楊麗萍，李偉宏

（河南應(yīng)用技術(shù)職業(yè)學(xué)院，河南 鄭州 450042）

桔皮素屬于天然多甲氧基黃酮類(lèi)化合物，在柑橘屬植物果皮及枳實(shí)、青皮、陳皮等中藥中均可提取得到［1-2］，具有抗炎、抗腫瘤、降血糖、保護(hù)神經(jīng)、保護(hù)皮膚、護(hù)肝、改善記憶等活性［1，3］，并且毒性極?。?］，可應(yīng)用于臨床，但該成分飽和溶解度僅為（15.12±0.18） μg/mL，導(dǎo)致其溶出度極低； 油水分配系數(shù)logP值為3.5［5］，表明其脂溶性良好。文獻(xiàn)［6］ 報(bào)道，桔皮素容易受胃腸道pH值影響而發(fā)生降解，并且該成分也是P-糖蛋白底物［7］，口服絕對(duì)生物利用度僅為6.02%［8］。目前，桔皮素制劑有自微乳［7］、淀粉納米粒［9］等類(lèi)型。

固體脂質(zhì)納米?？商岣咚幬锶芙舛取⑷艹龆?，增加被包載藥物體內(nèi)吸收［10-12］。辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯（Labrasol） 是一種非離子型表面活性劑，可通過(guò)減少體內(nèi)代謝、抑制P-糖蛋白外排等作用來(lái)提高藥物生物利用度［13-14］。本實(shí)驗(yàn)制備桔皮素固體脂質(zhì)納米粒，并考察該制劑體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)，以期為相關(guān)制劑開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料

JC-TP3/B 型電子分析天平（青島精誠(chéng)儀器儀表有限公司）； Agilent 1200 型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司）； DJ-1A 型實(shí)驗(yàn)室數(shù)顯恒溫磁力攪拌器（佛山輕子精密測(cè)控技術(shù)有限公司）；Master-sizer 型粒度分析儀（英國(guó)馬爾文儀器有限公司）； TMX-22R 型高速離心機(jī)（美國(guó)Beckman 公司）； PS-30 型超聲儀（深圳市得康科技有限公司）； MDS-2008DS 型溶出試驗(yàn)儀（寧波新芝生物科技股份有限公司）； TK-201 型X 射線粉末衍射儀（北京泰坤工業(yè)設(shè)備有限公司）； DSC-3 型差示掃描量熱儀（梅特勒托利多科技有限公司）； YTST-24 型水浴氮吹儀（南京曉曉儀器設(shè)備有限公司）。

桔皮素原料藥（批號(hào)20200222，純度97.6%，成都格利普生物科技有限公司）； 桔皮素對(duì)照品（批號(hào)K177866，西安開(kāi)來(lái)生物工程有限公司）。單硬脂酸甘油酯（批號(hào)201025，北京鳳禮精求醫(yī)藥股份有限公司）； 辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯（Labrasol，批號(hào)20210158，上海嘉法獅貿(mào)易有限公司）； 泊洛沙姆188 （批號(hào)20191025，上海運(yùn)宏化工制劑輔料技術(shù)有限公司）。

SD 大鼠，雌雄兼具，體質(zhì)量200 ～240 g，購(gòu)自河南省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK （豫） 2020-0001。

2 方法與結(jié)果

2.1 桔皮素含量測(cè)定 采用HPLC 法。

2.1.1 色譜條件 Agilent SB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）； 流動(dòng)相甲醇-水（70 ∶30）； 體積流量1.0 mL/min； 柱溫30 ℃； 檢測(cè)波長(zhǎng)375 nm；進(jìn)樣量10 μL。

