孫 光，張 蓉，劉鳳丹，陳光吉,，李世歌,，尚以順，宋 莉，班 騫，鐘 理，龍忠富，王 茜，李小冬,

（1.貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 / 農(nóng)業(yè)生物工程研究院 / 山地植物資源保護(hù)與保護(hù)種質(zhì)創(chuàng)新教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 / 貴州省農(nóng)業(yè)生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院草業(yè)研究所, 貴州 貴陽(yáng) 550006；3.貴州鼎芯農(nóng)牧科技有限公司, 貴州 貴陽(yáng) 550006）

金蕎麥(Fagopyrum dibotrys)是蓼科蕎麥屬多年生草本植物，因?yàn)槠渑虼蟮慕瘘S色的根而得名“金蕎”。金蕎麥?zhǔn)侵嗅t(yī)中常用的一味中藥，其干燥的根莖入藥味微辛、澀，性涼，具有清熱解毒、排膿祛痰、祛風(fēng)化濕之功效[1]，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，金蕎麥根莖中含有多酚類、甾體、萜類、有機(jī)酸類、苷類等物質(zhì)，因有較強(qiáng)的抗菌活性以及增強(qiáng)機(jī)體免疫能力等功能而被載入《中華人民共和國(guó)藥典》和《中國(guó)獸藥典》[2]。同時(shí)，報(bào)道指出金蕎麥地上部分有黃酮類、黃酮醇類、多酚類、有機(jī)酸類等物質(zhì)，且其粗蛋白質(zhì)含量與紫花苜蓿(Medicago sativa)接近[3]，而金蕎麥根莖中的黃酮含量達(dá)0.322～1.554 mg·g-1，高于多數(shù)草本植物[4]，且年生物產(chǎn)量較高(達(dá)112 500 kg·hm-2)[5]，因此被當(dāng)作一種優(yōu)質(zhì)的飼草資源應(yīng)用于養(yǎng)殖領(lǐng)域[6-7]。有研究發(fā)現(xiàn)，在夏季高溫條件下新鮮金蕎麥莖葉替代10%的基礎(chǔ)飼糧飼喂蛋雞可維持原有產(chǎn)蛋率，且降低了血清中炎癥因子和內(nèi)毒素水平，可見(jiàn)具有較高應(yīng)用價(jià)值[8]。但鮮飼的利用方式存在營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)不穩(wěn)定且使用不便等問(wèn)題而限制其推廣應(yīng)用。因此，研制金蕎麥提取物的飼料添加劑對(duì)挖掘金蕎麥飼用價(jià)值具有現(xiàn)實(shí)意義。

研究表明，多數(shù)植物提取物中含有大量具有抗氧化、消炎、抗病毒、抗腫瘤等特性的黃酮類化合物，而黃酮類化合物在植物提取方法的研究較廣泛[9-10]。目前，植物提取物中黃酮的提取方法各有不同，有單一提取方法(如水提法、有機(jī)溶劑法，超聲法、酶解法等)，也有輔助提取法(如超聲波酶提法、超聲波醇提法、蒸汽爆破輔助、機(jī)械化學(xué)輔助等[11-12])，而這些提取方法還存在耗時(shí)長(zhǎng)、提取率低以及生物活性物質(zhì)降解率高等缺點(diǎn)。近年來(lái)，雙水相提取技術(shù)被廣泛應(yīng)用于植物黃酮的提取方法中，具有操作簡(jiǎn)便、溶劑量少、安全、效率高等特點(diǎn)[13]。

本研究采用乙醇-硫酸銨雙水相(硫酸銨相比于常見(jiàn)的碳酸鈉、磷酸氫二鈉、氯化銨等鹽類，在乙醇中的溶解度更低，有利于黃酮類成分的分離)體系提取金蕎麥中總黃酮，再輔以超聲波破壞植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)的作用，增強(qiáng)溶質(zhì)在細(xì)胞膜的透過(guò)率，有利于黃酮活性物質(zhì)的釋放和溶出，同時(shí)以黃酮得率為目標(biāo)，考察了硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)、液料比、超聲時(shí)間等單因素的影響，采用Box-Behnken-響應(yīng)面分析法優(yōu)化提取方法，同時(shí)通過(guò)研究金蕎麥總黃酮對(duì)DPPH、OH-和O2-自由基的清除效果，測(cè)定金蕎麥總黃酮的抗氧化活性，旨在為金蕎麥活性成分的有效提取及其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料制備

