黃昆鵬　董昆樂　李芳芳　田效園　姚建　吳疆　李洪臣　王曉強　周俊學　孫聚濤

摘要：為探究抗病嫁接對煙草根際土壤微生物多樣性的影響以及抗病增強的機制，為煙草嫁接抗病和篩選有益微生物提供理論基礎。以煙草抗病品系8306作為砧木，以中煙100和NC89作為接穗進行嫁接，并以中煙100和NC89自根植株嫁接作為對照，利用高通量測序技術分析煙草根際土壤微生物群落結構特征。結果表明，抗病嫁接明顯改變了煙草根際土壤中細菌和真菌的群落組成，增加了細菌OTU總數(shù)和特有OTU數(shù)量，提高了α多樣性指數(shù)；降低了真菌OTU總數(shù)、特有OTU數(shù)量以及α多樣性指數(shù)。與自根植株相比，中煙100/8306和NC89/8306根際土壤微生物中酸桿菌門相對豐度增幅分別為18.60%、12.02%；擔子菌門相對豐度增幅分別為19.54%、17.24%，被孢霉門相對豐度增幅分別為97.78%、14.54%；RB41相對豐度增幅分別為28.52%、21.37%；土壤紅桿菌屬相對豐度增幅分別為1.41%、10.78%；被孢霉屬相對豐度增幅分別為91.67%、14.16%；木霉屬相對豐度增幅分別為43.30%、102.51%；毛殼菌屬相對豐度增幅分別為1.80%、29.73%；鐮刀菌屬相對豐度分別降低了15.58%、51.09%，赤霉菌屬相對豐度分別降低了76.79%、19.33%。研究表明，煙草抗病嫁接能夠明顯改變煙草根際土壤細菌和真菌群落的組成和數(shù)量，減少了病原微生物數(shù)量，增加了有益功能優(yōu)勢菌的相對豐度，有益功能優(yōu)勢菌的增加改善了根際土壤微生物環(huán)境，增加了土壤有機質(zhì)和土壤養(yǎng)分含量，促進植株根系發(fā)育，這是煙株嫁接抗病性增強的重要原因之一。

關鍵詞：煙草；嫁接；真菌；根際土壤；多樣性；高通量測序

中圖分類號：S435.72；S572.06文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2023）20-0239-09

煙草是我國重要作物，為煙農(nóng)提供了諸多經(jīng)濟機會，而土傳病害在國內(nèi)烤煙主產(chǎn)區(qū)危害呈加重趨勢，造成了嚴重的經(jīng)濟損失。土傳病害與根際土壤微生態(tài)環(huán)境密切相關，根際土壤微生態(tài)環(huán)境由植物、土壤和微生物群落組成［1-3］。土壤微生物中，細菌的數(shù)量是最多的，在維護土壤健康、拮抗土傳病害、養(yǎng)分循環(huán)等方面起到關鍵作用［4］；土壤真菌具有降解有機質(zhì)、釋放營養(yǎng)和微量元素及調(diào)控土壤養(yǎng)分的作用，在農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)，以及植物生長過程中扮演著重要角色［5-7］。根系健康的微生物一方面可抑制植物病原菌過度繁殖，另一方面可酶解產(chǎn)生誘導物質(zhì)并積累大量次生抗病物質(zhì)，提高作物的抗病性，根莖通過增強養(yǎng)分和水分的吸收影響整體，增加內(nèi)源激素的合成，提高對惡劣環(huán)境的抗性［8-9］。有研究發(fā)現(xiàn)，嫁接能夠改變茄子、辣椒、番茄等茄科作物根系分泌物質(zhì)組成及根際微生物群落結構，進而影響植株對土傳病害的抗性［10-14］。長期的實踐生產(chǎn)已證實，嫁接能克服連作障礙，并且對煙草黑脛病、煙草青枯病等有較好的防治效果［15-16］。然而關于嫁接引起的煙草根際微生物相互作用和群落組合的變化卻知之甚少。

