周佳妮 徐玉輝 覃愛桃 楊德泉

【摘 要】 目的：研究苗藥芮博期藥材的質(zhì)量標準。方法：采用薄層色譜法對芮博期藥材進行定性鑒別；按《中國藥典》2020年版方法檢測水分、總灰分；采用液相色譜法測定芮博期藥材中血根堿的含量。結(jié)果：薄層色譜斑點清晰，苗藥芮博期藥材中鹽酸血根堿和白屈菜紅堿分離效果好；水分平均值9.88%，總灰分平均值6.87%；鹽酸血根堿在0.1450～0.7033mg/mL濃度范圍內(nèi)線性良好（r=0.9998），平均加樣回收率（n=3）結(jié)果為96.00%、95.71%、99.23%。結(jié)論：研究建立的質(zhì)量標準方法可用于苗藥芮博期的質(zhì)量控制和質(zhì)量評價。

【關(guān)鍵詞】苗藥；芮博期；顯微鑒別；含量測定；鹽酸血根堿

【中圖分類號】R29 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2023）11-0024-05

Abstract：Objective Study on the quality standard of Miao medicine Eomecon Chionantha.Methods Thin layer chromatography（TLC）was used to identifyEomecon Chionantha;Water content and total ash were detected according to themethod of Chinese Pharmacopoeia 2020 edition;The content of sanguine in Eomecon Chionantha was determined by liquid chromatography.Results TLC spots were clear，and the separation effect of hemagarine hydrochloride and chelidonine from Eomecon Chionantha was good;The average moisture content was 9.88% and total ash content was 6.87%;The linearity was good in the concentration range of 0.1450-0.7033mg/mL（r=0.9998），The averagerecoveries（n=3）were 96.00%，95.71% and 99.23%.Conclusion The quality standard method established in this study can be used for the quality control and quality evaluation of seedling medicine Eomecon Chionantha.

Keywords：Miao Nationality Herbal;Eomecon Chionantha;Microscopic Identification;Content Determination;Sanguinarine Hydrochloride

苗藥芮博期［1］，為罌粟科植物血水草Eomecon Chionantha Hance的全草?！断嫖髅缢巺R編》載名一口血，苗語名阿乎采［2］。苗族醫(yī)藥理論認為：芮博期性冷味苦，具有清熱解毒、活血止痛、止血功效。主治目赤腫痛、咽喉疼痛、口腔潰瘍、疔瘡腫毒、毒蛇咬傷、癬瘡、濕疹、跌打損傷、腰疼、咳血。芮博期含血根堿、白屈菜紅堿、β-香樹脂醇乙酸脂、博落回堿等成分［3-5］。藥理研究［6］表明，芮博期具有抗菌抑菌和殺釘滅螺功能作用；血根堿具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、改善肝功能及誘導細胞凋亡、殺蟲等作用［7-20］；白屈菜紅堿具有抑菌、抗炎、抗腫瘤、抗化學性大鼠肝纖維化作用及減輕糖尿病大鼠腎缺血再灌注遠程心肌損傷、改善心肌功能作用［21-31］；血根堿對肝臟、心臟等具有一定的毒性，血根堿和白屈菜紅堿對HBsAg、HBeAg和HBV DNA復(fù)制具有較高的抑制活性，但細胞毒性較高［32-33］。劉年猛等［34］報道了其生藥學研究。芮博期藥材，目前尚無質(zhì)量標準。為合理、安全、有效應(yīng)用民族藥，筆者研究了芮博期藥材質(zhì)量標準，報道如下。

1 儀器、試藥和樣品

1.1 儀器 尼康顯微鏡Nikon SMZ745T TCA-5.0C；RMZ126RT型石臘切片機［徠卡顯微系統(tǒng)（上海）有限公司］；OLYMPUS電動顯微鏡BX61（日本）；液相色譜儀Agilent 1260Ⅱ，色譜柱Agilent C18（250mm ×4.6mm×5μm，編號 588905-902Agilent公司）；島津LC-20AT，色譜柱YMC C18（250mm×4.6mm×5μm，編號HS12S05-2546WT，YMC公司）；ML304-T 電子天平；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；202 型電熱恒溫干燥箱；YB-Z真空恒溫干燥箱；ZOOMWO超純水機；超聲波振蕩器；雙槽層析缸。

1.2 試藥和樣品 硅膠G薄層板：10cm×20cm，德國化工技術(shù)（上海）有限公司產(chǎn)品、青島海洋化工廠分廠產(chǎn)品。FAA固定液、TO型生物透明劑、無水乙醇、乙醇、二甲苯、中性樹脂、切片石臘、番紅、亮綠、水合氯醛溶液、甲苯、甲醇、磷酸氫二銨、硝酸銨為分析純，甲醇為色譜純，水為自制超純水。

