【摘 要】目的：探討長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，LncRNA）肌球蛋白輕鏈激酶反義RNA1（myosin light chain kinaseantisense RNA1，MYLK-AS1）調(diào)節(jié)miR-141-3p/微管不穩(wěn)定蛋白1（stathmin 1，STMN1）軸對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲的影響。方法：將HGC27 細(xì)胞分為NC 組、si-NC 組、si-MYLK-AS1 組、si-MYLK-AS1+inhibitor NC 組、si-MYLK-AS1+miR-141-3pinhibitor組。雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p、STMN1的關(guān)系；qRT-PCR檢測(cè)HGC27細(xì)胞中LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p表達(dá)；CCK-8法檢測(cè)HGC27細(xì)胞增殖情況；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HGC27細(xì)胞凋亡；使用Tran?swell實(shí)驗(yàn)評(píng)估了HGC27細(xì)胞的侵襲和遷移能力，并統(tǒng)計(jì)了穿透基質(zhì)膜的細(xì)胞數(shù)量；同時(shí)采用Western blot技術(shù)檢測(cè)了HGC27細(xì)胞中STMN1、E-cadherin、Vimentin 及N-cadherin 這幾種蛋白表達(dá)量的變化。結(jié)果：HGC27 細(xì)胞中LncRNA MYLK-AS1、STMN1水平高于GES-1細(xì)胞（Plt;0.05），miR-141-3p水平低于GES-1細(xì)胞（Plt;0.05）。si-MYLK-AS1組HGC27細(xì)胞A450 nm值、遷移、侵襲細(xì)胞數(shù)量、LncRNA MYLK-AS1 表達(dá)量、STMN1、N-cadherin、Vimentin 蛋白水平低于NC 組、si-NC 組（Plt;0.05），HGC27細(xì)胞凋亡率、miR-141-3p表達(dá)量、E-cadherin蛋白水平高于NC組、si-NC組（Plt;0.05）；而miR-141-3p低表達(dá)減弱了沉默LncRNA MYLK-AS1抑制HGC27細(xì)胞發(fā)展的作用；LncRNA MYLK-AS1靶向調(diào)節(jié)miR-141-3p/STMN1軸。結(jié)論：LncRNAMYLK-AS1可能通過上調(diào)microRNA-141-3p的表達(dá)水平，間接導(dǎo)致STMN1基因表達(dá)受到抑制，這一過程可能對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡及侵襲特性產(chǎn)生明顯影響。

【關(guān)鍵詞】長(zhǎng)鏈非編碼RNA肌球蛋白輕鏈激酶反義RNA1；微小RNA-141-3p/微管不穩(wěn)定蛋白1軸；胃癌；增殖；凋亡；侵襲

【中圖分類號(hào)】R735.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【收稿日期】2023-06-27

胃癌是一種起源于胃黏膜上皮的消化道惡性腫瘤。截至2020年，新增病例超過100萬例，死亡病例為76.9萬例。在癌癥中，胃癌發(fā)病率排名第5，死亡率排名第4[1]。胃癌早期沒有明顯癥狀，由于缺乏有效的早期診斷分子，大多數(shù)患者在診斷時(shí)已處于晚期[2]。盡管化療可延長(zhǎng)患者生存時(shí)間，但預(yù)后仍不容樂觀。因此，迫切需要尋找有效的靶向分子，以改善患者預(yù)后。已有研究證實(shí)長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non coding RNA，lncRNA）可用作診斷和治療胃癌的生物標(biāo)志物[3]。有研究通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，沉默LncRNA 肌球蛋白輕鏈激酶反義RNA1（myosinlightchainkinaseantisenseRNA1，MYLK-AS1）可以抑制胃癌小鼠腫瘤生長(zhǎng)，抑制胃癌細(xì)胞遷移和侵襲[4]。Target Scan網(wǎng)站及雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn)，LncRNA MYLK-AS1 可以靶向調(diào)節(jié)miR-141-3p/STMN1 軸。上調(diào)miR-1-141p 水平可以抑制胃癌細(xì)胞活力、遷移和侵襲[5]，而STMN1與胃癌患者化學(xué)抵抗和預(yù)后不良有關(guān)[6]。本研究對(duì)LncRNAMYLK-AS1是否可以通過調(diào)節(jié)miR-141-3p/微管不穩(wěn)定蛋白1（stathmin1，STMN1）軸對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲產(chǎn)生影響，進(jìn)行研究報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 主要材料