高通量測序技術不僅能檢測土壤微生物的優(yōu)勢物種，亦可檢測稀有物種及部分未知物種［14］。本研究采用嫁接技術，以土傳病害高抗煙草品系8306砧木與煙草感病品種中煙100和NC89進行嫁接栽培，利用Illumina MiSeq高通量測序技術，分析抗病嫁接對煙草植株根際土壤微生物多樣性及群落結構的影響，旨在探究煙草嫁接增強植株抗性的機制，并為利用嫁接技術防控煙草土傳病害提供一定理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗于2021年在河南省許昌市襄城縣汾陳鎮(zhèn)（33°58′11.50″N，113°32′5.82″E）進行，供試大田土壤為黃壤，該地近年均溫14.7 ℃，日照時長2 280 h，年均年降水量579 mm，平均無霜期217 d。供試煙草包括抗病品系8306、河南當前主栽品種中煙100、河南曾經(jīng)主栽品種NC89，由河南農(nóng)業(yè)大學煙草育種實驗室提供。在溫室中按漂浮育苗方法育苗，煙苗培育至6～7張真葉期，用于嫁接處理，嫁接方式參照文獻［15］。以中煙100、NC89的煙苗作接穗，以8306的煙苗作砧木，并以中煙100、NC89自根苗嫁接作對照，共設4組嫁接，嫁接編號見表1。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品采集 在煙草移栽80 d時，在試驗田進行樣品采集。取樣時去除地表雜物，然后將煙株整株挖起，去除主體根圍土，采用抖根法收集須根 2 mm 范圍內(nèi)的土壤［17］。

1.2.2 檢測項目及方法 按5點取樣法進行取樣，每個處理取 5 株，收集完成后混勻并分為兩部分，一部分土壤樣品用于土壤真菌高通量測序，用 10 mL 無菌離心管裝好置于干冰保藏箱中，快速帶回實驗室于-80 ℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆?；另一部分土壤樣品用于化學性質(zhì)檢測，用自封袋裝好帶回實驗室，自然陰干，研磨過篩后備用，參照文獻［18］中的方法進行檢測，檢測結果見表2。

1.2.3 基因組DNA的提取 樣品DNA提取由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司完成。根據(jù) E.Z.N.A. soil DNA kit （Omega Bio-tek，Norcross，GA，U.S.）說明書進行根際土壤微生物總 DNA 的提取，使用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的提取質(zhì)量，使用NanoDrop2000 UV-Vis 分光光度計（Thermo Fisher Scientific，Wilmington，NC，United States），測定DNA 濃度和純度。

1.2.4 目的基因擴增及 Illumina Miseq 測序 將同一樣本的PCR產(chǎn)物混合后使用2%瓊脂糖凝膠回收PCR產(chǎn)物，引物序列為ITS1F（5′-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3′）和ITS2R（5′-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3′）。利用凝膠回收試劑盒［AxyPrep DNA Gel Extraction Kit （Axygen Biosciences，Union City，CA，USA）］ 進行回收產(chǎn)物純化，用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，并用QuantusTM Fluorometer （Promega，USA） 對回收產(chǎn)物進行檢測定量。使用NEXTflexTM Rapid DNA-Seq Kit（Bioo Scientific，美國）進行建庫，PCR 產(chǎn)物由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司利用 HiSep 測序平臺進行高通量測序。

利用軟件平臺Usearch（version 7.0）對相似度在97%條件下的操作分類單元（OTU）進行質(zhì)控拼接和Tag聚類去嵌合體，獲得4 組 16 個樣品的 OTU 的豐度和 OTU 代表序列。由圖1可知，各不同嫁接處理樣品細菌和真菌的OTU水平的Shannon指數(shù)曲線均在測序量約為5 000條時趨于平緩，證明本次測序數(shù)據(jù)量能夠比較真實地反映土壤樣本的微生物群落。表明本研究測序深度所產(chǎn)生的測序數(shù)據(jù)可滿足后續(xù)試驗要求。

1.3 數(shù)據(jù)分析

對原始測序序列進行質(zhì)控、拼接、OTU 聚類并剔除嵌合體。利用[JP+1]Mothur（version v.1.30.2 ）軟件指數(shù)分析樣本的α多樣性分析，通過Ace 指數(shù)、Chao 1 指數(shù)、香農(nóng) （Shannon）指數(shù)和辛普森 （Simpson）指數(shù)反映微生物群落的豐富度和多樣性［19］。利用主坐標分析（PCoA）法進行β多樣性分析，PCoA是基于距離矩陣進行降維分析，以百分比評估各坐標軸對菌群結構總體差異的解釋度。用 Microsoft Excel 2016和IBM Statistics SPSS 21.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析和正態(tài)分布檢驗。