2.1.2 線性關(guān)系考察 精密稱取桔皮素對(duì)照品26.80 mg，置于100 mL 量瓶中，甲醇超聲溶解，靜置至室溫后甲醇稀釋定容，得到268 μg/mL 貯備液，密封保存，流動(dòng)相依次稀釋至13.4、6.7、1.34、0.67、0.335、0.067 μg/mL，在 “2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品峰面積（Y） 對(duì)其質(zhì)量濃度 （X） 進(jìn)行回歸，得方程為Y＝20.155 7X+0.163 8 （r＝0.999 8），在0.067～13.4 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.3 供試品溶液制備 精密吸取固體脂質(zhì)納米?；鞈乙? mL，轉(zhuǎn)移至50 mL 量瓶中，加30 mL甲醇超聲（功率250 W） 處理3 min，甲醇稀釋定容并搖勻，0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，取5 mL 續(xù)濾液，流動(dòng)相稀釋至2 倍，即得。

2.1.4 方法學(xué)考察 取同一份供試品溶液，在“2.1.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定6 次，測(cè)得桔皮素含量RSD 為1.04%，表明儀器精密度良好。取同一份固體脂質(zhì)納米粒，按“2.1.3” 項(xiàng)下方法制備6 份供試品溶液，在“2.1.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得桔皮素含量RSD 為1.77%，表明該方法重復(fù)性良好。取“2.1.3” 項(xiàng)下供試品溶液適量，于0、2、4、8、12、24 h 在“2.1.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得桔皮素含量RSD 為0.89%，表明溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。取9 份固體脂質(zhì)納米粒混懸液，每份0.5 mL，轉(zhuǎn)移至50 mL 量瓶中，分為低、中、高3 組，每組3 份，分別加入“2.1.2” 項(xiàng)下貯備液0.8、1.2、1.6 mL，按“2.1.3” 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得桔皮素平均加樣回收率分別為99.48%、100.94%、101.42%，RSD 分別為0.62%、0.34%、0.58%。

2.2 固體脂質(zhì)納米粒制備 采用熔融-高壓均質(zhì)法。稱取桔皮素原料藥30 mg，置于圓底燒瓶中，加入處方量固態(tài)脂質(zhì)，65 ℃水浴攪拌（800 r/min）至熔融狀態(tài)； 配制一定質(zhì)量濃度的Labrasol、泊洛沙姆188 溶液各50 mL，攪拌至相同溫度，作為水相，將水相加到熔融液中，攪拌10 min 后高壓均質(zhì)，置于-20 ℃冰箱中冷卻8 min，取出，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，補(bǔ)加蒸餾水至50 mL，搖勻，即得。

2.3 包封率、載藥量、粒徑、Zeta 電位測(cè)定 精密吸取固體脂質(zhì)納米粒混懸液1 mL，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定桔皮素總量m總；另精密吸取1 mL，置于超濾管中（截留分子量10 kDa），12 000 r/min 離心20 min，取續(xù)濾液，測(cè)定游離桔皮素量m游離，計(jì)算包封率、載藥量，公式分別為包封率＝ ［（m總-m游離） /m總］ ×100%、載藥量＝ ［（m總-m游離） /m］ ×100%，其中m為藥物、載體總量。再取固體脂質(zhì)納米粒混懸液適量，蒸餾水稀釋至40 倍，搖勻，取適量至比色皿中，測(cè)定粒徑、Zeta 電位，平行3 次。

2.4 處方優(yōu)化 采用單因素試驗(yàn)。

2.4.1 固態(tài)脂質(zhì)種類(lèi) 參考文獻(xiàn)［15-16］ 報(bào)道，取單硬脂酸甘油酯、雙硬脂酸甘油酯、硬脂酸各1 g，加熱至高于熔融點(diǎn)10 ℃，加入2 mg 桔皮素原料藥，攪拌溶解，測(cè)定溶解量，結(jié)果見(jiàn)表1。由此可知，單硬脂酸甘油酯對(duì)桔皮素的溶解量最大，故選擇其作為固態(tài)脂質(zhì)，并確定加熱溫度為65 ℃。

