李 平，孫越鵬，甄會(huì)賢，程侯蓮，韓曉靜，冀小君，楊 紅*

基于HPLC多成分定量分析不同產(chǎn)地太子參藥材的質(zhì)量

李 平1，孫越鵬2#，甄會(huì)賢1，程侯蓮1，韓曉靜1，冀小君1，楊 紅1*

1. 山西藥科職業(yè)學(xué)院，山西 太原 030031 2. 天津生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，天津 300301

建立太子參HPLC多成分定量檢測(cè)方法，結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)和加權(quán)逼近理想解排序（TOPSIS）法對(duì)不同產(chǎn)地太子參藥材質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。以Agilent Zorbax ODS C18柱為色譜柱，乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，檢測(cè)波長分別為254、285、203 nm，采用HPLC法同時(shí)檢測(cè)尿苷、肌苷、鳥苷、川陳皮素、染料木苷、木犀草素、金合歡素、白楊素、水楊酸、阿魏酸、肉桂酸、太子參環(huán)肽B、太子參環(huán)肽A、烏蘇酸和β-谷甾醇的含量。利用SIMCA 14.1和SPSS 26.0軟件對(duì)上述15種成分含量檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行主成分分析（principal component analysis，PCA）和正交偏最小二乘法-判別分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA），挖掘影響太子參產(chǎn)品質(zhì)量的差異性標(biāo)志物。運(yùn)用加權(quán)TOPSIS法進(jìn)行7省17批次太子參藥材綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)。HPLC多成分定量分析方法學(xué)考察符合《中國藥典》規(guī)定要求。PCA結(jié)果顯示前2個(gè)主成分特征值均大于1，累積方差貢獻(xiàn)率為87.843%，17批次太子參樣品分為3類。OPLS-DA篩選出尿苷、金合歡素、肌苷、太子參環(huán)肽A、太子參環(huán)肽B、β-谷甾醇和阿魏酸為影響太子參產(chǎn)品質(zhì)量的差異標(biāo)志物。EW-TOPSIS歐氏貼近度在0.258 5～0.642 5，表明不同產(chǎn)地太子參質(zhì)量差異較大，其中江蘇、安徽地區(qū)太子參排名靠前，其次為福建、江西和湖南地區(qū)，云南、四川地區(qū)太子參排名靠后。建立的太子參HPLC多成分定量檢測(cè)方法操作便捷、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，PCA、OPLS-DA聯(lián)合加權(quán)TOPSIS法可用于不同產(chǎn)地太子參藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

太子參；高效液相色譜法；主成分分析；正交偏最小二乘法-判別分析；逼近理想解排序法；尿苷；肌苷；鳥苷；川陳皮素；染料木苷；木犀草素；金合歡素；白楊素；水楊酸；阿魏酸；肉桂酸；太子參環(huán)肽B；太子參環(huán)肽A；烏蘇酸；β-谷甾醇；差異標(biāo)志物；質(zhì)量評(píng)價(jià)

太子參為石竹科植物孩兒參(Miq) Pax ex Pax et Hoffm.的干燥塊根，益氣健脾、生津潤肺，多用于脾虛體倦、食欲不振、病后虛弱、氣陰不足、自汗口渴、肺燥干咳等病癥的治療，臨床應(yīng)用廣泛[1]。太子參資源分布廣泛，喜歡生長在溫涼濕潤的氣候環(huán)境中，適應(yīng)性較強(qiáng)，主產(chǎn)自于江蘇、安徽、福建、江西、湖南等地，主要含有核苷類、黃酮類、環(huán)肽類、有機(jī)酸類、皂苷及其苷元等化學(xué)成分[2-3]，具有心肌保護(hù)、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、降血糖、抗應(yīng)激、抗疲勞、抗腫瘤、鎮(zhèn)咳等藥理作用。現(xiàn)代研究表明腺苷、肌苷、尿苷、鳥苷等核苷類具有增強(qiáng)免疫、預(yù)防心血管疾病等藥理作用，川陳皮素、染料木苷、木犀草素、金合歡素和白楊素等黃酮類具有抗炎、抗菌、抗氧化等活性，水楊酸、阿魏酸和肉桂酸等有機(jī)酸類具有抗菌、消炎、抗血小板聚集等藥理作用，太子參環(huán)肽B和太子參環(huán)肽A等環(huán)肽類成分具有抑菌、促血管生成等作用，烏蘇酸和β-谷甾醇皂苷元類成分具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等作用。太子參現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)《中國藥典》2020年版一部中暫未對(duì)其所含成分進(jìn)行定量控制，已有的文獻(xiàn)報(bào)道也僅局限于對(duì)其所含同類成分定量研究[4-8]，中藥所含成分復(fù)雜，多種成分相互協(xié)同、相互制約，為更加全面地評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地來源太子參的綜合質(zhì)量，本研究采用HPLC法對(duì)江蘇、安徽、福建、江西、湖南、云南和四川7個(gè)省17批太子參樣品中核苷類成分尿苷、肌苷和鳥苷，黃酮類成分川陳皮素、染料木苷、木犀草素、金合歡素和白楊素，有機(jī)酸類水楊酸、阿魏酸和肉桂酸，環(huán)肽類成分太子參環(huán)肽B和太子參環(huán)肽A及皂苷元類成分烏蘇酸和β-谷甾醇進(jìn)行含量測(cè)定，并采用化學(xué)計(jì)量學(xué)[9-10]結(jié)合加權(quán)TOPSIS[11-12]法對(duì)所測(cè)含量數(shù)據(jù)進(jìn)行分析挖掘，綜合評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地的太子參藥材質(zhì)量，旨為太子參整體質(zhì)量的全面控制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 試藥