HGC27人胃癌細(xì)胞株是從賽百慷生物技術(shù)（上海）有限公司獲得的，GES-1人胃黏膜上皮細(xì)胞是由上海致備生物科技有限公司提供的。此外，實(shí)驗(yàn)中使用的si-NC、si-MYLKAS1、inhibitor NC和miR-141-3p inhibitor等產(chǎn)品均購于上海生工生物科技有限公司。用于檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的CCK-8試劑盒，由無錫菩禾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司生產(chǎn)。實(shí)行雙熒光素酶報(bào)告基因分析和細(xì)胞凋亡檢測(cè)的試劑盒，包括膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素/碘化丙錠（annexin V-FITC/PI）雙染試劑盒，是北京百奧萊博科技有限公司所供應(yīng)的。針對(duì)STMN1、E鈣黏蛋白（E-cadherin）、N 鈣黏蛋白（N-cadherin）及波形蛋白（vimentin）的專用抗體，是由Abcam公司銷售的。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組[7-8] 所有細(xì)胞種類在添加了1%的青霉素/鏈霉素和10%胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）的杜爾伯科改良伊格爾培養(yǎng)基（Dulbecco’s modified eagle medium，DMEM）里進(jìn)行了培養(yǎng)。這些細(xì)胞在37 ℃、含有5% CO2的飽和濕度條件下的穩(wěn)定溫度培養(yǎng)箱中進(jìn)行了培養(yǎng)。在6孔培養(yǎng)板上，每孔種植3×104個(gè)HGC27細(xì)胞。接下來，根據(jù)轉(zhuǎn)染試劑盒的指導(dǎo)說明，分別將si-NC、si-MYLK-AS1、si-MYLK-AS1與inhibitor NC組合，以及si-MYLK-AS1與miR-141-3p inhibitor組合轉(zhuǎn)染入HGC27細(xì)胞。這些處理分別標(biāo)識(shí)為si-NC組、si-MYLK-AS1組、si-MYLK-AS1+inhibitor NC組和si-MYLK-AS1+miR-141-3p inhibitor組。同時(shí)，設(shè)置一組未接受任何處理的HGC27細(xì)胞作為對(duì)照組，此組被稱為NC組。轉(zhuǎn)染完成后，所有細(xì)胞繼續(xù)在培養(yǎng)條件下培養(yǎng)48 h。

1.2.2 LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p、STMN1 關(guān)系 為了探究MYLK-AS1和STMN1基因與miR-141-3p的相互作用，首先構(gòu)建MYLK-AS1 的野生型載體（MYLK-AS1-WT）及其突變型載體（MYLK-AS1-MUT），并將這2個(gè)質(zhì)粒分別與mimic NC 或miR-141-3p mimic 共同轉(zhuǎn)染至HGC27 細(xì)胞中，由此形成了4 個(gè)實(shí)驗(yàn)組：miR-NC+MYLK-AS1-WT 組、miR-141-3p mimic+MYLK-AS1-WT組、miR-NC+MYLK-AS1-MUT組及miR-141-3p mimic+MYLK-AS1-MUT組。同時(shí)，構(gòu)建STMN1基因的野生型質(zhì)粒（STMN1-WT）和突變型質(zhì)粒（STMN1-MUT），同樣將這2 類質(zhì)粒各自與mimic NC或miR-141-3p mimic共轉(zhuǎn)染至HGC27細(xì)胞內(nèi)，從而設(shè)立了以下4 個(gè)對(duì)照組：miR-NC+STMN1-WT 組、miR-141-3p mimic+STMN1-WT 組、miR-NC+STMN1-MUT 組及miR-141-3p mimic+STMN1-MUT組。轉(zhuǎn)染48 h后，對(duì)HGC27細(xì)胞中的熒光素酶活性變化進(jìn)行評(píng)價(jià)分析[7-8]。

