＊唐麗莉 黃慧萍

（復(fù)旦大學(xué) 上海 200433）

制藥從業(yè)者在研究和生產(chǎn)藥品時，既希望藥品有效，又希望能減少其毒副作用。藥品的毒副作用不僅來源于主藥的藥理活性，還來源于藥品中存在的雜質(zhì)。因此，雜質(zhì)控制是藥品安全性研究的核心內(nèi)容。藥品中的雜質(zhì)通常分為：有機(jī)雜質(zhì)、無機(jī)雜質(zhì)、殘留溶劑。有機(jī)雜質(zhì)可在藥品的生產(chǎn)或貯存期間產(chǎn)生，也可由藥物與輔料或包裝結(jié)構(gòu)的相互作用產(chǎn)生，其中化學(xué)結(jié)構(gòu)與活性成分類似或具淵源關(guān)系的有機(jī)雜質(zhì)，通常稱為有關(guān)物質(zhì)。根據(jù)中國藥典藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則的規(guī)定，除降解產(chǎn)物和毒性雜質(zhì)外，原料藥中已控制的雜質(zhì)，制劑中一般不再控制，制劑雜質(zhì)研究重點在于降解產(chǎn)物。

復(fù)方制劑系指含有多個主藥成分（≥2個）的制劑，由于其主藥成分較多，復(fù)方制劑相較于單方制劑的雜質(zhì)研究更為復(fù)雜，不僅包括每個原料藥中的雜質(zhì)，還包括生產(chǎn)和貯存期間產(chǎn)生的降解產(chǎn)物以及主藥與主藥、主藥與輔料之間相互作用產(chǎn)生的降解產(chǎn)物。對于各原料帶入的雜質(zhì)，原料藥供應(yīng)商均已進(jìn)行了全面的研究，制劑研究可加以參考。復(fù)方制劑雜質(zhì)研究的難點在于降解產(chǎn)物。對于復(fù)方制劑降解產(chǎn)物的研究，國內(nèi)外很少涉及，而基于復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)研究優(yōu)化其產(chǎn)品和改進(jìn)工藝的案例則更少之甚少。

本文將重點闡述復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)研究的基本思路，并將其與產(chǎn)品優(yōu)化的實際案例相結(jié)合，介紹對復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)研究和產(chǎn)品優(yōu)化的整體方法與基本思路，供復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)研究和產(chǎn)品優(yōu)化工作參考。

1.雜質(zhì)分析預(yù)測

單方制劑和復(fù)方制劑雜質(zhì)研究過程中需要重點關(guān)注的雜質(zhì)均為降解產(chǎn)物。復(fù)方制劑相對單方制劑而言，由于其原料數(shù)量為兩個及以上，原料之間也會由于相互作用而產(chǎn)生降解產(chǎn)物。因此，復(fù)方制劑不僅要從原料藥和單方制劑的穩(wěn)定性實驗結(jié)果來預(yù)測雜質(zhì)，還需基于各原料藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)等方面開展分析，以此預(yù)測復(fù)方制劑中可能存在的降解產(chǎn)物。此類預(yù)測的方法有很多，較為傳統(tǒng)的方法是通過藥物的結(jié)構(gòu)來分析兩個藥物之間是否會存在相互作用及可能的反應(yīng)類型。此外，還可依托模型來分析兩個藥物之間的相互作用，如：PBPK模型等。

2.建立復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)檢測方法

復(fù)方制劑的雜質(zhì)數(shù)量和種類紛繁復(fù)雜。如何開發(fā)一個有效的分析方法對有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測，是復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)研究中最難且最為關(guān)鍵的一步。筆者建議通過如下方式建立復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。

（1）初步檢測條件建立。查詢各國藥典（如：美國藥典USP、歐洲藥典EP、日本藥典JP、中國藥典Ch.P等），匯總并比較各國藥典中收錄的各主成分雜質(zhì)檢測方法，同時收集各國藥典中收載的各主成分雜質(zhì)作為后續(xù)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)確證及定位的基礎(chǔ)。

