閆聚瀚 趙朋濤 閆曉冬 劉鑫 綜述 李向東 審校

(1.河北北方學(xué)院研究生學(xué)院,河北 張家口 075000;2. 河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院,河北 張家口 075000)

腎缺血再灌注損傷(Ischemia reperfusion injury,IRI)是指腎組織經(jīng)缺血缺氧處理再恢復(fù)其血液供應(yīng)后造成腎臟出現(xiàn)損傷的一種病理生理過程,腎IRI發(fā)生后,隨著腎臟物質(zhì)代謝、結(jié)構(gòu)和功能損傷程度逐步加重,甚至可能會引起一系列不可逆的損傷[1]。而且腎臟是人體內(nèi)一個對缺血缺氧環(huán)境非常敏感的強血液灌注器官,腎IRI會誘發(fā)炎癥因子過表達(dá)、氧化應(yīng)激、Ca2+超載及細(xì)胞線粒體自噬而發(fā)生急性腎損傷(Acute kidney injury,AKI)[2-3],其中休克、敗血癥、腎移植是造成AKI的主要原因,嚴(yán)重的AKI甚至?xí)l(fā)展成慢性腎臟病(Chronic kidney disease,CKD),最終導(dǎo)致器官衰竭而危及生命[4-5]。有研究[6-7]報道,近年來AKI的發(fā)病率和死亡率不斷上升,臨床AKI發(fā)病率估計在20%。故腎臟的缺血缺氧仍是AKI發(fā)病的重要因素之一,且目前針對AKI的治療措施仍不完善,這不僅增加了患者的負(fù)擔(dān),還加重了臨床工作的壓力,目前臨床工作者和研究人員仍在通過動物模型建造的不斷完善以進一步探索更有效的治療方法[8]。

近幾年以來,隨著AKI與CKD臨床患者人數(shù)的增加以及科研工作的需要,對腎IRI的研究受到了越來越多科研人員的關(guān)注,他們分別使用了不同的實驗建模方法對腎IRI進行了研究[9-10]。有研究[11]發(fā)現(xiàn),腎IRI模型主要包括用于研究組織細(xì)胞學(xué)的體外模型以及用于研究其機制、腎功能指標(biāo)監(jiān)測、炎癥因子和不同通路作用的體內(nèi)模型。但是,體外模型建立條件相對簡易方便以及在模擬人整體性和復(fù)雜性方面存在著明顯的局限性,而體內(nèi)模型的建立雖較為復(fù)雜,但更多的應(yīng)用于科學(xué)研究。小鼠腎IRI體內(nèi)模型多采取背部切口和腹部切口的手術(shù)方式,主要通過雙側(cè)鉗夾腎蒂、單側(cè)鉗夾腎蒂兩種方式模擬腎IRI,從而對腎IRI進行進一步的研究。自上世紀(jì)90年代以來,建立小鼠模型研究腎IRI的方法受到越來越多研究者們的青睞,而且,小鼠模型具有可獲得性和簡易性的優(yōu)點,可以大大提高模型建立的效率。但是,小鼠對于飼養(yǎng)或?qū)嶒灜h(huán)境的細(xì)微變化非常敏感,可能會導(dǎo)致模型的建立并不穩(wěn)定。另外,有研究證實,建模成功與否與建模條件(溫度、濕度、飼養(yǎng)及實驗環(huán)境等)有關(guān),目前在以小鼠模型模擬腎缺血再灌注損傷的科研實驗中,建模條件各異,并沒有統(tǒng)一的建模條件,這就要求實驗者不斷完善并形成自己需要的建模條件。本文對小鼠腎IRI建模研究的進展進行綜述,以此為建立穩(wěn)定、可靠的小鼠腎IRI模型提供一定參考價值。

