摘""要：為了深入探索海南地方特色茶的抗氧化活性及總多酚、總黃酮含量的差異，本研究對7種海南特色茶（辣木茶、苦丁茶、五指山綠茶、白沙綠茶、五指山紅茶、蘭貴人和鷓鴣茶）提取液的抗氧化活性及總多酚、總黃酮含量進行測定。結果表明：不同品種茶葉的抗氧化活性存在差異，茶葉提取液的抗氧化活性與樣品濃度均表現(xiàn)出量效關系，同時熱穩(wěn)定性較好。7種茶的總多酚和總黃酮含量分別在9.80%～22.84%和0.90%～4.67%之間，五指山綠茶的總多酚含量最高，是辣木茶的2.33倍；苦丁茶、五指山紅茶、蘭貴人、鷓鴣茶的總多酚含量差異不顯著。五指山綠茶的總黃酮含量最高，是辣木茶的5.18倍；五指山紅茶、蘭貴人、鷓鴣茶總黃酮含量差異不顯著，五指山綠茶的總多酚和總黃酮含量均為7種茶葉中最高。7種茶葉提取液均具有抗氧化還原能力，并且茶葉中的茶多酚含量、總黃酮含量與自由基清除能力呈現(xiàn)良好的量效關系，辣木茶的清除ABTS能力最強，五指山紅茶的清除超氧自由基能力最強，白沙綠茶整體的抗氧化效果最好，其還原能力、DPPH清除能力、羥自由基清除能力最強。7種茶葉提取液在不同溫度條件和沸水孵育，其抗氧化性并未發(fā)生顯著變化，說明7種茶葉提取液的熱穩(wěn)定性較佳。研究表明供試7種茶不僅富含總多酚和總黃酮，而且具有較強的抗氧化活性，為海南特色茶的進一步開發(fā)利用提供理論基礎。

關鍵詞：海南特色茶；總多酚；總黃酮；抗氧化中圖分類號：TS272.5""""""文獻標志碼：A

Determination"of"Antioxidant"Activity，"Total"Polyphenol"and"Total"Flavonoid"Content"of"Seven"Hainan"Specialty"Tea

CHEN"Yuanjie1，"XU"Jing2，"LIU"Changtao1，"HUANG"Jinghua1，"CEN"Juren1*

1."School"of"Life"Sciences，"Hainan"University，"Haikou，"Hainan"570228，"China;"2."School"of"Chemical"Engineering"and"Technology，"Hainan"University"/"Hainan"Provincial"Chemical"Engineering"Research"Center，"Haikou，"Hainan"570228，"China

Abstract："The"antioxidant"activity，"total"polyphenol"and"total"flavonoid"content"differences"of"local"Hainan"specialty"teas"（Moringa"Tea，"Kuding"Tea，"Wuzhishan"Green"Tea，"Baisha"Green"Tea，"Wuzhishan"Black"Tea，"Languiren"and"Partridge"Tea）"were"evaluated."Results"revealed"significant"variations"in"antioxidant"activity"among"the"teas."The"antioxidant"activity"of"the"tea"extract"exhibited"a"dose-dependent"relationship"with"sample"concentration"and"demonstrated"excellent"thermal"stability."The"total"polyphenol"and"total"flavonoid"content"of"the"teas"was"ranged"from"9.80%"to"22.84%"and"0.90%"to"4.67%，"respectively，"and"the"total"polyphenol"content"of"Wuzhishan"Green"Tea"was"the"highest，"which"was"2.33"times"that"of"Moringa"Tea."The"difference"in"total"polyphenol"content"of"Kuding"Tea，"Wuzhishan"Black"Tea，"Languiren，"and"Partridge"Tea"was"not"significant，"while"the"total"flavonoid"content"of"Wuzhishan"Green"Tea"was"the"highest，"and"the"total"flavonoid"content"of"Wuzhishan"Green"Tea"was"5.18"times"that"of"Moringa"Tea."The"difference"in"total"flavonoid"content"of"Wuzhishan"Black"Tea，"Languiren，"and"Partridge"Tea"was"not"significant，"and"the"total"polyphenol"and"total"flavonoid"content"of"Wuzhishan"Green"Tea"were"the"highest"among"the"teas."The"seven"tea"extracts"had"antioxidant"reduction"ability，"and"the"tea"polyphenol"content"and"total"flavonoid"content"showed"a"good"quantitative"relationship"with"the"scavenging"ability"of"free"radicals."Moringa"Tea"had"the"strongest"ability"to"scavenge"ABTS，"Wuzhishan"Black"Tea"had"the"strongest"ability"to"scavenge"superoxide"radicals，"and"Baisha"Green"Tea"had"the"best"antioxidant"effect"overall，"with"the"reduction"ability，"DPPH"scavenging"ability，"hydroxyl"radical"scavenging"ability"were"the"strongest."The"antioxidant"properties"of"the"seven"tea"extracts"did"not"change"significantly"when"incubated"at"different"temperature"conditions"and"boiling"water，"indicating"that"the"seven"tea"extracts"had"better"thermal"stability."This"study"shows"that"Hainan"specialty"teas"are"rich"in"total"polyphenols"and"total"flavonoids"and"exhibit"strong"antioxidant"abilities，"providing"a"theoretical"foundation"for"further"development"and"utilization"of"Hainan"specialty"teas.

