楊婕琳, 王曉媛, 高會(huì)斌, 杜 光

1.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院 消化內(nèi)科,河北 張家口 075000;2.北部戰(zhàn)區(qū)空軍醫(yī)院 健康管理科,遼寧 沈陽 110092

結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)是一種常見的消化道惡性腫瘤,我國CRC的粗發(fā)病率為29.51/10萬,粗病死率為14.14/10萬,分別排名惡性腫瘤的第2、4位[1]。目前,CRC的發(fā)病機(jī)制仍未完全明確,主流研究認(rèn)為CRC發(fā)病的主要分子機(jī)制包括Wnt/β-catenin通路、血管內(nèi)皮生長因子通路、法尼醇X受體信號(hào)傳導(dǎo)及核因子-κB信號(hào)通路等[2]。隨著CRC治療手段的不斷發(fā)展,CRC患者的5年存活率逐漸提高,Ⅰ期CRC患者術(shù)后5年存活率達(dá)90%,Ⅱ期患者5年存活率>60%,而Ⅲ期患者5年存活率>30%[3]。部分Ⅱ期及Ⅲ期患者在治療后有較高的復(fù)發(fā)率及轉(zhuǎn)移率,因此,準(zhǔn)確地預(yù)測CRC患者術(shù)后復(fù)發(fā)情況意義重大。硫氧還蛋白(thioredoxin,TRX)系統(tǒng)由TRX、硫氧還蛋白還原酶及還原型輔酶Ⅱ組成,可調(diào)節(jié)細(xì)胞氧化還原狀態(tài),是人類細(xì)胞中重要的抗氧化蛋白[4]。有研究表明,TRX系統(tǒng)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、凋亡過程關(guān)系密切[5]。硫氧還蛋白相互作用蛋白(trx-interacting protein,TXNIP)屬于硫氧還蛋白結(jié)合蛋白的家族成員,通過抑制硫氧還蛋白系統(tǒng)的功能發(fā)揮介導(dǎo)氧化應(yīng)激、抑制細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等作用[6]。TXNIP作為一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因,是判斷腫瘤預(yù)后的重要指標(biāo)[7]。目前,TRX系統(tǒng)及TXNIP對(duì)CRC術(shù)后復(fù)發(fā)預(yù)測價(jià)值的相關(guān)研究較少。本研究旨在探討TRX、TXNIP對(duì)CRC患者術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取自2017年1月至2020年12月河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科收治的87例CRC患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):符合《中國原發(fā)性結(jié)直腸癌規(guī)范診療質(zhì)量控制指標(biāo)(2022版)》[8]中關(guān)于CRC的診斷標(biāo)準(zhǔn),并經(jīng)過病理檢查確認(rèn);腫瘤臨床病理(tumor node metastasis,TNM)分期Ⅱ～Ⅲ期;臨床資料完整;初診,未接受過抗腫瘤治療;未發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移;對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):合并其他惡性腫瘤;心、肝、腎功能嚴(yán)重受損;罹患潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病及其他急慢性結(jié)腸炎;罹患嚴(yán)重心腦血管疾病及血液疾病;依從性差。根據(jù)有無復(fù)發(fā)將患者分為復(fù)發(fā)組(n=55)與未復(fù)發(fā)組(n=32)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批(K2020197)。

1.2 研究方法

1.2.1 資料收集 收集患者的一般資料,包括年齡、性別、TNM分期、組織學(xué)類型、腫瘤部位、腫瘤直徑、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。

1.2.2 TRX及TXNIP檢測 將患者于術(shù)中取下的癌組織樣本進(jìn)行切片、脫蠟、水化,采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法檢測TRX和TXNIP的表達(dá)。操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。由兩名病理科醫(yī)師隨機(jī)挑選5個(gè)完成染色的標(biāo)本,在高倍鏡視野下進(jìn)行判讀,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞。染色強(qiáng)度評(píng)分[9]:0分為未著色,1分為淺黃色或黃色,2分為棕黃色,3分為棕色或棕褐色;染色范圍評(píng)分:0分為無陽性細(xì)胞,1分為染色范圍≤10%,2分為10%～50%,3分為染色范圍≥51%。以染色強(qiáng)度和范圍的兩項(xiàng)乘積作為表達(dá)強(qiáng)度的結(jié)果,TRX和TXNIP表達(dá)強(qiáng)度的總分≥4分為高表達(dá),總分<4分為低表達(dá)。

1.2.3 隨訪 所有患者均隨訪1年。隨訪終點(diǎn)為患者因CRC死亡。隨訪方式為電話、微信、查閱病歷、門診復(fù)查。隨訪時(shí)間為術(shù)后的第3、6、9、12個(gè)月。隨訪內(nèi)容為患者的生存、復(fù)發(fā)情況。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般資料比較 復(fù)發(fā)組TNM分期Ⅲ期比例、分化程度低分化比例、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比例、TRX均高于未復(fù)發(fā)組,TXNIP低于未復(fù)發(fā)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者一般資料比較/例(百分率/%)