對(duì)照品尿苷、肌苷、川陳皮素、染料木苷、白楊素、水楊酸、阿魏酸、肉桂酸、鳥苷、木犀草素和β-谷甾醇批號(hào)分別為110887-202305、140669-202007、112055-202102、111709-202303、111701-202102、100106-202106、110773-201915、110786-202305、111977-202202、111520-202107和110851-201909，質(zhì)量分?jǐn)?shù)依次為99.6%、99.2%、99.7%、99.6%、99.6%、99.8%、99.4%、99.8%、88.6%、96.3%和92.7%，均購自中國食品藥品檢定研究院；對(duì)照品金合歡素、太子參環(huán)肽B、太子參環(huán)肽A和烏蘇酸批號(hào)分別為PRF8041842、PRF16012101、PRF21051821和PRF8101222，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為98.6%、99.9%、98.0%和98.5%，均購自成都普瑞法科技開發(fā)有限公司；乙腈（瑞典歐普森公司，色譜純），磷酸（美國Fisher公司，色譜純），甲醇（天津市大茂化學(xué)試劑廠，分析純），水為超純水；太子參藥材采集地信息見表1，所用藥材經(jīng)山西藥科職業(yè)學(xué)院楊紅教授鑒定為孩兒參(Miq) Pax ex Pax et Hoffm.，符合《中國藥典》2020年版一部規(guī)定。

1.2 儀器

Agilent 1200型HPLC儀（美國安捷倫科技公司）；DS-2510DTH型超聲波清洗器（上海生析超聲儀器公司；AB135-S型電子天平（精度0.01 mg，梅特勒-托利多公司）。

表1 太子參藥材信息

Table 1 Medicinal information of Pseudostellariae Radix

編號(hào)采集地批號(hào)編號(hào)采集地批號(hào) S1湖南新邵縣210615S10四川威遠(yuǎn)縣210703 S2湖南衡南縣210603S11四川中江縣210604 S3江西永豐縣210707S12安徽懷寧縣210709 S4江西于都縣210602S13安徽績溪縣210608 S5福建福鼎市210701S14安徽渦陽縣210706 S6福建柘榮縣210706S15江蘇丹陽市210701 S7福建霞浦縣210606S16江蘇句容市210807 S8云南新平縣210705S17江蘇溧陽市210709 S9云南雙江縣210811

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

取太子參粉末約1.0 g，精密稱定，加70%甲醇20 mL，超聲處理60 min，放冷，70%甲醇定容至25 mL，振搖，濾過，取續(xù)濾液，備用。

2.2 混合對(duì)照品溶液的制備

取各對(duì)照品適量，精密稱定，用70%甲醇制成折干折純后每mL含尿苷0.390 mg、肌苷0.186 mg、鳥苷0.114 mg、川陳皮素0.018 mg、染料木苷0.062 mg、木犀草素0.046 mg、金合歡素0.090 mg、白楊素0.028 mg、水楊酸0.036 mg、阿魏酸0.098 mg、肉桂酸0.024 mg、太子參環(huán)肽B 0.106 mg、太子參環(huán)肽A0.178 mg、烏蘇酸0.052 mg和β-谷甾醇0.058 mg的混合貯備液，精密吸取貯備液適量，經(jīng)70%甲醇稀釋20倍，搖勻，即得含尿苷19.50 μg/mL、肌苷9.30 μg/mL、鳥苷5.70 μg/mL、川陳皮素0.90 μg/mL、染料木苷3.10 μg/mL、木犀草素2.30 μg/mL、金合歡素4.50 μg/mL、白楊素1.40 μg/mL、水楊酸1.80 μg/mL、阿魏酸4.90 μg/mL、肉桂酸1.20 μg/mL、太子參環(huán)肽B5.30 μg/mL、太子參環(huán)肽A 8.90 μg/mL、烏蘇酸2.60 μg/mL和β-谷甾醇2.90 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.3 色譜條件

