王 弘，黃承峰，張 艷，劉海隆*

(1. 海南省定安縣龍門農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，海南 定安 571226；2. 海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，海南 ?？?571100)

定安豬是海南省地方優(yōu)良畜禽品種之一，主要產(chǎn)于海南省定安縣雷鳴、龍門、龍河等鎮(zhèn)，分布于全縣各地，目前是海南豬中群體規(guī)模最大的類群，飼養(yǎng)的群眾基礎(chǔ)好[1]，但其體型小、生長發(fā)育慢，當(dāng)?shù)匾话憷枚ò材肛i與杜洛克公豬雜交[2]，生產(chǎn)二元黑豬。 定安母豬經(jīng)過長期的選育留種，非常適應(yīng)當(dāng)?shù)刈匀粭l件和經(jīng)濟(jì)條件，具有敏捷、覓食性強(qiáng)、耐粗飼、耐熱、抗逆性強(qiáng)、繁殖力較強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)[3-4]，雖然如此，如果飼養(yǎng)條件太過于粗獷，飼養(yǎng)管理不當(dāng)及疫病預(yù)防措施不到位的話，也經(jīng)常會發(fā)生懷孕母豬產(chǎn)死胎及流產(chǎn)的現(xiàn)象，大幅降低了定安母豬的繁育利用水平。

引起妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎的原因很多:除了產(chǎn)科性疾病、飼養(yǎng)管理不當(dāng)、損傷性、藥物性等原因外，大部分感染性因素占主導(dǎo)地位。 比如，藍(lán)耳病、細(xì)小病毒病、日本乙型腦炎、豬衣原體病、豬瘟、鉤端螺旋體病、豬偽狂犬病等，這些都可能造成母豬流產(chǎn)、死胎[5-8]。 為了解定安母豬發(fā)生流產(chǎn)、死胎主要病因，筆者從當(dāng)?shù)?2 個(gè)養(yǎng)殖場及養(yǎng)殖戶總共收集到267 例定安母豬無明顯臨床癥狀或輕微癥狀發(fā)生流產(chǎn)及產(chǎn)死胎的案例，開展了豬圓環(huán)病毒2 型(PCV2)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬細(xì)小病毒(PPV)、豬偽狂犬病病毒(PRV) 及豬乙型腦炎病毒(JEV) 5 種主要病毒性繁殖障礙疫病病原的檢測，并分析其病原感染情況，以期為有效防控定安母豬繁殖障礙疫病提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

定安母豬流產(chǎn)胎兒或流產(chǎn)未成形的組織排泄物，在2021 年11 月份至2022 年10 月份采自海南省定安縣32 個(gè)定安母豬養(yǎng)殖場及養(yǎng)殖戶。 樣品信息見表1。

表1 樣品采集信息表

1.2 主要儀器設(shè)備

全自動(dòng)核酸提取儀(型號VNP -32P)，南京諾唯贊生物科技股份有限公司制造；全自動(dòng)樣品快速研磨機(jī)(型號JXFSTPRP -32)，上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司制造；熒光定量PCR 儀(型號CFX-96 touch)，美國Bio-Rad 制造。

1.3 主要試劑

病毒 DNA/RNA 提取試劑盒 ( 批號20220120)，購自上海凡濟(jì)生物科技有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑購自大連寶生物工程有限公司；豬圓環(huán)病毒2 型 (PCV - 2) 核酸檢測試劑盒(熒光PCR 法，批號20220225)，上海帛科生物技術(shù)有限公司；豬藍(lán)耳病病毒通用型(PRRSV-U) 核酸檢測試劑盒(熒光PCR 法，批號20220310)，上海初態(tài)生物科技有限公司；豬細(xì)小病毒(PPV) 核酸檢測試劑盒(熒光PCR 法，批號20220120)，上海初態(tài)生物科技有限公司；豬偽狂犬病病毒檢測試劑盒(熒光PCR 法，批號20220320)，深圳子科生物技術(shù)有限公司；日本乙型腦炎病毒(JEV) 核酸檢測試劑盒(熒光PCR 法，批號20220408)，上海初態(tài)生物科技有限公司。 以上試劑盒均符合國家要求，其引物的設(shè)置也是根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等標(biāo)準(zhǔn)要求設(shè)計(jì)的特異性引物和引物序列。

1.4 方法

現(xiàn)場采集母豬的流產(chǎn)排泄物或成形的胎兒，20 ℃保存，冷藏送至實(shí)驗(yàn)室檢測。 將流產(chǎn)胎兒的臟器或母豬流產(chǎn)的組織樣品，加入一定比例的生理鹽水，在組織研磨器內(nèi)充分研磨并保證漿液均勻，反復(fù)凍融3 次，4 ℃、12 000 r/min 離心5 min 后取上清，按照病毒基因組DNA/RNA 提取試劑盒使用說明書對樣品上清進(jìn)行DNA/RNA 提取。 RNA 病毒反轉(zhuǎn)錄成cDNA，所獲得的DNA/cDNA 按照各種疾病的病原試劑盒使用說明直接進(jìn)行熒光PCR 檢測。

2 結(jié)果與分析

2021 年11 月至2022 年10 月，在海南省定安縣32 個(gè)養(yǎng)殖場及養(yǎng)殖戶共采集到267 份定安母豬流產(chǎn)臨床病例，在不同的月份及母豬妊娠的不同階段流產(chǎn)發(fā)生率不同，見圖1、圖2。 經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室檢測，最終有98 份病例樣品檢出了至少一種病原，病原的檢出率為36.70%(98/267) 。5 種病毒性繁殖障礙疫病病原的檢測結(jié)果見表2，其中有不少樣品中可以檢出2 種或2 種以上病原，5 種病原單獨(dú)感染和混合感染的情況中見圖3、圖4。