表1 固態(tài)脂質(zhì)種類(lèi)對(duì)桔皮素溶解量的影響（n＝3）Tab.1 Effects of solid lipid kind on the dissolution amount of tangeretin （n＝3）

2.4.2 脂藥比 固定桔皮素用量30 mg，Labrasol用量0.16%，泊洛沙姆188 用量1.2%，固液脂質(zhì)比5 ∶1，均質(zhì)壓力80 MPa，均質(zhì)次數(shù)8 次，考察脂藥比對(duì)包封率、載藥量的影響，結(jié)果見(jiàn)圖1。由此可知，隨著脂質(zhì)用量增加包封率先升高后趨穩(wěn)，而載藥量先升高后降低，當(dāng)脂藥比大于15 ∶1 后包封率基本不再增加，但載藥量逐漸降低，最終確定為15 ∶1。

圖1 脂藥比對(duì)包封率、載藥量的影響（n＝3）Fig.1 Effects of lipid-drug ratio on encapsulation efficiency and drug loading （n＝3）

2.4.3 泊洛沙姆188 用量 固定桔皮素用量30 mg，脂藥比15 ∶1，Labrasol 用量0.16%，均質(zhì)壓力80 MPa，均質(zhì)次數(shù)8 次，考察泊洛沙姆188用量對(duì)包封率、載藥量的影響，結(jié)果見(jiàn)圖2。由此可知，隨著泊洛沙姆188 用量增加包封率、載藥量先升高后降低，前者用量為1.0%、1.2%時(shí)后兩者接近，為了降低成本，最終確定為1.0%。

圖2 泊洛沙姆188 用量對(duì)包封率、載藥量的影響（n＝3）Fig.2 Effects of poloxamer 188 consumption on encapsulation efficiency and drug loading （n＝3）

2.4.4 Labrasol 用量 固定桔皮素用量30 mg，脂藥比15 ∶1，泊洛沙姆188 用量1.0%，均質(zhì)壓力80 MPa，均質(zhì)次數(shù)8 次，考察Labrasol 用量對(duì)包封率、載藥量的影響，結(jié)果見(jiàn)圖3。由此可知，Labrasol 用量大于0.16% 時(shí)包封率、載藥量降低，這可能與其增溶作用有關(guān)，最終確定為0.16%。

圖3 Labrasol 用量對(duì)包封率、載藥量的影響（n＝3）Fig.3 Effects of Labrasol consumption on encapsulation efficiency and drug loading （n＝3）

2.4.5 均質(zhì)壓力 固定桔皮素用量30 mg，脂藥比15 ∶1，Labrasol 用量0.16%，泊洛沙姆188 用量1.0%，均質(zhì)次數(shù)8 次，考察均質(zhì)壓力對(duì)包封率、載藥量的影響，結(jié)果見(jiàn)圖4。由此可知，均質(zhì)壓力小于80 MPa 時(shí)對(duì)包封率、載藥量的影響較小，而大于90 MPa 時(shí)兩者降低，表明壓力過(guò)大時(shí)會(huì)對(duì)固體脂質(zhì)納米粒產(chǎn)生破壞作用，由于適度壓力有利于形成較小粒徑［13］，最終確定為80 MPa。

圖4 均質(zhì)壓力對(duì)包封率、載藥量的影響（n＝3）Fig.4 Effects of homogeneous pressure on encapsulation efficiency and drug loading （n＝3）

2.4.6 均質(zhì)次數(shù) 固定桔皮素用量30 mg，脂藥比15 ∶1，Labrasol 用量0.16%，泊洛沙姆188 用量1.0%，均質(zhì)壓力80 MPa，考察均質(zhì)次數(shù)對(duì)包封率、載藥量的影響，結(jié)果見(jiàn)圖5。由此可知，均質(zhì)8 次時(shí)包封率、載藥量降低，為減少過(guò)度均質(zhì)對(duì)固體脂質(zhì)納米粒的影響，最終確定為6 次。