基于前期預(yù)測的雜質(zhì)，綜合評估各雜質(zhì)的分離情況，從各國藥典主成分有關(guān)物質(zhì)檢測方法中，選取一個相對較為合適的方法作為有關(guān)物質(zhì)檢測的初始條件，考慮因素包含：方法可以檢測出較多雜質(zhì)或者方法的合理性等。由于復(fù)方制劑涉及雜質(zhì)較多且分離較難，正相液相色譜法較難實現(xiàn)有效分離，通常會選用反相液相色譜技術(shù)，通過梯度洗脫來檢測復(fù)方制劑的有關(guān)物質(zhì)。

（2）分析方法優(yōu)化。從初始色譜檢測條件出發(fā)開展優(yōu)化，直至找出可以有效分離各個已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的色譜條件。一般情況下，雜質(zhì)初步分離的色譜條件還不足以開展雜質(zhì)的定量檢測，可能存在主峰與雜質(zhì)峰分離度不理想的情況，或者，在一段時間內(nèi)無雜質(zhì)檢出等問題。后續(xù)，應(yīng)分別從洗脫梯度、色譜柱篩選、流動相體系、緩沖鹽、柱溫、檢測波長等方面摸索出最為適宜的檢測條件。這就需要分析人員具有充足的經(jīng)驗，摸索出最為適宜的分析方法。

（3）分析方法驗證。對新開發(fā)的檢測方法進(jìn)行分析方法驗證，從專屬性、檢測限、定量限、線性、準(zhǔn)確性、范圍、精密度、耐用性等方面，確證新開發(fā)的檢測方法適用于復(fù)方制劑產(chǎn)品的檢測。

3.雜質(zhì)譜研究

在明確初步色譜條件后，通過對復(fù)方制劑近效期產(chǎn)品的檢測，獲得代表批次色譜圖。結(jié)合原料藥供應(yīng)商的雜質(zhì)研究結(jié)果和各國藥典中收載的各主成分雜質(zhì)，對色譜圖進(jìn)行分析，將已知雜質(zhì)定位，并標(biāo)記未知雜質(zhì)。在分析未知雜質(zhì)時，可以采用HPLC-MS聯(lián)用法，通過HPLC-MS對HPLC圖譜中出現(xiàn)的未知色譜峰進(jìn)行質(zhì)譜分析，得到未知雜質(zhì)的質(zhì)譜圖，根據(jù)未知雜質(zhì)的分子離子峰和其裂解后產(chǎn)生的碎片離子峰的信息進(jìn)行初步的質(zhì)譜分析，從而推測該雜質(zhì)與哪種主成分有關(guān)。需特別需注意的是，由于色譜處理也可能對復(fù)方制劑雜質(zhì)產(chǎn)生影響，某些色譜峰中出現(xiàn)的雜質(zhì)，可能在實際生產(chǎn)條件下未必生成，比如：某個雜質(zhì)為原料水解開環(huán)后的產(chǎn)物，該雜質(zhì)只能在強(qiáng)堿條件下才能保持相對穩(wěn)定，在弱堿條件下，會閉環(huán)回到原先結(jié)構(gòu)，所以，對于這些類型的雜質(zhì)，較難通過制備分離獲得，而是否需進(jìn)一步對其進(jìn)行管控，就要結(jié)合具體處方和工藝開展評估，確定在現(xiàn)有處方和工藝條件下，是否有可能產(chǎn)生此類雜質(zhì)，根據(jù)評估結(jié)果，明確具體的管控措施，比如：某雜質(zhì)在強(qiáng)堿條件下穩(wěn)定在弱堿條件下回到原先結(jié)構(gòu)，而實際生產(chǎn)過程未使用到強(qiáng)堿類的物料，因此，可在適當(dāng)評估后略去對該雜質(zhì)的研究。