1.2.3 qRT-PCR 檢測(cè)LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p 表達(dá) 采用Trizol試劑，依據(jù)產(chǎn)品說明書進(jìn)行操作，從HGC27和GES-1 細(xì)胞樣本中提取總RNA。挑選純度和濃度接近2.0的樣本，進(jìn)而使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將其轉(zhuǎn)化為cDNA，以分析LncRNA MYLK-AS1 和miR-141-3p 的表達(dá)。配置包含cDNA、引物、MIX的混合溶液20 μL，置于qRT-PCR儀擴(kuò)增。qRT-PCR的條件如下：95 ℃持續(xù)10 min，40個(gè)循環(huán)（95 ℃持續(xù)15 s，60 ℃持續(xù)1 min）。采用GAPDH 和U6 作為參考基因，通過2?ΔΔCt 技術(shù)評(píng)估LncRNA MYLK-AS1與miR-141-3p的相對(duì)表達(dá)水平。引物如下。miR-141-3p，F(xiàn)：5’-GCGCGTAACACTGTCTGG-3’，R：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’；LncRNA MYLK-AS1，F(xiàn)：5’-TCTCCTTGTGCAAACCTCC-3’，R：5’-CCCACATTGAGCGAATGCC-3’；U6，F(xiàn)：5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’，R：5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’；GAPDH，F(xiàn)：5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’，R：5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’。

1.2.4 Western blot 檢測(cè)STMN1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 蛋白表達(dá)[7-8] 使用RIPA 裂解緩沖液對(duì)轉(zhuǎn)染HGC27 細(xì)胞進(jìn)行裂解后，樣本在4 ℃下進(jìn)行12 000 g 離心15 min。隨后，BCA 蛋白質(zhì)定量試劑盒用于測(cè)定總蛋白濃度。等量的蛋白樣品通過10% SDS-PAGE進(jìn)行分離，并轉(zhuǎn)印至PVDF膜上，維持2 h。PVDF膜隨后用5%脫脂牛奶封閉1 h，室溫條件下。之后，膜在4 ℃條件下與以下初級(jí)抗體孵育過夜：E-cadherin（稀釋比1∶2 000）、vimentin（稀釋比1∶2 000）、N-cadherin（稀釋比1∶1 000）、STMN1（稀釋比1∶1 000）和GAPDH（稀釋比1∶1 000）。次日，繼續(xù)在室溫下使膜與辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔二抗孵育2 h。最后，添加ECL 試劑以實(shí)現(xiàn)目標(biāo)條帶的化學(xué)發(fā)光顯色，應(yīng)用Image J軟件對(duì)目的條帶的灰度值進(jìn)行量化分析。

1.2.5 CCK-8法檢測(cè)HGC27細(xì)胞增殖情況 在96孔板上，每孔接種4×103 個(gè)轉(zhuǎn)染HGC27 細(xì)胞，并在培養(yǎng)48 h 后，在37 ℃下向每孔添加10 μL CCK-8試劑，孵化4 h。隨后，使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）儀器，測(cè)定450 nm波長(zhǎng)下的吸光度（absorbance，A）值。

1.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HGC27細(xì)胞凋亡 HGC27細(xì)胞在6孔板中以每孔4×105細(xì)胞的密度種植并培養(yǎng)。24 h培養(yǎng)后，收集浮游細(xì)胞，并將這些細(xì)胞暴露于含有各5 μL AnnexinV-FITC和PI的混合溶液中，避光孵育15 min。接著，利用流式細(xì)胞分析儀準(zhǔn)確評(píng)估HGC27細(xì)胞的凋亡比例[7-8]。

1.2.7 Transwell試驗(yàn)測(cè)定HGC27細(xì)胞遷移和侵襲[7-8] 檢測(cè)遷移和侵襲性能時(shí)，使用了Matrigel基質(zhì)涂層的Transwell室（用于侵襲性評(píng)估）和未經(jīng)Matrigel基質(zhì)覆蓋的Transwell室（用于遷移性評(píng)估）。對(duì)已轉(zhuǎn)染的HGC27細(xì)胞進(jìn)行收集，并將其重新溶解于不含血清的DMEM培養(yǎng)基中。將5×104個(gè)/mLHGC27細(xì)胞接種在上室，將含有20%FBS的DMEM培養(yǎng)基作為化學(xué)引誘劑添加到Transwell下室。將細(xì)胞培養(yǎng)24 h后，用棉簽去除聚碳酸酯膜上表面的細(xì)胞，在Transwell室內(nèi)，遷移和侵襲的細(xì)胞用4%的多聚甲醛進(jìn)行固定后，再用0.05%的結(jié)晶紫溶液進(jìn)行染色。接下來，在顯微鏡下捕獲圖像，并從中隨機(jī)選擇5個(gè)有代表性的區(qū)域，以便對(duì)這些區(qū)域內(nèi)的侵襲或遷移細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

