(shì)，說(shuō)明參麥注射液可有效改善大鼠心功能。代謝組學(xué)檢測(cè)中，與CON組比較，H-HF組心肌組織中有16種代謝物水平出現(xiàn)明顯變化，可能為該模型的生物標(biāo)志物。SMI治療后，9種代謝產(chǎn)物顯著回調(diào)，7種代謝產(chǎn)物表現(xiàn)出調(diào)控趨勢(shì)。代謝通路分析顯示，SMI影響最大的通路為精氨酸和脯氨酸代謝（P<0.05）。

結(jié)論 H-HF組心肌組織代謝組學(xué)出現(xiàn)變化，益氣養(yǎng)陰法可顯著改善高血壓心衰大鼠心肌代謝物紊亂，其治療心衰的作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)糖、氨基酸、乳酸代謝紊亂，從而改善能量代謝有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 高血壓心衰；代謝組學(xué)；參麥注射液；益氣養(yǎng)陰法；大鼠；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀

〔中圖分類號(hào)〕R256.2 ? ? ? 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A ? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０23.03.003

Mechanism of tonifying qi and nourishing yin on hypertensive heart failure based on metabonomics

LI Lin， ZHONG Senjie， LI Xinchun， HU Zhixi*

Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To explore the mechanism of tonifying qi and nourishing yin on hypertensive heart failure by using high-throughput metabolomics technology and bioinformatics methods， and then to build a metabolic regulation network. Methods Dahl salt-sensitive rats were given a high-salt diet to create the hypertensive heart failure rat model， and the intervention model of Shenmai Injection， a representative method of tonifying qi and nourishing yin， was adopted. Gas chromatography-mass spectrometer was used to detect the metabolites in myocardial tissue of three groups， namely control （CON） group， hypertensive heart failure （H-HF） group and Shenmai Injection （SMI） group， with 6 rats in each group. According to the content change of the metabolites in each group， the principal component was analyzed， and biomarkers of hypertensive heart failure were screened with partial least square analysis. Metabolic pathway analysis and metabolic network construction were performed by MetaboAnalyst online database. Results Compared with CON group， serum concentrations of N-terminal-pro-brain-natriuretic-peptide（NT-proBNP）， angiotensin Ⅱ（Ang Ⅱ） and endothelin-1， （ET-1） of rats in H-HF group were significantly increased （P<0.01）， and echocardiogram left ventricular ejection fraction（LVEF）and left ventricular fractional shortening（LVFS） were significantly decreased （P<0.05）. After SMI treatment， the serum concentrations of NT-proBNP， Ang Ⅱ and ET-1 significantly decreased. LVFS value of echocardiography significantly increased （P<0.05）， the increasing trend of LVEF indicated that Shenmai Injection can effectively improve the cardiac function of rats. Compared with CON group， there were sixteen metabolites in H-HF group showing significant changes in myocardial tissue of hypertensive heart failure， which may be biomarkers of the model. After SMI treatment， 9 metabolites were significantly reduced， and 7 metabolites showed a trend of regulation. Metabolic pathway analysis showed that arginine and proline metabolism were most affected by SMI. Conclusion Myocardial metabolomics of hypertensive heart failure rat model group showed changes and SMI can significantly improve the level of myocardial metabolites in rats with hypertensive heart failure. The mechanism may be related to the regulation of metabolism disorder of glucose metabolism， amino acid and lactic acid， thus improving energy metabolism.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 hypertensive heart failure; metabonomics; Shenmai Injection; tonifying qi and nourishing yin; rats; gas chromatography-mass spectrometer

心力衰竭（簡(jiǎn)稱心衰）是各種心臟疾病的嚴(yán)重和終末階段，其死亡率高，預(yù)后差，是危害人類生命健康的重大疾病[1]。高血壓是導(dǎo)致慢性心衰的主要原因[2]。心衰屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹”“心悸”“水腫”“喘證”等范疇，中醫(yī)藥在治療心衰方面積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。研究表明，氣虛、陰虛證貫穿于心衰緩解階段的始終，氣陰兩虛為常見證型，參麥注射液（Shenmai Injection， SMI）是益氣養(yǎng)陰法的代表方之一，其源于《癥因脈治》中的參冬飲，以紅參和麥冬二味藥等分同用，紅參大補(bǔ)脾肺之氣，麥冬養(yǎng)陰潤(rùn)肺，益氣養(yǎng)陰并重，扶正祛邪，已被廣泛應(yīng)用于心衰臨床治療中。課題組前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)SMI對(duì)高血壓心衰大鼠有較好的療效[3]，本實(shí)驗(yàn)利用高通量代謝組學(xué)技術(shù)探討益氣養(yǎng)陰法對(duì)高血壓心衰大鼠心肌組織作用機(jī)制，構(gòu)建代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，從生物信息學(xué)角度探討SMI治療心衰的作用機(jī)制，為心衰的治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 ?動(dòng)物