在此期間，還應(yīng)關(guān)注復(fù)方制劑產(chǎn)品各組分含量變化平均值和有關(guān)物質(zhì)平均總檢出量，明確有關(guān)物質(zhì)生成量和其含量下降量之間是否能符合質(zhì)量守恒，從而再次確證復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)檢測方法的適用性。

4.雜質(zhì)歸屬研究

根據(jù)ICH新制劑中的雜質(zhì)（Q3B）與《中國藥典）（2020年版）9102藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則，對于表觀含量在鑒定閾值及以上的單個雜質(zhì)和在鑒定閾值以下但具強(qiáng)烈生物作用的單個雜質(zhì)或毒性雜質(zhì)，予以定性或確證其結(jié)構(gòu)。

表1 制劑的雜質(zhì)限度

雜質(zhì)歸屬的研究手段較多，主要包含HPLC圖譜比對，光、熱、濕影響因素試驗以及穩(wěn)定性加速試驗的HPLC圖譜比較分析。本文將重點闡述如何通過光、熱、濕影響因素試驗來研究復(fù)方制劑的降解產(chǎn)物，并以含4種主成分的復(fù)方制劑為例，闡述配伍設(shè)計的基本方法。

假設(shè)某復(fù)方制劑共有4種原料藥和若干輔料，其配伍設(shè)計參考如下。

表2 配伍設(shè)計

研究時，應(yīng)逐一列出各個主藥在單成份、雙成份、三成份和四成份及其于不同強(qiáng)制降解條件下的雜質(zhì)及其含量。在完成所有的影響因素試驗后。重點關(guān)注于在鑒定限度以上的雜質(zhì)，匯總分析其在何種條件下，以哪種配伍形式生成。并結(jié)合原料藥和雜質(zhì)的物理和化學(xué)特性，分析該雜質(zhì)生成的機(jī)理。

在進(jìn)行雜質(zhì)歸屬分析時，還應(yīng)匯總所關(guān)注雜質(zhì)在不同效期的雜質(zhì)含量及其生成速率，有些雜質(zhì)的生成會呈現(xiàn)一定的相關(guān)性，一般可推測為兩個主成分相互作用下產(chǎn)生的兩個雜質(zhì)，如：含有一對孤對電子的主成分進(jìn)攻具有親電性缺電子中心的另一個主成分，從而發(fā)生去甲基/甲基化等相互作用，形成兩個呈現(xiàn)一定相關(guān)性的雜質(zhì)。主藥之間的相互作用方式有很多，本文列舉一二僅做示例。

此外，雜質(zhì)歸屬要結(jié)合實際生產(chǎn)工藝和貯存條件綜合考慮，比如，在雜質(zhì)歸屬實驗中發(fā)現(xiàn)某個雜質(zhì)在高溫條件下由兩個主藥配伍時生成。如遇到這種情況，在分析時要評估內(nèi)容包括：①高溫條件對其影響更為顯著，還是兩個主藥配伍對其影響更為顯著；②在實際生產(chǎn)中，這兩個主藥配伍緊密性如何；③產(chǎn)品的儲運(yùn)條件是否有所規(guī)定，以上幾個因素都對雜質(zhì)歸屬研究存在一定的指導(dǎo)意義和確證作用，并對后續(xù)雜質(zhì)改進(jìn)提供很大的參考價值。

5.產(chǎn)品優(yōu)化

（1）基本思路。基于雜質(zhì)生成的機(jī)理，可以通過諸多方式優(yōu)化產(chǎn)品，如：變更產(chǎn)品貯藏條件、優(yōu)化產(chǎn)品生產(chǎn)工藝、變更原輔料來源、改變產(chǎn)品的包裝材料或包裝形式等。

如在研究中發(fā)現(xiàn)，某個有關(guān)物質(zhì)的生成機(jī)理為主藥與主藥之間的相互作用，或者主藥與輔料之間的相互作用，可考慮通過工藝改進(jìn)來降低有關(guān)物質(zhì)，例如，調(diào)節(jié)主藥投料順序等。由于該方式涉及工藝變更，需要按照《已上市化學(xué)藥品藥學(xué)變更研究技術(shù)指導(dǎo)原則》開展相應(yīng)的研究和驗證工作，并按規(guī)定申報或備案。