1 小鼠品系的選擇

最近一項研究表明,129/S與瑞士小鼠和野生型C57小鼠相比,對缺血性AKI表現(xiàn)出較低的敏感性,這表明不同小鼠品系甚至同一小鼠品系的不同個體之間,對缺血性AKI的敏感性都存在明顯的差異。另外,許多轉(zhuǎn)基因小鼠雖然與野生型C57小鼠具有同樣的遺傳背景,但是這些轉(zhuǎn)基因小鼠至少經(jīng)過5代繁殖后,對缺血性AKI的敏感性明顯高于一般的野生型C57小鼠。所以,有關(guān)小鼠品系的選擇,Sun等[12]研究者認(rèn)為優(yōu)先選擇野生型C57(WT C57 )雄性小鼠,因為WT C57是一種近交系小鼠,且價格低廉、對環(huán)境適應(yīng)性強、易獲得和飼養(yǎng),屬于一種常用的實驗小鼠[13-14]。另外,關(guān)于不同性別小鼠的選擇問題,考慮到雌鼠有雌激素的保護作用[15],可能會導(dǎo)致血清肌酐的水平受到影響[16],而且雌鼠卵巢血管的走形與輸尿管相近,造成腎蒂及血管游離困難而增加了腎缺血再灌注手術(shù)的難度,所以,大多數(shù)研究者都選擇了雄性小鼠進行腎IRI實驗。另外,選擇合適周齡的雄鼠是影響實驗效果的重要因素,目前,Zhang等[17]研究者認(rèn)為≥8周齡的小鼠更適合作為實驗建模的手術(shù)對象,小鼠周齡過大或者過小都會影響建模效果,同時指出周齡過小(≤6周)影響建模的原因主要體現(xiàn)在以下幾方面:①≤6周齡的小鼠器官發(fā)育未成熟,而術(shù)中對于游離小鼠的組織器官等操作要求非常精確,可能會因組織器官體積過小造成肉眼游離不充分、不徹底而增加實驗結(jié)果的偏差。②≤6周齡的小鼠對于局麻藥物的抵抗能力較弱,麻醉藥劑量控制稍有不慎,就可能會增加小鼠的死亡概率。③≤6周齡的小鼠術(shù)后采血時因血量較少,經(jīng)離心后血清容積可能不足150 ul而無法進行后續(xù)的實驗研究。因此,相比較而言,≥8周齡的小鼠術(shù)后采血,經(jīng)離心后所需血清容積一般可以穩(wěn)定在150 ul以上[18],能滿足后續(xù)實驗的進行,且≥8周齡的小鼠對于麻醉劑的耐受程度較好,抗寒能力和抗饑餓能力也均較強,另外,≥8周齡的小鼠術(shù)后蘇醒較快,術(shù)后因腸粘連而發(fā)生腸梗阻的概率較小,基本能維持小鼠腎IRI后機體功能的正常運行。此外,對于周齡過大的小鼠,有研究證實,腎臟的老化會引起腎臟的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變以及腎臟代謝功能出現(xiàn)明顯的衰退,在腎IRI逐步誘導(dǎo)AKI發(fā)生后,其血清肌酐、血尿素氮的值達(dá)到預(yù)期水平所需的時間更長,因此,小鼠也更易出現(xiàn)死亡[19-20]。

2 小鼠術(shù)前處理

2.1 小鼠所處環(huán)境及實驗前飼養(yǎng) 研究[21]表明,在恒定室溫22～26 ℃、相對濕度40%～60%且通風(fēng)良好的標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下采用晝夜周期為12 h:12 h的模式對小鼠進行實驗前飼養(yǎng)一周左右,使小鼠的各項生理機能保持在一個良好的狀態(tài),同時也能抵抗一部分手術(shù)給小鼠帶來的損傷,從而加快術(shù)后恢復(fù)的速度。若小鼠于實驗前數(shù)天內(nèi)未進行飼養(yǎng),使小鼠長時間處于饑餓或應(yīng)激狀態(tài),這不僅會加重小鼠在術(shù)中的損傷程度,而且對術(shù)后組織器官功能的恢復(fù)也會帶來很大影響,而且,從人文關(guān)懷的角度出發(fā),生命均需得到尊重[22]。另外,有相關(guān)研究還發(fā)現(xiàn),腎IRI模型建立的最佳時間段與小鼠腎臟脫水的程度密切相關(guān),有研究人員發(fā)現(xiàn),小鼠在黑暗環(huán)境下較興奮,飲水次數(shù)也相對較多,而且,在上述晝夜周期模式下飼養(yǎng)的小鼠在每日14～17點時間段內(nèi)脫水最嚴(yán)重,因此,認(rèn)為每日14～17點是建立腎IRI模型的最佳時間段[23]。

