高 龍,張 娟,戈辰妍,劉 寬,唐嘉祺,石神炳,陽伏林*,周 晶

(1.福建農林大學動物科學學院(蜂學學院),福建 福州 350002; 2. 南平市建陽區(qū)吉翔牧業(yè)有限公司,福建 南平 354207;3. 福建農林大學國家菌草工程技術研究中心,福建 福州 350002)

雜交狼尾草(Pennisetumglaucum×purpureum)是一種生長于熱帶和亞熱帶地區(qū)的多年生草本植物,具有生長速度快、再生能力強、產量高、耐干旱、抗倒伏等特點[1-2]。我國南方地區(qū)潮濕多雨,雜交狼尾草刈割后多將其制成青貯飼料。雜交狼尾草水溶性碳水化合物含量相對較低,水分含量和緩沖能較高,且莖稈中含大量空氣,導致青貯發(fā)酵進程緩慢,易發(fā)生腐敗變質[3-4]。當原料水分大于70%時,青貯過程中會稀釋水溶性碳水化合物濃度和乳酸菌數量,易造成水分大量流失多及梭菌發(fā)酵,最終導致丁酸含量升高,干物質損失和蛋白質水解嚴重,降低青貯飼料適口性[5]。因此,開發(fā)優(yōu)質的青貯飼料添加劑對提升雜交狼尾草青貯發(fā)酵品質至關重要。目前關于雜交狼尾草的青貯發(fā)酵研究較多,冼振宇等[6]研究表明添加葡萄糖和蘋果酸均可改善雜交狼尾草青貯品質,降低氨態(tài)氮含量;李玨等[7]研究發(fā)現添加布氏乳桿菌和枯草芽胞桿菌能提雜交狼尾草青貯飼料中的乙酸含量,降低pH值和氨態(tài)氮含量,提高青貯飼料發(fā)酵品質;何瑋等[8]發(fā)現添加纖維素酶可降低雜交狼尾草青貯飼料中酸性洗滌纖維和中性洗滌纖維含量,增加粗蛋白含量,添加乳酸菌則可有效抑制青貯飼料中丁酸的產生,進而改善雜交狼尾草青貯發(fā)酵品質。

乳酸菌(Lactic acid bacteria)在青貯發(fā)酵過程中發(fā)揮重要作用[9-10]。在青貯制備過程中,乳酸菌在厭氧條件下將水溶性碳水化合物轉化為乳酸,降低pH值,抑制有害微生物活動,從而保留牧草的營養(yǎng)物質。由于雜交狼尾草水溶性碳水化合物含量較低,且乳酸菌數量少,直接青貯很難制備出優(yōu)質青貯飼料。近年來,乳酸菌已被廣泛應用于提高青貯發(fā)酵品質和飼料利用率等[11-12]。乳酸菌發(fā)酵有兩種形式:同型乳酸發(fā)酵和異型乳酸發(fā)酵。植物乳桿菌(Lactiplantibacillusplantarum)是一種革蘭氏陽性菌,在青貯飼料中的發(fā)酵方式一般為同型乳酸發(fā)酵,發(fā)酵產生的乳酸在青貯初期迅速降低pH值[13]。Yang等[14]研究表明添加植物乳桿菌可顯著提高紫花苜蓿青貯飼料中乳酸含量,降低pH值,改善發(fā)酵品質。Li等[15]研究發(fā)現在牧草青貯中添加植物乳桿菌可提高青貯品質,并改變微生物群落結構。布氏乳桿菌(Lactobacillusbuchneri)屬于異型發(fā)酵乳酸菌,在青貯過程中,布氏乳桿菌可將乳酸轉化為乙酸和1,2-丙二醇,有效抑制霉菌和酵母菌的生長,提高有氧穩(wěn)定性[16]。Xu等[17]研究表明布氏乳桿菌可提高玉米青貯飼料的有氧穩(wěn)定性,減少青貯飼料有氧暴露期間,營養(yǎng)物質氧化變質的風險。Muck等[18]認為布氏乳桿菌的添加量應大于5×105cfu·g-1FW才能提高青貯效果。然而,青貯飼料暴露在空氣中時,增加的乳酸易被酵母菌和其它有害微生物利用,因此接種同型發(fā)酵乳酸菌可能會增加有氧腐敗的風險,而同型和異型發(fā)酵乳酸菌的混合添加可改善這一現象,異型發(fā)酵乳酸菌產生的乙酸可有效抑制有害微生物的生長[19]。目前,有關植物乳桿菌和布氏乳桿菌等青貯添加劑的研究多集中于玉米、小麥青貯等,單獨添加或混合使用植物乳桿菌和布氏乳桿菌,對雜交狼尾草青貯營養(yǎng)成分,微生物數量及有氧暴露時各指標的變化研究較少。本試驗通過在雜交狼尾草青貯飼料中單獨添加或混合使用植物乳桿菌和布氏乳桿菌,探究其對雜交狼尾草青貯發(fā)酵品質、營養(yǎng)價值和有氧穩(wěn)定性的影響,以期為生產中獲取高品質雜交狼尾草青貯飼料提供一定的科學依據和技術支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