對照品均購自中國食品藥品檢定研究院，鹽酸血根堿（批號510001-201101，純度99.3%），白屈菜紅堿（批號111718-201402），均40℃、P2O5真空干燥24h。芮博期藥材10批采自湘西土家族苗族自治州吉首市乾州街道社塘坡村和鳳凰縣禾庫鎮(zhèn)米良村，經(jīng)湘西自治州食品藥品檢驗所楊德泉主任藥師鑒定為罌粟科植物血水草Eomecon Chionantha Hance的全草。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒別 根及根莖呈細圓柱形，彎曲或扭曲，長20～50cm，直徑1～6mm，少分枝，表面皺縮，棕褐色，有細縱紋，近基生葉，端頭大節(jié)密，長2～3cm， 直徑4～8mm，殘存葉柄或葉柄痕，被棕褐色鱗葉，具細須根，稍扁黑褐色。其他根莖部分節(jié)間長，節(jié)上具細須根或根痕、芽或芽痕，有時可見殘存鱗葉。易折斷，斷面不平坦，米黃色，具棕黃色斑點，排列成環(huán)狀，氣微，味苦而微麻（如圖1）。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 根莖的橫切面 呈圓形或橢圓形，由表皮、皮層、內(nèi)皮層、維管束組成，表皮細胞形態(tài)不規(guī)則，較小，細胞壁稍增厚。皮層由眾多薄壁細胞組成， 薄壁細胞中含淀粉粒。內(nèi)皮層明顯，外韌型維管束數(shù)個， 韌皮部窄，形成層不明顯，木質(zhì)部圓形，導管較多，近圓形，直徑10～60μm皮層髓部中均有乳管分布（如圖2）。

2.2.2 薄層色譜鑒別 取芮博期粉末（過3號篩）1g，加乙醇50mL，超聲處理1h，濾過，濾液作為供試品溶液。另取鹽酸血根堿、白屈菜紅堿對照品，分別加無水乙醇制成0.2mg/mL的對照品溶液；再分別取鹽酸血根堿和白屈菜紅堿對照品溶液，按（1∶1）比例混合，制成0.1mg/mL的鹽酸血根堿和白屈菜紅堿混合對照品溶液。吸取芮博期供試品溶液、鹽酸血根堿對照品溶液、白屈菜紅堿對照品溶液各5μL，鹽酸血根堿和白屈菜紅堿混合對照品溶液5μL點樣于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-甲醇（15∶1）為展開劑，在展開槽中，放置一小杯氨水，預(yù)平衡30min，展開，取出，晾干，在365nm紫外燈光下檢視。供試品色譜圖中，供試品溶液所顯斑點的位置與顏色與對照品溶液在相對應(yīng)的位置上所顯顏色斑點和熒光斑點相同（如圖3）。

2.3 檢查

2.3.1 水分 取芮博期藥材樣品10份，每份約2g，照水分測定法（《中國藥典2020年版四部》通則0832）測定，如表1所示，10批芮博期藥材水分含量為9.03%～10.93%，平均值9.88%，按平均值的120%設(shè)置水分限度，為11.86%，建議水分限度訂為：應(yīng)不得過12.00%。

2.3.2 總灰分 取芮博期藥材粉末（過3號篩）10份，每份約2 g，照灰分測定法（《中國藥典2020年版 四部》通則2302）測定。如表2所示，10批芮博期藥材的總灰分含量為6.62%～7.17%，平均值為6.87%，按平均值的120%設(shè)置總灰分限度，為8.2%，建議總灰分限度訂為：應(yīng)不得過9.0%。

2.4 含量測定

2.4.1 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸血根堿對照品5.68mg，于20mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度作為對照品溶液，其濃度為0.284mg/mL。

2.4.2 供試品溶液的制備 精密稱取本品粉末（過3號篩）約2g，置150mL具塞錐形瓶中，加乙醇100mL，超聲提取1 h，濾過，將濾液轉(zhuǎn)置100mL雞心瓶中，在55℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，減壓濃縮至乙醇揮盡后，用甲醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移定容至100mL量瓶中，搖勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

2.4.3.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：甲醇（A）-0.028mol/L （NH4）2HPO4（用磷酸調(diào)pH7.5）（B），梯度洗脫（0～28min，5%～100%A）；檢測波長320nm；流速1.0mL/min；進樣量10μL。

2.4.3.2 系統(tǒng)適用性試驗 取“2.4.1”項下溶液，按“2.4.3.1”色譜條件測定，鹽酸血根堿色譜峰的理論板數(shù)為576993，分離度為12.3，均符合要求。取“2.4.2”項下溶液測定，供試品色譜中，在與對照品色譜峰相應(yīng)位置上檢出色譜峰。對照品、供試品色譜圖。如圖4、圖5所示。