2.2 小鼠術(shù)前禁食 關(guān)于小鼠術(shù)前4～6 h內(nèi)是否禁食,與以往研究對比發(fā)現(xiàn)小鼠在術(shù)前4～6 h內(nèi)采取禁食對手術(shù)有一定的幫助,對于那些只開腹行雙側(cè)腎蒂血管夾閉或行右側(cè)腎切除伴左側(cè)腎蒂夾閉的小鼠而言,采取術(shù)前禁食,小鼠并不會出現(xiàn)重要消化器官的損傷[24-25],唯一的影響是術(shù)中腸管方向可能比較混亂。因此,這也對術(shù)后對小鼠腸管大致位置的復(fù)位提出了嚴(yán)格的要求,在進行腸管復(fù)位時,可根據(jù)腸管中的內(nèi)容物判斷腸管的大致位置。有研究[26-27]還證實了術(shù)前禁食可以調(diào)控免疫球蛋白A(IgA)在維持腸道穩(wěn)態(tài)中的作用,所以只要術(shù)中注意操作謹(jǐn)慎,未損傷腸管,術(shù)前4～6 h內(nèi)禁食對于術(shù)后小鼠的恢復(fù)和存活并無太大影響。

2.3 手術(shù)麻醉方案 麻醉方式分為全身麻醉和局部麻醉[28],關(guān)于小鼠腎IRI模型麻醉方式的選擇,國內(nèi)外研究者們最早普遍采用腹腔注射氯胺酮/甲苯噻嗪的方式對小鼠進行麻醉,但后來發(fā)現(xiàn)這種麻醉方式會導(dǎo)致小鼠死亡率升高;之后的研究者采用了異氟烷對小鼠進行麻醉,結(jié)果發(fā)現(xiàn)這種麻醉方式不受控,而且,在發(fā)生腎IRI時,此麻醉方式除了可以發(fā)揮麻醉效果,同時還會對腎功能存在一定的保護作用而造成實驗結(jié)果出現(xiàn)明顯的偏差[29]。相比較而言,戊巴比妥鈉用于小鼠腎IRI建模的麻醉效果較好,因此,近幾年越來越多的研究者都選擇采用腹腔注射戊巴比妥鈉的麻醉方式,此操作相對簡捷,注射30 min后小鼠便可達(dá)深度麻醉狀態(tài),其藥物劑量按照50 mg/kg換算,8周左右20 g重的小鼠,所需麻醉劑(5%戊巴比妥鈉)的劑量約為0.1 mL ,而周齡>8周的小鼠可按其體重少量添加戊巴比妥鈉的劑量[30]。但是,最近有研究者發(fā)現(xiàn),在實際實驗操作中,用1 mL注射器取合適劑量的麻醉劑腹腔注射后,注射器中一般還會殘留少量的麻醉劑,這就可能會造成部分小鼠在術(shù)中會因為麻醉劑的劑量不足出現(xiàn)疼痛躁動,進而影響手術(shù)的正常操作[31],這時可以用0.9%濃度的生理鹽水對注射器中剩余的麻醉劑(約0.02～0.05 mL)稀釋后進行腹腔噴灑,或者在注射戊巴比妥鈉后,按50 g/kg的劑量皮下注射丁丙諾啡3～5 min后,再用力按壓小鼠足部,若小鼠對用力擠壓產(chǎn)生的疼痛沒有任何反應(yīng),則可繼續(xù)進行后續(xù)的實驗操作。上述兩種處理方式不僅可以有效的減輕實驗中小鼠因麻醉劑量不足而產(chǎn)生的疼痛,而且還可以提高術(shù)后小鼠的成功蘇醒以及降低實驗中小鼠的死亡率[32-33]。