雜交狼尾草于2021年5月采自福建省南平市長富乳業(yè)牧場(117.93 °E,26.79 °N,海拔142 m,亞熱帶季風氣候)。雜交狼尾草株高約為3 m,距離地面8～10 cm處進行刈割,用鍘刀鍘至1～2 cm備用。植物乳桿菌(菌株編號BNCC185392)和布氏乳桿菌(菌株編號BNCC187961)購自北京北納聯創(chuàng)生物技術研究菌種保藏中心。

1.2 試驗設計

試驗共設置對照組(CK)、植物乳桿菌組(LP組,添加1×106cfu·g-1植物乳桿菌)、布氏乳桿菌組(LB組,添加1×106cfu·g-1布氏乳桿菌)、植物乳桿菌和布氏乳桿菌組(LPLB組,添加5×105cfu·g-1植物乳桿菌+5×105cfu·g-1布氏乳桿菌)。每組3個重復,添加量均以鮮重為基礎,添加劑與無菌水配制成10 mL混合液添加,對照組添加10 mL無菌水;將添加劑裝入提前滅菌的手持噴壺均勻噴灑,混合均勻后各稱取400 g裝于聚乙烯厭氧袋(248 mm×344 mm)中,真空密封后置于室溫(22℃～29℃)進行厭氧發(fā)酵60 d。

1.3 測定指標及方法

1.3.1營養(yǎng)成分測定 雜交狼尾草鮮料及青貯料營養(yǎng)成分主要測定干物質(Dry matter,DM)、粗蛋白(Crude protein,CP)、水溶性碳水化合物(Water-soluble carbohydrate,WSC)、酸性洗滌纖維(Acid detergent fiber,ADF)、中性洗滌纖維(Neutral detergent fiber,NDF)、半纖維素(Hemicellulose,HC)含量。青貯60 d后,每袋取200 g樣品于65℃烘箱烘干至恒重后,稱重計算DM含量。烘干的樣品進行粉碎,過40目篩后用于其余營養(yǎng)成分的測定。其中測定水溶性碳水化合物采用蒽酮-硫酸比色法[20];干物質、粗蛋白、酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維和半纖維素采用張娟等[21]的方法測定。

1.3.2發(fā)酵參數測定 青貯發(fā)酵參數主要測定pH、氨態(tài)氮(Ammonia nitrogen,AN)、乳酸(Lactic acid,LA)、乙酸(Acetic acid,AA)、丙酸(Propionic acid,PA)、丁酸(Butyric acid,BA)。每袋青貯取10 g混勻樣品,加入90 ml蒸餾水,于4℃浸泡24 h后,用4層紗布過濾后即為浸提液,用于測定后續(xù)發(fā)酵參數。用pHS-3D型酸度計(上海)測定浸提液pH值;氨態(tài)氮采用苯酚-次氯酸鈉比色法測定[22];有機酸測定:使用0.22 μm水性濾膜過濾浸提液,后采用高效液相色譜儀測定。色譜柱為島津WondaSil C18 Superb液相色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流動相A/B(甲醇/0.02 mol·L-1NaH2PO4),使用硫酸調節(jié)流動相B至2.70。等梯度洗脫,A,B流動相分別占14%和86%,檢測波長為210 nm,一次循環(huán)測定時間為25 min,柱溫為30℃,流速1 mL·min-1,進樣體積為20 μL[23]。

