古昌輝，許明珠，程光平，，程蔓，韋云勇，麻艷群*

（1.廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院/廣西高校水生生物健康養(yǎng)殖與營(yíng)養(yǎng)調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530004；2.廣西海洋研究所有限責(zé)任公司，廣西 北海 536000）

巴馬擬纓魚(yú)（Pseudocrossocheilus bamaensis），屬鯉形目（Cyprinformes），鯉科（Cyp-rinidae），野鯪亞科（Labeoninae），擬纓魚(yú)屬（Pseudocrossocheilus）[1]，因富含脂肪，又稱(chēng)巴馬油魚(yú)。主要分布于廣西境內(nèi)巴馬縣的盤(pán)陽(yáng)河和紅水河的都安江段，喜穴居，一般晨昏活動(dòng)，冬季進(jìn)洞穴越冬，于春末夏初洪水期繁殖，在自然水域多以固著藻類(lèi)為食[2]，體型小而肥，是廣西土著小型經(jīng)濟(jì)特色魚(yú)類(lèi)[3]。研究表明[4]，巴馬擬纓魚(yú)肌肉中蛋白含量高，肉質(zhì)細(xì)嫩，營(yíng)養(yǎng)豐富，脂肪含量適中，富含各類(lèi)氨基酸及不飽和脂肪酸，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)與繁殖，需要消耗大量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。研究表明[5]，高蛋白含量的日糧，有利于異育銀鯽雌魚(yú)卵細(xì)胞的發(fā)育。脂肪含量為14%的配合飼料，可以促進(jìn)海灣扇貝（Argopecten irradians）的性腺發(fā)育[6]。在自然界中，河水的流速能夠刺激魚(yú)類(lèi)產(chǎn)卵行為[7-8]。在人工養(yǎng)殖條件下，流水刺激，會(huì)加強(qiáng)四大家魚(yú)親魚(yú)的性細(xì)胞質(zhì)量[9-10]。此外，光照、產(chǎn)卵場(chǎng)所基質(zhì)、鹽度等外源因子，均會(huì)對(duì)性腺的發(fā)育造成不同的影響?，F(xiàn)探討不同試驗(yàn)條件對(duì)巴馬擬纓魚(yú)血液性激素水平的影響，以期為巴馬擬纓魚(yú)生理生態(tài)學(xué)、規(guī)?；斯し敝逞芯浚峁┛茖W(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 時(shí)間與地點(diǎn)

2020 年6 月，試驗(yàn)周期365 d。試驗(yàn)地位于廣西大學(xué)水產(chǎn)養(yǎng)殖基地。

1.2 試驗(yàn)材料

選擇4 口圓形水泥池（直徑3.0 m，池高1.4 m，水深0.8 m），面積均為7.1 m2，進(jìn)、排水及供氣（氣控）設(shè)施完善，養(yǎng)殖用水均為經(jīng)曝氣的自來(lái)水。試驗(yàn)魚(yú)采自紅水河廣西都安河段的野生巴馬擬纓魚(yú)，于6 月2 日運(yùn)回廣西大學(xué)水產(chǎn)養(yǎng)殖基地，經(jīng)消毒處理、暫養(yǎng)和馴食配合飼料后，隨機(jī)分入試驗(yàn)池養(yǎng)殖，各池放養(yǎng)量均為150 尾。雄魚(yú)初始平均體質(zhì)量（88.20±4.03）g，初始平均體長(zhǎng)（26.35±2.10）cm；雌魚(yú)初始平均體質(zhì)量（112.40±8.05）g，初始平均體長(zhǎng)（29.83±2.28）cm。飼料為海大容川牌對(duì)蝦2 號(hào)沉性飼料（粗蛋白質(zhì)≥47.0%、粗灰分≤18.0%、0.8≤鈣≤4.0%、水分≤10.0%、粗纖維≤3.5%、總磷≥1.2%、粗脂肪≥5.0%、賴(lài)氨酸≥2.8%）。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)A、B、C 和D 4 個(gè)試驗(yàn)組（未設(shè)平行組）和E對(duì)照組。各組試驗(yàn)條件：A 組投喂“紅蟲(chóng)+對(duì)蝦2 號(hào)料”（9∶1）；B 組采用“混合水流”（涌流+旋流），用充（氧）氣管從池底堆積的卵石堆底端自下向上充氣，產(chǎn)生涌流，用小型水泵（85 W）于池內(nèi)抽水并沿圓形池壁切線方向“推水”產(chǎn)生旋流，流速0.15 m/s，投喂對(duì)蝦2 號(hào)料；C 組采用“紅光”光照，用600 nm LED燈作光源，光色為紅光，光照強(qiáng)度2 000 lx，光∶暗=12L∶12D（12L 為07：00—19：00，12D 為19：00 至次日07：00），投喂對(duì)蝦2 號(hào)料；D 組采用“粗沙+卵石底質(zhì)”（底質(zhì)厚10 cm，粗沙面積∶卵石面積=50%∶50%），投喂對(duì)蝦2 號(hào)料；E 組為試催產(chǎn)當(dāng)天，從紅水河廣西都安河段采獲并運(yùn)回試驗(yàn)基地野生巴馬擬纓魚(yú)。