利用SPSS 25.0對(duì)全部數(shù)據(jù)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。在經(jīng)過正態(tài)性及方差齊性驗(yàn)證之后，符合要求的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。2組之間的比較，采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)方法；多組數(shù)據(jù)的比較時(shí)，首選單因素方差分析。為進(jìn)一步明確各組之間的差異，使用SNK-q 檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 LncRNA MYLK-AS1靶向調(diào)控miR-141-3p/STMN1軸

使用TargetScan 預(yù)測(cè)工具分析顯示，LncRNA MYLKAS1與miR-141-3p，以及miR-141-3p與STMN1之間存在潛在的相互作用結(jié)合位點(diǎn)。在HGC27 細(xì)胞中，miR-141-3pmimic+MYLK-AS1-WT組顯示出的熒光素酶活性明顯低于miR-NC+MYLK-AS1-WT組的活性（[ 0.37±0.03） vs.（ 1.06±0.14）]，有明顯差異（q=14.852，Plt;0.001）。另一方面，miR-141-3p mimic+MYLK-AS1-MUT 組共轉(zhuǎn)染至HGC27 細(xì)胞時(shí)，所測(cè)定的熒光素酶活性為（1.04±0.12），與miR-NC+MYLK-AS1-MUT 組的活性（1.07±0.13）相比并無差異（q=0.656，P=0.968）。

相似地，相較于miR-NC+STMN1-WT組的熒光素酶活性（1.06±0.13），miR-141-3p mimic+STMN1-WT 組HGC27細(xì)胞的熒光素酶活性降低至（0.44±0.05）（q=12.463，Plt;0.001）。然而，miR-141-3p mimic+STMN1-MUT組的熒光素酶活性（1.08±0.16）相較于miR-NC+STMN1-MUT組（1.05±0.12）并無差異（q=0.603，P=0.973），見圖1。

2.2 LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p、STMN1在細(xì)胞中的表達(dá)

相較于GES-1細(xì)胞，HGC27細(xì)胞內(nèi)LncRNA MYLK-AS1和STMN1 的表達(dá)水平均有所上調(diào)（t=6.736、9.321，均P=0.000），而miR-141-3p的表達(dá)在HGC27細(xì)胞中則表現(xiàn)為下調(diào)（t=15.513，P=0.000），見圖2、3。

2.3 LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p、STMN1蛋白在HGC27細(xì)胞中的表達(dá)

相較于NC 組和si-NC 組，si-MYLK-AS1 組中LncRNAMYLK-AS1及STMN1的表達(dá)水平均下調(diào)（q=34.721、18.924，36.168、19.840，均Plt;0.05），miR-141-3p 的表達(dá)量卻上調(diào)（q=14.374、14.209，均Plt;0.05）；與MYLK-AS1+miR-141-3pinhibitor組相比較，si-MYLK-AS1組、si-MYLK-AS1+inhibi?tor NC 組STMN1 水平下降（q=21.366、21.061，均Plt;0.05），miR-141-3p 表達(dá)量上升（q=13.878、14.374，均Plt;0.05），見圖4、5。

2.4 沉默LncRNA MYLK-AS1或下調(diào)miR-141-3p對(duì)HGC27細(xì)胞增殖的影響

與NC 組和si-NC 組相比，si-MYLK-AS1 組在HGC27細(xì)胞的A450 nm 值觀測(cè)到減少（q=18.152、17.859，均Plt;0.05）。進(jìn)一步，與si-MYLK-AS1+miR-141-3p inhibitor 組進(jìn)行比較時(shí)，si-MYLK-AS1 組和si-MYLK-AS1+inhibitor NC 組的A450 nm 值同樣表現(xiàn)出下降（q=15.517、16.102，均Plt;0.05），見圖6。