1.3.3有氧穩(wěn)定性測定 取發(fā)酵60 d后的雜交狼尾草青貯樣品,在開袋后將其暴露在空氣中觀察9 d,于開袋第0,3,6和9 d分別取其青貯樣品,每組的各時間點取3個重復,進行有氧穩(wěn)定性的評價,測定包含pH、乳酸、氨態(tài)氮的測定及乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)、酵母菌(Yeast)和好氧菌(Aerobic bacteria,AB)的計數。pH、乳酸、氨態(tài)氮按照上述發(fā)酵參數測定方法進行測定;參照馮啟賢等[24]的方法,分別采用MRS培養(yǎng)基、麥芽糖浸粉瓊脂培養(yǎng)基和平板計數瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)乳酸菌、酵母菌及好氧菌,培養(yǎng)結束后進行平板計數,計算微生物數量。

1.3.4青貯綜合價值評定 參照凌文卿等[25]方法,采用隸屬函數法對雜交狼尾草青貯的營養(yǎng)品質、發(fā)酵特性和有氧穩(wěn)定性中18項指標進行綜合評價,其值越大,效果越好。以青貯發(fā)酵60 d的DM,CP,WSC,LA,AA,PA以及有氧暴露9 d時的LA,LAB為正向指標,以青貯發(fā)酵60 d的NDF,ADF,HC,pH,BA,AN以及有氧暴露9 d時的pH,NH3-N,Yeast,AB為負項指標,計算隸屬度平均值,進行排序,確定最佳處理。計算公式如下:

UX+=(Xij-Ximin)∕(Ximax-Ximin);

UX-=1-(Xij-Ximin)∕(Ximax-Ximin);

式中:Ux+為各指標正相關隸屬函數值,Ux-為各指標負相關隸屬函數值,Xij為某指標測定值,Ximin和Ximax分別為某指標所有測定值中的最小值和最大值,i表示各項處理,j表示青貯指標,n為指標數。

1.4 數據分析

使用Excel 2013軟件進行數據整理,利用SPSS 20.0軟件對雜交狼尾草青貯各項指標進行單因素方差分析,并用Turkey法進行多重比較,結果用平均值±標準差表示,使用GraphPad Prism 9繪制圖表。

2 結果與分析

2.1 雜交狼尾草營養(yǎng)成分和微生物組成

雜交狼尾草的主要營養(yǎng)成分和微生物組成如表1所示。本試驗所用雜交狼尾草原料CP含量為14.30% DM,低NDF(63.50%DM)和ADF含量(34.30% DM);WSC含量較低,為9.64% DM;pH值為6.22,呈弱酸性。雜交狼尾草原料乳酸菌含量6.24 lg cfu·g-1FW,酵母菌數量為6.27 lg cfu·g-1FW。好氧菌數量為6.42 lg cfu·g-1FW。

表1 雜交狼尾草營養(yǎng)成分和微生物組成(干物質為基礎)Table 1 Nutrient composition and microbial composition of Pennisetum glaucum×purpureum (DM basis)

2.2 植物乳桿菌和布氏乳桿菌對雜交狼尾草青貯營養(yǎng)品質的影響

由表2可知,LP組DM含量顯著降低(P<0.05),LPLB組DM含量顯著增加(P<0.05)。LP組、LB組、LPLB組CP含量較CK組顯著增加(P<0.05)。與CK相比,LP組、LB組、LPLB組WSC含量顯著降低(P<0.05)。LPLB組NDF和ADF含量較CK組下降最多,但LP組、LB組、LPLB組的NDF和ADF含量與CK組都無顯著性差異,LP組、LB組、LPLB組的HC含量較CK組也無顯著差異。

表2 不同添加劑對雜交狼尾草青貯營養(yǎng)品質的影響Table 2 Effects of different additives on the nutritional components of Pennisetum glaucum × purpureum

2.3 植物乳桿菌和布氏乳桿菌對雜交狼尾草青貯發(fā)酵特性的影響

由表3可知,與CK相比,LP組、LB組、LPLB組的pH值顯著下降(P<0.05),其中,LPLB組的pH值顯著低于其它組(P<0.05)。與CK相比,LP組、LB組、LPLB組LA和AA含量顯著增加(P<0.05),LB組LA含量顯著高于其它組(P<0.05),LPLB組次之(P<0.05),LB組、LPLB組AA含量顯著高于LP組(P<0.05)。LPLB組的PA含量較其余組顯著增加(P<0.05)。與CK相比,各處理均顯著降低了BA含量(P<0.05),顯著增加了AN含量(P<0.05)。

