摘" 要：為了分析張掖地區(qū)豬場(chǎng)鏈球菌的流行情況及對(duì)臨床中常用抗菌藥的耐藥性，本試驗(yàn)于2022—2023年采集張掖地區(qū)豬場(chǎng)疑似患豬鏈球菌病死亡豬的肺臟、肝臟、脾臟及關(guān)節(jié)液等組織樣本182份，采用細(xì)菌分離培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)觀察、生化鑒定等鑒定方法對(duì)鏈球菌進(jìn)行分離鑒定，采用人工感染試驗(yàn)動(dòng)物和K-B藥敏紙片法分析鏈球菌的致病性和耐藥性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，從采集的182份樣本中分離到102株豬鏈球菌，其中82株具有致病性，可引起小鼠死亡；82株致病性鏈球菌對(duì)新霉素、阿莫西林、氨芐西林等8種藥物的耐藥率在58.5％～96.3％，對(duì)其他藥物的耐藥率在3.7％～30.5％。本研究為該地區(qū)豬場(chǎng)不同階段豬（育肥豬、仔豬）的鏈球菌病防控提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：豬；鏈球菌；分離鑒定；耐藥性

中圖分類(lèi)號(hào)：S854.4+4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2024）03-0074-03

在養(yǎng)豬過(guò)程中，細(xì)菌性疾病如大腸桿菌病、沙門(mén)菌病、鏈球菌病、副豬嗜血桿菌病、放線(xiàn)菌病等是臨床中常見(jiàn)疾病，可引起不同階段的豬發(fā)生腹瀉、肺炎、關(guān)節(jié)炎等臨床癥狀，發(fā)病率和死亡率均較高，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的影響[1]。鏈球菌廣泛存在于自然界中，是一種常見(jiàn)的革蘭陽(yáng)性球菌，可引起多種動(dòng)物（豬、牛、羊、鹿、雞、鴨、鵝）及人感染，嚴(yán)重危害動(dòng)物和人的健康，為臨床中一種常見(jiàn)的人獸共患病原菌[2-3]。豬鏈球菌可以通過(guò)不同的途徑引起不同階段的豬（育肥豬、仔豬）發(fā)生一系列急性癥狀（急性敗血癥）與慢性感染（關(guān)節(jié)炎），嚴(yán)重者出現(xiàn)急性死亡，會(huì)給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重影響[4-5]。相關(guān)研究表明，豬鏈球菌可感染各個(gè)年齡段的豬，其中對(duì)仔豬危害較大，常表現(xiàn)為急性敗血癥死亡，死亡率達(dá)80％以上，在臨床上常與病毒性疾病混合感染，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[6]。

本試驗(yàn)采集張掖地區(qū)豬場(chǎng)疑似患鏈球菌病死亡豬的組織樣本，共182份，病料采用多種鑒定方法進(jìn)行鏈球菌鑒定，并進(jìn)行致病性和耐藥性分析，為張掖地區(qū)豬場(chǎng)不同年齡段豬（育肥豬、仔豬）的鏈球菌病防控提供參考依據(jù)。

1" 材料與方法

1.1 病料來(lái)源

試驗(yàn)于2022—2023年采集張掖地區(qū)豬場(chǎng)疑似患鏈球菌病死亡豬的肺臟、肝臟、脾臟及關(guān)節(jié)液等組織樣本，共計(jì)182份。

1.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)

在無(wú)菌條件下，將采集的組織樣本進(jìn)行處理，分別接種于7％綿羊血脫纖培養(yǎng)基，37 ℃恒溫培養(yǎng)12～18 h，挑取優(yōu)勢(shì)（完全溶血）單個(gè)菌落，分區(qū)劃線(xiàn)接種于鏈球菌顯示培養(yǎng)基，37 ℃恒溫培養(yǎng)8～12 h，挑取鏈球菌顯示培養(yǎng)基上典型單個(gè)菌落進(jìn)行染色鏡檢，觀察形態(tài)學(xué)。

1.3 細(xì)菌生化鑒定

在無(wú)菌條件下，將鏈球菌顯色培養(yǎng)基上典型的單個(gè)菌落接種于胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（tryptic soy peptone broth medium，TSB），37 ℃恒溫培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，參照鏈球菌生化鑒定試劑盒說(shuō)明書(shū)，將菌液濃度用TSB調(diào)整為2個(gè)麥?zhǔn)蠞岫龋缓蠼臃N于陽(yáng)性菌鑒定試紙條，37 ℃培養(yǎng)12～18 h，進(jìn)行生化特性鑒定。

1.4 致病性分析

將1.3中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌液用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)，并將菌液濃度調(diào)整為1×108 CFU/mL，通過(guò)腹腔注射攻毒小鼠，攻毒劑量為每只0.3 mL。未攻毒組小鼠腹腔注射等量的TSB。將攻毒組小鼠與未攻毒組小鼠隔離飼養(yǎng)6 d，每天記錄小鼠的發(fā)病和死亡情況。

1.5 藥敏試驗(yàn)

將1.3中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌液濃度調(diào)整為1×108 CFU/mL，利用藥敏紙片進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，操作步驟和判定結(jié)果參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）2013年推薦的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

2" 結(jié)果

2.1 細(xì)菌分離鑒定

臨床分離菌株在7％綿羊血脫纖培養(yǎng)基上長(zhǎng)出典型的圓形、大小一致的α溶血菌落，在鏈球菌顯色培養(yǎng)基上長(zhǎng)出綠色、大小一致的典型菌落，染色可見(jiàn)單個(gè)或聚在一起的兩頭鈍圓的桿菌，與《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》中鏈球菌的培養(yǎng)特性及形態(tài)學(xué)基本一致。