于2021 年10 月在貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院麥坪基地刈割3 年生地上部分的新鮮金蕎麥(含莖葉)。金蕎麥干樣制備：采集金蕎麥莖葉于真空干燥箱(60 ℃)烘干，然后放入研缽中研磨至粉狀，過(guò)25.4 mm篩。過(guò)篩后的金蕎麥粉末避光冷藏(4 ℃)備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 提取工藝參數(shù)的單因素試驗(yàn)

為了確定提取參數(shù)的范圍，便于進(jìn)一步優(yōu)化提取工藝。首先采用完全隨機(jī)單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以肖連冬等[14]報(bào)道的提取方法為基礎(chǔ)，以提取參數(shù)硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)(13%、15%、17%、19%、21%)、液料比(25 ： 1、30 ： 1、35 ： 1、40 ： 1、45 ： 1)和超聲時(shí)間(20、30、40、50、60 min)為試驗(yàn)因子，分別開(kāi)展單因素提取方法研究?；A(chǔ)步驟：在10 g 一定組成的乙醇-硫酸銨雙水相體系中，按照質(zhì)量分?jǐn)?shù)稱取一定量硫酸銨，置于燒杯中，加少量水溶解后，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為32% (4 mL)的乙醇溶液，攪拌混勻，靜置直到溶液分相。按照液料比(浸提液體積與物質(zhì)質(zhì)量之比)稱取一定量的金蕎麥莖葉粉末，加入燒杯中，混合均勻后于60 ℃水浴60 min，超聲50 min 后倒入10 mL 的離心管 中，并在4 000 r·min-1的條件下離心5 min，取上相澄清液作為待測(cè)液。

1.2.2 金蕎麥提取物總黃酮含量的測(cè)定

首先繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，參照邱夢(mèng)瑜等[15]的方法配制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用Na2NO2-Al (NO3)3法后，在510 nm 處測(cè)吸光度，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y= 0.013 09x+ 0.000 285 7，其線性相關(guān)性R2= 0.999 4。取樣品提取液1 mL，并以其替代蘆丁對(duì)照液，按Na2NO2-Al (NO3)3顯色法的步驟，測(cè)定吸光度。將吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出樣品溶液中黃酮的濃度。

金蕎麥總黃酮含量按下列公式計(jì)算：Y=C×V×n/M，其中Y為金蕎麥總黃酮含量，C為樣品溶液中黃酮的濃度，V為樣品提取液的體積，n為稀釋倍數(shù)，M為樣品質(zhì)量。

1.2.3 響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)、液料比、超聲時(shí)間為試驗(yàn)因素，黃酮得率為響應(yīng)值，利用Design-Expert 軟件進(jìn)行Box-Behnken 設(shè)計(jì)，優(yōu)化金蕎麥總黃酮提取工藝。試驗(yàn)因素與水平如表1所列。

表1 Box-Behnken 響應(yīng)面試驗(yàn)的因素與水平Table 1 Response surface analysis of experimental factors level

1.2.4 金蕎麥黃酮抗氧化活性研究

對(duì)所得金蕎麥黃酮提取液進(jìn)行DPPH、OH-和自由基清除方法測(cè)定[16-18]，具體測(cè)定方法如下。

DPPH 自由基清除率測(cè)定：分別取2 mL 不同質(zhì)量濃度(0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg·mL-1)的提取液和陽(yáng)性對(duì)照液(抗壞血酸)置于10 mL 離心管中，加入2 mL 0.04 g·L-1的DPPH，混合均勻，避光30 min，于517 nm 處測(cè)吸光度記為Ai；另取樣液2 mL 于試管中，加2 mL 無(wú)水乙醇，避光30 min，在517 nm 處 測(cè) 吸 光 度，記 為Aj；取2 mL 0.4 g·L-1的DPPH 和2 mL 無(wú)水乙醇于試管中，混合均勻，避光30 min，在517 nm 處測(cè)吸光度，記為A0。按下列公式計(jì)算對(duì)DPPH 自由基的清除率(F)：