表3 不同添加劑對雜交狼尾草青貯發(fā)酵特性的影響Table 3 Effects of different additives on the fermentation characteristics of Pennisetum glaucum×purpureum

2.4 植物乳桿菌和布氏乳桿菌對雜交狼尾草有氧穩(wěn)定性的影響

各組pH值隨著有氧暴露天數的增加呈上升趨勢;有氧暴露0 d時,四組間差異不明顯,隨著天數增加,LP組pH較CK組升高;在有氧暴露3 d和6 d時,LPLB組pH值在四組中最低;有氧暴露9 d時,四組pH差異不明顯(圖1A)。雜交狼尾草青貯有氧暴露后,LA含量隨著天數的增加而顯著降低(P<0.05);在有氧暴露3 d時,CK組、LP組、LB組、LPLB組LA含量的降低趨勢較緩慢;在有氧暴露6 d時,四組的LA含量快速下降;有氧暴露后,三個加乳酸菌組LA含量較CK組顯著增加(P<0.05);在有氧暴露0 d時,LB組LA含量最高;在有氧暴露6 d時,LPLB組LA含量最高,與其余三組差異顯著(P<0.05);在有氧暴露9 d時,四組LA含量均顯著降低(P<0.05)(圖1B)。在不同雜交狼尾草青貯有氧暴露后,各組AN含量在3 d時呈現增加趨勢,之后隨著有氧暴露天數增加呈降低趨勢;與CK相比,LP組、LB組、LPLB組AN含量在有氧暴露0,3 d時明顯降低(P<0.05),在有氧暴露6,9 d時與CK相比變化不明顯(圖1C)。

圖1 不同添加劑對雜交狼尾草青貯有氧穩(wěn)定性的影響Fig.1 Effects of different additives on aerobic stability of Pennisetum glaucum × purpureum silage注:不同小寫字母表示相同天數不同處理組差異顯著(P<0.05),不同大寫字母表示相同處理不同天數差異顯著(P<0.05)Note:Different lowercase letters represent significant difference between different treatment in the same days (P<0.05),and different uppercase letters represent significant difference between different days in the same treatment (P<0.05)

由圖1D可知,各處理組LAB數量均呈現先增高后降低的趨勢;在有氧暴露0 d時,LP組、LPLB組LAB數量較CK組、LB組顯著增加(P<0.05);在有氧暴露6,9 d時,LB組、LPLB組LAB數量較CK組、LP組顯著增加(P<0.05)。CK組、LP組酵母菌數量隨著有氧暴露天數的增加呈上升趨勢;LB和LPLB組在有氧暴露6 d時呈上升趨勢,在有氧暴露9 d時呈下降趨勢;在有氧暴露9 d時LPLB組酵母菌數量顯著低于其他組(圖1E)。與CK相比,LB組、LPLB組好氧菌數量在有氧暴露0,3,9 d時顯著降低(P<0.05),且在有氧暴露過程中好氧菌數量顯著低于LP組(P<0.05)(圖1F)。

2.5 雜交狼尾草青貯綜合價值評定

用隸屬函數法分析各處理對雜交狼尾草青貯的作用效果,LPLB組效果最好,即布氏乳桿菌和植物乳桿菌聯用效果最佳,各處理綜合價值排序為:LPLB(0.76)>LB(0.58)>LP(0.42)>CK(0.33)(表4)。

