譚正瑩，龔會(huì)琴，楊鴻波，代前沖

(1.貴州省分析測(cè)試研究院，貴陽 550000；2.貴州醫(yī)科大學(xué) 公共衛(wèi)生學(xué)院 環(huán)境污染與疾病監(jiān)控教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽 550025，3.貴州省檢測(cè)技術(shù)研究應(yīng)用中心，貴陽 550000)

戊唑醇(tebuconazole)是由德國拜耳公司開發(fā)、生產(chǎn)的一種高效、廣譜、內(nèi)吸性三唑類殺菌劑，其可抑制病原菌麥角甾醇的生物合成，從而影響病原菌細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，達(dá)到抑制病原菌生長發(fā)育的作用。戊唑醇主要通過種子處理或葉面噴灑等施用方式用于防治銹病、根腐病、白粉病和黑穗病等多種病害[1]。肟菌酯(trifloxystrobin)是由諾華公司研制、拜耳公司開發(fā)的具有高效、低毒、廣譜特性的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，是一種呼吸作用抑制劑[2]。肟菌酯能有效控制真菌病害，對(duì)子囊菌、半知菌、擔(dān)子菌、卵菌等多個(gè)綱的真菌有效，可以防治銹病、稻瘟病和白粉病等多種真菌病害[3]。按適當(dāng)比例將戊唑醇和肟菌酯進(jìn)行復(fù)配使用，不僅可以提高殺菌效果，同時(shí)還可降低病害對(duì)單一有效成分的抗性風(fēng)險(xiǎn)。

目前有關(guān)戊唑醇和肟菌酯單劑或與其他有效成分復(fù)配而成的制劑的分析方法報(bào)道較多，主要包括液相色譜法[410]和氣相色譜法[1113]，但戊唑醇和肟菌酯的復(fù)配制劑僅有水分散粒劑劑型的分析方法報(bào)道[10,13]，2 者復(fù)配的懸浮劑劑型的分析方法研究尚屬空白，本文建立了高效液相色法同時(shí)測(cè)定30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑中有效成分的分析方法，方法具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、快速準(zhǔn)確等特點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 試劑

甲醇(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技有限公司，色譜純)；超純水(實(shí)驗(yàn)室自制，電阻率18.2 MΩ×cm，25 ℃)；戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)品(上海市農(nóng)藥研究所有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.6%)；肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)品(國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.2%)；30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑(浙江中山化工集團(tuán)股份有限公司，戊唑醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%、肟菌酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%)；0.45 μm 有機(jī)濾膜(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技有限公司)。

1.2 儀器

島津LC 2030C 3D Plus，具有PDA 檢測(cè)器(島津公司)；XSE205DU 型電子天平(梅特勒 托利多公司)；明澈超純水制備系統(tǒng)(默克公司)；液相色譜柱：ZORBAX SB C18(安捷倫公司，250 mm×4.6 mm，5 μm)。

1.3 液相色譜操作條件

進(jìn)樣體積：5 μL；檢測(cè)波長：230 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；運(yùn)行時(shí)間：15 min；流動(dòng)相：甲醇+水=80+20(體積比)。在上述色譜條件下，戊唑醇保留時(shí)間約為6.3 min，肟菌酯保留時(shí)間約為7.7 min。

上述操作條件是典型操作參數(shù)，可根據(jù)不同儀器特點(diǎn)，對(duì)給定的操作參數(shù)作適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果。戊唑醇和肟菌酯標(biāo)樣色譜圖見圖1，30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑色譜圖見圖2。

圖1 戊唑醇和肟菌酯標(biāo)樣色譜圖

圖2 30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑色譜圖

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制

分別稱取0.078 48 g 戊唑醇標(biāo)樣和0.040 64 g 肟菌酯標(biāo)樣于同一50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，得到戊唑醇和肟菌酯質(zhì)量濃度分別為1 563.32、806.30 mg/L 的混合標(biāo)樣母液；分別移取上述母液0.5、1.0、2.5、5.0 mL 置于4 個(gè)10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，得到系列梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取約含0.02 g 戊唑醇的30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑試樣于50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，過膜待測(cè)。

1.4.3 測(cè)定

在1.3 節(jié)儀器操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2 針戊唑醇(肟菌酯)峰面積響應(yīng)值相對(duì)變化小于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.4.4 計(jì)算

將測(cè)得的2 針試樣溶液以及試樣前后2 針標(biāo)樣溶液中目標(biāo)物(戊唑醇、肟菌酯)峰面積進(jìn)行平均，試樣中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X1(%)按下式計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中目標(biāo)物峰面積的平均值；A2為試樣溶液中目標(biāo)物峰面積的平均值；m1為標(biāo)樣的質(zhì)量(g)；m2為試樣的質(zhì)量(g)；ω1為標(biāo)樣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 特異性測(cè)定

采用HPLC PDA 進(jìn)行掃描測(cè)定，戊唑醇和肟菌酯的最小峰純度均大于2 個(gè)峰的最小峰純度閾值，表明2 個(gè)峰在此區(qū)域具有光譜一致性，峰純度滿足試驗(yàn)需求，色譜峰純度圖見圖3。

圖3 30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑中戊唑醇和肟菌酯峰純度圖譜

2.2 分析方法的線性相關(guān)性

按1.3 節(jié)儀器操作條件對(duì)1.4.1 節(jié)中配制的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行分析測(cè)定。以戊唑醇質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，戊唑醇峰面積為縱坐標(biāo)，得戊唑醇線性方程為y=9 502x+116 725，R2=0.999 2；以肟菌酯質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，肟菌酯峰面積為縱坐標(biāo)，得肟菌酯線性方程為y=43 183x-7 091，R2=0.999 9。表明戊唑醇和肟菌酯在對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.3 分析方法的精密度

從同一懸浮劑產(chǎn)品中準(zhǔn)確稱取5 個(gè)試樣，按1.3節(jié)儀器操作條件進(jìn)行分析測(cè)定，測(cè)得戊唑醇和肟菌酯的變異系數(shù)分別為0.48%和0.50%，表明分析方法的精密度良好，見表1。

表1 分析方法的精密度測(cè)定

2.4 分析方法的準(zhǔn)確度

從已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑中稱取5 個(gè)試樣，分別加入一定量的戊唑醇和肟菌酯標(biāo)樣，按1.3 節(jié)儀器操作條件進(jìn)行分析測(cè)定，測(cè)得戊唑醇和肟菌酯的平均回收率分別為100.4%和100.3%，表明分析方法的準(zhǔn)確度良好，見表2、3。

表2 戊唑醇準(zhǔn)確度測(cè)定

表3 肟菌酯準(zhǔn)確度測(cè)定

3 結(jié) 論

本文建立了一種同時(shí)檢測(cè)30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑中有效成分的分析方法。戊唑醇和肟菌酯在測(cè)試質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法精密度和準(zhǔn)確度高，說明該方法具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、快速準(zhǔn)確等特點(diǎn)，是檢測(cè)30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑中有效成分含量的理想方法。