2 結果與分析

2.1 不同嫁接處理根際土壤細菌和真菌群落 α多樣性

由表3可知，土壤細菌、真菌樣品的文庫覆蓋度分別達到了96.50%、99.50%以上，表明注釋結果反映的群落生物信息能夠代表真實環(huán)境中的微生物多樣性。通過分析得出，細菌的 α 多樣性指數(shù)明顯高于真菌的 α 多樣性，嫁接提高了細菌物種豐富度以及群落多樣性，但不具有顯著性差異。通過分析真菌的Ace 指數(shù)和Chao 1 指數(shù)可知，嫁接降低了真菌物種的豐富度以及群落多樣性。

2.2 OTU水平Venn圖分析

由圖2可知，8306作為抗病砧木對中煙100 OTU數(shù)量的影響大于對NC89 OTU數(shù)量的影響。其中由圖2-a可以看出，T1和T2的細菌OTU總數(shù)高于自根苗嫁接，其中T1特有的OTU為1 352個，CK1特有的OTU為1 283個，T2特有的OTU為 1 146 個，CK2特有的OTU為1 132個。由圖2-b可知，真菌OTU總數(shù)、特有OTU數(shù)量均低于自根苗嫁接，T1特有的OTU為435個，而CK1特有的OTU為606個；T2特有的OTU為431個，CK2特有的OTU為436個。綜合分析，嫁接增加了細菌的OTU數(shù)量及特有OTU數(shù)量，降低了真菌的OTU數(shù)量及特有OTU數(shù)量。

2.3 根際土壤微生物群落組成分析

2.3.1 基于門分類水平的微生物群體結構分析 由圖3-a 可知，基于門分類水平分析發(fā)現(xiàn)，不同嫁接處理根際土壤中前4個優(yōu)勢菌門相對豐度累計總和為72.45%～74.93%。其中，放線菌門 （Actinobacteriota）在各嫁接處理中相對豐度占比最高 均值在25.48%～26.80%之間 各嫁接處理之間無明顯差異；其次是變形菌門 （Proteobacteria），其占比在19.61%～24.65%之間，與自根植株嫁接相比，T1、T2處理變形菌門的相對豐度分別降低了14.82%、11.02%；酸桿菌門 （Acidobacteria）分別增加了18.60%、12.02%；綠彎菌門 （Chloroflexi）分別增加了2.08%、8.16%；黏菌門（Myxococcota）分別增加了3.55%、3.92%、Methylomirabilota分別增加了118.58%、10.91%；浮霉菌門 （Planctomycetota）分別增加了42.89%、4.28%；unclassified_k__norank_d__Bacteria分別增加了38.35%、20.71%；腸桿菌門（Entotheonellaeota）分別增加了48.15%、17.71%；Latescibacterota分別增加了174.7%、79.59%；NB1-j分別增加了118.58%、10.91%；髕骨細菌門（Patescibacteria）分別降低了54.62%、30.43%；蛭弧菌（Bdellovibrionota）分別降低了7.58%、13.28%；綜合對比，嫁接煙株優(yōu)勢菌門相對豐度呈現(xiàn)共同上漲趨勢的有9種，下降趨勢的有3種。由圖3-b可知，子囊菌門（Ascomycota）相對豐度占比最高，均值在55.24%～73.37%之間，與自根植株相比，中煙100/8306和NC89/8306的相對豐度分別減少24.72%、2.59%；其次是被孢霉門（Mortierellomycota），相對豐度占比在12.71%～25.14%之間，與對照相比增幅分別為97.78%、14.54%，擔子菌門（Basidiomycota）相對豐度增幅分別為19.54%、17.24%；Aphelidiomycota 相對豐度增幅分別為242.86%、97.01%；毛霉門（Mucoromycota） 相對豐度降幅分別為93.23%、78.04%；羅茲菌門（Rozellomycota）相對豐度降幅分別為6.85%、75.58%；壺菌門（Chytridiomycota）相對豐度降幅分別為26.37%、25.41%。綜合對比，嫁接對中煙100的影響大于對NC89的影響。

