王艷新，賈冠美，曹 朗，曹順義，張士宏

（保定市第二中心醫(yī)院，河北 保定 072750）

糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetes retinopathy, DR）是臨床中糖尿病引起的常見(jiàn)并發(fā)癥之一，可引起患者視力損傷和失明[1]。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（retinal ganglion cells, RGCs）是視神經(jīng)的重要組成部分，高糖環(huán)境下誘導(dǎo)RGCs凋亡是DR病程進(jìn)展的重要過(guò)程。RGCs的凋亡會(huì)引起視網(wǎng)膜毛細(xì)血管病變，致使患者失明[2-3]。因此亟需尋找安全有效、毒副作用低的治療藥物。當(dāng)歸多糖是提取自中藥當(dāng)歸的主要成分，具有抗氧化損傷、抗炎、降血糖、降血脂等藥理作用[4-5]，常用于治療視神經(jīng)損傷。研究表明，當(dāng)歸多糖可通過(guò)減少氧化應(yīng)激反應(yīng)，緩解青光眼大鼠視神經(jīng)損傷癥狀，但其作用機(jī)制尚不明確[6-7]。因此，本研究擬通過(guò)高糖處理的大鼠RGCs建立高糖損傷模型，檢測(cè)當(dāng)歸多糖對(duì)高糖損傷誘導(dǎo)的RGCs氧化應(yīng)激狀態(tài)的改善作用及其對(duì)凋亡情況的影響，旨在為當(dāng)歸多糖藥物開(kāi)發(fā)及臨床治療DR提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 細(xì)胞 SD大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞RGC-5購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海生科院細(xì)胞資源中心（BFN608006377）。

1.2 試劑 當(dāng)歸多糖（純度≥98%，西安金萃坊植物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，批號(hào)：20190517）；Nrf2信號(hào)通路抑制劑（ML385）（北京百奧萊博科技有限公司，批號(hào)：20211020）；MTT溶液（美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：M2128）；DMSO（美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：D2650）；丙二醛（malondialdehyde, MDA）ELISA試劑盒（批號(hào)：20200117）、超氧化物岐化酶（superoxide dismutase, SOD）ELISA試劑盒（批號(hào)：20191202）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）ELISA試劑盒（批號(hào)：20200109）均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；兔抗β-actin多克隆抗體（批號(hào)：#4970）、兔抗鼠凋亡蛋白B細(xì)胞淋巴瘤因子2（b-cell lymphoma factor 2, Bcl-2）多克隆抗體（批號(hào)：ab21726）、Bcl-2相關(guān)蛋白（bcl-2 related x protein, Bax）多克隆抗體（批號(hào)：ab32503）、Caspase-3（批號(hào)：ab184787）多克隆抗體、Caspase-9多克隆抗體（批號(hào)：ab182648）、山羊抗兔二抗IgG（批號(hào)：ab205718）均購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling公司；DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基（批號(hào)：M4530）、胎牛血清（批號(hào)：F8687）、0.25%胰蛋白酶（批號(hào)：T4049）均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。

1.3 主要儀器 SW-CJ2-1F型超凈工作臺(tái)（蘇州安泰技術(shù)有限公司）；BIOFUGE28RS型低溫高速離心機(jī)（德國(guó)HERAEUS公司）；7500型熒光定量PCR儀（美國(guó)ABI公司）。

2 方法

2.1 MTT檢測(cè)細(xì)胞存活情況 待RGC-5細(xì)胞復(fù)蘇、傳代后，收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度當(dāng)歸多糖對(duì)RGC-5細(xì)胞活力的影響。胰蛋白酶將細(xì)胞消化重懸，制備細(xì)胞濃度為1×104個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，接種至96孔板中，每孔約100 μL細(xì)胞懸液。每孔分別給予0、25、50、100、200、400 μmol/L的當(dāng)歸多糖處理細(xì)胞，放入37 ℃、含有5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。取出細(xì)胞，吸去培養(yǎng)液，向各孔加入MTT溶液（5mg/mL）20μL，繼續(xù)培養(yǎng)4h，再加入DMSO溶液150μL，溫和振蕩10 min。將96孔板置入酶標(biāo)儀中于（OD）波長(zhǎng)490 nm處檢測(cè)各孔吸光度值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。細(xì)胞存活率（%）=OD實(shí)驗(yàn)組/OD對(duì)照組×100%。