3 小鼠術(shù)中處理

3.1 術(shù)中小鼠體溫 近幾年,有大量研究發(fā)現(xiàn),飼養(yǎng)小鼠的室內(nèi)溫度和實驗過程中小鼠體溫的變化是腎IRI后腎功能指標(biāo)出現(xiàn)明顯變化的關(guān)鍵因素。所以,在充分考慮這個因素后,研究者們在實驗中使用了恒溫系統(tǒng),此恒溫系統(tǒng)的頂端有一個探針,實驗中需要將探針插入小鼠的直腸內(nèi),就可以精準(zhǔn)地調(diào)節(jié)腎IRI實驗小鼠體溫的變化,從而可以很大程度降低因溫度的變化導(dǎo)致的實驗結(jié)果偏差。在最近的一項實驗中,將小鼠充分麻醉后放置于恒溫系統(tǒng)(37.0 ℃恒溫手術(shù)臺,且溫度控制在±0.1 ℃范圍內(nèi)波動)上進行后續(xù)的實驗操作,然后對比小鼠在有無恒溫系統(tǒng)時血清肌酐、血尿素氮水平的差異:他們在前期實驗中,未使用恒溫系統(tǒng),致使小鼠血清肌酐水平不穩(wěn)定,在后期實驗中,他們在37.0 ℃恒溫系統(tǒng)的控制下進行實驗,發(fā)現(xiàn)小鼠血清肌酐、血尿素氮的水平隨溫度的升高而升高[34-35]。另外,Wong等[36-37]研究已證實,AKI血清肌酐的標(biāo)準(zhǔn)值為1.5 mg/dL (133 μmol/L),若在48 h內(nèi)血清肌酐值迅速升高超過 3 mg/dL (265 μmol/L)或血清肌酐值在其標(biāo)準(zhǔn)值的基礎(chǔ)上增加50%則代表發(fā)生了AKI。不僅如此,通過對小鼠術(shù)后血肌酐水平以及其術(shù)后恢復(fù)程度方面進行比較,發(fā)現(xiàn)經(jīng)恒溫系統(tǒng)下處理的小鼠血肌酐水平顯著升高,腎損傷程度也更嚴(yán)重,小鼠術(shù)后恢復(fù)較慢、精神狀態(tài)和活動度均較差。實驗結(jié)果表明:術(shù)中溫度的恒定是腎IRI后小鼠血肌酐升高的關(guān)鍵步驟,小鼠實驗中經(jīng)37.0 ℃恒溫系統(tǒng)處理后,術(shù)后腎功能和生化指標(biāo)會出現(xiàn)明顯的變化[38]。

3.2 術(shù)中手術(shù)操作 實驗者發(fā)現(xiàn),實驗中對小鼠進行常規(guī)麻醉后,在剪開腹腔時小鼠都會出現(xiàn)不同程度的疼痛反應(yīng),仔細(xì)觀察小鼠的反應(yīng),判斷其疼痛程度,若不影響后續(xù)手術(shù)進程以及各指標(biāo)的監(jiān)測,就盡量不再增加麻醉藥物的劑量,否則將會延長術(shù)后小鼠的蘇醒時間及增加小鼠的死亡丟失率[39]。另外,研究者們還指出,在術(shù)中使用棉簽、拉鉤、玻璃分針、動脈夾等器械時動作一定要輕柔,避免造成腹腔內(nèi)組織器官的損傷。其中,使用大小合適的拉鉤可以增加術(shù)野的暴露、方便后續(xù)手術(shù)操作以及減少手術(shù)的時長。綜上,實驗中每一步操作都應(yīng)緩慢謹(jǐn)慎,特別是在游離腎蒂時,要密切注意附近的血管和組織,以免造成實驗中腎臟或者鄰近器官出現(xiàn)不必要的損傷而導(dǎo)致實驗結(jié)果出現(xiàn)較大的差異。