Keywords："Hainan"speciality"tea;"total"polyphenols;"total"flavonoids;"antioxidant

DOI："10.3969/j.issn.1000-2561.2024.06.016

茶屬山茶科，是生長于熱帶、亞熱帶地區(qū)的多年生常綠木本植物。海南省盛產茶，是中國最南部的茶葉產區(qū)，也是唯一的熱帶茶區(qū)[1]。茶是世界上使用最廣泛的飲料，在國內，茶是除了水之外消費最多的飲品。茶是豐富的藥物活性分子來源，對人體健康有許多益處[2-3]。茶葉中含有許多具有藥理價值的化合物，其中對人體健康影響較為顯著的化學物質主要是茶多酚[4]。茶多酚的含量對茶葉品質有較大影響，是形成茶葉獨特風味不可缺少的物質[5]，酚類物質也是茶葉中主要的活性物質，是一類存在于植物體內并擁有特殊活性的次生代謝產物，具有抗炎[6]、抗衰老[7]、抗氧化[8]等生理活性，常用作天然的抗氧化劑。黃酮類化合物也具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗動脈硬化、清除自由基[9-10]等功效。

機體生理代謝活動中產生的活性氧（ROS）類對生命體的健康產生重大影響，而消除ROS最有效的方法就是使用抗氧化劑，如二丁基羥基甲苯（BHT）、丁基羥基茴香醚（BHA）、抗壞血酸（VC）等。而這些人工合成的抗氧化劑存在致癌和毒性等安全性問題[11]。植物黃酮和多酚具有很強的清除自由基[8-10]和防止一系列自由基連鎖反應的能力，而茶葉含有豐富的茶多酚，表明茶葉具有成為天然抗氧化劑的巨大潛力。

本研究以7種海南特色茶（辣木茶、苦丁茶、五指山綠茶、五指山紅茶、白沙綠茶、蘭貴人、鷓鴣茶）為試驗材料，測定茶葉提取物中總多酚和總黃酮的含量，以及不同種茶葉提取物的抗氧化活性，并進行抗氧化活性的比較分析，全面評估7種海南特色茶的抗氧化活性與總多酚、總黃酮含量之間的相關性，為研究茶葉的抗氧化機制提供理論依據。

1""材料與方法

1.1""材料

1.1.1""供試材料""于海南當?shù)厥袌鲑徺I辣木茶（海南椰仙生物科技有限公司）、苦丁茶（海南椰仙生物科技有限公司）、五指山綠茶（?？诮鸱鍘r茶葉有限公司）、白沙綠茶（海南農墾白沙茶業(yè)股份有限公司）、五指山紅茶（海南椰仙生物科技有限公司）、蘭貴人（海南椰仙生物科技有限公司）、鷓鴣茶（?？诤＼Q易有限公司）等成品茶葉作為供試材料，以上成品茶均為春季采摘的一芽兩葉茶葉。