2.2 模型建立與分組 將RGC-5細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含有10%胎牛血清的普通DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，置于37 ℃、含有5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，生長(zhǎng)密度達(dá)到80%時(shí)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶消化重懸后用于實(shí)驗(yàn)。在RGC-5細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)加入50 mmol/L葡萄糖建立高糖損傷模型[8-9]，然后分為高糖組、當(dāng)歸多糖組和當(dāng)歸多糖+ML385組，另設(shè)對(duì)照組。當(dāng)歸多糖組使用100 μmol/L的當(dāng)歸多糖處理，當(dāng)歸多糖+ML385組使用100 μmol/L的當(dāng)歸多糖聯(lián)合20 μmol/L的ML385處理，高糖組使用50 mmol/L葡萄糖處理，對(duì)照組加入等量完全培養(yǎng)基。

2.3 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)活力 收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期RGC-5細(xì)胞，胰蛋白酶消化重懸后接種于96孔板中，每孔中細(xì)胞約1×104個(gè)，各組細(xì)胞加入相應(yīng)藥物進(jìn)行干預(yù)后，置于37 ℃、含有5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中48 h，棄去培養(yǎng)液，每孔加入CCK-8溶液10 μL，再于37 ℃培養(yǎng)箱孵育3 h。將96孔板置入全自動(dòng)酶標(biāo)儀中于450 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔吸光度值，計(jì)算細(xì)胞存活率。每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，結(jié)果取平均數(shù)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況 收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的RGC-5細(xì)胞，4 ℃預(yù)冷PBS溶液，使用預(yù)冷的PBS溶液重懸細(xì)胞制備細(xì)胞懸液，以每孔1×105個(gè)細(xì)胞接種于6孔板中，各組加入相應(yīng)藥物干預(yù)48 h。棄去原培養(yǎng)液，PBS溶液清洗2次，每孔加入Annexin V-FITC液5 μL，避光孵育10 min，離心重懸細(xì)胞后加入PI染液5 μL，避光孵育5 min。使用流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況。

2.5 氧化應(yīng)激水平檢測(cè) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞RGC-5進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，各組加入相應(yīng)藥物干預(yù)48 h后，用胰蛋白酶消化為細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液濃度調(diào)整為5×105個(gè)/mL。提前取出ELISA試劑盒，待試劑盒平衡至室溫后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。使用ELISA法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，檢測(cè)各組MDA、GSH-Px、SOD含量。使用酶標(biāo)測(cè)定儀于450 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。

2.6 RT-PCR檢測(cè)Akt mRNA、GSK-3β mRNA、Nrf2 mRNA表達(dá) 取各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期RGC-5細(xì)胞，加入相應(yīng)藥物干預(yù)48 h后棄去原培養(yǎng)液，加入適量TRIzol試劑裂解細(xì)胞，TRIzol沉淀法提取細(xì)胞總RNA，檢測(cè)各組細(xì)胞中蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）mRNA、糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3 β,GSK-3β）mRNA和核因子E2相關(guān)因子2（nuclear factor E2 and related factor 2, Nrf2）mRNA表達(dá)情況。紫外分光光度計(jì)檢測(cè)總RNA濃度并鑒定純度，反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。配制PCR反應(yīng)液：2×PrimeScript Enzyme Mix10μL，cDNA樣品2 μL，上、下游引物各1 μL，RNase Free ddH2O 6 μL。反應(yīng)程序設(shè)置為：94 ℃5 min，94 ℃30 s，59 ℃30 s，72 ℃30 s，共循環(huán)40次。反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)測(cè)得樣品的循環(huán)閾值（CT值），以2-△△CT法計(jì)算目的基因與內(nèi)參基因的相對(duì)表達(dá)量，比較各樣本之間基因表達(dá)差異。引物序列見(jiàn)表1。