其他還有許多改善產(chǎn)品的方式，例如，改變濕法制粒為干法制粒，改變原料藥和輔料的來源和種類、改變包裝材料等。本文不再贅述?？傊?，應(yīng)基于前期研究，采取合適的改善措施，并加以確證。

（2）案例分析。本文將根據(jù)筆者實際經(jīng)歷的研究，側(cè)重于闡述如何基于雜質(zhì)生成機(jī)理，從改變產(chǎn)品貯藏條件和優(yōu)化產(chǎn)品工藝這兩種方式來提高產(chǎn)品質(zhì)量。

某復(fù)方制劑中兩個原料藥所屬有關(guān)物質(zhì)的生成呈相關(guān)性，原料藥1的有關(guān)物質(zhì)隨著原料藥2的有關(guān)物質(zhì)的生成不斷增加。在該復(fù)方制劑的強(qiáng)制降解試驗中，顯示其是在原料藥1和原料藥2混合輔料配伍時在高溫條件下生成。因此，從前期的雜質(zhì)譜分析和強(qiáng)制降解試驗，并結(jié)合兩個原料藥及其有關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)分析，推測出這兩個有關(guān)物質(zhì)的生成機(jī)理為：①原料藥1的甲氧基在有氫離子存在的條件下形成缺電子中心原子，具有親電性；原料藥2的N,N-二甲基的N含有一對孤對電子（親核試劑）進(jìn)攻具有親電性的甲基缺電子中心，從而生成原料藥2的N,N-二甲基N位的甲基化雜質(zhì)（原料藥2有關(guān)物質(zhì)）和去甲基化雜質(zhì)（原料藥1有關(guān)物質(zhì)）。

基于雜質(zhì)生成機(jī)理，考慮以兩種方式開展優(yōu)化。

①變更產(chǎn)品的貯藏條件：原產(chǎn)品的貯藏條件為常溫，根據(jù)強(qiáng)制降解試驗顯示，該產(chǎn)品對溫度較為敏感。將貯藏條件變更為陰涼，并基于變更后的貯藏條件，對復(fù)方制劑開展長期留樣觀察至產(chǎn)品有效期，獲得相關(guān)數(shù)據(jù)并進(jìn)行匯總分析后發(fā)現(xiàn)，兩個原料藥相互作用所產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì)均得到了有效的控制。

②優(yōu)化產(chǎn)品生產(chǎn)工藝：經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，這兩個存在相互作用的原料藥均在同一工段同時投料，考慮將該兩個原料藥分別在不同工段投料，盡可能改善兩個原料藥配伍過于緊密的問題，并基于優(yōu)化后工藝，開展穩(wěn)定性加速試驗，統(tǒng)計兩個原料藥有關(guān)物質(zhì)的情況，發(fā)現(xiàn)其均得到了有效的控制。

鑒于兩種方法均可對有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行有效控制，結(jié)合成本收益考量，選擇相對更為合適的方法，經(jīng)批準(zhǔn)后實施。

6.小結(jié)與展望

藥品不同于普通商品，不僅要有效，還要安全。無論是新藥研發(fā)還是傳統(tǒng)藥的優(yōu)化，雜質(zhì)研究都是藥品質(zhì)量控制的重中之重。而很多傳統(tǒng)藥，受限于早期較為落后的技術(shù)手段，對雜質(zhì)的控制并不完善。制藥行業(yè)從業(yè)人員，應(yīng)以患者的健康為要務(wù)，致力于探索更為有效的雜質(zhì)檢測方法，并依托先進(jìn)有效的檢測方法，不斷改善藥品質(zhì)量，以一種獲益和風(fēng)險平衡的方式，盡可能降低藥品中的雜質(zhì)，以期提高藥品的安全性。