2.5 沉默LncRNA MYLK-AS1或下調(diào)miR-141-3p對(duì)HGC27細(xì)胞凋亡的影響

相較于si-MYLK-AS1 處理的組別，未處理的NC 組及si-NC 處理的HGC27 細(xì)胞組展現(xiàn)了更低的細(xì)胞凋亡率（q=42.675、42.836，均Plt;0.05）；與si-MYLK-AS1+miR-141-3pinhibitor組相比較，si-MYLK-AS1組、si-MYLK-AS1+inhibi?tor NC 組HGC27 細(xì)胞凋亡率上升（q=33.004、33.907，均Plt;0.05），見圖7、8。

2.6 沉默LncRNA MYLK-AS1或下調(diào)miR-141-3p對(duì)HGC27細(xì)胞侵襲、遷移及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）相關(guān)蛋白的影響

在NC組和si-NC組中，相比于si-MYLK-AS1組，HGC27細(xì)胞的遷移和侵襲能力及N-cadherin和Vimentin蛋白的水平有所增加（q=14.726、10.898、25.852、17.000 和14.033、11.587、24.961、17.667，均Plt;0.05），而E-cadherin 蛋白水平則表現(xiàn)為下降（q=23.668、24.083，均Plt;0.05）。另一方面，與si-MYLK-AS1+miR-141-3p inhibitor組相比，si-MYLK-AS1組和si-MYLK-AS1+inhibitor NC組在HGC27細(xì)胞遷移和侵襲能力及N-cadherin 和Vimentin 蛋白水平上明顯下降（q=6.207、4.061、14.263、14.667和7.656、3.546、15.601、16.000，Plt;0.05），而E-cadherin 蛋白水平則呈現(xiàn)上升趨勢(shì)（q=17.024、17.440，均Plt;0.05），見圖9～13。

3 討論

近幾年，胃癌發(fā)病率及死亡率在持續(xù)增長(zhǎng)，研究報(bào)道稱，胃癌患者死亡率高的主要原因是發(fā)生轉(zhuǎn)移[9]。有大量研究報(bào)道稱，lncRNA可以調(diào)控胃癌進(jìn)展。例如，LINC01116可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖，抑制胃癌細(xì)胞凋亡[10]。LncRNA MYLK-AS1是各種人類癌癥中的癌基因，LncRNA MYLK-AS1沉默對(duì)腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞體內(nèi)致瘤能力起抑制作用[11]。LncRNAMYLK-AS1上調(diào)可以促進(jìn)肝癌腫瘤進(jìn)展和血管生成[12]。近期，還有研究發(fā)現(xiàn)，LncRNA MYLK-AS1沉默抑制胃癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、遷移和侵襲[4]。由此可見，LncRNA MYLK-AS1可能是胃癌分子診斷的潛在標(biāo)志物。本項(xiàng)研究揭示了在HGC27細(xì)胞中，LncRNA MYLK-AS1的表達(dá)水平較高，暗示LncRNAMYLK-AS1有可能在胃癌的發(fā)展過程中起促進(jìn)作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)LncRNA MYLK-AS1被沉默之后，HGC27細(xì)胞的A450 nm 值降低，凋亡率提高，這表明通過抑制LncRNA MYLK-AS1的表達(dá)，可以抑制胃癌細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡，從而可能對(duì)胃癌的發(fā)展產(chǎn)生抑制作用。

在胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲過程中，EMT 被激活。在EMT中，上皮細(xì)胞失去其特有的上皮特性，例如E-cadherin的下調(diào)，而獲得間質(zhì)細(xì)胞的特征，表現(xiàn)為N-cadherin和Vimentin的上調(diào)，并激活一系列下游轉(zhuǎn)錄因子，如Snail、Slug、Twist等[13]。通過EMT過程，胃癌細(xì)胞獲得了向周圍基質(zhì)遷移和侵入的能力，之后可以通過血液和淋巴管擴(kuò)散到相鄰組織[14]。