6周齡Dahl鹽敏感性大鼠18只，體質(zhì)量（220±10） g，雄性，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供（合格證編號(hào)：11400700134072），飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。

1.2 ?儀器和主要試劑

SonoScape-S2N型彩色多普勒超聲診斷儀，深圳開立科技有限公司。參麥注射液（規(guī)格：20 mL/瓶），杭州正大青春寶藥業(yè)公司生產(chǎn)（批號(hào)：1402225），NT-pro BNP（CUSABIO，批號(hào)：CSB-E08752r）、ET-1（CUSABIO，批號(hào)：CSB-E06979r）和AngⅡ（CUSABIO，批號(hào)：CSB-E04494r）ELISA試劑盒（CUSABIO，批號(hào)：CSB-E08752r）。

1.3 ?造模及分組

采用隨機(jī)數(shù)字表法選取6只大鼠作為對(duì)照（control， CON）組，其余大鼠參考文獻(xiàn)的方法研制高血壓心衰大鼠模型[3-5]，將Dahl鹽敏感雄性大鼠先給予低鹽飲食（0.3% Nacl），適應(yīng)性喂養(yǎng)至7周齡。繼續(xù)給予低鹽飲食，其余大鼠給予高鹽飲食（8.0% NaCl），飼養(yǎng)20周[4]。

1.4 ?給藥方法

造模成功后，參麥注射液（SMI）組，腹腔注射SMI，每次給藥劑量為6.0 mL·kg-1，模型（hypertensive heart failure， H-HF）組、CON組注射等量滅菌注射用水。每天1次，給藥15 d，干預(yù)15 d后，處死動(dòng)物取材。

1.5 ?超聲心動(dòng)圖檢測(cè)

選用超聲心動(dòng)圖方法評(píng)估心臟功能。根據(jù)二維圖像和從胸骨旁長(zhǎng)軸視圖在肌水平上采集的M模式測(cè)量以下參數(shù)。根據(jù)Teichholtz公式計(jì)算左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction， LVEF）和左室短軸縮短率（left ventricular fractional shortening， LVFS），計(jì)算3次獨(dú)立測(cè)量的平均值。

1.6 ?樣本收集

麻醉后采集血液和心臟組織樣本，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后頸椎脫臼處死大鼠。腹主動(dòng)脈采血，4 ℃下， 以3500 r/min離心10 min，離心半徑7 cm，樣本保存在-80 ℃冰箱，待測(cè)。

1.7 ?血清NT-pro BNP、ET-1和AngⅡ含量檢測(cè)

采用ELISA檢測(cè)血清NT-pro BNP、ET-1和AngⅡ含量，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書規(guī)定步驟進(jìn)行。

1.8 ?GC-MS分析

1.8.1 ?GC-MS測(cè)定條件 ?取心肌組織150 mg于2 mL 管中，加入 1500 μL 甲醇水混合溶液（4∶1，-20 ℃）后，放入組織研磨儀中以70 Hz 1 min進(jìn)行預(yù)處理，選用90 μL 2-氯苯丙氨酸（0.2 mg/mL）以及 90 μL 十七碳酸（0.2 mg/mL）作為內(nèi)標(biāo)，渦旋振蕩 30 s；以14 000 r/min 4 ℃離心10 min，離心半徑7 cm，取上清液，將上清液放入離心管中，真空離心濃縮儀濃縮。

GC-MS分析：氣相色譜采用HP-5MS毛細(xì)管柱，1 μL樣品以分流比20∶1的方式通過(guò)自動(dòng)進(jìn)樣器注入。注射溫度280 ℃，接口150 ℃，離子源調(diào)230 ℃。升溫程序以60 ℃為初始溫度，以10 ℃/min的速率上升至300 ℃，持續(xù)2 min，300 ℃停留5 min。質(zhì)譜采用的是m/z 35～750的全掃描方法。樣本預(yù)處理和方法同前期研究[6]。