OH-自由基清除率測(cè)定：分別取2 mL 不同質(zhì)量濃度(1、2、3、4、5 mg·mL-1)的提取液和陽(yáng)性對(duì)照液于5 mL 離心管中，依次加入0.3 mL 9 mmol·L-1的硫酸亞鐵和0.5 mL 9 mmol·L-1的水楊酸-乙醇溶液，最后用0.3 mL 8.8 mmol·L-1過(guò)氧化氫啟動(dòng)，于37 ℃下水浴30 min，在510 nm 處測(cè)定吸光度值記為Ai；不加過(guò)氧化氫記為Aj；以蒸餾水代替待測(cè)溶液記為A0。根據(jù)式(1)計(jì)算OH-自由基清除率。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)分析

單因素試驗(yàn)結(jié)果采用Excel 2010 制作趨勢(shì)圖，響應(yīng)面設(shè)計(jì)試驗(yàn)用Graphpad 10.0 軟件進(jìn)行分析數(shù)據(jù)并制作圖表，再用SPSS 26.0 軟件進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 金蕎麥黃酮提取單因素試驗(yàn)

2.1.1 硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)金蕎麥黃酮得率的影響

固定液料比為30 ： 1，超聲時(shí)間為50 min，考察硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)金蕎麥黃酮得率的影響(圖1)發(fā)現(xiàn)，在(NH4)2SO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13%～15%時(shí)，隨著(NH4)2SO4濃度的增加，上相中總黃酮的含量增加，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%～21%時(shí)，總黃酮含量降低；質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%時(shí)，總黃酮含量最高，為76.1 mg·g-1，顯著高于其他質(zhì)量分?jǐn)?shù)時(shí)的含量(P< 0.05)。

圖1 硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)黃酮含量的影響Figure 1 Effect of mass fraction of ammonium sulfate on flavonoid content

2.1.2 液料比對(duì)金蕎麥黃酮得率的影響

固定硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%，超聲時(shí)間為50 min，考察液料比對(duì)金蕎麥黃酮得率的影響(圖2)發(fā)現(xiàn)，液料比對(duì)黃酮提取率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，在液料比為35 ： 1 時(shí)，黃酮含量最高，為78.84 mg·g-1。

圖2 液料比對(duì)黃酮含量的影響Figure 2 Effect of liquid - material ratio on flavonoid content

2.1.3 超聲時(shí)間對(duì)金蕎麥黃酮得率的影響

固定硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%，液料比為30 ： 1，考察超聲時(shí)間對(duì)金蕎麥黃酮得率的影響(圖3)發(fā)現(xiàn)，黃酮提取率隨超聲時(shí)間的延長(zhǎng)先升高后下降，在超聲50 min 時(shí)達(dá)到最高值，為53.98 mg·g-1。

圖3 超聲時(shí)間對(duì)黃酮含量的影響Figure 3 Effect of ultrasonic time on flavonoid content

2.2 響應(yīng)面設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.2.1 Box-Behnken 試驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)單因素試驗(yàn)后，試驗(yàn)選取硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)、液料比和超聲時(shí)間3 個(gè)因素的3 個(gè)水平，采用Box-Behnken 模型優(yōu)化試驗(yàn)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)結(jié)果如表2 所列?？梢钥吹搅蛩徜@質(zhì)量分?jǐn)?shù)、液料比和超聲時(shí)間分別為15%、35 mL·g-1和50 min 提取的黃酮含量最高，為81.7 mg·g-1。

