李凱華,張楊,肖曼,徐媛原,林敏霞,林英揚(yáng),吳丹,魏芝芝,鐘仕花

(深圳市質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)研究院,深圳 518055)

低共熔溶劑(Deep eutectic solvents,DESs),是指由一定摩爾質(zhì)量比的氫鍵受體和氫鍵供體組合熔溶形成的不同組分混合物,由Abbott等[1-2]于2003年首次報(bào)道。DESs的物理、化學(xué)性質(zhì)與離子液體非常相似,因此也有人把其歸為一類新型離子液體或離子液體類似物,可廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域[3-5]。DESs正在成為一類新的可持續(xù)溶劑,通常被認(rèn)為是可再生的、廉價(jià)的和綠色的“設(shè)計(jì)”溶劑,具有低揮發(fā)性、可生物降解、成本低、環(huán)境友好等優(yōu)勢(shì)[6],減少了有機(jī)溶劑提取劑對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的健康影響,符合當(dāng)前環(huán)保理念[7]。常見(jiàn)的可組成DESs氫鍵受體有季銨鹽(如氯化膽堿)、兩性離子(如甜菜堿)等,以氯化膽堿最常用;氫鍵供體有胺類、多元醇類等[8-10]。DESs的研究多集中在食品添加色素萃取檢測(cè)領(lǐng)域,劉慧強(qiáng)等[11]利用低共熔溶劑萃取液相色譜法檢測(cè)調(diào)味油中的酸性橙和堿性橙等食品中禁用的工業(yè)染料,考察了幾種不同DESs的提取效率,為食品中非法添加劑殘留檢測(cè)提供了新方法。周佳等[12]利用低共熔溶劑萃取高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定了肉制品和水產(chǎn)品中的3種非法添加劑,拓展了DESs的應(yīng)用領(lǐng)域。蔡娜娜等[13]對(duì)低共熔溶劑的形成機(jī)理和應(yīng)用進(jìn)行了進(jìn)一步研究,為開(kāi)發(fā)利用低共熔溶劑提供新思路。

孔雀石綠(Malachite green,MG)是一種有毒的三苯甲烷類人工合成有機(jī)化合物,既是染料,也是殺菌劑,因其廉價(jià)及殺菌作用好,曾被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖治療水霉病等。在生物體內(nèi),孔雀石綠被還原為穩(wěn)定的隱色孔雀石綠(Leucomalachite green,LMG),其在生物體內(nèi)蓄積、殘留時(shí)間長(zhǎng)。經(jīng)研究,孔雀石綠及代謝物隱色孔雀石綠具有致癌、致畸和致突變作用,已被中國(guó)在內(nèi)的多個(gè)國(guó)家列入食品生產(chǎn)中禁用藥物[14-15]。

中國(guó)漁業(yè)養(yǎng)殖規(guī)模大,水產(chǎn)貿(mào)易值及人均消費(fèi)量占食品消費(fèi)比重持續(xù)增高[16],水產(chǎn)品質(zhì)量安全顯得尤為重要。同時(shí),種植、養(yǎng)殖等農(nóng)業(yè)活動(dòng)中大量使用的農(nóng)藥、獸藥會(huì)通過(guò)陸源輸入進(jìn)入水環(huán)境中,成為影響水產(chǎn)品質(zhì)量安全的風(fēng)險(xiǎn)因子。目前,國(guó)內(nèi)水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)方法有GB/T 19857—2005[17]、GB/T 20361—2006[18]、SC/T 3021—2004[19]、SC/T 9435—2019[20]等液相及液質(zhì)檢測(cè)方法。養(yǎng)殖水體中的孔雀石綠檢測(cè)方法多為乙腈等有機(jī)溶劑提取,固相萃取柱富集凈化等前處理方式,SC/T 9435—2019《水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境(水體、底泥)中孔雀石綠的高效液相色譜法測(cè)定》利用乙腈和二氯甲烷混合提取、固相萃取柱富集凈化,液相色譜分離測(cè)定。趙東豪等[21]建立了水產(chǎn)養(yǎng)殖水體中49種獸藥的殘留量檢測(cè)方法,利用固相萃取法和冷凍干燥法測(cè)定,效果顯著,但耗時(shí)較長(zhǎng)。張秀妍等[22]建立液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定養(yǎng)殖水體中的孔雀石綠,水樣經(jīng)二氯甲烷萃取濃縮,以1 mL濃度為50%的乙腈-乙酸銨溶液定容,內(nèi)標(biāo)法定量檢測(cè),方法定量限為0.010 ng/mL,經(jīng)驗(yàn)證適用于養(yǎng)殖水體中孔雀石綠的測(cè)定。