2.3.2 基于屬分類水平的微生物群體結構分析 圖4為抗病嫁接根際土壤中占比大于1.5%的優(yōu)勢菌屬以及占比小于1.5%的其他菌屬（以others表示）。如圖4-a 所示，細菌屬水平中，與自根植株相比，中煙100/8306和NC89/8306的norank_f__Vicinamibacteraceae、norank_f__norank_o__Vicinamibacterales、norank_f__Gemmatimonadaceae、RB41、norank_f__norank_o__norank_c__MB-A2-108、norank_f__norank_o__Rokubacteriales、土壤紅桿菌屬（Solirubrobacter）、norank_f__norank_o__norank_c__KD4-96、鏈霉菌屬（Streptomyces）和norank_f__norank_o__norank_c__bacteriap25 菌屬的相對豐度呈現(xiàn)相對增加的趨勢，其中RB41相對豐度增幅分別為28.52%、21.37%，而芽殖球菌屬（Blastococcus）、鏈霉菌屬（Streptomyces）、鞘脂單胞菌屬（Sphingomonas）呈現(xiàn)相對豐度降低的趨勢，嫁接煙株優(yōu)勢菌屬相對豐度呈現(xiàn)上漲趨勢的有10種，呈現(xiàn)下降趨勢的有3種。

由圖4-b可知，真菌屬水平中被孢霉屬（Mortierella）的相對豐度占比最高，4組處理的均值在12.53%～24.01%之間，與自根植株相比，中煙100/8306和NC89/8306被孢霉屬相對豐度增幅分別為91.67%、14.16%；木霉屬（Trichoderma）相對豐度增幅分別為43.30%、102.51%；毛殼菌屬（Chaetomium）相對豐度增幅分別為1.80%、29.73%；除上述3種菌屬外unclassified_p_Ascomycota、Solicoccozyma、unclassified_o__Hypocreales、unclassified_o__Pleosporales、Pyrenochaetopsis、unclassified_o__Agaricales 菌屬的相對豐度呈現(xiàn)增加的趨勢，其中unclassified_o__Agaricales增加幅度較大，相對豐度增幅分別是 6 480.00%、579.30%。相對豐度降低的菌屬有鐮刀菌屬（Fusarium），相對豐度降幅分別為15.58%、51.09%，赤霉菌屬（Gibberella），相對豐度降幅分別為76.79%、19.33%，除此之外，新赤殼屬（Neocosmospora ）、青霉屬（Penicillium）、短梗蠕孢屬（Trichocladium）、unclassified_o__Sordariales、unclassified_c__Sordariomycetes、Cercophora、Plectosphaerella的相對豐度也呈現(xiàn)降低的趨勢。

2.4 不同嫁接根際土壤微生物 β 多樣性分析

PCoA 基于距離矩陣進行降維分析，以百分比評估各坐標軸對菌群結構總體差異的解釋度，一般PCoA1和PCoA2總和達到50%以上較好［20］。由圖 5-a 可知，T1和CK1、T2和CK2第1主成分（PC1）和第2主成分（PC2）對嫁接處理樣品差異的貢獻值之和分別為71.56%、 64.41%，大于50%，說明坐標軸對細菌群落結構總體解釋度較好，T1和CK1的非度量多維標度（NMDS）分析結果為0.009，T2和CK2的NMDS分析結果為0.037，均小于0.1，說明模型模擬效果好，可靠性高。2個樣本之間距離越接近，表示樣本組成結構相似度越高，T1與CK1之間和T2與CK2之間相比，T1、CK1 2個樣本之間距離較大，群落結構差異也較大。由圖5-b可知，T1和CK1、T2和CK2的PC1和PC2對嫁接處理樣品差異的貢獻值之和分別為71.24%、51.05%，均大于50%，T1和CK1、T2和CK2的NMDS分析結果均小于0.1，模型符合數(shù)據(jù)要求。T1與CK1和T2與CK2 2個樣本之間的距離相差不大，說明嫁接對真菌群落結構影響在2個品種之間基本一致。

