支曉紅

（咸陽市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，陜西咸陽 712000）

水是人體的六大營養(yǎng)元素之一，是所有生物（包括人類）賴以生存的重要條件。隨著高品質(zhì)飲用水的提出，越來越多的人選擇包裝飲用水，世界衛(wèi)生組織制定的飲用水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)明確指出飲用水有關(guān)的安全問題大多來自微生物[1]。數(shù)據(jù)分析顯示我國的包裝飲用水中微生物主要集中在銅綠假單胞菌的超標(biāo)問題[2-3]。銅綠假單胞菌是包裝飲用水中污染風(fēng)險(xiǎn)較大的一種水源性條件致病菌，飲用被其污染的水表現(xiàn)為急性腹瀉，嚴(yán)重的發(fā)展為敗血癥、肺炎、腦膜炎等重癥。因此，研究和探討包裝飲用水中銅綠假單胞菌的控制措施及檢測方法，對于預(yù)防銅綠假單胞菌中毒和保障公共安全具有重要意義。

1 污染現(xiàn)狀及超標(biāo)原因

1.1 污染現(xiàn)狀

自2015 年《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 包裝飲用水》將銅綠假單胞菌作為質(zhì)量檢測指標(biāo)后，我國很多地方在包裝飲用水的抽樣檢測中檢出銅綠假單胞菌。福建省市場監(jiān)督管理局2019 年抽檢信息公告顯示共抽檢包裝飲用水787 批次，不合格產(chǎn)品共5 個(gè)批次，且5 個(gè)批次均檢出銅綠假單胞菌[4]。李杜娟[5]采集某市區(qū)居民飲用水180 份，其中純凈水103 份，礦物質(zhì)水46 份，天然礦物質(zhì)水31 份進(jìn)行抽樣檢測，檢出銅綠假單胞菌69 份，銅綠假單胞菌檢出率為38.3%，在天然礦泉水中檢出銅綠假單胞菌22 份，檢出率高達(dá)70.9%。因此，探討包裝飲用水中銅綠假單胞菌的超標(biāo)原因顯得尤為重要。

1.2 超標(biāo)原因

1.2.1 水源污染

銅綠假單胞菌超標(biāo)考慮的首要原因就是水源污染。包裝飲用水中的純凈水以自來水為水源，礦泉水以河流水、湖泊水或者泉水為水源，這些水源都易被銅綠假單胞菌污染。如果水源受到污染，且后續(xù)沒有采用清除設(shè)備和正確有效的清除方式，就很有可能導(dǎo)致最終的成品飲用水中出現(xiàn)銅綠假單胞菌。

1.2.2 生產(chǎn)過程衛(wèi)生控制不嚴(yán)格

銅綠假單胞菌分布于空氣、水、土壤中，甚至人的皮膚上，且常存在于潮濕的環(huán)境中[5]。而包裝飲用水的生產(chǎn)操作環(huán)境一般比較潮濕，這在無形之中就為銅綠假單胞菌的生長提供了良好環(huán)境。因此，生產(chǎn)過程中生產(chǎn)車間環(huán)境不達(dá)標(biāo)、儀器設(shè)備污染、殺菌工藝參數(shù)設(shè)置不合理都有可能導(dǎo)致包裝飲用水中銅綠假單胞菌超標(biāo)。

有的生產(chǎn)操作區(qū)缺乏合理規(guī)劃，回收區(qū)、灌裝區(qū)、檢驗(yàn)區(qū)都在一起就容易造成交叉污染；有的儀器設(shè)備和車間消毒不嚴(yán)格，甚至沒有消毒設(shè)備，就非常容易導(dǎo)致銅綠假單胞菌污染且蔓延到整個(gè)生產(chǎn)工序的管道和設(shè)備，導(dǎo)致成品水的污染。

1.2.3 包裝材料清洗消毒不標(biāo)準(zhǔn)

包裝飲用水受銅綠假單胞菌污染的最主要原因就是桶裝、瓶裝清潔和消毒不到位。目前包裝飲品水廠家都存在回收包裝材料的現(xiàn)象，水桶的特殊構(gòu)造會讓消毒效果大打折扣，而不合理的消毒方式和使用不當(dāng)?shù)南緞┒紩斐上静粡氐祝善匪腥匀淮嬖阢~綠假單胞菌。需要注意的是，紫外線對銅綠假單胞菌殺菌效果不佳[6]。