表2 金蕎麥黃酮提取工藝條件的響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Response surface design with results for extraction of flavonoids from Fagopyrum dibotrys

2.2.2 模型建立與顯著性分析

利用Design-Expert 10.0.1 軟件對(duì)響應(yīng)面數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合和方差分析，預(yù)測(cè)黃酮得率和各因素的回歸模型如下：

方差分析表明，本研究所選用的回歸模型具有極好的顯著性(P< 0.01) (表3)，表明該模型準(zhǔn)確地?cái)M合了黃酮提取率與上述3 個(gè)因素之間的關(guān)系。另外，模型決定系數(shù)R2= 0.965 0，說(shuō)明該模型方程對(duì)響應(yīng)值變化有很高的適用性；校正系數(shù)R2adj= 0.920 0，說(shuō)明該模型方程能夠解釋92%的響應(yīng)值變化。失擬項(xiàng)P= 0.809 7 > 0.05，表明該模型失擬項(xiàng)不顯著，模型整體的絕對(duì)誤差較小，變異系數(shù)3.35%。根據(jù)F值可知，各因素對(duì)金蕎麥總黃酮得率的影響程度為B > C > A，即液料比 > 超聲時(shí)間 > 硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)。此外，3 個(gè)因素對(duì)提取率影響是顯著的，但三者之間的相互作用對(duì)總黃酮提取率有不同的影響，交互項(xiàng)系數(shù)BC 顯著(P< 0.05)，其他項(xiàng)系數(shù)(AB、AC)不顯著(P> 0.05)。

表3 響應(yīng)面試驗(yàn)回歸模型方差分析Table 3 Response surface test regression model analysis of variance

2.2.3 響應(yīng)面交互作用分析

為了優(yōu)化提取條件，通過(guò)響應(yīng)面圖獲得的模型可視化是研究自變量對(duì)因變量影響的最佳方法。通常，響應(yīng)面圖是通過(guò)在試驗(yàn)范圍內(nèi)改變兩個(gè)變量并保持其他變量不變來(lái)生成的[19]。因此，繪制三維響應(yīng)面曲線，以可視化表面響應(yīng)值和交互變量之間的關(guān)系，從而獲得最大產(chǎn)量(圖4)。所有響應(yīng)曲面均為具有最大點(diǎn)的凸形，表明試驗(yàn)因子的范圍是合理的，因此可以根據(jù)擬合模型預(yù)測(cè)優(yōu)化條件。

圖4 各因素交互作用對(duì)金蕎麥黃酮得率影響的響應(yīng)面和等高線圖Figure 4 Response surface and contour map of interaction of various factors on yield of total flavonoids from buckwheat

當(dāng)液料比一定時(shí)，隨著硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加，黃酮得率呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)(圖4a)，而當(dāng)硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)一定時(shí)，隨著液料比的增加，黃酮得率也呈現(xiàn)出先增大后減小的趨勢(shì)，等高線圖呈橢圓形，但變化不明顯。如表3 所列，液料比和硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)交互作用對(duì)黃酮得率影響不顯著，在液料比為34 ： 1～36 ： 1，硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%時(shí)，響應(yīng)值最大。

當(dāng)超聲時(shí)間一定時(shí)，隨著硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加，黃酮得率呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)(圖4b)，而當(dāng)硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)一定時(shí)，隨著超聲時(shí)間的增加，黃酮得率也呈現(xiàn)出先增大后減小的趨勢(shì)，等高線呈圓形，對(duì)黃酮得率影響不顯著[20]，在超聲時(shí)間為50 min、硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%時(shí)，響應(yīng)值最大。

當(dāng)超聲時(shí)間一定時(shí)，隨著液料比的增加，黃酮得率呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)(圖4c)，而當(dāng)液料比一定時(shí)，隨著超聲時(shí)間的增加，黃酮得率也呈現(xiàn)出先增大后減小的趨勢(shì)，但變化幅度較液料比小，因此，等高線圖呈橢圓形，液料比與超聲時(shí)間交互作用對(duì)黃酮得率影響顯著。