色譜柱為Agilent Zorbax ODS C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫30 ℃；檢測(cè)波長分別為254 nm（0～35 min檢測(cè)尿苷、肌苷、鳥苷、川陳皮素、染料木苷、木犀草素、金合歡素和白楊素）[13-18]、285 nm（35～50 min檢測(cè)水楊酸、阿魏酸和肉桂酸）[19-21]、203 nm（50～75 min檢測(cè)太子參環(huán)肽B、太子參環(huán)肽A、烏蘇酸和β-谷甾醇）[22-24]；流動(dòng)相為乙腈（A）-0.2%磷酸，梯度洗脫：0～11 min，5.0% A；11～20 min，5.0%～8.0% A；20～36 min，8.0%～35.0% A；36～51 min，35.0%～45.0% A；51～61 min，45.0%～48.0% A；61～69 min，48.0%～80.0% A；69～75 min，80.0%～5.0% A，體積流量1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。在以上色譜條件下，進(jìn)樣混合對(duì)照品溶液及供試品溶液各10 μL，運(yùn)行時(shí)間75 min，記錄色譜圖（圖1）。圖譜顯示太子參供試品溶液中15種成分色譜峰峰尖銳，對(duì)稱度良好，且與對(duì)照品溶液色譜圖保留時(shí)間一致。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性回歸 分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0和5.0 mL，用70%甲醇定容至20 mL，混勻，制得一系列混合對(duì)照品溶液，按“2.3”項(xiàng)色譜條件分別進(jìn)樣檢測(cè)，記錄尿苷等15個(gè)對(duì)照品峰面積，以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫軸（），峰面積為縱軸（）進(jìn)行線性回歸，15種活性成分的回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)（）如表2所示，各成分在相應(yīng)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

1-尿苷 2-肌苷 3-鳥苷 4-川陳皮素 5-染料木苷 6-木犀草素 7-金合歡素 8-白楊素 9-水楊酸 10-阿魏酸 11-肉桂酸 12-太子參環(huán)肽B 13-太子參環(huán)肽A 14-烏蘇酸 15-β-谷甾醇，圖5同

表2 線性關(guān)系考察結(jié)果

Table 2 Investigation results of linear relationship

成分回歸方程線性范圍/(μg·mL?1)r 尿苷Y＝8.694 3×106X－458.51.95～97.500.999 2 肌苷Y＝7.405 1×106X＋1 032.10.93～46.500.999 8 鳥苷Y＝6.916 5×106X＋261.60.57～28.500.999 5 川陳皮素Y＝1.309 4×106X－645.70.09～4.500.999 3 染料木苷Y＝4.902 6×106X＋1 315.20.31～15.500.999 8 木犀草素Y＝2.832 8×106X＋856.70.23～11.500.999 1 金合歡素Y＝5.389 4×106X＋953.80.45～22.500.999 6 白楊素Y＝1.935 6×106X－643.20.14～7.000.999 5 水楊酸Y＝2.190 7×106X－294.10.18～9.000.999 7 阿魏酸Y＝6.201 3×106X＋784.50.49～24.500.999 7 肉桂酸Y＝1.583 2×106X＋1 085.30.12～6.000.999 9 太子參環(huán)肽BY＝7.129 5×106X＋518.20.53～26.500.999 3 太子參環(huán)肽AY＝5.730 8×106X＋476.60.89～44.500.999 2 烏蘇酸Y＝3.579 2×106X－1 104.70.26～13.000.999 5 β-谷甾醇Y＝4.385 9×106X＋628.40.29～14.500.999 8