表1 引物序列

2.7 Western blotting檢測(cè)Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達(dá) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期RGC-5細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，各組加入相應(yīng)藥物干預(yù)48 h后，TBS緩沖液清洗細(xì)胞2次，加入適當(dāng)體積細(xì)胞蛋白提取劑與蛋白酶抑制劑，作用3 min，期間反復(fù)搖晃培養(yǎng)板，使液體與細(xì)胞充分接觸。收集上清液，BCA試劑盒測(cè)定蛋白樣品濃度。確定蛋白上樣量，配制電泳SDS-PAGE凝膠與緩沖液，灌膠后加入蛋白樣品，電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)膠板下沿。準(zhǔn)備好轉(zhuǎn)膜濾紙，300 mA轉(zhuǎn)至PVDF膜，加入含有脫脂牛奶的封閉液室溫孵育2 h，除去封閉液，加入1∶1 000稀釋一抗4 ℃孵育過(guò)夜；室溫下TBST清洗3次后加入1∶3 000稀釋二抗，搖床封閉2 h。滴加ECL混合液暗室中避光顯色，曝光系統(tǒng)進(jìn)行顯影、定影，掃描膠片存檔，應(yīng)用圖像分析軟件觀察并分析相應(yīng)條帶。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料符合正態(tài)分布采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（x±s）表示，數(shù)據(jù)方差齊，多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 當(dāng)歸多糖對(duì)細(xì)胞活力的影響 MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度當(dāng)歸多糖（0、25、50、100、200、400 μmol/L）作用于RGC-5細(xì)胞后，各組細(xì)胞存活率均明顯降低，且呈現(xiàn)濃度依賴性（P<0.05）。25、50、100、200、400 μmol/L當(dāng)歸多糖組細(xì)胞存活率明顯低于0 μmol/L當(dāng)歸多糖組（P<0.05）。當(dāng)歸多糖作用于RGC-5細(xì)胞24 h的IC50約為100 μmol/L，所以后續(xù)實(shí)驗(yàn)當(dāng)歸多糖給藥濃度為100 μmol/L。（見(jiàn)表2）

表2 各組細(xì)胞存活率比較 （±s）

表2 各組細(xì)胞存活率比較 （±s）

注：與0 μmol/L當(dāng)歸多糖組比較，aP<0.05；與25 μmol/L當(dāng)歸多糖組比較，bP＜0.05；與50 μmol/L當(dāng)歸多糖組比較，cP＜0.05；與100 μmol/L當(dāng)歸多糖組比較，dP＜0.05；與200 μmol/L當(dāng)歸多糖組比較，eP＜0.05。

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3.2 各組細(xì)胞活力比較 高糖組細(xì)胞活力低于對(duì)照組（P<0.05），當(dāng)歸多糖組細(xì)胞活力高于高糖組（P<0.05），當(dāng)歸多糖+ML385組細(xì)胞活力低于當(dāng)歸多糖組（P<0.05）。（見(jiàn)表3）

表3 各組細(xì)胞活力比較 （±s）

表3 各組細(xì)胞活力比較 （±s）

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與高糖組比較，bP＜0.05；與當(dāng)歸多糖組比較，cP＜0.05。

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3.3 各組細(xì)胞凋亡情況比較 高糖組細(xì)胞凋亡率高于對(duì)照組（P<0.05），當(dāng)歸多糖組細(xì)胞凋亡率低于高糖組（P<0.05），當(dāng)歸多糖+ML385組細(xì)胞凋亡率高于當(dāng)歸多糖組（P<0.05）。（見(jiàn)表4、圖1）

圖1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況

表4 各組細(xì)胞凋亡率比較 （±s）

表4 各組細(xì)胞凋亡率比較 （±s）

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與高糖組比較，bP＜0.05；與當(dāng)歸多糖組比較，cP＜0.05。

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3.4 各組細(xì)胞氧化應(yīng)激水平比較 高糖組細(xì)胞MDA含量高于對(duì)照組，GSH-Px、SOD含量低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；當(dāng)歸多糖組細(xì)胞MDA含量低于高糖組，GSH-Px、SOD含量高于高糖組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；當(dāng)歸多糖+ML385組細(xì)胞MDA含量高于當(dāng)歸多糖組，GSH-Px、SOD含量低于當(dāng)歸多糖組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（見(jiàn)表5）

表5 各組細(xì)胞氧化應(yīng)激水平比較 （±s）

表5 各組細(xì)胞氧化應(yīng)激水平比較 （±s）

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與高糖組比較，bP＜0.05；與當(dāng)歸多糖組比較，cP＜0.05。