各組均為自然水溫（16~30 ℃）。A 組（紅蟲(chóng)+對(duì)蝦二號(hào)料）日投飼率為4%，B、C、D 組對(duì)蝦2 號(hào)料日投飼率1.3%~1.5%，每日投飼1 次（20：00 前后）。每周換水1 次，每次換水量約為原池水量的1/3。養(yǎng)殖全程開(kāi)啟增氧機(jī)持續(xù)充氣增氧，保持池水ρ（溶解氧）>5 mg/L。

2021 年6 月18 日（推測(cè)的繁殖季節(jié)），從A、B、C、D 各組隨機(jī)抽取6 尾（3 雌和3 雄）共24 尾；從E組隨機(jī)抽取3 雌和3 雄共6 尾，采血測(cè)定性激素含量。從各試驗(yàn)組隨機(jī)抽取3 雌和3 雄親魚(yú)共24 尾，用相同的催產(chǎn)劑[1 kg 雌魚(yú)催產(chǎn)劑型及劑量：促黃體素釋放激素（LHRH-A3）10 μg+注射用多情素絨促性素（I）（HCG）2 500 IU+多潘立酮注射液（DOM）15 mg]，雄魚(yú)催產(chǎn)劑量為雌魚(yú)的1/2。注射激素72 h后，分別采集各組催產(chǎn)親魚(yú)血樣，先用含間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽（MS-222），將待采血親魚(yú)麻醉8～10 min，然后采用尾椎取血法采血，室溫放置1 h，于3 500 r/min 離心10 min，結(jié)束后吸取上清液保存。采用雙抗體夾心法測(cè)定樣本魚(yú)血清性激素水平。具體操作方法參照南京建成試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

雌二醇（E2）雌三醇（E3）孕酮（P）雌酮（E1）睪酮（T）。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2016 處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)后，于SPSS25.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA）和多重比較（LSD 法），并判斷在0.05 水平上差異的顯著性，P>0.05 為差異不顯著，P<0.05 為差異顯著。試驗(yàn)結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組巴馬擬纓魚(yú)性激素水平

2.1.1 雌魚(yú)性激素

各組巴馬擬纓魚(yú)雌魚(yú)（催產(chǎn)前）性激素水平見(jiàn)表1。

表1 各組雌魚(yú)催產(chǎn)前性激素水平①

E2：相較于E 組，C 組的E2含量提高了0.5%，A組最低，下降了51.7%。C 組E2含量最高，比A、B、D組分別提高51.9%、6.0%和5.2%。分析表明，C 組最利于雌魚(yú)E2的合成，A 組可能會(huì)抑制E2的合成，其抑制機(jī)理還有待研究。

E3：與E 組比較，E3含量除D 組略為上升外，其余各組均顯示降低，其中B 組最低，下降了35.7%；D 組E3比A 組、B 組和C 組 分 別提高35.7%、64.2%、和10.2%，表明D 組有利于雌魚(yú)E3的合成。比較各組間的E3含量，D 組最高，B 組最低，但差異不顯著（P>0.05）。