2.4.2 重復(fù)性試驗(yàn) 取太子參（S1）6份，各自按“2.1”項(xiàng)方法制成供試品溶液，依法進(jìn)樣，記錄峰面積，代入“2.5.1”項(xiàng)回歸方程，計(jì)算15個(gè)成分含量，各成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD值均＜2.0%。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取一份太子參（S1）供試品溶液，于制備后0、2、4、7、12、18、24和36 h進(jìn)樣，記錄峰面積，各成分峰面積的RSD值均＜2.0%，太子參供試品溶液36 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.4.4 精密度試驗(yàn) 取一份太子參（S1）供試品溶液，依法重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，各成分峰面積的RSD值均＜2.0%，說明精密度良好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 取太子參（S1）9份，每份約0.5 g，精密稱定，分別加入按太子參各成分已知含量配制的加樣混合對(duì)照品溶液（折干折純后含尿苷0.219 mg/mL、肌苷0.135 mg/mL、鳥苷0.064 mg/mL、川陳皮素0.010 mg/mL、染料木苷0.037 mg/mL、木犀草素0.027 mg/mL、金合歡素0.041 mg/mL、白楊素0.017 mg/mL、水楊酸0.022 mg/mL、阿魏酸0.047 mg/mL、肉桂酸0.014 mg/mL、太子參環(huán)肽B 0.059 mg/mL、太子參環(huán)肽A 0.126 mg/mL、烏蘇酸0.029 mg/mL和β-谷甾醇0.035 mg/mL）0.8、1.0和1.2 mL，每個(gè)水平各平行3份，使得對(duì)照品加入量約為原供試品含有量的80%、100%和120%，再按照2.1項(xiàng)方法制成加樣供試品溶液，分別依法進(jìn)樣，計(jì)算加標(biāo)回收率，結(jié)果低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度水平的平均加樣回收率及RSD分別為尿苷100.07%（1.26%）、肌苷97.55%（1.03%）、鳥苷97.61%（1.25%）、川陳皮素96.93%（1.29%）、染料木苷97.59%（1.43%）、木犀草素97.45%（1.33%）、金合歡素97.81%（1.63%）、白楊素96.84%（1.42%）、水楊酸98.11%（1.46%）、阿魏酸97.99%（1.41%）、肉桂酸96.99%（1.43%）、太子參環(huán)肽B 97.70%（1.48%）、太子參環(huán)肽A 98.16%（1.53%）、烏蘇酸96.82%（1.38%）、β-谷甾醇97.56%（1.15%）。

2.4.6 含量測(cè)定 取17批不同產(chǎn)地的太子參（S1～S17）樣品，按照“2.1”項(xiàng)步驟平行制成供試品溶液（每批平行3份），依法進(jìn)樣，記錄峰面積，代入“2.4.1”項(xiàng)回歸方程，計(jì)算15種成分的含量，結(jié)果見表3。結(jié)果表明太子參中15種成分含有量均存在一定的批間差異，所得結(jié)果均在線性關(guān)系考察范圍內(nèi)。

表3 17批太子參中15種成分含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

Table 3 Results of determination of 15 components in 17 batches of Pseudostellariae Radix (n＝3)

樣品編號(hào)質(zhì)量分?jǐn)?shù)/(mg·g?1) 尿苷肌苷鳥苷川陳皮素染料木苷木犀草素金合歡素白楊素水楊酸阿魏酸肉桂酸太子參環(huán)肽B太子參環(huán)肽A烏蘇酸β-谷甾醇 S10.4430.2690.1270.0190.0730.0510.0890.0320.0430.0920.0270.1170.2490.0570.064 S20.4080.2980.1430.0220.0780.0590.1140.0400.0410.1100.0250.1240.2690.0620.074 S30.4040.2900.1980.0150.0760.0670.1270.0360.0290.1140.0280.1330.3120.0600.082 S40.4530.2600.1710.0180.0830.0560.1030.0370.0340.0920.0260.1550.2860.0680.073 S50.4370.2750.1620.0210.0850.0610.1100.0380.0380.1010.0260.1390.2770.0630.079 S60.4840.2520.1790.0170.0880.0640.1070.0340.0330.1070.0280.1480.3030.0650.080 S70.4640.2430.1900.0160.0800.0540.0950.0330.0310.0980.0250.1630.2940.0740.071 S80.3640.2290.2060.0000.1040.0440.0720.0420.0250.0960.0230.0910.2320.0520.046 S90.3810.2350.1760.0110.1010.0450.0780.0310.0280.0700.0230.0940.2420.0580.045 S100.3530.2140.2100.0100.1090.0420.0560.0290.0230.0900.0220.0740.2240.0540.049 S110.3450.2220.1840.0000.1060.0440.0510.0280.0260.0880.0210.0820.2150.0500.038 S120.5330.3450.1240.0290.0620.0810.0820.0270.0480.0860.0340.2020.3460.0730.070 S130.5570.3660.1060.0280.0660.0750.0990.0250.0510.0840.0360.2100.3380.0910.054 S140.5680.3300.1530.0270.0600.0780.0690.0240.0530.0810.0330.1950.3690.0770.075 S150.5790.3580.1150.0310.0560.0840.0860.0220.0600.0780.0370.2180.3570.0880.062 S160.5850.3500.1030.0320.0690.0720.0970.0210.0560.0750.0350.1870.3210.0820.041 S170.5840.3370.1350.0260.0710.0690.1060.0190.0460.0730.0330.1670.3300.0790.068