3.3 雙側(cè)腎蒂夾閉和右側(cè)腎切除伴左側(cè)腎蒂夾閉 根據(jù)以往小鼠實驗的研究,大多數(shù)研究者們在實驗中分別通過雙側(cè)夾閉小鼠腎蒂30 min、40 min、右側(cè)腎切除伴左側(cè)腎蒂夾閉30 min的方式分別誘導(dǎo)腎IRI的發(fā)生,觀察腎臟顏色的變化,當(dāng)顏色由鮮紅色變?yōu)樽虾谏珪r,即可判斷為腎缺血模型建造成功,然后,夾閉雙側(cè)或單側(cè)腎蒂使腎臟缺血至相應(yīng)的時間后立即松開微型動脈夾以恢復(fù)腎臟的血流灌注,當(dāng)血供恢復(fù)后,腎臟顏色也由紫黑變回鮮紅色,即可認(rèn)為腎缺血后再灌注成功。Behaghel等[40]在腎IRI后通過對腎功能和相應(yīng)血清生化指標(biāo)的監(jiān)測,觀察到各建模方式術(shù)后血清肌酐值的變化為:雙側(cè)夾閉腎蒂30 min后血肌酐值在100 μmol/L～150 μmol/L范圍內(nèi)波動、雙側(cè)夾閉腎蒂40 min后血肌酐值在120～240 μmol/L范圍內(nèi)波動、右側(cè)腎切除伴左側(cè)腎蒂夾閉30 min后血肌酐值在150～200 μmol/L范圍內(nèi)波動,而造成血肌酐值不同的原因除了單、雙側(cè)夾閉腎蒂方式的不同,他們認(rèn)為還要考慮的是術(shù)中腎蒂及血管游離不徹底或者動脈夾夾閉腎蒂時有鄰近組織嵌入的原因。另外,需要特別指出的是,上述建模方式中提到的單側(cè)鉗夾腎蒂伴對側(cè)腎切除建立腎IRI的方式也是目前研究AKI一個較好的選擇,此方式常用于從急性腎損傷到腎小管間質(zhì)纖維化發(fā)展進程的研究[41-42],因此,后續(xù)越來越多的實驗采取了以右側(cè)腎切除伴左側(cè)腎蒂夾閉的方式,顯微鏡下游離腎蒂和血管,待充分游離后,使用微型動脈夾夾閉腎蒂及血管25 min,并且,單側(cè)鉗夾腎動脈伴對側(cè)腎切除的方式還可以應(yīng)對高強度的腎缺血,血清肌酐和血尿素氮的值在腎IRI發(fā)生6 h后顯著升高,并在24 h內(nèi)達(dá)到峰值(術(shù)后24 h肌酐水平維持在100～150 μmol/L左右)。

腎IRI后判斷腎功能損傷的程度可以通過血清肌酐、血尿素氮以及尿蛋白水平的變化體現(xiàn),但用于定位腎臟具體損傷的部位和程度,則需要行HE染色、PAS染色以及TUNEL測定法進行進一步判斷。缺血性AKI最典型的組織病理變化是近端腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生壞死凋亡(需要用TUNEL測定法進行判斷),艾娜等[43]關(guān)于腎IRI對足細(xì)胞損傷的研究中表明腎IRI發(fā)生后會導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞壞死并沉積于腎小管的管腔,經(jīng)PAS染色后觀察發(fā)現(xiàn)腎小管發(fā)生嚴(yán)重的擴張壞死并伴有刷狀緣的消失,同時足突紊亂融合,足細(xì)胞消失,基底膜增厚,這些變化的原因可能與ROS的變化密切相關(guān)。另外,有研究表明腎小管的近端小管分為S1-S3段,在缺血性AKI中,腎小管損傷最嚴(yán)重的是S3段。刁愛芹等[44-45]在TIR/BB環(huán)擬似物AS-1對小鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用研究中明確證實:在腎IRI后,將小鼠處死,將腎臟進行脫水包埋后切片,每只小鼠腎臟切片隨機選取20個視野在200倍光鏡下進行觀察,根據(jù)腎小管壞死程度,常用HE染色法對腎小管的損傷進行分級評分(0分:正常腎臟,無損傷;1分:≤10%,2分:11%～25%區(qū)間的腎小管損傷;3分:26%～45%區(qū)間的腎小管損傷;4分:46%～75%區(qū)間的腎小管損傷;5分:≥76%區(qū)間的腎小管損傷),其評分越高說明腎小管壞死越嚴(yán)重(最高5分)。