本方法參考DESs萃取色素等非法添加劑的研究成果,研究了幾種不同低共熔溶劑的萃取效果,建立了養(yǎng)殖水體中孔雀石綠的快速高效萃取富集、液質(zhì)聯(lián)用定量檢測(cè)方法,并為水產(chǎn)品、水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境(水質(zhì)、底泥)中農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)方法研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實(shí)驗(yàn)用養(yǎng)殖用水來(lái)源于水產(chǎn)暫養(yǎng)池養(yǎng)殖用水。

四丁基溴化銨(色譜級(jí),上海阿拉丁生化科技股份有限公司);正辛醇(分析純,天津大茂化學(xué)試劑廠);二乙二醇(色譜純,MACKUN麥克林公司);三乙醇胺(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);正丁醇(分析純,天津大茂化學(xué)試劑廠);乙腈(色譜純,德國(guó)默克股份兩合公司);乙酸銨(色譜級(jí),上海阿拉丁生化科技股份有限公司);甲酸(色譜純97%,阿法埃莎(中國(guó))化學(xué)有限公司);超純水。

孔雀石綠(純度91%)、隱色孔雀石綠(純度99.99%)、D5孔雀石綠(純度97.6%)、D6隱色孔雀石綠(純度96.5%),均購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 儀器與設(shè)備

1290 InfinityⅡ、TripleQuad5500液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀(配ESI離子源,安捷倫、愛(ài)博才思公司);電導(dǎo)率儀(梅特勒托利多科技(中國(guó))有限公司);Milli-Q Reference純水處理儀(法國(guó)Millipore公司);BSA2202S-CW型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司);AS 30600BDT超聲波清洗儀(天津奧特賽恩斯儀器有限公司);旋渦振蕩器(美國(guó)Scientific Industries公司);0.22 μm有機(jī)濾膜(津騰,紫色膜)。

1.3 試劑制備

1.3.1 DESs制備

DESs的制備參考丁勇等[21]研究,選取四丁基溴化銨作為DESs氫鍵受體,二乙二醇、正辛醇、三乙醇胺和正丁醇4種多元醇或胺作為氫鍵供體進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)。按照一定摩爾比,分別稱取一定量的氫鍵供體和氫鍵受體于平底燒瓶,在60 ℃水浴鍋中加熱溶解,直到混合物完全變成澄清、透明液體,室溫冷卻備用。

1.3.2 乙酸銨溶液配制

準(zhǔn)確稱取乙酸銨38.50 g,超純水溶解并定容至1 000 mL,配制成濃度為0.50 mol/L的乙酸銨溶液,4 ℃冷藏保存。流動(dòng)相乙酸銨溶液配制,準(zhǔn)確稱取乙酸銨0.385 g,超純水溶解并定容至999.50 mL,配制成濃度為5 mmol/L的乙酸銨溶液,加0.50 mL甲酸混勻。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取適量的孔雀石綠、隱色孔雀石綠、D5孔雀石綠和D6隱色孔雀石綠,分別用乙腈溶解配制成濃度為1 000 μg/mL的母液。逐級(jí)稀釋,乙腈定容,配制成孔雀石綠和隱色孔雀石綠混合外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液100 μg/L和10 μg/L;D5孔雀石綠和D6隱色孔雀石綠混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液1 000 μg/L和100 μg/L,-18 ℃條件下保存。

1.4 儀器條件

1.4.1 液相色譜條件

色譜柱：BEH C18(3.0 mm×50 mm,1.7 μm);柱溫：40 ℃;進(jìn)樣量：2 μL;流速：0.50 mL/min;流動(dòng)相A：乙腈;流動(dòng)相B：鹽溶液(5 mmol/L乙酸銨+0.05%甲酸溶液)。