2.5 太子參化學(xué)計(jì)量學(xué)質(zhì)量分析的建立

2.5.1 主成分分析（principal component analysis，PCA） 將表3中17個(gè)批次中15個(gè)成分含量數(shù)據(jù)一并導(dǎo)入SPSS 26.0軟件，采用降維的方式進(jìn)行PCA，以特征值＞1為標(biāo)準(zhǔn)，提得2個(gè)主成分，累計(jì)方差貢獻(xiàn)率為87.843%（表4），表明前2個(gè)主成分可綜合反映太子參原變量的大部分信息，其中第1主成分綜合了尿苷、肌苷、鳥苷、川陳皮素、染料木苷、木犀草素、白楊素、水楊酸、肉桂酸、太子參環(huán)肽B、太子參環(huán)肽A和烏蘇酸的信息，第2主成分的信息來自金合歡素、阿魏酸和β-谷甾醇的信息，見表5。同時(shí)以17個(gè)批次為變量，15個(gè)成分含量為特征值，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SIMCA 14.1建立PCA模型，結(jié)果同樣提取出2個(gè)主成分（2＝0.878），17批樣品均在正常范圍內(nèi)分布，未出現(xiàn)異常點(diǎn)，模型擬合良好。見圖2。

表4 特征值與貢獻(xiàn)率

Table 4 Eigen values and contribution rate

主成分特征值方差貢獻(xiàn)率/%累積方差貢獻(xiàn)率/% 110.52470.160 70.160 2 2.65217.683 87.843 3 0.606 4.038 91.881 4 0.364 2.425 94.306 5 0.277 1.846 96.152 6 0.203 1.350 97.502 7 0.125 0.836 98.338 8 0.073 0.487 98.825 9 0.062 0.412 99.237 10 0.043 0.284 99.521 11 0.029 0.197 99.718 12 0.022 0.144 99.862 13 0.015 0.102 99.964 14 0.005 0.031 99.995 15 0.001 0.005100.000

表5 載荷矩陣

Table 5 Loading matrix

成分載荷 主成分1主成分2 尿苷 0.965?0.073 肌苷 0.961?0.001 鳥苷?0.847 0.188 川陳皮素 0.947 0.107 染料木苷?0.940?0.202 木犀草素 0.945 0.165 金合歡素 0.331 0.787 白楊素?0.668 0.616 水楊酸 0.947?0.117 阿魏酸?0.396 0.839 肉桂酸 0.977?0.057 太子參環(huán)肽B 0.956 0.099 太子參環(huán)肽A 0.931 0.184 烏蘇酸 0.930?0.068 β-谷甾醇 0.264 0.874

圖2 PCA得分圖

2.5.2 正交偏最小二乘法-判別分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA） 再次使用SIMCA 14.1軟件對(duì)17×15矩陣數(shù)據(jù)開啟OPLS-DA程序，以期挖掘?qū)Ξa(chǎn)品質(zhì)量影響較大的標(biāo)志性成分。預(yù)測(cè)2個(gè)主成分，繪制OPLS-DA模型（圖3），所建立的OPLS-DA累積解釋能力參數(shù)2＝0.926、2＝0.946，預(yù)測(cè)能力參數(shù)2＝0.870，表明模型預(yù)測(cè)能力強(qiáng)。再對(duì)建立的OPLS-DA模型置換檢驗(yàn)200次（圖4），結(jié)果最右側(cè)的2值和2值均高于左側(cè)的2值和2值，且2和2的截距值分別為0.275和?0.584，表明所構(gòu)建的OPLS-DA模型不存在過擬合。結(jié)合變量重要性投影（VIP）圖（圖5），以VIP＞1為閾值，篩選出尿苷、金合歡素、肌苷、太子參環(huán)肽A、太子參環(huán)肽B、β-谷甾醇和阿魏酸7個(gè)成分，VIP值分別為1.651 4、1.402 8、1.250 4、1.235 7、1.195 5、1.092 7和1.011 2，這7個(gè)成分可作為影響太子參產(chǎn)品質(zhì)量的差異標(biāo)志物。

圖3 17批太子參樣品的OPLS-DA模型得分圖

圖4 OPLS-DA置換檢測(cè)結(jié)果圖

2.6 加權(quán)TOPSIS法分析

2.6.1 標(biāo)準(zhǔn)化決策矩陣的建立 太子參不屬于毒性藥材，因此所含的尿苷、肌苷、鳥苷、川陳皮素、染料木苷、木犀草素、金合歡素、白楊素、水楊酸、阿魏酸、肉桂酸、太子參環(huán)肽B、太子參環(huán)肽A、烏蘇酸和β-谷甾醇均屬于越大越優(yōu)型指標(biāo)[11]，對(duì)太子參中15種成分含量檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)化決策矩陣（表6）。

2.6.2 加權(quán)決策矩陣的建立 以“2.6.2”項(xiàng)分析中各成分的VIP值作為各指標(biāo)權(quán)重，將表6數(shù)據(jù)與各指標(biāo)權(quán)重相乘得加權(quán)決策矩陣（表7）。