1.1.2""試劑""1，1-二苯基-2-2苦基肼（DPPH，Sigma公司）；2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（ABTS，Sigma公司）；沒食子酸（上海源葉生物科技有限公司）；蘆丁標準品（上海源葉生物科技有限公司）；核黃素（上海源葉生物科技有限公司）；無水乙醇、L-甲硫氨酸、福林酚試劑、無水乙醇、VC、亞硝酸鈉、硝酸鋁、NaOH、無水碳酸鈉、過硫酸鉀、水楊酸、硫酸亞鐵、雙氧水、鐵氰化鉀、氯化亞鐵、三氯化鐵、磷酸鈉緩沖液，以上化學試劑均為分析純。蒸餾水為實驗室自制。

1.1.3""儀器nbsp;"FW高速萬能粉碎機（杭州旭眾機械設備有限公司）；JH-41-04型紫外可見分光光度計（上海菁華科技有限公司）；AR2140型電子天平（奧豪斯儀器上海有限公司）；XD-5200DTD型超聲波清洗機（南京先歐儀器制造有限公司）；DM0412S低速離心機（大龍興創(chuàng)實驗儀器股份公司）；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）。

1.2""方法

1.2.1""樣品制備""將供試茶葉經高速多功能粉碎機粉碎成粉末，過60目篩，精密稱定7種茶葉粉末各1"g，置于具塞錐形瓶，加入75%乙醇10"mL，密塞，稱定重量，浸泡過夜，在功率為100"W，頻率為40"kHz條件下超聲處理1"h，冷卻，稱定重量，用75%乙醇補足減少的重量，搖勻，過濾，取濾液，于4000"r/min條件下離心15"min，取上清液作供試液。

1.2.2""清除DPPH·能力測定""參考李瑋等[12]的方法，稍作修改，取7個5"mL離心管，分別加入3.9"mL"60"μmol/L"DPPH溶液和7個不同濃度的茶葉提取液0.1"mL，將混合物充分震蕩后于室溫下避光反應30"min，在517"nm處測吸光值，未加提取液作空白對照，平行測定3次。清除率=[（Ablank?"Asample）/Ablank]×100%，式中，Ablank表示對照管的吸光值，Asample表示加入提取液樣品后的吸光值。

1.2.3""清除ABTS+·能力測定""參考馬慧等[13]的方法，稍作修改，取7個5"ml離心管，分別加入3.9"mL"ABTS溶液和7個不同濃度的茶葉提取液0.1"mL，將混合物充分震蕩后于室溫下避光反應30"min，在734"nm處測吸光值。設置1個對照管，對照管中加入0.1"mL無水乙醇和3.9"mL"ABTS溶液。以VC為陽性對照，平行測定3次。清除率="[（Ablank?Asample）/Ablank]×100%，式中，Ablank表示對照管的吸光值，Asample表示加入提取液樣品后的吸光值。

1.2.4""清除超氧自由基（O2?·）能力測定""參照蘇凡等[14]的方法測定茶葉提取液的超氧陰離子自由基清除率。

1.2.5""清除羥自由基（·OH）能力測定""參考周婧[15]的方法，稍作修改，取7個5"mL離心管，依次加入1"mL"FeSO4溶液，1"mL水楊酸-乙醇溶液，7個不同濃度茶葉提取液1"mL，200"μL"H2O2以及800"μL水，37"℃水浴30"min，在510"nm處測吸光值。對照管和樣底管各設置1個，對照管中用1"mL水代替供試液，樣底管中用水代替H2O2，以VC為陽性對照。平行測定3次。清除率＝1?（A樣品?"A樣底）/A對照，式中，A樣品表示加入提取液樣品后的吸光值，A樣底表示樣底管的吸光值，A對照表示對照管的吸光值。

1.2.6""還原能力測定""參考劉子金等[16]的方法，

稍作修改，取7個10"mL離心管，依次加入7個

不同濃度茶葉提取液1"mL，2.5"mL磷酸鈉緩沖液，2.5"mL鐵氰化鉀，50"℃水浴30"min，加入2.5"mL三氯乙酸，3000"r/min離心20"min，取上清液2.5"mL，加入2.5"mL水和0.5"mL"FeCl3。靜置10"min，在700"nm處測定吸光值。以沒食子酸為對照組，平行測定3次。