1.4.2 質(zhì)譜條件

離子化模式：大氣壓電噴霧離子源(ESI),正離子模式;掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(Multiple reaction monitoring,MRM);離子化電壓：5 500 V(正離子模式),離子源溫度：550 ℃,噴霧氣(GS1)、輔助氣(GS2)、氣簾氣(CUR)、碰撞氣(CAD)均為高純氮?dú)?使用前調(diào)節(jié)氣體流量使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測(cè)要求。待測(cè)物母離子、定量定性離子、去簇電壓和碰撞電壓見(jiàn)表1。

表1 MRM掃描模式的參數(shù)Tab.1 Parameters of MRM

1.5 樣品處理

養(yǎng)殖水經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾備用。取10 mL過(guò)濾后的養(yǎng)殖水,加入適量混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液和乙酸銨溶液,旋渦混勻。準(zhǔn)確移取1 mL水樣至離心管內(nèi),加入低共熔溶劑,加蓋旋渦混勻1～2 min,靜置萃取5 min,待分層后,取全部上層萃取液至進(jìn)樣瓶中,乙腈定容至1 mL,過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜,上機(jī)待測(cè)。

1.6 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制

準(zhǔn)確移取100 μg/L的孔雀石綠和隱色孔雀石綠混合外標(biāo)工作溶液,用乙腈乙酸銨溶液(1.3.2流動(dòng)相乙酸銨溶液,v/v=7∶3)稀釋成濃度為5、10、20、50和100 μg/L的孔雀石綠和隱色孔雀石綠混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液;同樣準(zhǔn)確移取100 μg/L的D5孔雀石綠和D6隱色孔雀石綠混合內(nèi)標(biāo)工作溶液20 μL,配制成內(nèi)標(biāo)濃度均為2.00 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.7 添加實(shí)驗(yàn)

向已知10 mL空白養(yǎng)殖水中分別添加5、20和50 μL濃度為1 000 μg/L的孔雀石綠外標(biāo)混合工作液,得到含量為0.5、2.0、5.0 μg/L的孔雀石綠和隱色孔雀石綠加標(biāo)樣品,按2.5實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行處理測(cè)定,并計(jì)算方法線性范圍、檢出限、精密度和回收率。

1.8 數(shù)據(jù)處理

采用ESI電噴霧離子源,正離子掃描模式,分別對(duì)孔雀石綠和隱色孔雀石綠監(jiān)測(cè)其母離子和2個(gè)子離子,母離子和子離子組成監(jiān)測(cè)離子對(duì),以MRM多反應(yīng)監(jiān)測(cè)對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定性,內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析。建立數(shù)據(jù)處理方法時(shí),先檢測(cè)一個(gè)中濃度目標(biāo)物,待所有離子出峰完成后,在愛(ài)博才思(AB)工作站中,按照相應(yīng)離子出峰時(shí)間、半峰寬等參數(shù),選擇使用曲線(不過(guò)零點(diǎn))、對(duì)應(yīng)的內(nèi)標(biāo)物來(lái)進(jìn)行定量數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 低共熔溶劑種類選擇

參照DESs組分及配比研究,本次試驗(yàn)選擇四丁基溴化銨作為DESs氫鍵受體,二乙二醇、正辛醇、三乙醇胺和正丁醇4種多元醇作為氫鍵供體,按照摩爾比1∶2進(jìn)行熔溶對(duì)比試驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)四丁基溴化銨和二乙二醇、三乙醇胺和正丁醇混合加熱溶解后液體均澄清,但在試驗(yàn)中,分別加入上述DESs 400 μL于1 mL養(yǎng)殖水樣品中,混勻靜置,未分層。四丁基溴化銨和正辛醇進(jìn)行混合加熱溶解,液體澄清。在試驗(yàn)中,加入該DESs 400 μL于1 mL養(yǎng)殖水樣品,混勻靜置,呈油狀液滴浮于水面,分層明顯。

2.2 低共熔溶劑配比考察

以四丁基溴化銨作為DESs氫鍵受體,正辛醇作為氫鍵供體,按照摩爾比1∶2、1∶3、1∶4和1∶5,進(jìn)行熔溶考察試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)不同配比混合加熱后,均能形成澄清透明均一溶液,但溶液隨著氫鍵供體正辛醇增加,黏度變小。試驗(yàn)統(tǒng)一在3組平行樣品中添加400 μL DESs的情況下,考察不同摩爾比對(duì)萃取效果的影響,發(fā)現(xiàn)按照摩爾比1∶4混合配制的DESs孔雀石綠和隱色孔雀石綠實(shí)驗(yàn)離子強(qiáng)度最高,摩爾比1∶3混合配制的DESs回收率穩(wěn)定(圖1),最終選取摩爾比為1∶3的DESs作為試驗(yàn)萃取溶劑。

