林云霞,劉源源,王生偉

南京腦科醫(yī)院胸科院區(qū)呼吸科 南京市,210029

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD) 是一種由有害顆粒物或氣體造成的氣道和/或肺泡異常,可預(yù)防、可治療的常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)疾病[1]。其中慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD) 是COPD 病情進(jìn)展中的重要事件,導(dǎo)致肺功能急性下降,部分患者可能會(huì)經(jīng)歷2 次或2 次以上的急性加重期,生活質(zhì)量更差,未來(lái)發(fā)生心腦血管事件及死亡風(fēng)險(xiǎn)的概率更高[2]。據(jù)報(bào)道,全世界中COPD 位于死亡原因的第三位,其發(fā)病與氣道炎癥及氧化應(yīng)激等有關(guān),研究顯示AECOPD 的主要臨床表現(xiàn)是呼吸癥狀急性惡化,臨床診斷主觀性強(qiáng),尚缺乏能客觀評(píng)估AECOPD 發(fā)生的指標(biāo)[3-6]。

近年研究認(rèn)為,非編碼RNA (non-coding RNA) 在多種疾病過(guò)程、炎性反應(yīng)、腫瘤發(fā)生發(fā)展中均起重要作用[7],其中miR-181a 被認(rèn)為與炎性疾病有關(guān)[9]。但miR-181a 是否可作為AECOPD的評(píng)估指標(biāo)尚不明確,故本研究探討了miR-181a在COPD 患者中的表達(dá)水平及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 分組

選取我院2019 年6 月～2021 年6 月呼吸科診斷為COPD 的患者80 例,其中根據(jù)病情分為2 組:COPD 組(穩(wěn)定期38 例) 和AECOPD 組(急性加重期42 例),其中AECOPD 組按照預(yù)后情況分為預(yù)后良好組(18 例) 與預(yù)后不良組(24 例)。另選取健康體檢者對(duì)照組40 例。

納入標(biāo)準(zhǔn): AECOPD 組均符合AECOPD 診治中國(guó)專家共識(shí)2017 年更新版中關(guān)于AECOPD 的診斷標(biāo)準(zhǔn)[10];COPD 組均符合2017 GOLD COPD 全球倡議中關(guān)于COPD 的診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]。健康受試者無(wú)感染和呼吸系統(tǒng)疾病,同時(shí)不合并腫瘤。排除標(biāo)準(zhǔn): 合并其他肺部疾病;合并自身免疫性疾病或惡性腫瘤等。所有的入選的研究對(duì)象均知情同意,自愿參加本研究。

1.2 方法

1.2.1 qRT-PCR 檢測(cè)miR-181a 使用PureLink?RNA 微量提取試劑盒(廣州吉賽生物科技股份有限公司) 提取中總RNA 并進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)。根據(jù)RevertAid RT 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(廣州吉賽生物科技股份有限公司) 說(shuō)明書將總RNA 反轉(zhuǎn)錄成擴(kuò)增所需模板cDNA。采用Gentier 96E/96R 全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)(西安天隆科技有限公司),根據(jù)qRTPCR 試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作,miR-181a 以U6 作為內(nèi)參,用2-△△Ct來(lái)計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量。引物序列見(jiàn)表1。

表1 qRT-PCR 引物序列

1.2.2 肺功能測(cè)定 對(duì)照組、COPD 患者的肺功能檢查均由經(jīng)驗(yàn)豐富的人員完成,對(duì)照組于體檢當(dāng)天完成檢查,COPD 患者于入院后次日完成檢查。使用肺功能檢測(cè)儀(型號(hào): S-980AI,四川思科達(dá)科技有限公司) 進(jìn)行檢查,步驟如下: 先由工作人員示范完全吸氣和用力持續(xù)呼氣;患者端坐位,練習(xí)用力呼氣動(dòng)作。然后指導(dǎo)患者含咬口器,夾鼻夾,完全吸氣,然后用力、快速、完全呼氣;隨后按指令立刻用力快速吸氣。重復(fù)上述步驟測(cè)定3 次。