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3.5 各組細(xì)胞Akt mRNA、GSK-3β mRNA、Nrf2 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較 高糖組細(xì)胞Akt mRNA、GSK-3β mRNA相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組，Nrf2 mRNA相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；當(dāng)歸多糖組細(xì)胞Akt mRNA、GSK-3β mRNA相對(duì)表達(dá)量低于高糖組，Nrf2 mRNA相對(duì)表達(dá)量高于高糖組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；當(dāng)歸多糖+ML385組細(xì)胞Akt mRNA、GSK-3β mRNA相對(duì)表達(dá)量高于當(dāng)歸多糖組，Nrf2 mRNA相對(duì)表達(dá)量低于當(dāng)歸多糖組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（見(jiàn)表6）

表6 各組細(xì)胞Akt mRNA、GSK-3β mRNA、Nrf2 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較 （±s）

表6 各組細(xì)胞Akt mRNA、GSK-3β mRNA、Nrf2 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較 （±s）

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與高糖組比較，bP＜0.05；與當(dāng)歸多糖組比較，cP＜0.05。

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3.6 各組細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 高糖組細(xì)胞Bcl-2蛋白相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組，Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；當(dāng)歸多糖組細(xì)胞Bcl-2蛋白相對(duì)表達(dá)量高于高糖組，Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白相對(duì)表達(dá)量低于高糖組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；當(dāng)歸多糖+ML385組細(xì)胞Bcl-2蛋白相對(duì)表達(dá)量低于當(dāng)歸多糖組，Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白相對(duì)表達(dá)量高于當(dāng)歸多糖組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（見(jiàn)表7、圖2）

圖2 各組細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)Western blotting 圖

表7 各組細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 （±s）

表7 各組細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 （±s）

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與高糖組比較，bP＜0.05；與當(dāng)歸多糖組比較，cP＜0.05。

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4 討論

DR的發(fā)病和進(jìn)展過(guò)程是多細(xì)胞因子參與的過(guò)程；主要原因?yàn)樯窠?jīng)細(xì)胞長(zhǎng)期處于高糖微環(huán)境中，造成視網(wǎng)膜氧化應(yīng)激嚴(yán)重，導(dǎo)致視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡；其中信號(hào)傳導(dǎo)代謝酶、氧化應(yīng)激因子、離子通道和炎癥因子均發(fā)揮著重要調(diào)控作用[10-11]。近年來(lái)，研究表明，在DR的發(fā)病過(guò)程中，RGCs凋亡的主要因素可通過(guò)影響細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平，調(diào)控RGCs的細(xì)胞凋亡信號(hào)通路控制凋亡相關(guān)基因表達(dá)，從而導(dǎo)致RGCs凋亡[12]。因此，研究RGCs的細(xì)胞凋亡機(jī)制，尋找作用靶點(diǎn)對(duì)DR臨床治療有著重大意義。

當(dāng)歸多糖為中藥當(dāng)歸的水溶提取物，可以改善機(jī)體造血功能，提高免疫力，具有較強(qiáng)的抗氧化作用[13-15]。研究表明，當(dāng)歸多糖對(duì)視網(wǎng)膜缺血-再灌注的大鼠神經(jīng)節(jié)細(xì)胞具有保護(hù)作用，能大幅度縮短視力恢復(fù)時(shí)間，提示當(dāng)歸多糖對(duì)RGCs具有保護(hù)作用[16-17]。因此，本研究通過(guò)采用不同濃度當(dāng)歸多糖處理體外培養(yǎng)的RGC-5細(xì)胞，探討當(dāng)歸多糖對(duì)高糖誘導(dǎo)的RGC-5細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果顯示，在MTT實(shí)驗(yàn)中，采用不同濃度的當(dāng)歸多糖（0、25、50、100、200、400 μmol/L）作用于RGC-5細(xì)胞后，各組細(xì)胞存活率均明顯降低，且呈現(xiàn)濃度依賴性。當(dāng)歸多糖作用于RGC-5細(xì)胞24 h的IC50約為100 μmol/L，所以后續(xù)實(shí)驗(yàn)當(dāng)歸多糖給藥濃度為100 μmol/L。當(dāng)歸多糖組細(xì)胞活力明顯高于高糖組，且細(xì)胞凋亡率低于高糖組，而當(dāng)歸多糖+ML385組細(xì)胞活力低于當(dāng)歸多糖組，且細(xì)胞凋亡率高于當(dāng)歸多糖組。表明當(dāng)歸多糖能抑制高糖誘導(dǎo)的RGC-5細(xì)胞凋亡，對(duì)RGC-5細(xì)胞具有保護(hù)作用，而當(dāng)歸多糖對(duì)RGC-5細(xì)胞的保護(hù)作用會(huì)受到Nrf2通路抑制劑的影響。