P：A 組P 最大，C 組最小，與E 組比較，A、B、C和D 組的P 含量分別提高了13.5%、13.1%、7.5%和11.5%；各組間P 含量比較，A 組最高，比B 組、C 組和D 組分別提高0.5%、5.6%和1.9%，組間差異不顯著。表明A 組較利于雌魚(yú)P 的合成。

E1：與E 組比較，B 組E1提高33.7%，其余組均呈降低趨勢(shì)，其中A 組、C 組和D 組分別降低34.8%、7.0%和32.2%；各組間比較，在B 組E1最高，比A 組提高56.8%，差異顯著（P＜0.05），比C組、D 組和分別提高38.3%、55.0%，但差異不顯著（P＞0.05）。從E1含量的絕對(duì)值看，B 組較有利于雌魚(yú)E1合成。

2.1.2 雄魚(yú)性激素

各組巴馬擬纓魚(yú)雄魚(yú)T 變化見(jiàn)表2。由表2 可見(jiàn)，各試驗(yàn)組T 含量較E 組均呈下降趨勢(shì)，差異顯著（P＜0.05）。其中B 組最低，降幅達(dá)56.0%，D 組相對(duì)下降幅度較小，為45.4%。各組間，D 組T 含量最高，比A、B 和C 組分別提高21.3%、24.0%和5.4%。各試驗(yàn)組雄魚(yú)T 含量遠(yuǎn)未達(dá)到E 組水平?？傮w上，D組較有利于促進(jìn)T 的合成。

表2 各組雄魚(yú)睪酮含量①

2.2 各組巴馬擬纓魚(yú)催產(chǎn)前后性激素變化

2.2.1 雌魚(yú)催產(chǎn)前后性激素變化

各組巴馬擬纓魚(yú)雌魚(yú)催產(chǎn)前后性激素變化見(jiàn)圖1（a）（b）（c）（d），圖中柱上無(wú)字母表示催產(chǎn)前后組間差異不顯著（P＞0.05），字母不同表示催產(chǎn)前后組間差異顯著（P＜0.05）。由圖1 可見(jiàn)，催產(chǎn)后，A 組E2升高36.64%，催產(chǎn)前后差異顯著（P＜0.05），B、C、D 組分別下降3.3%、43.18%和12.08%，催產(chǎn)前后差異不顯著（P＞0.05）；E3含量在A、B 組分別提高17.60%、44.48%，其中B 組催產(chǎn)前后差異顯著（P＜0.05），在C、D 組分別降低37.75%、8.38%，催產(chǎn)前后差異不顯著（P＞0.05）；P 含量在A、B 組分別降低1.90%、6.80%，在C、D 組上升，分別上升6.25%、0.87%，催產(chǎn)前后差異不顯著（P＞0.05）；E1含量在A、B 分別下降了12.88%、54.62%，中B 組催產(chǎn)前后差異顯著（P＜0.05），在C、D 組分別上升了48.62%、50.65%，催產(chǎn)前后差異顯著（P＜0.05）。分析表明，注射催產(chǎn)劑有助于提高B 組E3以及C、D 組E1含量。

圖1 各組巴馬擬纓魚(yú)雌魚(yú)催產(chǎn)前后性激素含量變化

2.2.2 雄魚(yú)催產(chǎn)前后T 含量變化

各組巴馬擬纓魚(yú)雄魚(yú)催產(chǎn)前后T 含量變化見(jiàn)圖2，圖中柱上無(wú)字母表示催產(chǎn)前后組間差異不顯著（P＞0.05），字母不同表示催產(chǎn)前后組間差異顯著（P＜0.05）。由圖2 可見(jiàn)，催產(chǎn)后，T 含量在A、B、C、D 分別下降了17.15%，17.39%，19.69%和35.73%，其中D 組催產(chǎn)前后差異顯著（P＜0.05）。分析表明，各組注射激素，均會(huì)抑制巴馬擬纓魚(yú)雄魚(yú)T 的合成，D 組抑制作用更明顯。

圖2 各組巴馬擬纓魚(yú)雄魚(yú)催產(chǎn)前后T 含量變化

2.3 人工催產(chǎn)對(duì)各組巴馬擬纓魚(yú)性激素水平的影響

2.3.1 雌魚(yú)