1.2.7""熱穩(wěn)定性測定""參照吳英華等[17]的方法測定茶葉提取液的熱穩(wěn)定性。

1.2.8""總多酚含量測定""參照劉仙俊等[18]的方法，以沒食子酸作對照，采用福林酚法測定茶葉提取液中總多酚的含量。

1.2.9""總黃酮含量測定""參照楊芙蓮等[19]和王萍等[20]的方法，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁法測定茶葉提取液中總黃酮的含量。

1.3""數(shù)據處理

利用Execl"2021軟件進行數(shù)據處理，采用Graphpad"Prism"9.5.1軟件進行差異顯著性分析以及作圖。

2""結果與分析

2.1""茶葉提取液的抗氧化活性分析

2.1.1""清除DPPH和ABTS自由基能力""在相同的濃度條件下（8"mg/mL），茶葉提取液所表現(xiàn)出來清除DPPH自由基和ABTS自由基的能力不同，并且同種茶葉提取液隨濃度的增加，其清除自由基的能力也增強，質量濃度小于5"mg/mL時，各茶葉提取液的DPPH自由基清除能力具有明顯差異；質量濃度大于5"mg/mL時，DPPH自由基的清除率均達到80.00%以上，且無明顯差異（圖1A）。在測定的濃度范圍內，辣木茶提取液的清除ABTS+·能力最強，ABTS+·清除率始終高于其他茶葉提取液，辣木茶提取液濃度為8"mg/mL時，清除率達91.53%（圖1B）。

由表1可知，7種海南特色茶葉的75%乙醇提取液對DPPH·和ABTS+·的半抑制濃度（IC50）值有所不同，但是對DPPH自由基與ABTS自由基均具有較強的清除作用。五指山綠茶提取液的DPPH清除能力最強，IC50值為0.496"mg/mL，辣木茶提取液的ABTS清除能力最強，其IC50值為0.394"mg/mL。

2.1.2""清除超氧自由基能力""如圖2所示，隨著茶葉提取液濃度的增大，其清除超氧自由基能力不斷增強，呈現(xiàn)正量效關系。7種茶葉提取液對超氧自由基均具有清除作用，提取液質量濃度低于1.8"mg/mL時，五指山紅茶和鷓鴣茶提取液的超氧自由基清除率接近；濃度大于4.2"mg/mL時，五指山紅茶和鷓鴣茶提取液的超氧自由基清除率明顯高于白沙綠茶、苦丁茶、五指山綠茶，濃度達到4.8"mg/mL時，五指山紅茶提取液的超氧自由基清除率（79.68%）明顯高于其他茶葉。

2.1.3""清除羥自由基能力""羥自由基測定結果如圖3所示，在0.6～4.2"mg/mL濃度范圍內，隨著茶葉提取液濃度的增加，其清除羥自由基能力也逐漸增強。茶葉提取液濃度為0.6"mg/mL時，五指山綠茶（42.49%）和白沙綠茶（38.13%）提取液的清除率高于其他5種茶，而低于CK（VC）的清除率（75.88%）；提取液濃度達到3.0"mg/mL后其清除率增長緩慢，濃度超過3.6"mg/mL時清除率趨于平緩，達到最大濃度時（4.8"mg/mL）白沙綠茶提取液的羥自由基清除率為71.07%稍低于CK（78.76%）。

2.1.4""還原能力""如圖4所示，7種茶葉提取液均表現(xiàn)出一定的還原能力，隨茶葉提取液濃度的增加，其還原能力也不斷增強。在提取液濃度為0.06～0.18"mg/mL時，辣木茶、苦丁茶、蘭貴人、鷓鴣茶、五指山紅茶提取液的還原能力較為接近；提取液濃度為0.18～0.30"mg/mL時，鷓鴣茶與辣木茶的還原能力低于其他5種茶。隨著提取液濃度的增大，辣木茶的還原能力逐漸弱于鷓鴣茶，在0.18～0.48"mg/mL濃度范圍內，白沙綠茶的還原能力高于其余6種茶。在供試的濃度范圍內7種茶葉提取液的還原能力均低于CK（沒食子酸）。