圖5 17批太子參樣品的VIP圖

2.6.3 最優(yōu)與最劣方案的確定及最優(yōu)解的貼近度計(jì)算與評(píng)價(jià) 根據(jù)表7中每一成分的最大值為最優(yōu)方案Z+、最小值最劣方案Z?，得Z+依次為1.651 4、1.250 4、0.984 7、0.560 9、0.743 6、0.653 3、1.402 8、0.639 7、0.596 4、1.011 2、0.413 0、1.195 5、1.235 7、0.607 9和1.092 7，Z?均為0。分別計(jì)算各批太子參樣品與正理想解距離（D+）、與負(fù)理想解的距離（D?）、最優(yōu)解的歐氏貼近度（C）[11]。C越大則被評(píng)價(jià)樣品越優(yōu)，反之，越差。結(jié)果見表8。結(jié)果顯示S13、S15、S17、S12、S14和S16排名靠前，質(zhì)量相對(duì)較優(yōu)，樣品來自江蘇、安徽地區(qū)；其次為S6、S3、S5、S7、S4、S2和S1，樣品來自福建、江西和湖南地區(qū)，S8、S10、S9和S11排名靠后，樣品來自云南和四川地區(qū)。

表6 標(biāo)準(zhǔn)化決策矩陣

Table 6 Standardized decision matrix

編號(hào)標(biāo)準(zhǔn)化值 尿苷肌苷鳥苷川陳皮素染料木苷木犀草素金合歡素白楊素水楊酸阿魏酸肉桂酸太子參環(huán)肽B太子參環(huán)肽A烏蘇酸β-谷甾醇 S10.408 30.361 80.224 30.593 80.320 80.214 30.500 00.565 20.540 50.500 00.375 00.298 60.220 80.170 70.590 9 S20.262 50.552 60.373 80.687 50.415 10.404 80.828 90.913 00.486 50.909 10.250 00.347 20.350 60.292 70.818 2 S30.245 80.500 00.887 90.468 80.377 40.595 21.000 00.739 10.162 21.000 00.437 50.409 70.629 90.243 91.000 0 S40.450 00.302 60.635 50.562 50.509 40.333 30.684 20.782 60.297 30.500 00.312 50.562 50.461 00.439 00.795 5 S50.383 30.401 30.551 40.656 30.547 20.452 40.776 30.826 10.405 40.704 50.312 50.451 40.402 60.317 10.931 8 S60.579 20.250 00.710 30.531 30.603 80.523 80.736 80.652 20.270 30.840 90.437 50.513 90.571 40.365 90.954 5 S70.495 80.190 80.813 10.500 00.452 80.285 70.578 90.608 70.216 20.636 40.250 00.618 10.513 00.585 40.750 0 S80.079 20.098 70.962 60.000 00.905 70.047 60.276 31.000 00.054 10.590 90.125 00.118 10.110 40.048 80.181 8 S90.150 00.138 20.682 20.343 80.849 10.071 40.355 30.521 70.135 10.000 00.125 00.138 90.175 30.195 10.159 1 S100.033 30.000 01.000 00.312 51.000 00.000 00.065 80.434 80.000 00.454 50.062 50.000 00.058 40.097 60.250 0 S110.000 00.052 60.757 00.000 00.943 40.047 60.000 00.391 30.081 10.409 10.000 00.055 60.000 00.000 00.000 0 S120.783 30.861 80.196 30.906 30.113 20.928 60.407 90.347 80.675 70.363 60.812 50.888 90.850 60.561 00.727 3 S130.883 31.000 00.028 00.875 00.188 70.785 70.631 60.260 90.756 80.318 20.937 50.944 40.798 71.000 00.363 6 S140.929 20.763 20.467 30.843 80.075 50.857 10.236 80.217 40.810 80.250 00.750 00.840 31.000 00.658 50.840 9 S150.975 00.947 40.112 10.968 80.000 01.000 00.460 50.130 41.000 00.181 81.000 01.000 00.922 10.926 80.545 5 S161.000 00.894 70.000 01.000 00.245 30.714 30.605 30.087 00.891 90.113 60.875 00.784 70.688 30.780 50.068 2 S170.995 80.809 20.299 10.812 50.283 00.642 90.723 70.000 00.621 60.068 20.750 00.645 80.746 80.707 30.681 8