2.5 不同嫁接根際土壤理化性質(zhì)與微生物群落關聯(lián)分析

冗余分析（RDA）又稱多元直接梯度分析，將對應分析與多元回歸分析相結合，使用二維平面展示環(huán)境因子、樣品、菌群三者之間的關系。由圖6可知，不同嫁接處理根際土壤細菌（圖6-a）、真菌（圖6-b）RDA1與RDA2之和分別為55.82%、70.44%，說明排序軸能夠很好地反映環(huán)境因子與菌群之間的關系。在細菌屬水平上（圖6-a），斯皮爾曼（Spearman）相關系數(shù)顯示，土壤堿解氮含量對細菌的影響比較顯著，土壤堿解氮含量與norank_f__Vicinamibacteraceae、norank_f__norank_o__Vicinamibacterales、norank_f__norank_o__norank_c__MB-A2-108、 RB41的相對豐度呈顯著正相關，其中與RB41的R=0.562（P<0.01）；與芽殖球菌屬（Blastococcus）、土壤紅桿菌屬（Solirubrobacter）的相對豐度呈極顯著負相關，其中與土壤紅桿菌屬（Solirubrobacter）的R=-0.523（P<0.01）；土壤速效鉀含量與土壤紅桿菌屬（Solirubrobacter）（R=-0.552，P<0.01）的相對豐度呈顯著負相關。在真菌屬水平上（圖6-b），斯皮爾曼（Spearman）相關系數(shù)顯示，土壤pH值和土壤有機質(zhì)含量對真菌屬的影響比較顯著，其中土壤pH值與被孢霉屬（Mortierella）（R=0.674，P<0.01）的相對豐度呈極顯著正相關，與赤霉菌屬（Gibberella）（R=-0.602，P<0.05）的相對豐度呈顯著負相關；土壤有機質(zhì)含量與木霉屬（Trichoderma）（R=-0.579，P<0.05）的相對豐度呈顯著負相關；土壤堿解氮含量與被孢霉屬（R=0.547，P<0.05）的相對豐度呈顯著正相關。土壤堿解氮、土壤pH值和土壤有機質(zhì)含量是影響根際微生物群落組成的重要土壤理化性質(zhì)。

3 討論

本研究結果表明，抗病嫁接明顯改變了煙株根際土壤細菌和真菌的群落結構，其中嫁接增加了細菌OTU數(shù)量和特有OTU數(shù)量，這與劉娜等的研究結果［1］一致。嫁接后根際土壤優(yōu)勢菌門、優(yōu)勢菌屬相同，嫁接改變了優(yōu)勢菌的相對豐度，其中細菌優(yōu)勢菌呈現(xiàn)增加趨勢的數(shù)量大于降低的優(yōu)勢菌。煙草抗病嫁接對根際土壤細菌和真菌的α多樣性指數(shù)的改變不具有顯著性差異，但2個嫁接品種的結果與對照相比，改變趨勢相同。通過根際土壤理化性質(zhì)與微生物群落關聯(lián)分析得出，土壤堿解氮含量、土壤pH值和土壤有機質(zhì)含量是影響根際微生物群落組成的重要土壤理化性質(zhì)，這與文獻的研究結論［21］一致。