1.2.3 評(píng)分資料 由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的專職人員發(fā)放圣喬治呼吸問(wèn)卷(SGRQ)、改良版英國(guó)醫(yī)學(xué)研究委員會(huì)呼吸困難量表(mMRC)、慢性阻塞性肺疾病患者自我評(píng)估測(cè)試(CAT) 問(wèn)卷,患者完成評(píng)估并記錄詳細(xì)數(shù)據(jù)。SGRQ 問(wèn)卷包括癥狀、活動(dòng)、疾病影響3 個(gè)方面,共8 個(gè)問(wèn)題,由患者回憶過(guò)去3 個(gè)月呼吸障礙發(fā)生次數(shù)如實(shí)填寫;mMRC 評(píng)分分為4 級(jí)(0～3級(jí)),分級(jí)越高表示呼吸困難現(xiàn)象越嚴(yán)重;CAT 評(píng)分主要由6 個(gè)主觀指標(biāo)和2 個(gè)客觀指標(biāo)組成,總分40分,分?jǐn)?shù)越高表示COPD 病情越嚴(yán)重。問(wèn)卷均是患者入院時(shí)獨(dú)立完成,臨床協(xié)調(diào)員僅介紹量表的填寫規(guī)則,檢測(cè)填寫完整性,不干涉患者填寫內(nèi)容。

1.2.4 隨訪 對(duì)AECOPD 患者進(jìn)行1 年的隨訪,截止時(shí)間為2022 年6 月。隨訪內(nèi)容主要為患者生存情況,隨訪方式為電話隨訪。根據(jù)預(yù)后情況以生存為預(yù)后良好組,以死亡判定為預(yù)后不良組。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

用SPSS 25.00 軟件分析,P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。計(jì)數(shù)資料以例表示,采用χ2檢驗(yàn);計(jì)量資料以表示,采用t檢驗(yàn)。Pearson法分析患者血清miR-181a 與肺功能指標(biāo)FEV1/FVC、FEV1 %、FVC %之間的相關(guān)性;應(yīng)用COX 回歸分析影響AECOPD 患者不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素。

2 結(jié)果

2.1 3 組一般資料比較

3 組吸煙史、FEV1/FVC、FEV1 %、FVC %之間有差異,且AECOPD 組患者有吸煙史的人數(shù)高于COPD 組和對(duì)照組,AECOPD 組SGRQ 及CAT評(píng)分高于COPD 組,COPD 組患者有吸煙史的人數(shù)高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);AECOPD 組患者FEV1/FVC、FEV1 %、FVC %低于COPD 組和對(duì)照組,COPD 組患者FEV1/FVC、FEV1 %、FVC %顯著低于對(duì)照組(P＜0.05);3組年齡、性別、BMI 間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05) (表2)。

表2 3 組一般資料比較(,n)

表2 3 組一般資料比較(,n)

2.2 3 組血清miR-181a 水平比較

與對(duì)照組血清miR-181a 水平比較,COPD 組和AECOPD 組患者血清miR-181a 水平升高(P＜0.05);與COPD 組血清miR-181a 水平比較,AECOPD 組患者血清miR-181a 水平升高(P＜0.05)(表3)。

表3 3 組血清miR-181a 水平比較(,n)

表3 3 組血清miR-181a 水平比較(,n)

2.3 AECOPD 預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者血清miR-181a 水平比較

與預(yù)后良好組患者比較,預(yù)后不良組患者血清miR-181a 水平、有吸煙史的人數(shù)、SGRQ 及CAT評(píng)分顯著升高,FEV1 %、FVC %、FEV1/FVC 值顯著下降(P＜0.05) (表4)。

表4 AECOPD 預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者血清miR-181a 水平及相關(guān)指標(biāo)比較(,n)

表4 AECOPD 預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者血清miR-181a 水平及相關(guān)指標(biāo)比較(,n)

2.4 血清miR-181a 水平與肺功能及SGRQ、mMRC、CAT評(píng)分的相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示,血清miR-181a 水平與肺功能指標(biāo)FEV1/FVC、FEV1 %、FVC %呈負(fù)相關(guān) (r=-0.634、-0.739、-0.638,P＜0.05) (表5)。

表5 血清miR-181a 水平與肺功能的相關(guān)性分析

2.5 影響AECOPD 患者預(yù)后的因素分析

多因素COX 分析顯示,miR-181a 水平是影響AECOPD 患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素 (P＜0.05)(表6)。

