劉 港 裴珍珍 鄧博文 蔣昇源 馬 超 白惠中 左心瑋 徐 林 穆曉紅

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué),北京,100029; 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院,北京,100010)

脊髓損傷(Spinal Cord Injury,SCI)是指直接或者間接暴力造成脊髓組織損害,主要表現(xiàn)為損傷節(jié)段以下肢體嚴(yán)重功能障礙[1]。全球每年SCI人數(shù)25萬～50萬[2]。目前,我國SCI患者人數(shù)超過200萬,其發(fā)病率也伴隨交通意外、建筑事故頻發(fā)而快速上升[3]。SCI有效治療手段較少,是21世紀(jì)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域面臨的重大難題。

原發(fā)性損傷和繼發(fā)性損傷是SCI的2個(gè)階段[4]。原發(fā)性損傷包括神經(jīng)實(shí)質(zhì)及軸突網(wǎng)絡(luò)的破壞以各類細(xì)胞的機(jī)械性損傷。原發(fā)性損傷后繼發(fā)的組織級聯(lián)反應(yīng)稱為繼發(fā)性損傷,炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、微循環(huán)障礙、離子失衡、細(xì)胞凋亡和膠質(zhì)瘢痕形成及過度增生等是該階段主要病理[5]。SCI作用機(jī)制復(fù)雜,長期以來,人們針對SCI不同機(jī)制分別進(jìn)行了探索,但進(jìn)展緩慢。目前,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對于SCI治療手段主要包括手術(shù)減壓及激素沖擊療法,雖能取得一定效果,但效果并不理想[2]。中醫(yī)藥在SCI后神經(jīng)微環(huán)境調(diào)控方面具有獨(dú)特優(yōu)勢[6],但仍需要更多研究進(jìn)一步闡明其作用機(jī)制。

中醫(yī)認(rèn)為督脈受損,氣滯血瘀為SCI病機(jī),活血祛瘀、通達(dá)氣血、溫通督脈為治則,處方以通絡(luò)活血、行氣化瘀藥物為主?；仡櫸墨I(xiàn)[7-9]發(fā)現(xiàn),川芎、丹參為活血化瘀藥物代表藥,在治療SCI時(shí)常被配伍使用。川芎為“血中之氣藥”,上可至巔頂,下可達(dá)血海;丹參具有較強(qiáng)的活血作用,在血瘀類疾病中,常配伍使用。在補(bǔ)陽還五湯、脊髓康、川芎丹參湯等方中,二者均相須為用,共奏行氣活血之功。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法,挖掘川芎-丹參治療SCI的有效成分,預(yù)測核心靶點(diǎn)及通路,并對部分網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,以期為后續(xù)基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用提供證據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 健康無特定病原體(Specific Pathogen Free,SPF)級8周齡雌性斯?jié)娎鄹瘛ざ嗬?Sprague Dawley,SD)大鼠30只,體質(zhì)量220～240 g,購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號:SCXK(京)2021-0011。于北京中醫(yī)藥大學(xué)的SPF級動(dòng)物飼養(yǎng)中心飼養(yǎng),溫度22 ℃,濕度40%～50%,12 h光暗交替循環(huán),標(biāo)準(zhǔn)飼料飲食,活動(dòng)無限制。實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)由北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(倫理審批號:BUCM-2022042104-2098)。

1.1.2 藥物 川芎、丹參均購自北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院,根據(jù)臨床劑量和藥物動(dòng)物劑量換算[10],并參考文獻(xiàn)[11],給藥劑量分為3個(gè)梯度,分別為川芎-丹參高劑量(8.100 g/kg),川芎-丹參中劑量(4.050 g/kg),川芎-丹參低劑量(2.025 g/kg)。

1.1.3 試劑與儀器 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)試劑盒(北京索萊寶科技有限公司,貨號:SEKR-0017);小鼠抗鼠單克隆磷脂酰肌醇3激酶(Phosohoinositide 3 Kinase,PI3K)抗體(武漢三鷹生物技術(shù)有限公司,貨號:60225-1-Ig);兔抗鼠多克隆p-PI3K抗體(英國Abcam公司,貨號:ab182651);小鼠抗鼠單克隆p-蛋白激酶B(Protein Kinase B,AKT)抗體(武漢三鷹生物技術(shù)有限公司,貨號:66444-1-Ig);兔抗鼠多克隆AKT抗體(武漢三鷹生物技術(shù)有限公司,貨號:10176-2-AP);GAPDH(北京索萊寶科技有限公司,貨號:P02436);ECL發(fā)光液(Perkin Elmer公司,美國,貨號:NEL111001);聚偏二氟乙烯(Polyvinylidenefluoride,PVDF)膜(北京索萊寶科技有限公司,貨號:YA1701);酶標(biāo)儀(無錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司,型號:DR-200BS);穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(Bio-rad公司,美國,型號:Powerpac HQ);計(jì)算機(jī)圖像分析儀(Media Cybernetics公司,美國,型號:Image-Pro Plus Analysis Soft ware)。