圖1 不同摩爾比DESs對(duì)離子強(qiáng)度和樣品回收率的影響(樣品中孔雀石綠和隱色孔雀石綠添加濃度2.00 μg/L,n=3)Fig.1 Effects of DESs on ion strength and sample recovery with different molar ratios(Malachite green and Leucomalachite green were added at concentrations of 2.00 μg/L,n=3)

2.3 低共熔溶劑用量考察

添加摩爾比1∶3的DESs 100、200、300、400、500和 600 μL,發(fā)現(xiàn)添加100 μL DESs,未能形成明顯上層清液,添加200 μL DESs,萃取分層后,得到上清液約100 μL;當(dāng)添加400 μL DESs,萃取分層后,得到上清液約200 μL,質(zhì)譜離子強(qiáng)度最高,孔雀石綠和隱色孔雀石綠實(shí)驗(yàn)回收率均穩(wěn)定。隨著添加量增加,萃取分層越明顯,但離子響應(yīng)強(qiáng)度有減弱現(xiàn)象(圖2),最終選擇添加400 μL DESs作為本試驗(yàn)的最佳用量。

圖2 DESs添加量對(duì)離子響應(yīng)和樣品回收率的影響(樣品中孔雀石綠和隱色孔雀石綠添加濃度2.00 μg/L,n=3)Fig.2 Effect of DESs additive level on ion response and sample recovery rate (malachite green and leucomalachite green were added at concentrations of 2.00 μg/L,n=3)

2.4 低共熔溶劑電導(dǎo)率測(cè)定

室溫25 ℃條件下,分別對(duì)摩爾比1∶2、1∶3、1∶4和1∶5的DESs溶液進(jìn)行電導(dǎo)率測(cè)定,分別測(cè)得DESs溶液電導(dǎo)率為244.7、209.5、140.3和90.6 μS/cm。

2.5 乙酸銨溶液添加實(shí)驗(yàn)

乙酸銨是農(nóng)獸藥殘留常用輔助離子化試劑。利用乙酸銨溶液離子化特性進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn),一組試驗(yàn)在6個(gè)平行養(yǎng)殖水樣品中添加乙酸銨和不添加乙酸銨溶液進(jìn)行對(duì)照,另一組分別向3個(gè)平行養(yǎng)殖水樣品中添加50、100、150、200和250 μL的乙酸銨溶液,在統(tǒng)一添加摩爾比1∶3的DESs萃取劑400 μL條件下,考察添加適當(dāng)濃度乙酸銨溶液對(duì)孔雀石綠和隱色孔雀石綠離子強(qiáng)度和添加回收率的影響。在進(jìn)行6個(gè)平行養(yǎng)殖水樣品中添加乙酸銨和不添加乙酸銨溶液進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)添加乙酸銨樣品溶液中檢測(cè)孔雀石綠平均離子強(qiáng)度高于未添加乙酸銨溶液,而隱色孔雀石綠離子強(qiáng)度相當(dāng)。未添加乙酸銨樣品溶液中檢測(cè)孔雀石綠平均回收率<60%,而隱色孔雀石綠回收率>120%,而添加乙酸銨樣品溶液中孔雀石綠和隱色孔雀石綠回收率均在正常范圍(表2);在3個(gè)平行養(yǎng)殖水樣品中添加50、100、150、200和250 μL的乙酸銨溶液實(shí)驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)添加濃度為0.5 mol/L的乙酸銨溶液200 μL條件下孔雀石綠和隱色孔雀石綠離子強(qiáng)度處于中等水平,但回收率最穩(wěn)定(圖3)。綜上,選擇添加0.5 mol/L的乙酸銨溶液200 μL作為本試驗(yàn)的最優(yōu)添加量。

圖3 乙酸銨溶液添加量對(duì)離子強(qiáng)度和回收率的影響(樣品中孔雀石綠和隱色孔雀石綠添加濃度2.00 μg/L,n=3)Fig.3 Effect of ammonium acetate additive level on ion response strength and recovery rate(Malachite green and Leucomalachite green were added at concentrations of 2.00 μg/L,n=3)