表6 影響AECOPD 患者預(yù)后的因素分析

3 討論

COPD 發(fā)病與吸煙、空氣污染等有害物質(zhì)的暴露有關(guān),引起肺部或呼吸道炎癥,患者可出現(xiàn)咳嗽、咳痰等癥狀,主要累及器官是肺臟,隨病情進(jìn)展可能危及生命[12]。COPD 的發(fā)病人數(shù)和病死率都在不斷增加,已經(jīng)成為一個(gè)重要的健康問(wèn)題[13]。據(jù)報(bào)道,約半數(shù)的COPD 患者每年至少出現(xiàn)一次AECOPD,患者需要額外的治療,病情急性加重是COPD患者預(yù)后不良的主要驅(qū)動(dòng)因素[14]。臨床診斷中,常在排除其他可能引起急性加重的可能性后才可確診,缺乏特異性。因此,在臨床研究中,尋找能準(zhǔn)確、客觀評(píng)估AECOPD 的指標(biāo)具有積極意義。氣道的炎癥損傷是臨床癥狀性COPD 的主要表現(xiàn)和發(fā)病機(jī)制。盡管研究證實(shí)全身性炎癥是COPD 重要的發(fā)病機(jī)制之一,但在COPD 發(fā)病中有多種炎性介質(zhì)參與,因此明確能有效評(píng)估肺部炎癥程度的指標(biāo)至關(guān)重要[15]。miRNA 通過(guò)調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá),可以作為早期治療的潛在分子標(biāo)記物[16]。但是關(guān)于miRNA在COPD 發(fā)病中作用的相關(guān)研究并不多。本研究主要研究了miR-181a 在COPD 發(fā)病中的相關(guān)作用。

研究發(fā)現(xiàn)miRNA 參與多種呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病過(guò)程,如肺癌、哮喘等,同時(shí)在患者預(yù)后中扮演著重要角色[17-18]。miR-181a 是呼吸系統(tǒng)疾病中研究較多的一種miRNA,參與肺泡損傷、修復(fù)及氣道重塑等過(guò)程[19]。有相關(guān)研究表明,miR-181a 可降低COPD 模型大鼠炎性反應(yīng),對(duì)氣道重塑、肺組織病理形態(tài)有改善作用[20]。本研究通過(guò)檢測(cè)受試者血清miR-181a 水平,發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組血清miR-181a 水平比較,COPD 組和AECOPD 組患者血清miR-181a 水平升高;與COPD 組血清miR-181a 水平比較,AECOPD 組患者血清miR-181a 水平升高。這與余蕙君等[21]和徐藝丹等[22]的研究結(jié)果基本一致,提示miR-181a 可能通過(guò)調(diào)控炎癥因子分泌而參與COPD病情進(jìn)展,此推測(cè)需要在未來(lái)補(bǔ)充內(nèi)容進(jìn)行驗(yàn)證。

研究表明,SGRQ 評(píng)分是適用于COPD 患者的經(jīng)典準(zhǔn)確的評(píng)分方法,其臨床癥狀、核動(dòng)力、疾病影響3 個(gè)能區(qū)的區(qū)分值與患者生活質(zhì)量均有較好相關(guān)性[23],CAT 評(píng)分可以整體評(píng)估COPD 患者病情嚴(yán)重性,可較好地區(qū)分不同程度病情[24],mMRC 指標(biāo)簡(jiǎn)單,但在評(píng)價(jià)呼吸困難對(duì)患者生活質(zhì)量的影響方面優(yōu)勢(shì)較高[25]。本研究中,AECOPD 組SGRQ 評(píng)分、CAT 評(píng)分高于COPD 組,提示隨著病情進(jìn)展,患者的活動(dòng)能力及心理健康均受到損害,亦側(cè)面表明僅依靠肺功能檢查不能全面反映患者生活質(zhì)量,但兩組mMRC 評(píng)分差異不顯著,且相關(guān)性分析中血清miR-181a 與SGRQ、mMRC、CAT 評(píng)分不具有顯著相關(guān)性,這可能與本研究納入樣本量較少有關(guān),后續(xù)需擴(kuò)大樣本量繼續(xù)探究。

相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),血清miR-181a 水平與肺功能指標(biāo)呈負(fù)相關(guān),如FEV1/FVC、FEV1 %、FVC %,提示miR-181a 可能通過(guò)影響肺功能指標(biāo)而參與COPD 發(fā)病,即血清miR-181a 水平越高,肺功能越差,miR-181a 可能促進(jìn)患者疾病的進(jìn)展。有文獻(xiàn)報(bào)道細(xì)菌脂多糖可以誘導(dǎo)人單核細(xì)胞miR-181a 表達(dá)水平升高[26],從而可以激活JNK 通路誘導(dǎo)miR-181a 的升高[27-28]。本研究多因素COX 分析顯示,miR-181a 水平與AECOPD 患者預(yù)后獨(dú)立相關(guān),血清miR-181a 水平高的COPD 患者,病情可能更容易出現(xiàn)急性加重,對(duì)此類患者,臨床應(yīng)及時(shí)針對(duì)性的進(jìn)行預(yù)防或治療,以減少AECOPD 發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述,AECOPD 患者血清miR-181a 表達(dá)升高,miR-181a 與肺功能指標(biāo)及患者預(yù)后有關(guān),檢測(cè)miR-181a 水平可能對(duì)改善AECOPD 患者的預(yù)后有幫助。