1.2 方法

1.2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測

1.2.1.1 檢索及篩選川芎-丹參藥物主要活性成分 使用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(https://tcmsp-e.com/)、中國科學(xué)院有機(jī)化學(xué)研究所化學(xué)專業(yè)數(shù)據(jù)庫(http://www.organchem.csdb.cn.[1978-2019])、化源網(wǎng)(https://www.chemsrc.com/),檢索川芎、丹參兩味藥物的活性成分,并利用Pub-Chem數(shù)據(jù)庫(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)查找收集得到的藥物活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)式(2D結(jié)構(gòu)或smiles號),在Swissh(http://www.swissadme.ch/)平臺上傳化學(xué)結(jié)構(gòu)式,利用ADME(Absorption、Distribution、Metabolism and Excretion)進(jìn)行篩選,GI absorption為High;Druglikeness中Lipinski、Ghose、Veber、Egan、Muegge滿足≥3個(gè)yes的活性成分納入。其他重要活性成分通過文獻(xiàn)檢索方式補(bǔ)充。

1.2.1.2 預(yù)測川芎-丹參藥物活性成分作用靶點(diǎn) 利用Swiss Target Prediction平臺(http://www.swisstargetprediction.ch),預(yù)測ADME篩選后所得活性成分的作用靶點(diǎn),設(shè)置物種為“Homo sapiens”,選取Probability>0的靶基因。

1.2.1.3 獲取SCI疾病基因 以“Spinal cord injury”和“Spinal Cord Traumas”為關(guān)鍵詞,在GeneCards(http://www.genecards.org/)和OMIM(http://omim.org/)數(shù)據(jù)庫中查找SCI疾病基因。GeneCards數(shù)據(jù)庫中,Relevance score大于中位數(shù)的靶點(diǎn)被選為疾病對應(yīng)的基因。

1.2.1.4 構(gòu)建川芎-丹參活性成分-SCI相關(guān)靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò) 利用在線繪圖工具imageGP(http://www.ehbio.com/Cloud_Platform/front/)繪制川芎-丹參藥物成分和SCI對應(yīng)靶點(diǎn)的韋恩圖。后借助Cytoscape(3.8.2)軟件構(gòu)建“川芎-丹參活性成分-交集靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖,中藥活性成分的重要性通過節(jié)點(diǎn)度值大小評估。

1.2.1.5 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(Protein-protein Interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 在String(https://www.string-db.org/)平臺中導(dǎo)入獲得的交集靶點(diǎn),定義最高置信度0.900,分析蛋白間作用,后使用Cytoscape軟件,導(dǎo)入分析結(jié)果,優(yōu)化圖像。借助CytoNCA插件對PPI網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)進(jìn)行拓?fù)鋵傩苑治?篩選出核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。

1.2.1.6 生物富集分析 為了進(jìn)一步了解所篩選出的靶標(biāo)蛋白的功能及其在相關(guān)通路中的作用,將川芎-丹參和SCI的交集基因?qū)隡etascape數(shù)據(jù)庫(https://metascape.org/)中,物種限定為人類,閾值設(shè)定為P<0.01,在數(shù)據(jù)庫自我檢索和轉(zhuǎn)化操作后,進(jìn)行基因本體(Gene Ontology,GO)富集分析和京都基因和基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析,P值≤0.01的數(shù)據(jù)和KEGG通路被認(rèn)為是與本病的相關(guān)性最強(qiáng),使用imageGP做出可視化結(jié)果。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

1.2.2.1 分組與模型制備 30只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、川芎-丹參高劑量組、川芎-丹參中劑量組、川芎-丹參低劑量組,每組6只。造模前,各組大鼠禁食水12 h,腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉(3%,1.5 mL/kg)。除假手術(shù)組外,其余各組采用改良Allen重物打擊法制備SCI模型[12]。大鼠取俯臥位,于背部以胸10椎體為中心,縱向切開皮膚,逐層分離筋膜、肌肉等組織,充分胸10段脊髓。隨后使用脊髓打擊器完成打擊,高25 cm,重量10 g。逐層縫合切口。完成打擊后,局部脊髓表面迅速出現(xiàn)瘀紫色,并伴有強(qiáng)烈尾部擺動(dòng),術(shù)后雙下肢完全癱瘓,認(rèn)定為造模成功。假手術(shù)組暴露脊髓后即逐層縫合切口,不進(jìn)行打擊。模型構(gòu)建完成后,每日2次人工排尿,直至大鼠恢復(fù)自主排尿。