圖5 均質(zhì)次數(shù)對(duì)包封率、載藥量的影響（n＝3）Fig.5 Effects of homogeneous fequency on encapsulation efficiency and drug loading （n＝3）

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn) 根據(jù)“2.4” 項(xiàng)下結(jié)果，確定最優(yōu)處方為桔皮素用量30 mg，脂藥比15 ∶ 1，Labrasol 用量0.16%，泊洛沙姆188 用量1.0%，均質(zhì)壓力80 MPa，均質(zhì)次數(shù)6 次。按上述優(yōu)化處方平行制備3 批樣品，按“2.3” 項(xiàng)下方法測(cè)得平均包封率為（90.16±1.67）%，載藥量為（5.66±0.24）%，粒徑為 （189.76±8.92） nm （圖6），Zeta 電位為- （36.08±1.72） mV （圖7）。

圖6 桔皮素固體脂質(zhì)納米粒粒徑分布Fig.6 Particle size distribution of tangeretin solid lipid nanoparticles

圖7 桔皮素固體脂質(zhì)納米粒Zeta 電位Fig.7 Zeta potential of tangeretin solid lipid nanoparticles

2.6 形態(tài)觀察 吸取“2.3” 項(xiàng)下固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?（測(cè)定粒徑用） 適量，滴到銅網(wǎng)上，1.0%鎢酸鈉溶液染色，置于30 ℃真空干燥箱中25 min，取出，在透射電鏡下觀察形態(tài)，發(fā)現(xiàn)該制劑呈橢圓形或球形，見(jiàn)圖8。

圖8 桔皮素固體脂質(zhì)納米粒透射電鏡圖Fig.8 Transmission electron microscopy image of tangeretin solid lipid nanoparticles

2.7 凍干粉制備 取固體脂質(zhì)納米粒混懸液50 mL，加入4% 乳糖，振蕩溶解，由西林瓶底部緩慢加入混懸液 （液面高度約為1.0 cm），在-40 ℃下預(yù)凍2 d，立即置于冷凍干燥機(jī)中（冷阱溫度-35 ℃，真空度0.1 MPa），冷凍干燥2 d，即得，測(cè)得其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.98%。蒸餾水復(fù)溶凍干粉，測(cè)得其平均包封率為（81.52±1.28）%，粒徑為（214.16±10.56） nm，Zeta 電位為（-33.25±1.89） mV。

2.8 溶解度測(cè)定 取過(guò)量桔皮素、物理混合物（藥物與輔料比例同固體脂質(zhì)納米粒凍干粉）、桔皮素固體脂質(zhì)納米粒凍干粉適量，置于三角瓶中，加入模擬胃液（含胃蛋白酶），此時(shí)底部有藥物沉淀，置于37 ℃恒溫振蕩器中振蕩2 d，取上層混懸液，12 500 r/min 離心25 min，取上清液，測(cè)定溶解度，同法測(cè)定在模擬腸液中的溶解度，結(jié)果見(jiàn)表2。由此可知，物理混合物、固體脂質(zhì)納米粒凍干粉均可提高原料藥溶解度，但后者程度明顯大于前者。

表2 桔皮素溶解度測(cè)定結(jié)果（μg/mL，n＝3）Tab.2 Results of solubility determination of tangeretin（μg/mL，n＝3）