3.4 術(shù)中無創(chuàng)傷微型動脈夾的選擇 國內(nèi)外相關(guān)實驗研究均未提及實驗中夾閉腎蒂所用動脈夾的具體要求和品牌,大部分腎IRI實驗中所采用的是神經(jīng)外科用于臨時阻斷動脈瘤的無創(chuàng)傷微型動脈夾,夾力大小為73 n,但是,由于這種用于夾閉小鼠腎蒂的微型動脈瘤夾非常容易損壞,所以,應(yīng)使用專門設(shè)計的鑷子輔助實驗操作,以免造成任何不必要的損害。實驗結(jié)束取下動脈夾后觀察發(fā)現(xiàn)血管并未出現(xiàn)明顯損傷,證實了夾閉小鼠腎蒂時使用這種無創(chuàng)性微型動脈夾對小鼠血管有較好的保護作用,避免了血管破裂的發(fā)生[46]。有些實驗團隊在之前實驗?zāi)Ｐ徒⒅惺褂昧四X動脈瘤無創(chuàng)微型動脈夾行腎蒂夾閉,但術(shù)后發(fā)現(xiàn)血清肌酐水平?jīng)]有出現(xiàn)顯著的變化,主要考慮是實驗中動脈夾夾閉腎蒂不徹底導(dǎo)致小鼠部分血管仍殘留血液循環(huán)的原因。判斷動脈夾是否徹底夾閉了腎蒂及血管,主要通過夾閉腎蒂后觀察腎臟外觀有無出現(xiàn)顏色深淺不均來判斷。此外,對于動脈夾的選擇,有國外文獻[47]報道還可以使用微型塞拉芬夾(The micro serrafine clips)對腎蒂進行夾閉,經(jīng)檢測,使用此動脈夾術(shù)后血清肌酐水平也可以達(dá)到缺血再灌注損傷的預(yù)期范圍。這些研究表明,雖然夾閉腎蒂的動脈夾沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),但是,徹底夾閉腎蒂是建模成功以及血肌酐、尿素氮等指標(biāo)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵。

3.5 術(shù)中夾閉腎蒂結(jié)束后腸管的復(fù)原 有些實驗中小鼠在術(shù)前4～6 h內(nèi)未做禁食處理,在術(shù)中發(fā)現(xiàn)部分腸管中有腸內(nèi)容物殘留,此時,可以先用無菌棉簽輕推腸管,徹底游離出一側(cè)腎臟進行腎蒂徹底游離后夾閉,同樣的方法處理對側(cè)腎臟。待雙側(cè)腎臟均處理完畢后,需按腸管的原位置進行復(fù)位,并且復(fù)位時注意腸管有無損傷。

4 小鼠術(shù)后護理

4.1 術(shù)后腹腔噴灑0.9%生理鹽水用量 由于實驗中小鼠長時間暴露腹腔,致使腸管較大面積長時間暴露于空氣中,小鼠腸管水分丟失較嚴(yán)重,所以術(shù)后小鼠應(yīng)行腹腔注射0.9%生理鹽水進行補充。Iwaki等[48]的實驗中有部分小鼠術(shù)后腹腔未注射生理鹽水,導(dǎo)致小鼠術(shù)后蘇醒時間較長、活動度較差。他們通過實驗研究表明術(shù)后關(guān)閉腹腔時應(yīng)使用1 mL左右0.9%生理鹽水腹腔注射。但后續(xù)研究者在實驗中發(fā)現(xiàn)腹腔注射1 mL生理鹽水對于小鼠而言,劑量偏大,縫合時有液體外溢現(xiàn)象,導(dǎo)致小鼠皮膚毛發(fā)潮濕,易造成術(shù)后小鼠體溫失衡,進而增加術(shù)后小鼠死亡丟失的概率,而注射0.5 mL的生理鹽水對于小鼠腹腔體積較合適,縫合時無明顯液體外溢[49]。所以,建議在小鼠腹部切口閉合后,均立即腹腔注射0.5 mL溫?zé)釤o菌生理鹽水,然后將小鼠放在加熱墊上,直到其完全恢復(fù)意識,然后再放回鼠籠中。以上數(shù)據(jù)表明,術(shù)后經(jīng)腹腔注射生理鹽水的小鼠術(shù)后蘇醒時間無明顯延長以及小鼠活動度均較好。

