李由由, 盧 丹

(揚(yáng)州大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院 婦產(chǎn)科, 江蘇 揚(yáng)州, 215000)

上皮性卵巢癌(EOC)是卵巢惡性腫瘤中最常見的類型,病死率位居?jì)D科惡性腫瘤的首位。目前手術(shù)治療和以鉑類藥物為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療為主要治療手段[1]。雖然多數(shù)患者初次治療反應(yīng)較好,但75%的晚期卵巢癌患者3年內(nèi)會(huì)出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)[2], 影響患者生存狀態(tài)。配對盒基因8(PAX8)是Mullerian管的正常發(fā)育所必需的,是促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要介質(zhì)[3-4]。波形蛋白是中間絲蛋白家族中表達(dá)最廣泛且高度保守的蛋白質(zhì)之一,參與腫瘤細(xì)胞凋亡、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、血管生成等病理、生理過程[5]。本研究探討上皮性卵巢癌組織中PAX8、波形蛋白表達(dá)水平與臨床病理特征及化療后復(fù)發(fā)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

根據(jù)納入及排除標(biāo)準(zhǔn),選取2018年1月—2021年12月于本院治療并經(jīng)病理確診的86例上皮性卵巢癌患者為研究對象,患者年齡33～75歲,平均(56.1±9.7)歲。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 術(shù)前未接受治療者; ② 入院后接受手術(shù)治療(全面分期術(shù)或腫瘤細(xì)胞減滅術(shù))者; ③ 術(shù)后接受鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療≥4次者; ④ 臨床及術(shù)后隨訪資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 術(shù)前接受新輔助化療患者; ② 合并其他腫瘤、嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病、自身免疫性疾病者; ③ 臨床病理資料不完整,未定期復(fù)查,失訪患者。通過電話、門診定期復(fù)查隨訪,隨訪截止時(shí)間為2023年1月1日,以患者復(fù)發(fā)為終點(diǎn)事件,隨訪期間復(fù)發(fā)40例,未復(fù)發(fā)46例; 復(fù)發(fā)患者均為首次復(fù)發(fā),通過臨床表現(xiàn)、血清腫瘤標(biāo)志物測定、超聲或CT檢查確診。臨床數(shù)據(jù)資料見表1。

表1 上皮性卵巢癌病例臨床資料和病理特征

1.2 免疫組織化學(xué)法檢測

手術(shù)切除標(biāo)本經(jīng)福爾馬林固定和石蠟包埋,常規(guī)將標(biāo)本均制備成厚度為4 μm的切片,按流程脫蠟至水,使用3%過氧化氫20 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,隨后進(jìn)行抗原修復(fù),一抗孵育過夜,溫度4 ℃。復(fù)溫后PBS洗滌3次, 3 min/次,加入二抗孵育,使用DAB盒顯色,蘇木素進(jìn)行復(fù)染,氨水返藍(lán)后沖洗,脫水、透明以及封片。PAX8蛋白定位于細(xì)胞核中,其染色陽性表現(xiàn)為棕黃色或褐色顆粒。波形蛋白陽性染色為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃色、棕黃色或棕褐色顆粒。使用PBS替代一抗為陰性對照。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作,試劑盒由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。本研究獲本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.3 結(jié)果判讀

高倍鏡視野下根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行綜合評分。① 細(xì)胞染色強(qiáng)度評分:無色為0分; 淡黃色為1分; 棕色為2分; 棕褐色為3分。② 根據(jù)陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行評分: 陽性細(xì)胞<10%為0分, 10%～50%為1分, >50%～75%為2分, >75%為3分。③ 計(jì)算陽性細(xì)胞百分比得分與著色強(qiáng)度得分乘積, ≥3分為陽性表達(dá),<3分為陰性表達(dá)。結(jié)果判讀由蘇北人民醫(yī)院2名高年資的病理醫(yī)師在雙盲情況下共同完成。

1.4 觀察指標(biāo)

根據(jù)門診隨訪結(jié)果,通過臨床癥狀評估、影像學(xué)檢查和糖類抗原125(CA125)水平等來評估腫瘤復(fù)發(fā)情況。滿足下列5項(xiàng)指標(biāo)中的任意2項(xiàng)可定義為腫瘤復(fù)發(fā)[6]: ① 腫瘤標(biāo)志物升高, CA125>35 U/mL為陽性,人附睪蛋白4(HE4)>72 pmol/L為陽性; ② 影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)腫塊; ③ 查體發(fā)現(xiàn)腫塊; ④ 原因未明的腸梗阻; ⑤ 胸腔積液或腹水。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)數(shù)資料用[n(%)]表示,組間差異比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 PAX8、波形蛋白在卵巢癌中的表達(dá)情況