表4 綜合價值評定Table 4 Comprehensive value evaluation

3 討論

3.1 植物乳桿菌和布氏乳桿菌對雜交狼尾草青貯營養(yǎng)品質的影響

青貯發(fā)酵是一個復雜的生物化學過程,與植物酶解系統(tǒng)和微生物間的相互作用有關,隨著青貯發(fā)酵,微生物群落和飼料營養(yǎng)物質含量也會發(fā)生變化[26]。青貯飼料中DM的損失源于細胞的呼吸作用及微生物發(fā)酵,而添加乳酸菌可以提高乳酸含量,降低pH值,減少青貯中DM的損失[27]。Silva等[28]在玉米青貯的研究中發(fā)現,添加布氏乳桿菌會造成DM損失。然而,本研究結果表明LP組DM含量顯著降低,而LB和LPLB組DM顯著升高,這可能是由于本試驗所用雜交狼尾草含水量(92%)高于玉米,且表面微生物含量較多,從而抑制LP的繁殖,且LP無法同LB一樣產生較多具有減少有害菌作用的有機酸,如乙酸、丙酸等,從而使有害菌繁殖,消耗青貯飼料中的營養(yǎng)物質。因此,添加LB能有效減少雜交狼尾草青貯DM的損失。好氧微生物可將青貯飼料中WSC轉化為水、二氧化碳等,使得營養(yǎng)成分分解[29]。本試驗研究發(fā)現添加乳酸菌組WSC含量顯著降低,其主要原因可能是乳酸菌的添加可加快青貯進程,消耗更多底物。此外,添加異型發(fā)酵的LB組WSC含量降低更多,這與張嘉懿等[30]研究結果一致。原因可能是LB消耗青貯原料的WSC,產生了除乳酸以外的揮發(fā)性脂肪酸和二氧化碳等。Chen等[31]發(fā)現青貯時,CP的降解主要是附著在原料上的好氧微生物活動和植物蛋白酶作用的結果。青貯發(fā)酵時,乳酸菌逐漸占據主導,pH降低,抑制好氧微生物活動和蛋白酶活性,減少蛋白質分解。本試驗中,雜交狼尾草表面附著微生物較多,隨著青貯發(fā)酵的進行,蛋白質逐漸降解,CK組CP較青貯前降低。在青貯60 d時,添加乳酸菌組的CP含量均比CK組有所增加,這與司華哲等[32]研究結果一致,表明添加乳酸菌能促進雜交狼尾草青貯發(fā)酵,能有效保留雜交狼尾草青貯中的粗蛋白。本試驗中,接種LP,LB對雜交狼尾草青貯后NDF和ADF含量并無顯著性差異,這與Kung等[33]研究結果一致。

3.2 植物乳桿菌和布氏乳桿菌對雜交狼尾草青貯發(fā)酵特性的影響

雜交狼尾草含水量較高,且表面附著有害微生物較多,青貯時易發(fā)生腐敗變質。添加乳酸菌可增加乳酸含量,加速進入青貯穩(wěn)定期,從而改善發(fā)酵品質[34]。pH值是衡量青貯發(fā)酵品質好壞的重要指標之一,優(yōu)質青貯飼料的pH值一般在3.8～4.2[35]。本試驗中添加乳酸菌組的pH值均在4.2以下,且混合加菌組,即LPLB組的pH值最低,青貯效果好。AN是中的青貯中的蛋白質和氨基酸分解產生[36],本試驗中乳酸菌處理組AN含量顯著增加,可能是與青貯條件和原料等多種因素有關。AA可抑制酵母菌、霉菌等不利于青貯的微生物的生長和繁殖,減少其對底物的消耗,為乳酸菌發(fā)酵提供更好的環(huán)境[37-38];PA有較強的抑菌效果,可能抑制青貯飼料腐敗變質,有助于改善青貯品質[39];BA是由對青貯發(fā)酵有害的菌將青貯中的AA和糖分解轉化形成,BA的含量高,代表有害菌活動強,不利于青貯發(fā)酵[40-41]。本試驗研究發(fā)現LP組LA含量低于LB組,這可能是所用雜交狼尾草自身所含酵母菌數量較多,LP發(fā)酵過程中的主要產物LA會被酵母菌利用,導致LA含量降低[42]。LPLB組LA,AA,PA含量顯著增加,可能是由于兩者存在協同作用,LP產生的乳酸,可降低pH值,抑制有害菌的生長,LB促進了LA向AA的轉化,從而有效改善雜交狼尾草青貯的發(fā)酵特性[43]。LPLB組產生的BA含量高于其它處理組,這一結果與Wu等[44]研究結果不一致,可能與雜交狼尾草自身附生較多的有害微生物如酵母菌、好氧菌等有關。本試驗表明三個乳酸菌處理組均能使BA含量降低,降低有害菌的活動。