表7 加權(quán)決策矩陣

Table 7 Weighting matrix

編號(hào)加權(quán)值 尿苷肌苷鳥苷川陳皮素染料木苷木犀草素金合歡素白楊素水楊酸阿魏酸肉桂酸太子參環(huán)肽B太子參環(huán)肽A烏蘇酸β-谷甾醇 S10.674 30.452 40.220 90.333 10.238 50.140 00.701 40.361 60.322 40.505 60.154 90.357 00.272 80.103 80.645 7 S20.433 50.691 00.368 10.385 60.308 70.264 51.162 80.584 00.290 10.919 30.103 30.415 10.433 20.177 90.894 0 S30.405 90.625 20.874 30.262 90.280 60.388 81.402 80.472 80.096 71.011 20.180 70.489 80.778 40.148 31.092 7 S40.743 10.378 40.625 80.315 50.378 80.217 70.959 80.500 60.177 30.505 60.129 10.672 50.569 70.266 90.869 2 S50.633 00.501 80.543 00.368 10.406 90.295 61.089 00.528 50.241 80.712 40.129 10.539 60.497 50.192 81.018 2 S60.956 50.312 60.699 40.298 00.449 00.342 21.033 60.417 20.161 20.850 30.180 70.614 40.706 10.222 41.043 0 S70.818 80.238 60.800 70.280 50.336 70.186 60.812 10.389 40.128 90.643 50.103 30.738 90.633 90.355 90.819 5 S80.130 80.123 40.947 90.000 00.673 50.031 10.387 60.639 70.032 30.597 50.051 60.141 20.136 40.029 70.198 7 S90.247 70.172 80.671 80.192 80.631 40.046 60.498 40.333 70.080 60.000 00.051 60.166 10.216 60.118 60.173 8 S100.055 00.000 00.984 70.175 30.743 60.000 00.092 30.278 10.000 00.459 60.025 80.000 00.072 20.059 30.273 2 S110.000 00.065 80.745 40.000 00.701 50.031 10.000 00.250 30.048 40.413 70.000 00.066 50.000 00.000 00.000 0 S121.293 51.077 60.193 30.508 30.084 20.606 70.572 20.222 50.403 00.367 70.335 61.062 71.051 10.341 00.794 7 S131.458 71.250 40.027 60.490 80.140 30.513 30.886 00.166 90.451 40.321 80.387 21.129 00.987 00.607 90.397 3 S141.534 50.954 30.460 20.473 30.056 10.559 90.332 20.139 10.483 60.252 80.309 81.004 61.235 70.400 30.918 9 S151.610 11.184 60.110 40.543 40.000 00.653 30.646 00.083 40.596 40.183 80.413 01.195 51.139 40.563 40.596 1 S161.651 41.118 70.000 00.560 90.182 40.466 70.849 10.055 70.531 90.114 90.361 40.938 10.850 50.474 50.074 5 S171.644 51.011 80.294 50.455 70.210 40.420 01.015 20.000 00.370 70.069 00.309 80.772 10.922 80.430 00.745 0

表8 17批太子參藥材綜合評(píng)價(jià)結(jié)果

Table 8 Comprehensive evaluation of 17 batches of Pseudostellariae Radix

編號(hào)Di+Di?Ci排名 S12.311 31.450 40.385 613 S22.014 82.026 80.501 512 S31.834 72.391 80.565 9 8 S41.882 01.905 20.503 111 S51.858 21.980 50.515 9 9 S61.664 22.193 00.568 5 7 S71.909 11.948 20.505 110 S82.874 21.531 10.347 614 S92.859 11.193 30.294 516 S103.182 51.363 60.299 915 S113.261 91.137 40.258 517 S121.611 62.554 70.613 2 4 S131.547 72.781 20.642 5 1 S141.702 12.660 30.609 8 5 S151.702 92.905 50.630 5 2 S161.734 72.701 60.609 0 6 S171.633 72.638 10.617 6 3

3 討論

3.1 供試品預(yù)處理方式的選擇

以15個(gè)成分色譜峰峰形、響應(yīng)值為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用超聲為提取方式，考察了提取溶劑（50%甲醇、70%甲醇、甲醇）、提取時(shí)間（30、60、90 min），結(jié)果70%甲醇超聲60 min時(shí)，15種成分峰形最好，響應(yīng)值較大。

3.2 含量測(cè)定與化學(xué)計(jì)量學(xué)結(jié)果評(píng)價(jià)