鑒于抑制EMT對(duì)防止胃癌進(jìn)展至關(guān)重要，本研究所揭示的結(jié)果表明，在沉默LncRNA MYLK-AS1后，HGC27胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲潛能明顯減弱，表現(xiàn)為遷移和侵襲細(xì)胞的數(shù)量減少，同時(shí)Ncadherin和Vimentin這2種間質(zhì)標(biāo)志蛋白的表達(dá)下調(diào)。另一方面，E-cadherin這一上皮標(biāo)志蛋白的表達(dá)水平則得到了提升。據(jù)此可以推斷，沉默LncRNAMYLK-AS1能夠有效阻止胃上皮細(xì)胞向間質(zhì)表型轉(zhuǎn)變，從而有效限制胃癌細(xì)胞向周圍組織的擴(kuò)散和侵入，最終有助于抑制胃癌病情的惡化和發(fā)展。

生物信息學(xué)分析揭示了LncRNA MYLK-AS1與miR-141-3p 之間存在結(jié)合位點(diǎn)。此外，miR-141-3p在肺癌中的低表達(dá)已被證實(shí)具有臨床意義。例如，Chen DL 等[15]的研究表明，降低miR-141-3p的表達(dá)可以促進(jìn)胃癌的進(jìn)展和化療耐藥性，指出了miR-141-3p 在腫瘤發(fā)展中的潛在作用。Zhou YC等[16]發(fā)現(xiàn)，miR-141-3p不僅可限制胃癌細(xì)胞遷移和侵襲，還抑制正常成纖維細(xì)胞向癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)變。以上研究均表明上調(diào)miR-141-3p可以對(duì)胃癌的發(fā)展起到抑制作用。本研究所揭示的數(shù)據(jù)指出，miR-141-3p在HGC27細(xì)胞系中呈現(xiàn)低表達(dá)狀態(tài)。在對(duì)miR-141-3p的功能抑制后，發(fā)現(xiàn)其削弱了LncRNA MYLK-AS1對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的抑制效應(yīng)。這一現(xiàn)象暗示，LncRNAMYLK-AS1 可能借助上調(diào)miR-141-3p 的表達(dá)途徑，來有效地阻抑胃癌的惡性進(jìn)展。另外，通過生物信息學(xué)手段已確認(rèn)miR-141-3p與STMN1基因存在相互作用的結(jié)合位點(diǎn)，這為進(jìn)一步理解兩者間的調(diào)控關(guān)系提供了依據(jù)。有研究報(bào)道稱，STMN1的異常表達(dá)可能通過影響EMT促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[17]。STMN1基因沉默可以抑制胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲[18]。

研究揭示了STMN1在胃癌細(xì)胞中表達(dá)水平偏高，而在對(duì)HGC27細(xì)胞進(jìn)行LncRNA MYLK-AS1沉默處理后，miR-141-3p表達(dá)量增加，同時(shí)STMN1蛋白水平下降。反之，如果miR-141-3p表達(dá)下調(diào)，則STMN1蛋白水平上升，上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果揭示了這樣一個(gè)機(jī)制可能性：即LncRNA MYLK-AS1可能通過介導(dǎo)miR-141-3p的上調(diào)作用，間接導(dǎo)致STMN1表達(dá)下調(diào)，這一系列連鎖反應(yīng)可能對(duì)HGC27細(xì)胞的增殖潛能、EMT進(jìn)程及遷移和侵襲能力產(chǎn)生抑制效應(yīng)，并且有利于促進(jìn)此類細(xì)胞發(fā)生凋亡。此外，雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)了LncRNA MYLK-AS1直接靶向調(diào)控miR-141-3p與STMN1之間的相互作用。

綜上所述，通過沉默LncRNA MYLK-AS1，可能會(huì)導(dǎo)致miR-141-3p 的表達(dá)水平提升，進(jìn)而抑制STMN1蛋白的表達(dá)。這一連串的分子事件有助于有效抑制HGC27胃癌細(xì)胞的增殖、阻斷EMT進(jìn)程，以及減少細(xì)胞的遷移和侵襲能力，同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞凋亡。鑒于這些發(fā)現(xiàn)，本課題組計(jì)劃在未來的研究中使用小鼠模型進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，以進(jìn)一步驗(yàn)證這些結(jié)果和探索LncRNA MYLK-AS1 在胃癌發(fā)展中的作用機(jī)制。

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（責(zé)任編輯：曾 玲）