圖1 定安母豬不同月份流產(chǎn)病例分布

圖2 定安母豬不同妊娠階段流產(chǎn)病例分布

圖3 定安母豬5 種繁殖障礙疫病病原單一感染情況

圖4 定安母豬5 種繁殖障礙疫病病原混合感染情況

表2 5 種病毒性繁殖障礙疫病病原檢測結(jié)果

由表1 數(shù)據(jù)分析可得圖1、圖2，可知定安母豬流產(chǎn)病例樣品主要發(fā)生在海南氣溫相對較低、天氣冷熱變化較大的月份，2021 年11 月至2022 年3 月，共采集到169 例，占比63%(169/267)。 另外定安母豬懷孕2 個(gè)月以后，在妊娠后期發(fā)生流產(chǎn)的樣本占比77% (206/267)。

由表2 可知，定安母豬發(fā)生流產(chǎn)、死胎的病例5 種病毒性繁殖障礙疫病病原檢出率從高到低依次為 PRRSV ( 17.98%)、PCV2(11.61%)、JEV (9.74%)、PRV (6.37%)、PPV (4.49%)。

由圖3 可知，定安母豬5 種繁殖障礙疫病病原單一感染共65 例，占總感染數(shù)的66.33%(65/98)，占比最高的是PRRSV (20.41%，20/98)，其次分別是PCV2 (13.27%，13/98)、JEV (12.24%，12/98)、PRV (11.22%，11/98)、PPV (9.18%，9/98)。

由圖4 可知，定安母豬5 種繁殖障礙疫病病原混合感染共33 例，占總感染數(shù)的33.67%(33/98)。 混合感染情況以雙重病原感染較為常見，共30 例，占總感染數(shù)的30.61% (30/98)，其中以PRRSV ＋PCV2、PRRSV ＋JEV 感染病例較多，分別占總感染數(shù)的12.24%(12/98)、8.16% (8/98)。 多種病原混合感染情況僅發(fā)現(xiàn)3 例。

3 討論

妊娠母豬無癥狀或輕微臨床癥狀發(fā)生流產(chǎn)，不但減少了豬場產(chǎn)仔數(shù)，還會損害母豬健康，縮短利用年限，使養(yǎng)豬場生產(chǎn)成本加大，養(yǎng)殖效益降低[9]，而且很難分析病因、病情及做出正確的治療。 對此要采取何種預(yù)防措施?是否要及時(shí)淘汰母豬? 給養(yǎng)殖場及養(yǎng)殖戶帶來巨大困擾。 從樣本采集信息初步分析，定安母豬流產(chǎn)死胎病例絕大多數(shù)發(fā)生在海南當(dāng)?shù)貧鉁叵鄬^低、冷熱變化較大的11 月到次年的3月。 定安母豬妊娠后半階段(懷孕2 個(gè)月之后) 較前半階段更容易出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎的情況，這可能是因?yàn)樵谌焉锏脑缙诤椭衅诹鳟a(chǎn)的胚胎被吸收或者流產(chǎn)組織物被母豬采食掉而不易被察覺，在養(yǎng)殖過程也會被認(rèn)為是配種不成功，最終會導(dǎo)致母豬出現(xiàn)不規(guī)律發(fā)情[10]，降低母豬利用率。

傳染性因素是引起母豬流產(chǎn)的主要原因，但是母豬流產(chǎn)病原的確診存在很大的困難，很多流產(chǎn)病例的致病原在流產(chǎn)發(fā)生時(shí)已不存在。本次病原檢測檢出率僅為36.70% (98/267)，說明剩余病例還有很多其他病原存在或者檢測不出任何病原及其他非傳染因素導(dǎo)致流產(chǎn)。

從樣品檢測的結(jié)果來看，采集的病例樣品PRRSV、PCV2、JEV、PRV、PPV 5 種主要病毒性繁殖障礙疫病病原以單一病原感染為主，說明各養(yǎng)殖場及養(yǎng)殖戶母豬免疫程序存在不合理或者免疫失敗的現(xiàn)象。 據(jù)報(bào)道規(guī)?；B(yǎng)豬場中，免疫失敗引起的疾病性流產(chǎn)是母豬流產(chǎn)的主要原因之一[11]。 混合感染情況以雙重感染較為常見，三重感染情況僅出現(xiàn)3 例，綜合分析PRRSV、PCV2、JEV 是目前引起定安母豬流產(chǎn)死胎的主要病毒性病原，提示養(yǎng)殖戶要做好母豬流產(chǎn)的記錄工作，注意觀察母豬產(chǎn)死胎的現(xiàn)象，及時(shí)送檢，確定母豬流產(chǎn)是否為傳染性流產(chǎn)還是非傳染性流產(chǎn)，按照科學(xué)的免疫流程做好免疫預(yù)防工作，將養(yǎng)殖場的衛(wèi)生管理工作做到位，夏天減少蚊蟲滋擾，冬季做好保溫措施，減少母豬流產(chǎn)的發(fā)生率。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，定安母豬流產(chǎn)及死胎大部分發(fā)生在海南氣溫相對較低的月份及母豬妊娠后期。 PRRSV、PCV2、JEV、PRV、PPV 5種病原從高到低依次均有檢出，病原以單一感染為主，混合感染以雙重感染為主，多種病原感染少見。 PRRSV、PCV2、JEV 是目前引起定安母豬流產(chǎn)死胎的主要病毒性病原。