1.8.2 ?數(shù)據(jù)預(yù)處理 ?GC-MS分析后得到可供生物信息學(xué)分析的原始數(shù)據(jù)，通過(guò)G1701 MSD ChemStation軟件將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)為netCDF格式（xcms輸入文件格式），利用R（v3.1.3）的XCMS程序包進(jìn)行峰識(shí)別、峰過(guò)濾、峰對(duì)齊，獲得包括質(zhì)核比、保留時(shí)間及峰面積等信息的數(shù)據(jù)矩陣。參照NIST商業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)和Wiley Registry代謝組數(shù)據(jù)庫(kù)，結(jié)合AMDIS程序注釋代謝物[7-8]。

1.8.3 ?差異代謝物與代謝通路分析 ?采用SIMCA-P（v14.0）軟件，組間模式識(shí)別采用主成分分析（principal component analysis， PCA）和偏最小二乘判別分析（partial least squares discriminant analysis， PLS-DA），根據(jù)結(jié)果構(gòu)建相應(yīng)的得分圖。差異代謝物的篩選采用正交-偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis， OPLS-DA），結(jié)合單因素方差分析的P值，以VIP值＞1且P＜0.05為條件進(jìn)行篩選[9]。利用MetaboAnalyst （http：//www.metaboanalyst.ca）和KEGG（https：//www.kegg.jp/）等生物學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行代謝通路富集分析。

1.9 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 24.0軟件，數(shù)據(jù)以“ｘ±s”表示。兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析。以P<0.05和P<0.01為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ?心功能指標(biāo)

H-HF組NT-proBNP、Ang Ⅱ、ET-1濃度顯著高于CON組（P<0.01），說(shuō)明高血壓心衰模型構(gòu)建成功。SMI治療后，SMI組大鼠血清NT-pro BNP、Ang Ⅱ、ET-1濃度明顯低于H-HF組（P<0.05或P<0.01）。超聲心動(dòng)圖結(jié)果顯示：與CON組比較，H-HF組LVEF、LVFS顯著下降（P<0.05）；SMI治療后，與H-HF組比較，SMI組LVFS值顯著上升（P<0.05），LVEF呈上升趨勢(shì)。詳見表1—2。

2.2 ?總離子流圖

心肌組織GC-MS分析總離子流色譜圖（TIC）如圖1所示，橫軸為保留時(shí)間，縱軸為相對(duì)峰強(qiáng)度。各組間可見相當(dāng)差異。在樣本中共檢測(cè)到134個(gè)峰，將各組TIC導(dǎo)入NIST數(shù)據(jù)庫(kù)選擇出匹配度較好的內(nèi)源性代謝物68種，進(jìn)行后續(xù)的多元統(tǒng)計(jì)分析。

2.3 ?代謝模式識(shí)別分析

將數(shù)據(jù)進(jìn)行PCA分析，PCA得分圖可以觀察樣本的聚集、離散程度，越靠近的樣本點(diǎn)，表明兩者之間代謝差異越??；越遠(yuǎn)離的樣本點(diǎn)，表明兩者之間代謝差異越大。三維PCA得分圖示三組的樣本點(diǎn)部分交叉，但并無(wú)重疊，在空間分布上明顯分開，分離程度較好，表明三組間的代謝模式存在差異。同時(shí)，CON組和H-HF組分別在左側(cè)和右側(cè)位置，說(shuō)明造模后，H-HF組心肌代謝發(fā)生了顯著的變化，而SMI組較好的分布在CON組和H-HF組之間，說(shuō)明SMI治療后，SMI組能夠顯著改善高血壓心衰大鼠心肌代謝物水平趨向正常發(fā)展。詳見圖2。

2.4 ?差異代謝物篩選

為了篩選高血壓心衰病理過(guò)程中可能的生物標(biāo)志物，本研究進(jìn)一步通過(guò)OPLS-DA建立CON組和H-HF組及H-HF組和SMI組之間的判別模型。如圖3所示，CON組和H-HF組組內(nèi)聚集良好，組間顯著分離，說(shuō)明兩組代謝物數(shù)據(jù)之間存在顯著差異，R2Y=0.939，Q2=0.722，可見模型具有較好的區(qū)分能力，可用于差異標(biāo)志物篩選。同理，H-HF組和SMI組R2Y=0.931，Q2=0.704，可用于差異標(biāo)志物篩選。