4.2 術(shù)后復(fù)溫 實驗結(jié)束后,小鼠于26 ℃的環(huán)境保暖,且進行復(fù)溫40 min處理,復(fù)溫有助于加速血液凝固、組織器官功能的恢復(fù)以及傷口更好的愈合,復(fù)溫的同時需為小鼠補充水與飼料[50]。實驗中有部分小鼠,術(shù)后未行復(fù)溫處理,直接放置于常溫鼠盒中,導(dǎo)致這些未行復(fù)溫處理小鼠的蘇醒時間及傷口愈合時間均長于術(shù)后行復(fù)溫處理的小鼠。

5 其他細(xì)節(jié)

目前,腎IRI模型的建立,研究者們均比較傾向于選擇腹部正中切口[51-52],也有文獻記載可以采用背部切口和雙側(cè)切口[53],但大多數(shù)實驗者考慮到手術(shù)時間等問題還是選擇采用腹部正中切口。Lu等[54-55]通過實驗表明,在夾閉腎蒂過程中,將夾閉右腎蒂和左腎蒂之間的時間間隔控制在1～1.5 min內(nèi)。盡管從哪一側(cè)開始夾閉并不重要,但他們建議首先夾閉右側(cè),因為右椎弓根相對較短且較難夾緊,先將右腎蒂夾緊后,很容易在1～1.5 min內(nèi)完成左椎弓根的夾閉。但是,在雙側(cè)腎蒂被完全夾閉后,要分別記錄每側(cè)腎臟的缺血時間,以確保兩個腎臟都接受相同的持續(xù)缺血時間。夾閉完成后,使用濕無菌紗布覆蓋手術(shù)切口,這對于暴露的腹腔較少的丟失水分有較大幫助。他們還指出,關(guān)閉腹腔時使用5-0組織縫合線進行腹膜連續(xù)縫合和腹壁間斷縫合,因小鼠術(shù)后可能會主動撕咬縫合線,所以腹壁有行間斷縫合的必要性。不建議使用夾子閉合傷口而不縫合肌肉層,因為可能會導(dǎo)致傷口愈合不完全或發(fā)生感染。另外,小鼠復(fù)溫后給予喂食適量的生理鹽水,對于小鼠可以較快的恢復(fù)活動能力提供一定的幫助。

6 小結(jié)與展望

本文綜述了腎IRI小鼠模型建造過程中術(shù)前、術(shù)中及術(shù)后的操作及注意事項,并結(jié)合以往國內(nèi)外實驗中小鼠腎IRI建模的研究對目前建模條件進行綜述,總結(jié)出目前雙側(cè)腎IRI模型的建立是國內(nèi)外研究腎IRI應(yīng)用最多的建模方式,查閱相關(guān)文獻并歸納后認(rèn)為,目前最優(yōu)的雙側(cè)腎IRI模型建立的條件是:選擇8周齡左右雄性WTC57小鼠,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后(溫度:22～26 ℃,濕度40%～60%,晝夜各12 h),于術(shù)前禁食4～6 h后,用5%戊巴比妥鈉行腹腔注射麻醉,充分麻醉后將小鼠置于37 ℃恒溫臺上,行腹部正中切口逐層切開腹腔,小心并徹底游離雙側(cè)腎蒂周圍組織,用無損傷微型動脈夾夾閉雙側(cè)腎蒂30 min后恢復(fù)血流灌注并還原腸管至原本的解剖位置,為防止脫水腹腔內(nèi)注入1 mL溫?zé)嵘睇}水,并逐層縫合腹腔,術(shù)后將小鼠放置于26 ℃且食物充足環(huán)境內(nèi)等待蘇醒。另外有研究發(fā)現(xiàn)小鼠對實驗環(huán)境異常敏感,即使同條件下不同批次實驗,術(shù)后結(jié)果有時也會出現(xiàn)大范圍波動。目前隨著臨床AKI病患率不斷升高,模擬并建立穩(wěn)定的腎IRI模型以期對腎IRI病理生理機制的進一步研究至關(guān)重要。因此,之后研究者們對小鼠腎IRI模型建立的進一步優(yōu)化將有助于更加精細(xì)的模擬AKI的發(fā)生發(fā)展機制,也為后續(xù)建立更加可靠、穩(wěn)定的小鼠腎IRI模型及研究提供可靠的理論依據(jù)。