1.2.4 自檢及運(yùn)輸過程監(jiān)管不到位

目前很多包裝飲用水生產(chǎn)企業(yè)都因缺少專業(yè)檢測人員和檢測設(shè)備而未對成品水進(jìn)行微生物檢測，缺乏真實(shí)數(shù)據(jù)來有效應(yīng)對超標(biāo)情況，只能放之任之。同時(shí)，包裝飲用水中的桶裝水密封性相對差一些，在運(yùn)輸搬運(yùn)中多次提拉桶蓋會導(dǎo)致頂蓋松動甚至漏水，無形之中就會造成細(xì)菌污染。

2 控制措施

2.1 包裝材料的質(zhì)量控制

試驗(yàn)研究和調(diào)查結(jié)果顯示包裝飲用水中檢出銅綠假單胞菌和產(chǎn)品包裝材料的處理有著顯著的關(guān)系。一次性包裝材料的污染程度要比反復(fù)使用的包裝材料小得多。針對企業(yè)大多采用回收桶的現(xiàn)象，回收桶及瓶蓋的存放、消毒、沖洗必須做到分類存放和有效清潔，回收桶的內(nèi)部清潔應(yīng)當(dāng)至少含有預(yù)清洗、洗滌劑清洗、消毒劑清洗、沖洗和成品水沖洗等環(huán)節(jié)，且回收桶的使用不超過5 年桶齡。

2.2 生產(chǎn)環(huán)境的質(zhì)量控制

銅綠假單胞菌不僅會通過飲用水感染人體，也會通過交叉感染的方式進(jìn)入飲用水，因此生產(chǎn)企業(yè)必須嚴(yán)格控制生產(chǎn)環(huán)境。在生產(chǎn)過程中要及時(shí)清除積水保持地面干燥，生產(chǎn)區(qū)域要劃分合理且采取有效隔離，操作車間和生產(chǎn)設(shè)備要進(jìn)行定期清潔和消毒，此外還要加強(qiáng)對操作人員的消毒管理，徹底阻斷銅綠假單胞菌繁殖蔓延。

2.3 生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制

包裝飲用水的生產(chǎn)一般包括原水、砂濾、碳濾、精濾、反滲透、殺菌、罐裝和包裝等環(huán)節(jié)。其中，原水和殺菌是關(guān)鍵控制點(diǎn)。原水井每隔15 d 必須進(jìn)行一次嚴(yán)格的消毒，原水箱每周都要進(jìn)行嚴(yán)格的消毒，可以從源頭上杜絕被銅綠假單胞菌污染。貯水罐和管道應(yīng)配備沖洗消毒設(shè)施，每周進(jìn)行一次消毒，避免管道上附著有銅綠假單胞菌造成交叉污染。殺菌設(shè)備定期進(jìn)行維護(hù)和檢修，使用前必須檢查是否完好，使用后做好使用記錄。此外，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)找尋適合企業(yè)的消毒方式，減少因?yàn)橄静粡氐锥鴮?dǎo)致的交叉污染，使用消毒劑時(shí)要嚴(yán)格把控用量，避免產(chǎn)生消毒副產(chǎn)物，進(jìn)而帶來次生危害。

2.4 人員的質(zhì)量控制

生產(chǎn)人員的操作習(xí)慣和衛(wèi)生狀況也會直接影響包裝飲用水污染銅綠假單胞菌的概率，因此應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對生產(chǎn)人員的衛(wèi)生操作和消毒工作的監(jiān)督管理，進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)域后換衣帽，戴好符合要求且消過毒的防護(hù)用品，嚴(yán)格執(zhí)行消毒間的規(guī)定，做好消毒處理。同時(shí)生產(chǎn)人員要持健康證上崗，進(jìn)入車間后按照崗位要求操作，不隨意摸碰廢棄物，避免人體帶入銅綠假單胞菌。此外，人員的控制還應(yīng)當(dāng)包括檢測人員、運(yùn)輸人員和銷售人員的控制。檢測人員要熟悉標(biāo)準(zhǔn)和方法，定期開展考核，驗(yàn)證能力是否滿足崗位需求。運(yùn)輸人員在運(yùn)輸裝卸中禁止以桶蓋為抓手，防止蓋子受損產(chǎn)生污染。銷售人員要查驗(yàn)合格證和出廠報(bào)告，做到產(chǎn)品質(zhì)量安全心中有數(shù)。