各組巴馬擬纓魚(yú)雌魚(yú)催產(chǎn)后激素變化見(jiàn)表3。由表3 可見(jiàn)，魚(yú)催產(chǎn)后B 組E2含量最高，C 組最低，組間差異不顯著（P＞0.05）；P 含量亦為C 組最高，B組最低，組間差異均不顯著（P＞0.05）；E3含量在B 組最高，C 組最低，B 組和C 組間差異顯著（P＜0.05），其余組間差異不顯著（P＞0.05）；E1含量在C 組最高，A 組最低，C、D 組與A、B 組差異顯著（P＜0.05）。分析表明，注射催產(chǎn)劑，有助于促進(jìn)B 組培育條件下的E3以及C 組和D 組培育條件下E1的合成。

表3 各組雌魚(yú)催產(chǎn)后性激素水平①

2.3.2 雄魚(yú)

各組巴馬擬纓魚(yú)雄魚(yú)注射催產(chǎn)劑后T 含量變化見(jiàn)表4。

表4 各組催產(chǎn)后雄魚(yú)性激素水平

由表4 可見(jiàn)，催產(chǎn)后，A 組T 最高，D 組最低，但各組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。表明注射激素，在促進(jìn)或抑制巴馬擬纓魚(yú)雄魚(yú)T 合成方面，與各組的試驗(yàn)條件關(guān)系不大。

3 討論

3.1 各組巴馬擬纓魚(yú)性激素水平

激素是由機(jī)體內(nèi)分泌腺或內(nèi)分泌細(xì)胞直接分泌到血液和淋巴中，對(duì)一定器官或組織產(chǎn)生興奮或抑制作用，協(xié)調(diào)機(jī)體內(nèi)部生理機(jī)能的特殊化學(xué)物質(zhì)[11]。魚(yú)類(lèi)性類(lèi)固醇激素（T、17β-E2等）是體內(nèi)膽固醇的衍生物，對(duì)魚(yú)體性腺發(fā)育、卵黃形成和卵細(xì)胞成熟具有重要的調(diào)控作用，因此性激素水平的改變，最終會(huì)影響到魚(yú)類(lèi)的繁殖功能[12]。頡志剛等[13]研究表明，攝食含有芳香化酶抑制劑來(lái)曲唑（letrozole, LZ）的試驗(yàn)飼料10 d 后，雌性光唇魚(yú)的血漿E2水平顯著下降，而雄性光唇魚(yú)的血漿T 水平則無(wú)顯著變化。本試驗(yàn)A 組雌魚(yú)血清E2含量較E 組下降最多，表明紅蟲(chóng)飼料當(dāng)中可能含有某種物質(zhì)抑制雌魚(yú)的E2水平。

流水可以刺激魚(yú)類(lèi)側(cè)線器官，通過(guò)中樞神經(jīng)，誘使下丘腦合成和釋放促性腺激素釋放激素，進(jìn)而引發(fā)腦垂體分泌促性腺激素，誘導(dǎo)親魚(yú)發(fā)情產(chǎn)卵[14]。宋波瀾[15]研究表明，隨著水流速的增加，紅鰭銀鯽的肌肉中的血紅蛋白含量會(huì)顯著提高。在本試驗(yàn)中，B 組雌魚(yú)E1性激素水平較高，表明在混合水流刺激下，促進(jìn)了巴馬油魚(yú)性激素的合成，對(duì)P和E1的促進(jìn)效果較好。這可能是巴馬擬纓魚(yú)喜歡生活在水流湍急的水域，且對(duì)涌流敏感，B 組魚(yú)在旋流和涌流混合水流作用下育，性激素水平提高。