2.2.4 結(jié)果驗(yàn)證與比較

根據(jù)響應(yīng)面結(jié)果并依據(jù)回歸模型確定金蕎麥黃酮提取的最佳工藝參數(shù)為：硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)14.77%、液料比38 ： 1、超聲時(shí)間47.34 min。在此條件下，理論上金蕎麥黃酮提取率為80.51 mg·g-1。為驗(yàn)證試驗(yàn)可靠性，同時(shí)方便操作，將優(yōu)化工藝修正為硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%、液料比38 ： 1、超聲時(shí)間47 min，進(jìn)行3 次平行試驗(yàn)，得到金蕎麥黃酮提取率為78.52 mg·g-1，相對(duì)誤差為2.47%，與預(yù)測(cè)值偏差較小。

2.3 抗氧化試驗(yàn)

2.3.1 金蕎麥提取物對(duì)DPPH 自由基清除率的影響

在質(zhì)量濃度為0.05～1.0 mg·mL-1時(shí)，隨著金蕎麥提取物濃度的增加，對(duì)DPPH 自由基清除能力也明顯增加(圖5)，而抗壞血酸(Vitamin C)對(duì)DPPH自由基清除率始終保持在96%～97%。在濃度為1.0 mg·mL-1時(shí)，其對(duì)DPPH 自由基清除率達(dá)到96.25%，IC50為0.118 2 mg·mL-1，高 于 抗 壞 血 酸(IC50小 于0.001 mg·mL-1)。

圖5 不同濃度金蕎麥提取物對(duì)DPPH 自由基的清除作用Figure 5 Effect of different concentrations of buckwheat extract on DPPH free radical scavenging

2.3.2 金蕎麥提取物對(duì)OH-自由基清除率的影響

在質(zhì)量濃度為1～5 mg·mL-1時(shí)，對(duì) OH-自由基清除率隨著金蕎麥提取物濃度和抗壞血酸濃度的增加而增強(qiáng)(圖6)，金蕎麥提取物和抗壞血酸對(duì)OH-自由基清除的IC50值分別為4.071 和0.001 mg·mL-1。說(shuō)明其具有抗氧化活性。

圖6 不同濃度金蕎麥提取物對(duì)OH-自由基的清除作用Figure 6 Effect of different concentrations of Fagopyrum dibotrysextract on OH-free radical scavenging

2.3.3 金蕎麥提取物對(duì)O2-自由基清除率的影響

在質(zhì)量濃度為1～8 mg·mL-1時(shí)，對(duì)O2-自由基清除率隨著金蕎麥提取物濃度和抗壞血酸濃度的增加而增強(qiáng)(圖7)，金蕎麥提取物和抗壞血酸對(duì)自由基清除的IC50值分別為25.38 和0.008 152 mg·mL-1。從抗壞血酸陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)可看出其對(duì)O2-自由基的清除明顯優(yōu)于相同濃度的金蕎麥提取物。

圖7 不同濃度金蕎麥提取物對(duì)O2-自由基的清除作用Figure7Effectofdifferentconcentrations ofFagopyrum dibotrysextract onO2-freeradicalscavenging