2.1.5""熱穩(wěn)定性""7種茶葉提取液在不同溫度下的抗氧化活性無明顯變化（圖5A）。通過研究沸水孵育對7種茶葉提取液抗氧化活性的影響可知，在100"℃條件下，延長沸水浴的時間對7種茶葉提取液的抗氧化性無明顯變化（圖5B）。

2.2""總多酚和總黃酮的含量測定分析

7種茶葉提取液的總多酚和總黃酮含量如表2所示。五指山綠茶提取液的總多酚含量最高（22.84%），是辣木茶（9.80%）的2.33倍，而苦丁茶、五指山紅茶、蘭貴人、鷓鴣茶的總多酚含量差異不顯著。從7種茶葉提取液的總黃酮含量來看，五指山綠茶提取液的總黃酮含量最高（4.67%），是辣木茶的5.18倍，五指山紅茶、蘭貴人、鷓鴣茶的總黃酮含量差異不顯著。

3""討論

本研究對比7種海南特色茶葉提取液的總多酚、總黃酮含量及抗氧化活性，并進行了差異分析，發(fā)現(xiàn)其提取液均有抗氧化還原能力?？寡趸钚杂蒁PPH·、ABTS+·、羥自由基、超氧自由基等多個指標共同決定[21-23]。在探索潛在的天然抗氧化劑時，熱穩(wěn)定性是非常重要的一個因素[24]。在本研究中，7種茶葉提取液在不同溫度條件和沸水孵育下，其抗氧化性并未發(fā)生顯著變化。因此，可以得知這7種茶葉提取液的熱穩(wěn)定性較佳。

研究表明，7種茶葉的茶多酚含量在9.80%～"22.84%之間，其中，五指山綠茶的茶多酚含量最高為22.84%，屬茶多酚含量較高水平，這與董方等[25]和何進武等[26]的研究結果一致?？傸S酮含量在0.90%～4.67%之間，其中，五指山綠茶的總黃酮含量最高為4.67%，屬茶葉中相對較高的水平[27]。茶葉中的茶多酚含量和總黃酮含量與自由基的清除能力呈現(xiàn)良好的量效關系[28]。總多酚與總黃酮含量的測定結果也證實了這一觀點，但辣木茶的各項抗氧化活性指標低于其余幾種茶葉，而辣木茶的ABTS+·清除率反而略高，這與余芳等[29]的研究結果一致。這可能是由于辣木茶中含有的一些醇溶性的、不屬于多酚類的強抗氧化物質含量偏高，ABTS+·可溶于水和有機溶劑[30]，可以在不同的pH下使用，對pH的變化不敏感，而DPPH·只溶于有機極性溶劑中，如乙醇[31]，所以茶葉中的水溶性抗氧化物質只能清除ABTS+·而不能清除DPPH·，這些可能是導致ABTS+·清除率高的原因。這一結果也說明了抗氧化活性不僅與多酚和黃酮含量相關，同時也與其他化合物也存在著復雜的關系。

白沙綠茶整體的抗氧化效果最好，其還原能力、DPPH·清除能力、羥自由基清除能力最強。本研究中，75%乙醇提取物的抗氧化活性效果明顯強于李杰等[32]研究中所使用的70%乙醇提取物和水提物。說明不同的提取方法也會造成提取的總酚含量或者其他的抗氧化活性成分有一定的差異。鷓鴣茶與白沙綠茶、五指山綠茶為同一種茶種（綠茶），而抗氧化活性測定結果相差較大，茶葉品種及其生長環(huán)境不同，其所含的多酚種類和數(shù)量也不相同，會造成提取的總酚含量有一定差異。

五指山紅茶、蘭貴人、苦丁茶的抗氧化能力接近，這可能是由于這3種茶的總多酚和總黃酮含量較為接近。這一結果反映出茶葉的抗氧化活性與其化學成分及其含量存在相對復雜的關系，但總體上可看出其均具有較強的抗氧化活性。

綜上，本研究中的7種海南特色茶富含總多酚和總黃酮等抗氧化成分，且具有較好的抗氧化效果和熱穩(wěn)定性，具有很高的開發(fā)利用價值。

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