以VIP值＞1.0且P＜0.05為條件進(jìn)行篩選，CON組與H-HF組比較，篩選出最重要的內(nèi)源性差異，發(fā)現(xiàn)16種潛在的生物標(biāo)志物：脯氨酸（Proline）、磷酸（Phosphoric acid）、煙酰胺（Nicotinamide）、丙氨酸（Alanine）、尿素（Urea）、二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic acid）、蘇氨酸（Threonine）、葡萄糖（Glucose）、甘露醇（Mannitol）、核糖（Ribose）、纈氨酸（Valine）、果糖（Fructose）、蘋果酸（Malic acid）、腐胺（Putrescine）、麥芽糖（Maltose）、尿苷（Uridine）。詳見表3。

SMI可以不同程度地調(diào)節(jié)16個(gè)生物標(biāo)志物。其中尿素、脯氨酸、丙氨酸、煙酰胺、磷酸、尿苷、甘露醇、腐胺、二十二碳六烯酸9種代謝產(chǎn)物受到顯著回調(diào)，7種代謝產(chǎn)物表現(xiàn)出回調(diào)趨勢(shì)。

2.5 ?代謝通路分析及代謝網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

為進(jìn)一步探討SMI治療高血壓心衰的可能代謝機(jī)制，使用MetaboAnalyst在線數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)鑒定出的差異代謝物進(jìn)行富集和拓?fù)浞治觥＝Y(jié)果顯示，SMI治療后，主要影響的代謝通路是，煙酸鹽和煙酰胺代謝（nicotinate and nicotinamide metabolism），精氨酸和脯氨酸代謝（arginine and proline metabolism），氨酰生物合成（aminoacyl-tRNA biosynthesis）。其中影響最大的通路為精氨酸和脯氨酸代謝（P<0.05）。詳見圖4。結(jié)合KEGG在線數(shù)據(jù)庫(kù)的相關(guān)代謝通路信息構(gòu)建SMI干預(yù)高血壓心衰心肌組織代謝網(wǎng)絡(luò)。詳見圖5。

3 討論

心肌細(xì)胞能量代謝紊亂是心衰的重要分子生物學(xué)基礎(chǔ)。長(zhǎng)期以來(lái)，代謝功能障礙被認(rèn)為是心衰病理生理學(xué)的重要組成部分[10]。心力衰竭時(shí)心肌存在多種代謝缺陷。因此，代謝組學(xué)圖譜非常適合用于心衰的研究[11-12]，而代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建可進(jìn)一步識(shí)別心衰病理機(jī)制、生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)[13]。

本研究采用GC-MS代謝組學(xué)方法結(jié)合多變量分析，對(duì)高鹽飲食誘導(dǎo)的高血壓心衰大鼠模型和益氣養(yǎng)陰法進(jìn)行心肌組織代謝組學(xué)評(píng)價(jià)。SMI顯著升高LVEF和LVFS，降低血清NT-pro BNP、Ang Ⅱ和ET-1濃度，提示益氣養(yǎng)陰法可有效改善高血壓心衰大鼠模型心功能。此外，代謝組學(xué)分析鑒定出16種代謝物為H-HF模型的潛在生物標(biāo)志物，其中與CON組比較，H-HF組有13種代謝物上調(diào)，3種代謝物下調(diào)。SMI可對(duì)16個(gè)生物標(biāo)志物進(jìn)行不同程度的調(diào)控。其中9個(gè)代謝產(chǎn)物受到顯著調(diào)控，7個(gè)代謝產(chǎn)物表現(xiàn)出調(diào)控趨勢(shì)。這些代謝物可作為與SMI療效相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物。使用MetaboAnalyst在線數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)鑒定出的差異代謝物進(jìn)行富集和拓?fù)浞治?。結(jié)果顯示，SMI治療后，影響最大的通路為精氨酸和脯氨酸代謝（P<0.05）。結(jié)合KEGG在線數(shù)據(jù)庫(kù)的相關(guān)代謝通路信息構(gòu)建益氣養(yǎng)陰法改善高血壓心衰心肌代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。通過(guò)代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)（如圖5示）可知，這些檢測(cè)到的化合物大部分是能量代謝的中間體，說(shuō)明心衰與能量代謝紊亂有關(guān)，結(jié)果與前期研究一致，并且SMI的治療效果與能量代謝的改善有關(guān)[14]。