2.9 體外釋藥研究 取桔皮素及其固體脂質(zhì)納米粒凍干粉適量（桔皮素含量均為10 mg），加入模擬胃液5 mL （含胃蛋白酶），置于透析袋中（截留分子量10 kDa），兩端扎緊，設(shè)定轉(zhuǎn)速為75 r/min，介質(zhì)溫度為 （37±1）℃，釋放介質(zhì)為1 000 mL 模擬胃液（含胃蛋白酶），于0、15、30、45、60、75、90、120 min 各取樣5 mL，并補(bǔ)加5 mL模擬胃液，0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，測(cè)定累積釋放度，同法測(cè)定在模擬腸液（含胰蛋白酶） 中的累積釋放度，取樣點(diǎn)調(diào)整為0、0.5、1、1.5、2、4、6、8、12 h，結(jié)果見(jiàn)圖9 ～10。由此可知，原料藥在模擬胃液（120 min 內(nèi)）、模擬腸液（12 h內(nèi)） 中的累積釋放度分別為12.43%、25.17%，而固體脂質(zhì)納米粒分別提高至39.79%、74.56%。

圖9 模擬胃液中桔皮素體外釋藥曲線（n＝6）Fig.9 In vitro drug release curves for tangeretin in simulated gastric juice （n＝6）

圖10 模擬腸液中桔皮素體外釋藥曲線（n＝6）Fig.10 In vitro drug release curves for tangeretin in simulated intestinal juice （n＝6）

2.10 晶型分析 取桔皮素、空白輔料、物理混合物（原料藥與輔料比例同固體脂質(zhì)納米粒）、桔皮素固體脂質(zhì)納米粒凍干粉適量，置于樣品槽中，以氧化鋁 （Al2O3） 為參比物，設(shè)定升溫速度為10 ℃/min，升溫范圍為30 ～300 ℃，結(jié)果見(jiàn)圖11。由此可知，原料藥在152.1 ℃處出現(xiàn)較大的熔點(diǎn)峰； 物理混合物中該熔點(diǎn)峰提前至138.3 ℃，可能是由于單硬脂酸甘油酯等輔料熔點(diǎn)較低，隨著儀器逐漸升溫可能溶解原料藥，從而對(duì)熔點(diǎn)產(chǎn)生影響［17］； 固體脂質(zhì)納米粒圖譜中僅發(fā)現(xiàn)空白輔料，未出現(xiàn)原料藥熔點(diǎn)峰，表明它以無(wú)定形狀態(tài)存在。

圖11 各樣品差示掃描量熱圖Fig.11 Differential scanning calorimetry patterns for various samples

2.11 穩(wěn)定性研究 取桔皮素、空白脂質(zhì)、物理混合物（藥物與脂質(zhì)比例同固體脂質(zhì)納米粒）、熔融脂質(zhì)（含桔皮素）、桔皮素固體脂質(zhì)納米粒凍干粉適量，放置0、3、6 個(gè)月（溫度25 ℃，相對(duì)濕度65%） 后進(jìn)行X 射線粉末衍射分析，結(jié)果見(jiàn)圖12。由此可知，原料藥在6.9、9.4、12.1、14.6、18.8、24.0、27.8、29.5°等處出現(xiàn)特征晶型峰；物理混合物圖譜中仍可見(jiàn)上述特征晶型峰； 熔融脂質(zhì)（含桔皮素） 中未見(jiàn)上述特征晶型峰，表明原料藥轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)定形物質(zhì)； 固體脂質(zhì)納米粒凍干粉在6 個(gè)月后仍未見(jiàn)上述特征晶型峰，表明凍干過(guò)程未改變?cè)纤師o(wú)定形狀態(tài)，穩(wěn)定性良好。

圖12 各樣品X 射線粉末衍射圖Fig.12 X-ray powder diffraction patterns for various samples

2.12 固體脂質(zhì)納米粒（不含Labrasol） 制備 不加Labrasol，按“2.5” 項(xiàng)下最優(yōu)處方制備，即得，再按 “2.3” 項(xiàng)下方法測(cè)得其平均包封率為（92.12±0.96）%，載藥量為（5.74±0.22）%，粒徑為（263.75±9.11） nm，Zeta 電位為- （33.80±1.14） mV，并按“2.7” 項(xiàng)下方法制成凍干粉。