2.2 細(xì)菌生化試驗(yàn)鑒定

結(jié)果顯示，臨床分離菌株為陽(yáng)性菌株，能分解葡萄糖和麥芽糖，氧化酶試驗(yàn)為陽(yáng)性，不產(chǎn)硫化氫，與《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》中鏈球菌的生化特性基本一致。分離菌株可鑒定為鏈球菌。

2.3 分離菌株的致病性分析

在攻毒試驗(yàn)期間，攻毒組小鼠在攻毒后2～ 6 d出現(xiàn)不同的發(fā)病情況，個(gè)別小鼠出現(xiàn)急性死亡。在死亡小鼠的肝臟、肺臟、脾臟等組織病料中分離到了鏈球菌。未攻毒組小鼠未出現(xiàn)明顯的臨床癥狀。結(jié)果顯示，分離的102株鏈球球菌中有82株能引起小鼠發(fā)病或死亡，表明這82株分離菌株對(duì)小鼠具有致病性。

2.4 耐藥性分析

由表1可知，臨床中分離的82株致病性鏈球菌對(duì)新霉素、阿莫西林、氨芐西林等8種藥物的耐藥性較強(qiáng)，耐藥率在58.5％～96.3％；對(duì)頭孢噻呋、頭孢噻肟、氟苯尼考等8種藥物的耐藥率在3.7％～30.5％。結(jié)果表明，臨床中分離的鏈球菌對(duì)不同藥物的耐藥性不同。

3" 討論

鏈球菌在飼養(yǎng)環(huán)境中分布比較廣泛，可引起牛、羊、豬、鹿、雞、鴨、鵝等多種動(dòng)物及人發(fā)病，主要的臨床表現(xiàn)為敗血癥、腹瀉、肺炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎等一系列癥狀。鏈球菌可以通過(guò)多種途徑感染不同階段的動(dòng)物，其中對(duì)幼齡動(dòng)物（仔豬、犢牛及羔羊）危害較大，死亡率較高，是一種常見(jiàn)的人獸共患病原菌[7]。近幾年，國(guó)內(nèi)關(guān)于仔豬鏈球菌病的報(bào)道越來(lái)越多，在我國(guó)不同地區(qū)的豬場(chǎng)廣泛流行。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，從張掖地區(qū)豬場(chǎng)采集的182份樣本中共分離到102株鏈球球菌，其中82株具有致病性，可引起小鼠死亡，表明該地區(qū)豬場(chǎng)的鏈球菌感染比較嚴(yán)重，應(yīng)注意該病的綜合防控。國(guó)內(nèi)相關(guān)研究表明，分離的豬鏈球菌對(duì)臨床常用的藥物有不同程度的耐藥性，且呈現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象，給該病的防治帶來(lái)一定困難[8-9]。本試驗(yàn)研究顯示，這82株致病性鏈球菌對(duì)臨床中常用的藥物有耐藥性，耐藥率在58.5％～96.3％；對(duì)其他藥物的耐藥率在3.7％～30.5％，說(shuō)明從張掖地區(qū)豬場(chǎng)分離的致病性鏈球菌存在嚴(yán)重的耐藥性問(wèn)題。因此，在臨床中應(yīng)重視鏈球菌病的防治，減少耐藥性的產(chǎn)生。

4" 結(jié)論

從張掖地區(qū)豬場(chǎng)分離的182份組織樣本中分離到102株鏈球菌，其中82株為致病性鏈球菌；這82株鏈球菌對(duì)臨床常用的8種抗菌藥物的耐藥率在58.5％以上，對(duì)其他藥物的耐藥率在為3.7％～30.5％，應(yīng)引起重視，在防治時(shí)應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，選擇敏感的抗生素進(jìn)行治療。

參考文獻(xiàn)

[1] 李宏偉，王淑梅．豬常見(jiàn)細(xì)菌性疾病的診斷與治療方法探究[J]．吉林畜牧獸醫(yī)，2023，44（4）：37-38.

[2] 區(qū)海蘊(yùn)，周亞南，吳晨曉，等．一株豬關(guān)節(jié)源鏈球菌的分離鑒定及體外抑菌試驗(yàn)[J]．江西畜牧獸醫(yī)雜志，2021（2）：13-16.

[3] 劉愛(ài)華．山東東營(yíng)地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)仔豬鏈球菌的分離鑒定與耐藥性分析[J]．中國(guó)豬業(yè)，2023， 18（1）：90-92.

[4] 江波，楊蓉．一株豬鏈球菌2型的分離與鑒定[J]．中國(guó)豬業(yè)，2022，17（3）：74-77，80.

[5] 栗衛(wèi)東．一株4型副豬嗜血桿菌的分離鑒定與耐藥性分析[J]．中國(guó)豬業(yè)，2023，18（4）：93-96.

[6] 王冬雪，史佳楠，楊丹，等．豬圓環(huán)病毒與鏈球菌混合感染繼發(fā)仔豬副傷寒的診治體會(huì)[J]．吉林畜牧獸醫(yī)，2023，44（2）：39-40.

[7] 洪軍．仔豬圓環(huán)病毒與豬鏈球菌混合感染的診治[J]．豬業(yè)觀察，2020（6）：46-47.

[8] 曾獻(xiàn)良．仔豬PRRSV、PEDV和豬鏈球菌混合感染的診斷與治療[J]．湖南畜牧獸醫(yī)，2020（5）：24-26.

[9] 李志勇，劉勝春，熊云云，等．1例保育仔豬鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J]．江西畜牧獸醫(yī)雜志，2018（4）：11-13.