2.5 出廠檢驗(yàn)的質(zhì)量控制

很多包裝飲用水生產(chǎn)企業(yè)對新標(biāo)準(zhǔn)《食品安全標(biāo)準(zhǔn) 包裝飲用水》（GB 19298—2014）既不熟悉也不重視，只看重經(jīng)濟(jì)效益忽視產(chǎn)品質(zhì)量。建議生產(chǎn)企業(yè)配備銅綠假單胞菌檢測的定性和定量設(shè)備儀器，提高檢測數(shù)據(jù)的真實(shí)性和有效性，同時(shí)加強(qiáng)對檢測人員的管理，使其熟悉標(biāo)準(zhǔn)和檢測方法，提高檢測水平。每一批次成品水出庫前做好檢測，確保包裝飲用水的出廠有據(jù)可依、有據(jù)可循。此外，銷售商在售賣時(shí)應(yīng)仔細(xì)觀察包裝飲用水外包裝有無破損，是否完好，有破損時(shí)應(yīng)聯(lián)系廠家盡快返廠避免流入市場，同時(shí)做好銷售記錄登記。

3 檢測方法

3.1 國家標(biāo)準(zhǔn)法

國家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》（GB 8538—2022）中規(guī)定了銅綠假單胞菌的檢測方法。采用孔徑0.45 μm 親水性微孔濾膜將水中所含的細(xì)菌截留在濾膜上，再將濾膜移至CN瓊脂培養(yǎng)基上，（36±1） 培養(yǎng)20 ～48 h。菌落在CN 瓊脂上產(chǎn)綠膿菌素并呈藍(lán)色或綠色；菌落在CN瓊脂上呈非藍(lán)色且非綠色，但發(fā)熒光，并能夠利用乙酰胺產(chǎn)氨，42 生長；菌落在CN 瓊脂上呈紅褐色不發(fā)熒光，但在金氏B 培養(yǎng)基上生長發(fā)熒光，氧化酶反應(yīng)陽性，能夠利用乙酰胺產(chǎn)氨。符合上述3 類現(xiàn)象之一均可確證為銅綠假單胞菌，報(bào)告每250 mL水樣中銅綠假單胞菌數(shù)。

3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法

實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法是在分析銅綠假單胞菌外毒素A 基因片段序列后，設(shè)計(jì)特異性引物和對應(yīng)的TaqMan 探針，在其進(jìn)行特異性擴(kuò)增時(shí)加入熒光集團(tuán)或染料，通過熒光信號的強(qiáng)弱來反映擴(kuò)增過程中模板濃度變化。楊滴等[7]采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測礦泉水中的銅綠假單胞菌，結(jié)果表明特異性較好，檢測靈敏度也很高。

3.3 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測法

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測法（Loop-Mediated Isothermal Amplification，LAMP）是由NOTOMI 等[8]研發(fā)的一種新興快速測定方法，它主要是利用特異性引物和DNA 聚合酶在恒溫條件下擴(kuò)增，最終的檢驗(yàn)結(jié)果與國標(biāo)法基本一致，但具有成本低、檢驗(yàn)時(shí)間短的特點(diǎn)，適合即時(shí)量大的初篩作業(yè)。

3.4 Pseudalert 酶底物法

Pseudalert 酶底物法是已通過ISO 國際標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)證的一種特異性底物檢測技術(shù)。它主要是利用目標(biāo)細(xì)菌分泌的特定酶來分解培養(yǎng)基中的相應(yīng)底物發(fā)出熒光的原理，24 h內(nèi)定量或定性檢測水中銅綠假單胞菌，且不需要確認(rèn)試驗(yàn)。王莉莉[9]比較了國標(biāo)法（濾膜法）和Pseudalert 酶底物法檢測飲用水中銅綠假單胞菌，結(jié)果表明兩種方法結(jié)果一致，數(shù)據(jù)真實(shí)可靠。

4 結(jié)語

生活質(zhì)量和生活方式的改變讓包裝飲用水進(jìn)入千家萬戶，銅綠假單胞菌作為包裝飲用水中的危險(xiǎn)因子和必檢項(xiàng)目，其檢驗(yàn)檢測的質(zhì)量需要嚴(yán)格管控和監(jiān)督監(jiān)管。本文通過分析包裝飲用水中銅綠假單胞菌的超標(biāo)原因，提出了質(zhì)控措施，對檢測方法進(jìn)行了研究，為從事包裝飲用水的生產(chǎn)和檢測人員提供了技術(shù)參考和理論支撐，從而更大力度地保障消費(fèi)者的飲水安全。此外，消費(fèi)者在選用包裝飲用水時(shí)要看清外包裝上的相關(guān)標(biāo)識同時(shí)檢查外包裝，盡量選擇生產(chǎn)規(guī)模大、社會口碑好、售后服務(wù)好的生產(chǎn)廠家。