PAX8定位于細(xì)胞核中,其染色陽性者細(xì)胞核染成棕黃色(圖1); 波形蛋白染色陽性表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃色、棕黃色或棕褐色顆粒(圖2); 本研究納入的86例卵巢癌組織中, PAX8呈陽性表達(dá)70例,波形蛋白呈陽性表達(dá)48例,陽性率分別為81.4%、55.8%。

A: 上皮性卵巢癌中PAX8表達(dá)陽性; B: 上皮性卵巢癌中PAX8表達(dá)陰性。圖1 上皮性卵巢癌中PAX8陽性及陰性表達(dá)(免疫組化法,放大100倍)

A: 上皮性卵巢癌中波形蛋白表達(dá)陽性; B: 上皮性卵巢癌中波形蛋白表達(dá)陰性。圖2 上皮性卵巢癌中波形蛋白陽性及陰性表達(dá)(免疫組化法,放大100倍)

2.2 PAX8、波形蛋白表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

PAX8、波形蛋白陽性表達(dá)均與腫瘤臨床分期、腹水、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05), 見表2、表3。

表2 PAX8在上皮性卵巢癌中表達(dá)情況

表3 波形蛋白在上皮性卵巢癌中表達(dá)情況

2.3 PAX8、波形蛋白與上皮性卵巢癌化療后復(fù)發(fā)關(guān)系

截至隨訪日期,上皮性卵巢癌患者化療后復(fù)發(fā)40例,未復(fù)發(fā)46例,復(fù)發(fā)率46.5%。復(fù)發(fā)患者中, PAX8、波形蛋白陽性表達(dá)率高于陰性表達(dá)率,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PAX8、波形蛋白共同表達(dá)陽性與上皮性卵巢癌復(fù)發(fā)有顯著相關(guān)性(P<0.001), 見表4。

表4 PAX8、波形蛋白表達(dá)與上皮性卵巢癌化療后復(fù)發(fā)的關(guān)系[n(%)]

3 討 論

卵巢癌是最致命的婦科惡性腫瘤,盡管近年來卵巢癌的檢測方法和治療手段在不斷進(jìn)步,但由于腫瘤異質(zhì)性,仍缺乏可靠的早期診斷方法,且治療后復(fù)發(fā)率高仍是一個(gè)全球性的問題[7-9]。PAX8具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制凋亡和終末分化的作用,與胚胎發(fā)育、器官的分化有關(guān)[10]。同時(shí), PAX8是Mullerian系統(tǒng)組織的重要轉(zhuǎn)錄因子,參與了輸卵管和子宮上皮的形成過程,在子宮頸和子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞中可見廣泛彌散的強(qiáng)染色,而在正常卵巢上皮細(xì)胞中幾乎不表達(dá)[3, 11-12]。相關(guān)研究[13-14]表明, PAX8可以與卵巢癌中突變的p53基因結(jié)合,導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)p21積累,發(fā)揮促癌增殖作用。而敲除PAX8可抑制癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,促進(jìn)凋亡的發(fā)生。

波形蛋白是一種可以維持細(xì)胞骨架的完整性的中間纖維蛋白,是EMT典型標(biāo)志之一,可使內(nèi)皮細(xì)胞的增生能力增強(qiáng),血管內(nèi)皮細(xì)胞持續(xù)增殖、分裂,促進(jìn)腫瘤的生長[15-16]。腫瘤侵襲性表型與波形蛋白過度表達(dá)呈正相關(guān),并且在體外敲除波形蛋白后這些腫瘤侵襲性特征會(huì)下降[17]。本研究發(fā)現(xiàn),上皮性卵巢癌中PAX8、波形蛋白陽性表達(dá)與上皮性卵巢癌進(jìn)展的嚴(yán)重程度和侵襲性生物學(xué)行為具有密切聯(lián)系,提示PAX8、波形蛋白不僅可作為病情診斷的有效指標(biāo),還可用作上皮性卵巢癌患者化療后復(fù)發(fā)的預(yù)測指標(biāo)。

綜上所述,上皮性卵巢癌組織中PAX8和波形蛋白表達(dá)與腫瘤臨床分期、腹水、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及化療后復(fù)發(fā)關(guān)系密切,可用于評估病情進(jìn)展,預(yù)測復(fù)發(fā),有助于個(gè)體化指導(dǎo)臨床治療,臨床應(yīng)加強(qiáng)隨訪,以期降低復(fù)發(fā)率,延長患者生存期。但本研究納入的樣本量較少,各層樣本篩選的占比差異較大,仍需要進(jìn)行更深入細(xì)致的研究。