本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法對(duì)17批太子參中尿苷等15個(gè)成分進(jìn)行了定量分析，其中尿苷、肌苷、鳥苷、川陳皮素、染料木苷、木犀草素、金合歡素、白楊素、水楊酸、阿魏酸、肉桂酸、太子參環(huán)肽B、太子參環(huán)肽A、烏蘇酸和β-谷甾醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.585～0.345、0.366～0.214、0.210～0.103、0.032～0.000、0.109～0.056、0.084～0.042、0.127～0.051、0.042～0.019、0.060～0.023、0.114～0.070、0.037～0.021、0.218～0.074、0.369～0.215、0.091～0.050、0.082～0.038，平均含量分別為0.467、0.287、0.158、0.019、0.080、0.062、0.091、0.030、0.039、0.090、0.028、0.147、0.292、0.068、0.063 mg/g，尿苷、太子參環(huán)肽A、肌苷、鳥苷和太子參環(huán)肽B的含量較高，不同批次間各成分含量差異較大，即便是來源于同一省份的藥材，成分也有較大差異。而《中國藥典》2020年版未對(duì)太子參藥材所含成分進(jìn)行定量分析。太子參分布廣泛，質(zhì)量產(chǎn)地差異較大，建議對(duì)太子參藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提升，以充分保證其療效?；瘜W(xué)計(jì)量學(xué)分析結(jié)果顯示2個(gè)主成分可綜合反映太子參的87.843%成分含量。OPLS-DA分析發(fā)掘出影響太子參產(chǎn)品質(zhì)量的主要差異性成分為尿苷、金合歡素、肌苷、太子參環(huán)肽A、太子參環(huán)肽B、β-谷甾醇和阿魏酸。加權(quán)TOPSIS結(jié)果顯示，江蘇、安徽地區(qū)太子參排名靠前、其次為福建、江西和湖南地區(qū)，云南、四川地區(qū)太子參排名靠后，與文獻(xiàn)顯示的野生太子參的生態(tài)適宜分布區(qū)劃基本一致[25]，后續(xù)將繼續(xù)加大樣品收集量及收集范圍，為進(jìn)一步綜合評(píng)價(jià)太子參綜合質(zhì)量提供更為全面的數(shù)據(jù)支持。

本實(shí)驗(yàn)采用化學(xué)計(jì)量學(xué)、熵權(quán)TOPSIS法對(duì)不同產(chǎn)地的17批太子參質(zhì)量進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，該方法可操作性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高，為該藥材的道地性研究提供了基礎(chǔ)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Quality evaluation offrom different habitats by HPLC

LI Ping1, SUN Yue-peng2, ZHEN Hui-xian1, CHENG Hou-lian1, HAN Xiao-jing1, JI Xiao-jun1, YANG Hong1

1. Shanxi Pharmaceutical Vocational College, Taiyuan 030031, China 2. Tianjin Vocational College of Bioengineering, Tianjin 300301, China

To establish a HPLC multi-component quantitative detection method for Taizishen (), and evaluate the quality offrom different producing areas by combining chemometrics and weighted TOPSIS method.The separation was carried out on an Agilent Zorbax ODS C18column using acetonitrile-0.2% phosphoric acid as the mobile phase. The detection wavelengths were set at 254, 285 and 203 nm. The contents of uridine, inosine, guanosine, nobiletin, genistin, luteolin, acacetin, chrysin, salicylic acid, ferulic acid, cinnamic acid, heterophyllin B, heterophyllin A, ursolic acid and β-sitosterol in 17 batches ofwere determined by HPLC. Using SIMCA 14.1 and SPSS 26.0 software, principal component analysis (PCA) and orthogonal partial least squares-discriminant analysis (OPLS-DA) were performed on the detection results of the above 15 components, and the differential markers affecting the quality ofwere excavated. The weighted TOPSIS method was used to evaluate the comprehensive quality of 17 batches offrom seven provinces.The methodological investigation of HPLC multi-component quantitative analysis met the requirements of Chinese Pharmacopoeia. PCA results showed that the eigenvalues of the first two principal components were greater than 1, and the cumulative variance contribution rate was 87.843 %, and the 17 batches ofcould be clustered into three categories. Orthogonal OPLS-DA showed that the main components that distinguish the quality ofwere uridine, acacetin, inosine, heterophyllin A, heterophyllin B, β-sitosterol and ferulic acid. The results of EW-TOPSIS analysis showed that the average values were between 0.2585 and 0.6425, indicating that the quality offrom different producing areas were quite different.in Jiangsu and Anhui ranked the top, followed by Fujian, Jiangxi and Hunan, and Yunnan and Sichuan ranked the bottom.The established HPLC multi-component quantitative detection method ofis convenient, accurate and reliable. PCA, OPLS-DA combined with weighted TOPSIS method can be used to evaluate the quality offrom different habitats.

(Miq) Pax ex Pax et Hoffm.; HPLC; PCA; OPLS-DA; EW-TOPSIS; uridine; inosine; guanosine; nobiletin; genistin; luteolin; acacetin; chrysin; salicylic acid; ferulic acid; cinnamic acid; heterophyllin B; heterophyllin A; ursolic acid; β-sitosterol; differential marker; quality evaluation

R286.2

A

0253 - 2670(2023)17 - 5734 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.17.026

2023-01-31

山西省教育科學(xué)“十四五”規(guī)劃2021年度課題項(xiàng)目（GH-21421）

李 平（1976—），女，副教授，研究方向?yàn)樗幬餀z測(cè)分析及分離純化。Tel: 13934159686

楊 紅（1966—），女，教授，研究方向?yàn)橹兴帉W(xué)。Tel: 13503514848 E-mail: lkb878@163.com

#共同第一作者：孫越鵬（1984—），男，副教授，研究方向?yàn)榉肿由飳W(xué)和細(xì)胞生物學(xué)。Tel: 18322236567

[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]