2.13 體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究

2.13.1 分組、給藥與采血 取桔皮素、物理混合物、桔皮素固體脂質(zhì)納米粒（不含Labrasol） 凍干粉、Labrasol+桔皮素固體脂質(zhì)納米粒凍干粉、桔皮素固體脂質(zhì)納米粒 （含Labrasol） 凍干粉適量，0.5%CMC-Na 溶液制成藥液（桔皮素質(zhì)量濃度均為6 mg/mL）。取30 只大鼠，拋幣法隨機(jī)分為5組，按50 mg/kg 劑量灌胃給藥，于0.5、1、2、3、4、5、6、8、12 h 尾靜脈取血各約250 μL，滴入含肝素的離心管中，混勻，3 000 r/min 離心3 min，取上層血漿冷凍保存。

2.13.2 血漿樣品處理 參考文獻(xiàn)［7］ 報(bào)道，取反式-1，2-二苯乙烯對(duì)照品適量，甲醇制成質(zhì)量濃度為1 800 ng/mL 的內(nèi)標(biāo)溶液。取血漿樣品100 μL、內(nèi)標(biāo)溶液50 μL、乙腈0.5 mL，置于離心管中，渦旋1 min，5 000 r/min 離心10 min，收集上清液，45 ℃水浴中氮?dú)饩徛蹈桑?00 μL 乙腈復(fù)溶。

2.13.3 線性關(guān)系考察 取2 μg/mL 對(duì)照品溶液適量，甲醇依次稀釋至1 000、500、250、100、50 ng/mL，分別取100 μL 至空白離心管中，按“2.13.2” 項(xiàng)下方法處理，加入空白血漿100 μL，渦旋復(fù)溶，作為血漿對(duì)照品溶液，在“2.1.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），對(duì)照品、內(nèi)標(biāo)峰面積比值為縱坐標(biāo)（Y） 進(jìn)行回歸，得方程為Y＝0.001 7X+0.249 7 （r＝0.996 5），在50 ～2 000 ng/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.13.4 方法學(xué)考察 取低 （50 ng/mL）、中（1 000 ng/mL）、高（2 000 ng/mL） 質(zhì)量濃度血漿對(duì)照品溶液適量，同一天內(nèi)在“2.1.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定6 次，測(cè)得桔皮素、內(nèi)標(biāo)峰面積比值RSD 分別為9.56%、5.78%、8.16%，表明該方法日內(nèi)精密度良好； 同法連續(xù)測(cè)定6 d，每天1 次，測(cè)得兩者峰面積比值RSD 分別為6.28%、4.32%、5.07% （n＝6），表明該方法日間精密度良好。取血漿樣品適量，室溫下于0、2、4、8、12、24 h在“2.1.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得桔皮素、內(nèi)標(biāo)峰面積比值RSD 為7.08%，表明樣品在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好?？瞻籽獫{配制低（50 ng/mL）、中（1 000 ng/mL）、高（2 000 ng/mL） 質(zhì)量濃度血漿樣品，加入內(nèi)標(biāo)溶液，按“2.13.2” 項(xiàng)下方法處理，在“2.1.1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得桔皮素平均加樣回收率分別為 92.77%、96.04%、95.18%，RSD 分別為4.17%、5.06%、4.89% （n＝3）。

2.13.5 結(jié)果分析 血藥濃度-時(shí)間曲線見(jiàn)圖13，再采用DAS 2.0 軟件計(jì)算主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表3。由此可知，與原料藥比較，物理混合物Cmax、AUC0～t、AUC0～∞升高（P＜0.05），可能與Labrasol、泊洛沙姆188 等輔料促吸收作用有關(guān)；固體脂質(zhì)納米粒（不含Labrasol）、Labrasol+固體脂質(zhì)納米粒、固體脂質(zhì)納米粒（含Labrasol）tmax、t1/2延長(zhǎng)（P＜0.05），Cmax、AUC0～t、AUC0～∞升高（P＜0.05，P＜0.01），其中AUC0～t、AUC0～∞以固體脂質(zhì)納米粒（含Labrasol） 更明顯（P＜0.05），相對(duì)生物利用度分別增加至3.13、3.41、4.10 倍，表明在固體脂質(zhì)納米粒中引入Labrasol 是必要的。