心臟可利用各種底物產(chǎn)生能量，包括葡萄糖、脂肪酸、乳酸、酮體和氨基酸[15-16]。發(fā)生心衰時(shí)，心肌細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取發(fā)生改變。當(dāng)心肌細(xì)胞經(jīng)歷短時(shí)間的缺氧缺血時(shí)，左心室負(fù)荷會(huì)增加，心肌耗氧量也會(huì)增加。此時(shí)，葡萄糖攝取的增加可以補(bǔ)償心肌的能量代謝需求。然而，在心肌持續(xù)缺氧缺血，舒張和收縮功能失代償?shù)那闆r下，葡萄糖攝取率會(huì)繼續(xù)下降，導(dǎo)致葡萄糖利用障礙。H-HF組大鼠葡萄糖、果糖、麥芽糖等多種糖原代謝物水平升高。這表明H-HF大鼠對(duì)葡萄糖的攝取和有氧氧化下降，導(dǎo)致葡萄糖消耗受損、ATP生成減少和心肌能量缺乏。結(jié)果表明，心衰時(shí)心肌葡萄糖利用率受到抑制，這與既往研究一致[17]。因此，通過(guò)提高心臟生產(chǎn)力和延緩進(jìn)展[18-19]，改善糖代謝可能是心衰治療的潛在策略。

氨基酸是重要的替代能源底物，可以轉(zhuǎn)化為糖酵解和三羧酸循環(huán)的中間產(chǎn)物，如磷酸烯醇丙酮酸和乙酰輔酶A。H-HF組出現(xiàn)脯氨酸、丙氨酸、蘇氨酸、纈氨酸等氨基酸紊亂。纈氨酸是一種支鏈氨基酸，是葡萄糖生物合成的重要底物。支鏈氨基酸的分解代謝在維持正常心臟功能方面也有重要的生理意義。雖然氨基酸不被用作常規(guī)能量代謝的底物，但它們可以用來(lái)補(bǔ)充心肌能量不足，并在缺氧條件下輔助TCA循環(huán)。內(nèi)源性小分子如尿素、煙酰胺、磷酸、尿苷、蘋果酸、甘露醇、腐胺等也被發(fā)現(xiàn)與能量代謝有關(guān)。蘋果酸參與TCA循環(huán)，尿素和腐胺參與精氨酸和脯氨酸的代謝。此外，煙酰胺是由煙酸形成的，煙酸是輔酶Ⅰ和輔酶Ⅱ的組成部分，參與脂質(zhì)代謝、組織呼吸氧化和糖的厭氧分解。

本研究表明益氣養(yǎng)陰法可顯著改善高血壓心衰大鼠心功能，減少代謝紊亂。SMI治療后，H-HF組代謝譜較治療前有明顯改變，超聲心動(dòng)圖和心肌血清生物標(biāo)志物也有明顯改變。SMI組大鼠糖和氨基酸水平均低于模型組。糖和氨基酸水平的改變表明，SMI通過(guò)促進(jìn)葡萄糖和氨基酸的利用，改善高血壓心衰的能量代謝。SMI被廣泛用于慢性心衰的治療[20]，但支持其靶點(diǎn)和機(jī)制的證據(jù)尚不清楚。本研究提示SMI可改善心功能，調(diào)節(jié)代謝紊亂，其治療心衰的作用與改善能量代謝有關(guān)，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)糖代謝、氨基酸代謝、乳酸代謝紊亂，從而改善能量代謝有關(guān)。本研究的結(jié)果對(duì)于闡述SMI治療高血壓心衰的分子機(jī)制具有重要的指導(dǎo)意義。

然而，由于本研究的局限性，進(jìn)一步的探索和更大的樣本量來(lái)描述這些代謝物是必要的。代謝組學(xué)為中醫(yī)藥理機(jī)制提供了新的見解，而代謝組學(xué)與其他“組學(xué)”（如蛋白質(zhì)組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)）的整合可能會(huì)有所幫助。

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〔收稿日期〕2022-06-05

〔基金項(xiàng)目〕國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（82274412）；廣東省重點(diǎn)領(lǐng)域研發(fā)項(xiàng)目（2020B1111100001）；湖南省中醫(yī)藥科研項(xiàng)目（B2023045）；長(zhǎng)沙市自然科學(xué)基金項(xiàng)目（kq2208185）。

〔第一作者〕李 ?琳，女，講師，研究方向：心血管疾病證本質(zhì)與診治規(guī)律。

〔通信作者〕*胡志希，男，教授，博士研究生導(dǎo)師，E-mail：515800272@qq.com。