表2 乙酸銨對(duì)回收率和離子強(qiáng)度影響Tab.2 Effect of ammonium acetate on recovery rate and ion response strength n=6

2.6 甲酸添加試驗(yàn)

在養(yǎng)殖水體樣品中添加一定劑量的甲酸,對(duì)水體進(jìn)行酸化處理。經(jīng)檢測(cè),與未添加甲酸養(yǎng)殖水樣品檢測(cè)孔雀石綠和隱色孔雀石綠對(duì)比,對(duì)目標(biāo)物提取及離子峰形等未產(chǎn)生明顯作用,因此該養(yǎng)殖水體前處理方法無(wú)需添加甲酸。

2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線和離子圖譜

用流動(dòng)相作為標(biāo)準(zhǔn)曲線定容液。標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表3;加標(biāo)濃度2.00 μg/L樣品的孔雀石綠離子流色譜圖見(jiàn)圖4;加標(biāo)濃度2.00 μg/L樣品的隱色孔雀石綠離子流色譜圖見(jiàn)圖5。

圖4 孔雀石綠2.00 μg/L色譜基線及離子出峰時(shí)間Fig.4 Chromatographic baseline and ion peak exit time of malachite green 2.00 μg/L

圖5 隱色孔雀石綠2.00 μg/L色譜基線及離子出峰時(shí)間Fig.5 Chromatographic baseline and ion peak exit time of leucomalachite green 2.00 μg/L

表3 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程、相關(guān)系數(shù)表和檢出限Tab.3 Standard curve regression equation,correlation coefficient table and detection limit

2.8 方法檢出限、回收率和精密度實(shí)驗(yàn)

2.8.1 方法檢出限

以空白養(yǎng)殖水為基質(zhì),最低添加濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn),依據(jù)GB/T 27417—2017《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》[23]確定檢出限的方法,采用信噪比法計(jì)算檢出限,根據(jù)3倍信噪比確定該方法的檢出限見(jiàn)表3,孔雀石綠和隱色孔雀石綠的方法檢出限分別為0.006 3和0.003 0 μg/L,說(shuō)明該方法靈敏度較高。

2.8.2 回收率和精密度

向已知未檢出養(yǎng)殖水中分別添加5、20和50 μL濃度為1 000 μg/L的孔雀石綠混合外標(biāo)工作液,得到含量為0.5、2.0、5.0 μg/L的孔雀石綠和隱色孔雀石綠加標(biāo)樣品,按1.5實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行處理測(cè)定,平行測(cè)定6次,實(shí)驗(yàn)結(jié)果測(cè)得孔雀石綠的回收率分別為91.9%、110.4%和109.7%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(Relative standard deviation,RSD)分別為8.3%、5.4%和3.6%。隱色孔雀石綠的回收率分別為76.4%、110.8%和115.8%,RSD分別為7.0%、4.4%和3.0%(表4)。

表4 回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Tab.4 Recovery rate and relative standard deviation n=6

3 討論

對(duì)于DESs的形成機(jī)理,普遍認(rèn)為是氫鍵的作用,也有認(rèn)為是離子鍵、范德華力[24]共同作用形成。四丁基溴化銨是一種有機(jī)鹽,分子式為C16H36BrN,純品為白色晶體或粉末,其熔點(diǎn)為117 ℃,氫鍵受體數(shù)量為1。正辛醇是一種有機(jī)化合物和飽和脂肪醇,分子式為C8H18O,常溫下是無(wú)色透明狀液體,其熔點(diǎn)為-16.7 ℃,氫鍵供體數(shù)量為1,氫鍵受體數(shù)量為1。DESs的電導(dǎo)率隨著氫鍵供體正辛醇含量的增加而減小,隨著四丁基溴化銨含量的增加而增加。

利用四丁基溴化銨作為DESs氫鍵受體,正辛醇作為氫鍵供體制備的DESs,對(duì)富集萃取孔雀石綠、隱色孔雀石綠具有較好的選擇性,孔雀石綠作為三苯甲烷類工業(yè)色素染料,研究表明DESs對(duì)色素染料具有較好的富集萃取作用[25]。DESs的熔點(diǎn)、黏度、電導(dǎo)性和溶解性隨氫鍵供體和受體選擇及摩爾比率變化而變化,并對(duì)萃取產(chǎn)生影響。因此,需要選擇適當(dāng)?shù)腄ESs對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行富集萃取。