3.3 植物乳桿菌和布氏乳桿菌對雜交狼尾草青貯有氧穩(wěn)定性的影響

青貯中AA的含量是評價青貯有氧穩(wěn)定性的標準之一,青貯飼料的AA含量高,有氧穩(wěn)定性也較好[45]。LB主要通過促進AA和1,2-丙二醇的產生,從而改善有氧穩(wěn)定性。Kuprys等[46]研究發(fā)現添加LB的青貯可產生PA,PA是霉菌生長的天然抑制劑,有助于提高青貯的有氧穩(wěn)定性。本試驗中,添加LB組均產生較高的AA和PA,其中LPLB組AA和PA含量最高,有較好的有氧穩(wěn)定性。在有氧暴露階段,青貯的pH值、LA含量和AN含量是衡量青貯有氧穩(wěn)定性好壞的重要指標[47]。pH值和AN含量越低,LA含量越高,有氧穩(wěn)定性越佳。本試驗中,各組的pH值均隨有氧暴露天數的增加而升高,這主要是由于有氧暴露后酵母菌等好氧微生物活動增強,消耗LA,使pH值升高。添加LB提高了青貯有氧穩(wěn)定性,LB和LPLB組的pH值在有氧暴露后低于LP組和CK組,這與Hooker等[48]研究結果一致。有氧暴露后,隨著有氧暴露天數的增加,AN含量呈現先增加后減少的趨勢,在上升階段主要是因為pH升高,有害微生物活動增強,蛋白質和氨基酸被分解,干物質降解增大;隨著有氧暴露時間的延長,營養(yǎng)物質被消耗,蛋白質和氨基酸所剩無幾,AN含量逐漸降低,這與Wang等[49]研究結果一致。添加乳酸菌組的AN均低于對照組,這可能是由于乳酸菌的添加使pH降低,從而抑制蛋白酶活性。LP組因含有較高的LA,在有氧暴露前期LA含量高于其它組,而后隨著有氧暴露時間的延長LA含量快速降低,而LPLB組LA含量的下降較其它組相對平緩,這可能是由于添加LP和LB可以產生LA和AA,從而降低pH值和LA消耗量。

本試驗添加了LAB用于青貯發(fā)酵,加菌組的LAB數量較CK組顯著增加。LB和LPLB組LAB數量在有氧暴露時較LP組呈現先緩慢上升,后加速升高的趨勢,在有氧暴露9 d時高于LP組和CK組。這可能是LB和LPLB組pH值較低,抑制了青貯過程中微生物的活動,只有少量LAB進行發(fā)酵,而大部分LAB進入休眠階段。隨著有氧暴露時間增加,pH逐漸升高,LAB逐漸恢復其活性,數量呈上升趨勢。隨著pH值繼續(xù)升高,青貯中其它微生物活動增強,LAB數量開始下降[50]。酵母菌是青貯飼料有氧腐敗的主要原因,酵母菌可消耗LA,造成二次發(fā)酵,使青貯環(huán)境有利于好氧微生物活動。當青貯飼料中酵母菌含量超過1×105cfu·g-1FW時,有氧暴露后易腐敗變質[51]。本試驗中添加LB組的酵母菌和好氧菌數量均低于CK組和LP組,Li等[52]認為LB發(fā)酵產生較多的AA,抑制了酵母菌和好氧菌等有害微生物的活動。

4 結論

添加植物乳桿菌(LP)、布氏乳桿菌(LB)、混合添加植物乳桿菌與布氏乳桿菌(LPLB)植物乳桿菌使雜交狼尾草青貯的粗蛋白、乳酸和乙酸含量顯著增加,pH值和丁酸含量顯著降低,可有效改善雜交狼尾草青貯發(fā)酵品質;在有氧暴露階段,各處理組乳酸含量顯著增加,氨態(tài)氮含量顯著降低;LB組和LPLB組在有氧暴露9天時能顯著降低酵母菌和好氧菌數量,顯著增加乳酸菌數量,可有效提高雜交狼尾草青貯有氧穩(wěn)定性;結合隸屬函數綜合價值評定結果得出,植物乳桿菌與布氏乳桿菌聯用青貯效果最佳。因此,本研究為實踐生產中獲取高品質雜交狼尾草青貯飼料提供一定的科學依據。