2.4.4 線性關(guān)系 考察精密量取2.4.1項的對照品溶液5μL、10μL、15μL、20μL、25μL作為各級別濃度的對照品溶液。測定，以峰面積為縱坐標，濃度（mg/mL）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程為Y=19799X+129.98（R=0.9998，n=6）。表明樣品在0.1450～0.7033mg/mL 的濃度范圍內(nèi)線性良好。

2.4.5 回收率試驗 精密稱定鹽酸血根堿對照品14.43mg，置50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，作為對照品溶液。按80%、100%、120%濃度分別加入鹽酸血根堿對照品溶液，按2.4.2項方法制備供試液，各濃度平行制備3份，測得樣品中回收率平均值（n=3）結(jié)果：鹽酸血根堿為96.00%、95.71%、99.23%，RSD分別為1.11%、1.05%、1.43%。詳見表3。

2.4.6 重復(fù)性試驗 取同批均質(zhì)樣品連續(xù)取樣6 份，每份約2g，按照2.4.2項制備供試品溶液，照2.4.3項測定每份樣品含量，計算相對標準偏差（RSD），RSD為1.28%。

2.4.7 精密度試驗 精取2.4.2項下供試品溶液各10μL，平行測定6次，記錄峰面積，計算得RSD為0.41%。

2.4.8 耐用性試驗 分別用液相色譜儀（1）Agilent 1260Ⅱ，色譜柱Agilent C18（250mm×4.6mm×5μm，編號 588905-902Agilent公司）和（2）LC-20AT，色譜柱YMC C18（250 mm×4.6 mm×5μm，編號HS12S05-2546WT， YMC公司），理論塔板數(shù)按鹽酸血根堿計，均能達到5000以上，鹽酸血根堿含量測定值RSD為 0.59%。結(jié)果表明，本方法耐用性良好。

2.4.9 穩(wěn)定性試驗 精密稱取芮博期藥材粉末（過3號篩）2.0614 g，按2.4.2項制備供試品溶液，照2.4.3項分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、16 h進行測定，記錄峰面積，計算得RSD為0.42%，表明在16 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4.10 樣品測定 精稱10批芮博期藥材粉末各2.0g，依2.4.2項下方法制備供試品溶液，按2.4.3項下方法測定，測得10批芮博期藥材中鹽酸血根堿的含量。同時測定樣品水分。結(jié)果見表4。10批芮博期藥材中鹽酸血根堿含量為1.3370%～1.4187%，平均值為1.3884%，按平均值的80%設(shè)置含量限度，為1.11%，建議含量測定限度訂為：本品按干燥品計算，含鹽酸血根堿應(yīng)不少于1.00%。

3 討論

3.1 薄層色譜鑒別展開劑的選擇 本研究考察了四種展開系統(tǒng)：①甲苯-甲醇-氨水（24∶1∶0.05）；②氯仿-二甲苯-甲醇-氨水（50∶10∶1∶0.1）；③氯仿-甲醇（15∶1）；④甲苯-甲醇（15∶1）。結(jié)果以④展開劑效果最佳，故選擇甲苯-甲醇（15∶1）為芮博期藥材中血根堿、白屈菜紅堿同時鑒別的展開劑，建立薄層色譜鑒別方法。

3.2 指標性成分和梯度洗脫流動相比例的選擇 血根堿的抗菌、抗炎、抗腫瘤、改善肝功能及殺蟲等藥理作用，與芮博期主治目赤腫痛、咽喉疼痛、口腔潰瘍、疔瘡腫毒、毒蛇咬傷、癬瘡、濕疹等臨床應(yīng)用，具有相關(guān)性，故選擇血根堿作為芮博期含量測定指標性成分。選擇流動相為甲醇（A）0.028mol/L （NH4）2HPO4（用磷酸調(diào)pH 7.5），（B）梯度洗脫（0～28min，5%～100%A）的比例，鹽酸血根堿峰形最佳，分離大于1.5。本方法重復(fù)性好，準確、簡便、快速。

4 結(jié)論

芮博期是湘西苗族常用藥物，本研究通過對芮博期藥材的性狀、顯微、薄層色譜、水分和總灰分、含量測定等項目研究，建立了質(zhì)量標準方法，該方法可用于苗藥芮博期的質(zhì)量控制和質(zhì)量評價，為建立芮博期藥材標準提供科學依據(jù)。血根堿的藥理活性與苗醫(yī)臨床應(yīng)用相符合，作為芮博期標準指標性成分，將該藥質(zhì)量評價模式與標準關(guān)聯(lián)，為臨床應(yīng)用提供了科學理論支撐。

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（收稿日期：2022-10-18 編輯：劉 斌）