圖13 桔皮素血藥濃度-時(shí)間曲線（n＝6）Fig.13 Plasma concentration-time curves for tangeretin （n＝6）

表3 桔皮素主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（±s，n＝6）Tab.3 Main pharmacokinetic parameters for tangeretin （±s，n＝6）

表3 桔皮素主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（±s，n＝6）Tab.3 Main pharmacokinetic parameters for tangeretin （±s，n＝6）

注： 與桔皮素比較，*P＜0.05，**P＜0.01； 與桔皮素固體脂質(zhì)納米粒（不含Labrasol） 比較，＃P＜0.05； 與Labrasol+桔皮素固體脂質(zhì)納米粒比較，△P＜0.05。

參數(shù)單位桔皮素物理混合物桔皮素固體脂質(zhì)納米粒（不含Labrasol）Labrasol+桔皮素固體脂質(zhì)納米粒固體脂質(zhì)納米粒（含Labrasol）tmaxh2.07±0.352.21±0.452.97±0.68*3.12±0.71*3.09±0.62*t1/2h3.72±0.603.88±0.724.94±0.76*5.04±0.91*5.32±0.89*Cmaxng·mL-1569.74±87.12762.71±107.83* 1 307.45±284.77*1 449.80±302.56**1 653.30±323.18**AUC0～tng·mL-1·h 1 898.43±361.77 2 680.06±436.91* 5 943.61±860.13**6 467.14±965.81**7 788.14±1 024.97**?！鰽UC0～∞ng·mL-1·h 1 978.24±378.81 2 744.62±487.73* 6 134.29±903.74**6 628.31±999.03**7 926.58±1 106.48**＃△

3 討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)冷卻后含桔皮素的脂質(zhì)熔融液進(jìn)行X射線粉末衍射分析，發(fā)現(xiàn)藥物以無(wú)定形狀態(tài)存在，即并未析出。溶解度實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，物理混合物在一定程度上提高了桔皮素在模擬胃腸液中的溶解度，可能與Labrasol、泊洛沙姆188 等輔料增溶作用有關(guān)； 固體脂質(zhì)納米粒凍干粉溶解度提高程度大于物理混合物，可能與原料藥粒徑大幅減小、轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)定形狀態(tài)等因素有關(guān)［11，18］。體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果表明，桔皮素固體脂質(zhì)納米粒tmax延長(zhǎng)，可能是由于原料藥在酸性條件下容易發(fā)生降解［6］，固體脂質(zhì)納米粒保護(hù)作用、Labrasol 抑制藥物降解作用使其入血量增加； 固體脂質(zhì)納米粒相對(duì)生物利用度升高，可能是由于原料藥溶解度、溶出度改善，有利于其吸收［18-20］。

前期報(bào)道，Labrasol 輔料可抑制藥物降解作用、促吸收作用，有利于增加后者吸收［21］； 無(wú)定形藥物比結(jié)晶型藥物更易吸收［19］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Labrasol+桔皮素固體脂質(zhì)納米粒生物利用度提高程度低于桔皮素固體脂質(zhì)納米粒（含Labrasol），可能是由于Labrasol 是一種表面活性劑，引入固體脂質(zhì)納米粒后可使后者粒徑更小，更有利于其口服吸收，同時(shí)它可更有效地附著在固體脂質(zhì)納米粒表面，從而抑制原料藥降解［22］，增加其口服吸收量。今后，將對(duì)桔皮素固體脂質(zhì)納米粒（含Labrasol）藥效學(xué)、毒理學(xué)等方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用該制劑。