3 討論與結(jié)論

目前植物中黃酮類化合物的提取主要采用回流提取法和有機(jī)溶劑萃取法。雙水相體系萃取的機(jī)理為：通過(guò)鹽析效應(yīng)、氫鍵和范德華力促進(jìn)溶劑向植物細(xì)胞的傳質(zhì)，從而萃取出黃酮等活性物質(zhì)[21]。張琳等[13]采用乙醇-硫酸銨雙水相提取陳皮黃酮，在乙醇體積分?jǐn)?shù)50%，硫酸銨用量33 g，超聲時(shí)間32 min 的條件下，提取總黃酮74.83 mg·g-1，與本研究結(jié)果相近，表明本研究選用的鹽析溶劑作為試驗(yàn)因子具有理論支撐。料液比會(huì)影響溶液的粘度和濃度，從而對(duì)提取率造成影響，本研究黃酮提取率隨料液比增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，這可能是液料比增加時(shí)，細(xì)胞與外部溶劑之間黃酮類化合物濃度差增大，導(dǎo)致傳質(zhì)驅(qū)動(dòng)力的增加，然而，高料液比會(huì)使溶劑擴(kuò)散到內(nèi)部結(jié)構(gòu)的距離延長(zhǎng)，影響黃酮的提取，這與多數(shù)前人報(bào)道的結(jié)果一致[22]。當(dāng)超聲波持續(xù)時(shí)間達(dá)到50 min 時(shí)，黃酮提取率達(dá)到最高，這可能歸因于隨著超聲時(shí)間處理的延長(zhǎng)，植物細(xì)胞壁加速破壞，黃酮更容易溶出，然而，如果超聲波時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可能會(huì)破壞黃酮內(nèi)部結(jié)構(gòu)，降低提取率。本研究經(jīng)響應(yīng)面優(yōu)化后提取到的黃酮含量達(dá)到78.52 mg·g-1，相對(duì)于超臨界CO2流體萃取方法[23]效果更好，而王佰靈等[24]采用超聲波輔助纖維素酶法提取金蕎麥總黃酮，提取率為14.25%，高于本研究結(jié)果，但由于本研究只選用金蕎麥莖葉部分進(jìn)行提取，提取方法還有待比較，因此，下一步研究可以采用超聲波輔助纖維素酶法提取金蕎麥莖葉部位的黃酮，從而對(duì)本研究方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。

動(dòng)物機(jī)體在生產(chǎn)活動(dòng)中積累的活性氧自由基會(huì)引起動(dòng)物機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激，從而造成機(jī)體損傷。研究表明植物中含有多種抗氧化成分，具有清除自由基的作用，紫象草(Cenchrus purpureus)原花青素提取物濃度為200 mg·mL-1時(shí)，對(duì)ABTS、DPPH 清除率分別為95.69%和96.79%；槐花顆粒提 取 液 質(zhì) 量 濃 度 為8 mg·mL-1時(shí)，對(duì)DPPH 自 由基、過(guò)氧化氫的清除能力比維生素C 溶液更強(qiáng)[23]。本研究得到，在金蕎麥提取液濃度為1 mg·mL-1時(shí)，對(duì)DPPH 自由基清除率與維生素C 相近；金蕎麥提取液濃度分別為5、8 mg·mL-1時(shí)，對(duì)OH-、O2-自由基清除率為57.64%和30.20%。由此可見(jiàn)，金蕎麥提取物能有效清除自由基，且金蕎麥提取物對(duì)自由基清除率均隨提取物濃度增加而上升，表明其抗氧化性能存在劑量效應(yīng)。劉賽格等[25]研究表明，金蕎麥黃酮提取物質(zhì)量濃度在10 μg·mL-1時(shí)，對(duì)DPPH 自由基清除率達(dá)到86.09%，而本研究所得提取物在較高濃度時(shí)才能達(dá)到此效果，這是因?yàn)樘崛∥镏锌赡艽嬖谄渌钚猿煞趾涂扇苄匀軇┑绕渌s質(zhì)，金蕎麥黃酮提取物的成分組成和含量也有待進(jìn)一步分析，但是考慮到分離提純將增加生產(chǎn)成本，且得到的粗提取物具備一定的抗氧化能力，故本研究制備的金蕎麥黃酮提取物仍然具有開(kāi)發(fā)為天然抗氧化飼料添加劑的潛力。

本研究利用響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波輔助雙水相提取金蕎麥黃酮的工藝參數(shù)，在硫酸鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%、液料比38 ： 1、超聲時(shí)間47 min 的條件下，金蕎麥黃酮提取含量達(dá)到78.52 mg·g-1。金蕎麥提取物對(duì)自由基清除率的IC50值分別為0.118 2、4.071 0、25.380 0 mg·mL-1，表明金蕎麥提取物具有較強(qiáng)的抗氧化作用，并且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。