仇登高[16]研究發(fā)現(xiàn)，不同的光照條件可以延緩或者加快大西洋鮭性腺的發(fā)育。狄正凱等[17]研究發(fā)現(xiàn)，延長(zhǎng)光照周期，可以增加魚(yú)類(lèi)的攝食時(shí)間，提高攝食率，進(jìn)而促進(jìn)魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)，但過(guò)長(zhǎng)的光照時(shí)間，往往會(huì)導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)速度下降。本試驗(yàn)中，C 組P 含量在試驗(yàn)組中最低，E2含量最高，表明光照可能會(huì)刺激培育對(duì)象E2的合成，但同一光照周期又會(huì)抑制P 的合成?？赡艿脑?yàn)榘婉R擬纓魚(yú)是洞穴習(xí)性生活的魚(yú)類(lèi)，對(duì)特定光照的敏感度較高。本試驗(yàn)設(shè)定的光照強(qiáng)度和周期變化，刺激了雌魚(yú)，導(dǎo)致雌魚(yú)特定性激素水平升高。底質(zhì)類(lèi)型對(duì)巴馬擬纓魚(yú)自然繁殖的成敗尤為重要。張平梅等[18]研究表明，復(fù)雜的底質(zhì)更有利于鱘的產(chǎn)卵行為。在本試驗(yàn)中，D 組的E3含量為試驗(yàn)組中最高，E2和P 水平也較高，可能是野生巴馬擬纓魚(yú)來(lái)自紅水河流域，原生境中的底質(zhì)復(fù)雜多變，而D 組底質(zhì)環(huán)境比較接近野生環(huán)境，加上充足的餌料和安靜的環(huán)境，有利于促進(jìn)雌魚(yú)性激素水平的提高。

3.2 各組巴馬擬纓魚(yú)催產(chǎn)前后性激素水平

利用外源激素處理，是促進(jìn)養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)性腺成熟及產(chǎn)卵繁殖的重要方法。最常用的是利用促性腺激素釋放激素的類(lèi)似物（GnRHa），刺激腦垂體釋放促性腺激素（GtH），誘導(dǎo)精巢性類(lèi)固醇激素的生成和精子的排放[19-20]。魚(yú)類(lèi)卵巢發(fā)育受多種因素（溫度[21]、人工配合飼料[22]、外源激素[23]等）的影響。相關(guān)研究表明[24]，不同的外源激素，對(duì)卵巢作用不同，人工注射催產(chǎn)激素，能夠促進(jìn)半滑舌鰨卵巢更快地發(fā)育到下一個(gè)時(shí)期；但類(lèi)雄激素可以抑制麥穗魚(yú)卵巢發(fā)育，抑制程度隨著濃度的變大而增加[25]；絨毛膜促性腺激素（HCG）和鯉垂體（PT），對(duì)鰻鱺卵巢催熟效果較好，促黃體素釋放激素（LHRH-A2）和丙酸睪丸素（TOP），則無(wú)明顯效果[23]；GnRH-a 可用于誘導(dǎo)大菱鲆多次產(chǎn)卵[26]；多巴胺（DA）通過(guò)抑制促性腺激素（GtH）的分泌，從而阻斷促性腺激素釋放激素（GnRH）的作用[27]。

宋燕等[28]研究表明，在魚(yú)類(lèi)不同的生長(zhǎng)時(shí)期，催產(chǎn)劑對(duì)于魚(yú)體的性激素影響不同。鄒忠義等[29]在對(duì)大鯢尿液性激素水平季節(jié)變化及其與繁殖的關(guān)系中發(fā)現(xiàn)，大鯢的E2含量需要達(dá)到一定的閾值后進(jìn)行催產(chǎn)試驗(yàn)，才能刺激其產(chǎn)卵。本實(shí)驗(yàn)也是通過(guò)注射催產(chǎn)劑來(lái)研究性激素水平的變化，從而進(jìn)一步研究人工養(yǎng)殖環(huán)境下，巴馬擬纓魚(yú)性腺的發(fā)育情況。蔡智鳴等[30]研究表明，魚(yú)類(lèi)的卵巢在Ⅳ期初時(shí)人工催產(chǎn)無(wú)效，只有發(fā)育到Ⅳ期中期，最好是Ⅳ期期末，催產(chǎn)才能成功。本試驗(yàn)在巴馬擬纓魚(yú)性腺尚未完全成熟的情況下進(jìn)行試催產(chǎn)，以探索特定時(shí)期的巴馬擬纓魚(yú)性激素的變化。