當(dāng)歸多糖組細(xì)胞MDA含量低于高糖組，GSH-Px、SOD含量高于高糖組，而當(dāng)歸多糖+ML385組細(xì)胞MDA含量高于當(dāng)歸多糖組，GSH-Px、SOD含量低于當(dāng)歸多糖組。表明當(dāng)歸多糖能抑制RGC-5細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平，對(duì)RGC-5細(xì)胞具有保護(hù)作用，而當(dāng)歸多糖對(duì)RGC-5細(xì)胞的保護(hù)作用會(huì)受到Nrf2通路抑制劑的影響。

Akt/GSK-3β信號(hào)通路在細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和分化過(guò)程中進(jìn)行調(diào)控，是影響RGCs凋亡的典型信號(hào)通路[18-19]。當(dāng)RGC-5細(xì)胞受到高糖環(huán)境的刺激時(shí)，異常的氧化應(yīng)激水平可激活細(xì)胞質(zhì)中靜息狀態(tài)的Akt[20]。Akt激活后與GSK-3β區(qū)域中相應(yīng)受體結(jié)合，并從細(xì)胞膜轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核中，由磷酸化作用激活或抑制其下游抗氧化元件Nrf2和凋亡/抑凋亡蛋白的表達(dá)水平（包括抑凋亡蛋白Bcl-2和凋亡蛋白Bax、Caspase-3、Caspase-9），從而影響細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)與凋亡進(jìn)程[21-22]。此外，Akt/GSK-3β信號(hào)通路還可參與細(xì)胞生命活動(dòng)，如葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)與蛋白質(zhì)的合成[23]。在糖尿病的進(jìn)一步發(fā)展過(guò)程中，持續(xù)的高糖環(huán)境會(huì)活化Akt/GSK-3β信號(hào)通路，進(jìn)而引起多種細(xì)胞因子的合成與釋放，導(dǎo)致DR進(jìn)一步惡化[24-25]。本研究結(jié)果表明，當(dāng)歸多糖組Nrf2 mRNA相對(duì)表達(dá)量高于高糖組，Akt mRNA、GSK-3β mRNA相對(duì)表達(dá)量均低于高糖組；當(dāng)歸多糖組Bcl-2蛋白相對(duì)表達(dá)量高于高糖組，Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白相對(duì)表達(dá)量均低于高糖組。當(dāng)歸多糖+ML385組Nrf2 mRNA相對(duì)表達(dá)量低于當(dāng)歸多糖組，Akt mRNA、GSK-3β mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于當(dāng)歸多糖組；當(dāng)歸多糖+ML385組Bcl-2蛋白相對(duì)表達(dá)量低于當(dāng)歸多糖組，Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白相對(duì)表達(dá)量均高于當(dāng)歸多糖組。表明當(dāng)歸多糖能抑制高糖誘導(dǎo)的RGC-5細(xì)胞凋亡，對(duì)RGC-5細(xì)胞具有保護(hù)作用，然而在給予了Nrf2通路抑制劑后，當(dāng)歸多糖的抑凋亡作用受到阻滯，表明當(dāng)歸多糖對(duì)RGC-5細(xì)胞的保護(hù)作用會(huì)受到Nrf2通路抑制劑的影響。

綜上所述，當(dāng)歸多糖對(duì)高糖誘導(dǎo)的RGC-5細(xì)胞凋亡有一定的抑制作用，能降低細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平，可能機(jī)制為阻滯Akt/GSK-3β通路，提高細(xì)胞內(nèi)抗氧化Nrf2表達(dá)水平。