2.2 多因素Logistic回歸分析結(jié)果 多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示,TNM分期Ⅲ期、分化程度高分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TRX高表達(dá)、TXNIP低表達(dá)是CRC復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表2。

表2 多因素Logistic回歸分析結(jié)果

2.3 ROC曲線分析結(jié)果 TRX、TXNIP聯(lián)合預(yù)測CRC復(fù)發(fā)的ROC曲線下面積為0.867,高于TRX、TXNIP單獨(dú)檢測,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3、圖1。

圖1 TRX、TXNIP預(yù)測CRC復(fù)發(fā)的ROC曲線

表3 ROC曲線分析結(jié)果

3 討論

腫瘤細(xì)胞均存在細(xì)胞內(nèi)氧化還原體系失衡,這是由于各種原因?qū)е聶C(jī)體氧化應(yīng)激,于體內(nèi)產(chǎn)生高水平物質(zhì),各種氧化物導(dǎo)致的氧化速度超出了機(jī)體的抗氧化能力,最終損傷人體組織[10]。TRX是一類分布廣泛的小分子多功能蛋白。在高等的有機(jī)體中,TRX系統(tǒng)可催化還原氫過氧化物、有機(jī)過氧化物及一些被氧化的蛋白,參與并調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和由氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡等過程[11]。TXNIP被認(rèn)為是一種內(nèi)源性TRX抑制劑,能夠與TRX的半胱氨酸殘基結(jié)合在一起,從而抑制TRX的抗氧化功能[12]。因此,TXNIP是細(xì)胞氧化還原調(diào)節(jié)的關(guān)鍵組成部分。

本研究結(jié)果顯示,復(fù)發(fā)組的TRX表達(dá)高于未復(fù)發(fā)組,TXNIP表達(dá)低于未復(fù)發(fā)組,表明CRC細(xì)胞內(nèi)的TRX表達(dá)升高,而TXNIP的表達(dá)受到抑制,與既往研究[13]結(jié)果一致。腫瘤組織一般處于高代謝狀態(tài),需要大量的氧與營養(yǎng)物質(zhì),會(huì)釋放出活性氧簇(reactive oxygen species,ROS),使患者體內(nèi)呈現(xiàn)出高氧化應(yīng)激狀態(tài),在高氧化應(yīng)激狀態(tài)下,ROS會(huì)誘導(dǎo)TXNIP與TRX結(jié)合[14]。有研究報(bào)道,肝細(xì)胞癌、乳腺癌、膀胱癌等實(shí)體癌均會(huì)不同程度地引起TXNIP表達(dá)下降[15],提示TXNIP在多種惡性腫瘤中起抑癌作用。

本研究結(jié)果顯示,TRX高表達(dá)、TXNIP低表達(dá)是CRC復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素;ROC曲線分析結(jié)果顯示,TRX、TXNIP聯(lián)合預(yù)測CRC復(fù)發(fā)的敏感度為85.7%,ROC曲線下面積為0.867,表明TRX、TXNIP聯(lián)合檢測對(duì)CRC復(fù)發(fā)的預(yù)測價(jià)值較高。TRX可通過多種途徑保護(hù)腫瘤細(xì)胞免于凋亡。Shang等[16]研究表明,過表達(dá)TRX1可導(dǎo)致張力蛋白同源物水平降低。張力蛋白同源物可將磷脂酰肌醇-(3,4,5)-三磷酸轉(zhuǎn)化為磷脂酰肌醇-(4,5)-二磷酸,從而抑制蛋白激酶B的激活[17],而蛋白激酶B可磷酸化Caspase-9、Caspase-3,抑制其活性,進(jìn)而抑制下游細(xì)胞凋亡反應(yīng)[18]。凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)可通過激活c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNK)及p38絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Patwardhan等[19]研究發(fā)現(xiàn),抑制TRX1表達(dá)可激活下游ASK1及Caspase-3蛋白表達(dá),從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。另有研究報(bào)道,TRX水平升高有助于癌細(xì)胞生長并增加化療的耐藥性[20]。這提示,TRX的高表達(dá)會(huì)促進(jìn)CRC患者術(shù)后復(fù)發(fā)。TXNIP是TRX結(jié)合蛋白的家族成員,TXNIP的Cys-63、Cys-247可與TRX活性中心位點(diǎn)的巰基相互作用,抑制TRX活性,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,上調(diào)TXNIP可激活下游ASK1、JNK等凋亡信號(hào)通路,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡[21-23]。

綜上所述,TRX、TXNIP聯(lián)合檢測對(duì)CRC患者術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測價(jià)值較高。本研究存在一定的不足。首先,本研究為回顧性研究,在樣本選擇上存在一定的偏倚;其次,本研究樣本數(shù)量較少,可能會(huì)影響部分因素相關(guān)性檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。