基于門分類水平分析，中煙100/8306和NC89/8306與自根植株相比，酸桿菌門、綠彎菌門等的相對豐度呈現(xiàn)增加的趨勢，敖金成等研究發(fā)現(xiàn)煙草連作種植和根腐病發(fā)病的植株根際土壤中酸桿菌門、綠彎菌門的相對豐度呈明顯降低趨勢，說明健康的根際土壤微生物中酸桿菌門、綠彎菌門具有重要作用［22］。有研究表明，綠彎菌門能夠分解纖維素，酸桿菌門可以通過降解木質(zhì)素和纖維素增加土壤有機質(zhì)含量，提高土壤養(yǎng)分含量［23-25］。變形菌門包含有大量的動植物致病菌，其相對豐度的降低能夠提高土壤環(huán)境抗逆性，降低植株的病害損失［26］。擔子菌門的相對豐度提高了19.54%、17.24%，擔子菌門真菌作為土壤中主要分解者，與植物共生形成菌根，豐度的提高有利于植物生長，提高植株的抵抗力，增強抗病性［27-28］。被孢霉門的相對豐度增幅分別為97.78%、14.54%，被孢霉門屬于真菌中的好氧型，偏好透氣性良好的土壤環(huán)境，具有分解半纖維素、纖維素和木質(zhì)素等物質(zhì)的能力，并將土壤中的糖類物質(zhì)進行自身的生長代謝，進而增加土壤養(yǎng)分和有機質(zhì)含量［29］?；趯俜诸愃椒治?，RB41、土壤紅桿菌屬等的相對豐度呈增加趨勢，其中RB41的相對豐度增幅分別為28.52%、21.37%。研究表明在所有生態(tài)系統(tǒng)中常見的屬中，RB41和根瘤菌、鏈霉菌通過細菌生產(chǎn)力和呼吸共同構成了45%～57%的碳流，是碳循環(huán)的重要組成部分。土壤紅桿菌屬豐度增加有利于促進根系發(fā)育，植株的生長，提高植株得抵抗力［30］。被孢霉屬的相對豐度增幅分別為91.67%、14.16%，有研究表明在土壤中添加被孢霉可顯著增加鉀、鈣、鎂和硼等元素的含量，能夠增強土壤肥力［31-32］；而且其分泌的不飽和脂肪酸是土壤微生物吸收利用的重要碳源，可以改變土壤微生物生境，進而影響土壤微生物群落組成［33］。木霉屬的相對豐度增幅分別為43.30%、102.51%，木霉菌產(chǎn)生木聚糖、低聚糖、內(nèi)肽化合物等小分子量化合物誘導植物產(chǎn)生防御反應［34-35］，以空間競爭、營養(yǎng)競爭、重寄生、分泌抗菌物質(zhì)等途徑抑制或殺滅病原菌［36］，而且木霉菌同時具有一定促進作物增產(chǎn)的效果，目前木霉菌被廣泛用于防治煙草黑脛?。?7-39］；毛殼菌屬的相對豐度增幅分別為1.80%、29.73%，有研究表明毛殼菌屬是一種分布非常廣泛的腐霉真菌，可以產(chǎn)生豐富的降解纖維素的酶，產(chǎn)生多種次生代謝物（如球毛殼素、毛殼素等），能夠?qū)Χ喾N病原菌起到良好的抑制作用［40-41］。鐮刀菌屬的相對豐度分別降低了15.58%、51.09%，赤霉菌屬的相對豐度分別降低了76.79%、19.33%。研究表明，鐮刀菌屬可引發(fā)多種植物患病，是土壤中常見的致病菌，在煙草作物上可引起煙草枯萎病和根腐病［42-43］；所有的赤霉菌都是鐮刀菌的有性階段，許多赤霉菌可以引起具有破壞性的植物病害，例如小麥赤霉病、玉米穗腐病、水稻惡苗病和馬鈴薯塊莖干腐病等農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上重要的糧食作物［44］，因此，鐮刀菌屬和赤霉菌屬相對豐度的降低，有利于降低植株病害的發(fā)生。

4 結論

本研究通過Illumina MiSeq對抗病嫁接烤煙根際土壤進行宏基因組測序，探明了煙草抗病嫁接對土壤細菌、真菌群落結構的影響，嫁接富集了酸桿菌門、綠彎菌門、黏菌門、擔子菌門、被孢霉門、RB41、土壤紅桿菌屬、被孢霉屬、木霉屬、毛殼菌屬等有益菌，其中酸桿菌門、綠彎菌門、被孢霉門、毛殼菌屬具有提高纖維素分解的能力，從而增加土壤有機質(zhì)含量，提高土壤養(yǎng)分含量；木霉屬、毛殼菌屬對多種病原菌具有強大的拮抗能力，能夠改善植株根際微環(huán)境，降低根際土壤環(huán)境中的病原菌；擔子菌門、土壤紅桿菌屬相對豐度增加有利于促進根系發(fā)育，植株的生長，提高植株自身的病害抵抗力。由此推斷，富集有益微生物，減少病原微生物的方式是嫁接植株抗性增強的重要機制之一。

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收稿日期：2023-01-01

基金項目：中國煙草總公司河南省公司重點項目（編號：2021410000240021）；河南省煙草公司許昌市公司重點項目（編號：2020411000240069）；河南省煙草公司平頂山市公司重點項目（編號：2022.41.04.01.24.0105）。

作者簡介：黃昆鵬（1994—），男，河南商丘人，碩士研究生，研究方向為煙草抗病育種。E-mail：kph615@126.com。

通信作者：周俊學，農(nóng)藝師，從事煙草栽培、生產(chǎn)管理等研究，E-mail：910675295@qq.com；孫聚濤，博士，講師，主要從事煙草抗病育種研究，E-mail：1sjt@163.com。