本次利用DESs萃取富集養(yǎng)殖水體中孔雀石綠和隱色孔雀石綠試驗(yàn),樣本量為10 mL,取1 mL樣本進(jìn)行快速萃取富集,乙腈定容混勻溶解。為防止養(yǎng)殖水體中藻類等雜質(zhì)影響色譜柱和質(zhì)譜系統(tǒng),導(dǎo)致系統(tǒng)污染、基質(zhì)效應(yīng),最后定容液須經(jīng)過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾,進(jìn)行有效除雜,保護(hù)色譜柱和質(zhì)譜系統(tǒng)。

乙酸銨溶液常被用于液相質(zhì)譜流動(dòng)相中,與甲酸、乙酸等配制形成低離子強(qiáng)度的緩沖溶液,有利于分析不同pH值的化合物,有改善峰形、提高柱效和保護(hù)色譜柱等作用[26]。本次養(yǎng)殖水體中直接加入一定摩爾濃度的乙酸銨溶液,經(jīng)實(shí)驗(yàn)比對(duì),對(duì)改善目標(biāo)物離子峰形及穩(wěn)定回收率發(fā)揮重要作用。

定量限、檢測(cè)限比較,以信噪比S/N≥3確定檢出限,S/N≥10確定定量限。本試驗(yàn)測(cè)得孔雀石綠和隱色孔雀石綠的方法檢出限分別為0.006 3和0.003 0 μg/L。綜合對(duì)比張秀妍等[22]建立液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定養(yǎng)殖水體中的孔雀石綠,定量限0.010 ng/mL(檢出限0.005 ng/mL)。丁勇等[27]液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定養(yǎng)殖水體中孔雀石綠和結(jié)晶紫含量,定量限2.0 ng/L。本試驗(yàn)測(cè)得孔雀石綠檢出限與其他QuEChERS、固相萃取等方法檢出限相當(dāng)。

目前關(guān)于養(yǎng)殖水中的孔雀石綠檢測(cè)方法研究較多,相關(guān)研究及標(biāo)準(zhǔn)[17-22]采用乙腈、二氯甲烷等有機(jī)溶劑提取、固相萃取柱富集、氮吹濃縮、定容,濾膜過(guò)濾等凈化方式測(cè)定養(yǎng)殖水中孔雀石綠等方法,效果顯著,缺點(diǎn)是試劑耗量大,耗時(shí)較長(zhǎng)。DESs在農(nóng)獸藥領(lǐng)域應(yīng)用研究尚不多見(jiàn),利用DESs快速萃取富集目標(biāo)物,建立養(yǎng)殖水中孔雀石綠獸藥殘留的檢測(cè)方法,無(wú)需過(guò)柱、氮吹濃縮,不僅環(huán)保,而且節(jié)約時(shí)間、試劑和耗材,節(jié)省了實(shí)驗(yàn)室資源,并為利用低共熔溶劑快速高效萃取養(yǎng)殖環(huán)境及水產(chǎn)品中多種農(nóng)獸藥殘留、液質(zhì)定量測(cè)定提供更廣闊的研究思路。

4 結(jié)論

水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)中,禁用獸藥孔雀石綠常有檢出,說(shuō)明在養(yǎng)殖或運(yùn)輸環(huán)節(jié)中,依然存在違規(guī)添加孔雀石綠的風(fēng)險(xiǎn)。本試驗(yàn)方法在10 mL過(guò)濾水樣中,加入適量?jī)?nèi)標(biāo)物質(zhì)和0.5 mol/L的乙酸銨溶液200 μL,混勻取1 mL水樣于微量離心管中,加入400 μL以四丁基溴化銨作為氫鍵受體,正辛醇作為氫鍵供體,按照摩爾比1∶3混合制備的 DESs,渦旋混勻靜置提取上層萃取液,乙腈定容至1 mL,過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜,使用液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行定量測(cè)定,其優(yōu)點(diǎn)是萃取及檢測(cè)試劑消耗少、耗時(shí)短、靈敏度高、準(zhǔn)確性好。通過(guò)驗(yàn)證,該方法適用于開(kāi)展養(yǎng)殖水體中孔雀石綠的快速定量檢測(cè),并為下一步探索利用低共熔溶劑萃取養(yǎng)殖環(huán)境及水產(chǎn)品中多種農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)方法研究提供參考方向。