1.2.2.2 給藥方法 川芎-丹參各組按照1.1.2劑量灌胃給藥,假手術(shù)組給予等量生理鹽水,持續(xù)28 d。

1.2.2.3 檢測指標(biāo)與方法 1)ELISA檢測大鼠脊髓組織活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平,干預(yù)28 d后,取各組大鼠脊髓50 mg。采用ELISA試劑盒檢測ROS、MDA含量,檢測均按照試劑盒說明嚴(yán)格操作。2)蛋白質(zhì)印跡法檢測大鼠脊髓組PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表達(dá)水平,干預(yù)28 d后,取各組大鼠脊髓50 mg,冰上研磨呈粉末狀,加入裂解液后離心。蛋白樣品轉(zhuǎn)移至PVDF膜,加入5%脫脂奶粉,封閉樣品2 h。分別加入一抗PI3K(1∶2 000)、p-PI3K(1∶1 000)、AKT(1∶3 000)、p-AKT(1∶1 000)、GAPDH(1∶5 000),4 ℃孵育過夜,加入二抗室溫孵育1 h,使用ECL液顯色。ImageJ軟件觀察條帶灰度值并計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 川芎-丹參活性成分及靶點(diǎn) 共收集到川芎-丹參的154個(gè)活性成分,其中,川芎84個(gè),丹參74個(gè)。4個(gè)成分為川芎、丹參中藥所共有。預(yù)測154個(gè)成分靶點(diǎn),將重復(fù)靶點(diǎn)刪除,最終得到903個(gè)靶點(diǎn),其中川芎645個(gè),丹參788個(gè),530個(gè)靶點(diǎn)為二者共有。

2.2 SCI基因 共得到3 446個(gè)與SCI相關(guān)的基因。

2.3 川芎-丹參活性成分-SCI相關(guān)靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 共得到484個(gè)川芎-丹參活性成分與SCI的共同靶點(diǎn)。見圖1?！八幬镏饕钚猿煞?交集靶點(diǎn)”關(guān)系網(wǎng)絡(luò)見圖2。反映川芎-丹參154種成分與484個(gè)交集靶點(diǎn)之間的潛在作用。

圖1 川芎-丹參與SCI的韋恩圖

圖2 藥物主要活性成分-交集靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò) 共發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵靶點(diǎn)34個(gè)。根據(jù)Degree值排列,表1列出前8個(gè)關(guān)鍵節(jié)點(diǎn),包括淀粉樣前體蛋白、磷脂酰肌醇3激酶、促分裂原活化的蛋白

表1 川芎-丹參治療SCI的核心靶點(diǎn)

激酶1、絲/蘇氨酸蛋白激酶1、促分裂原活化的蛋白激酶3、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活子3、緩激肽受體B2、細(xì)胞外鈣敏感受體。關(guān)鍵靶點(diǎn)相互作用關(guān)系見圖3。

圖3 川芎-丹參治療SCI關(guān)鍵靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

2.5 GO功能富集分析結(jié)果 共得到447個(gè)GO功能富集分析條目(P<0.01),其中生物過程(Biologi-cal Process,BP)條目247個(gè),細(xì)胞組分(Cellular Component,CC)條目94個(gè),分子功能(Molecular Function,MF)條目106個(gè)。BP包括對有機(jī)氮化合物的細(xì)胞反應(yīng)、激酶活性的正向調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)等。CC包括神經(jīng)元胞體、軸突等。MF包括神經(jīng)遞質(zhì)受體活性、蛋白激酶活性等。各組前12個(gè)條目見圖4。

圖4 川芎-丹參治療SCI的關(guān)鍵靶點(diǎn)的GO功能富集分析

2.6 KEGG通路分析結(jié)果 KEGG通路富集篩選得到126條信號通路(P<0.01),涉及PI3K/AKT、cAMP、Apoptosis、MAPK等信號通路等,這意味著川芎-丹參可通過調(diào)控上述信號通路達(dá)到促SCI后神經(jīng)修復(fù)的效果。前20條通路構(gòu)建可視化見圖5。藥物-疾病-核心交集靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖見圖6。

圖5 川芎-丹參治療SCI關(guān)鍵靶點(diǎn)的KEGG通路富集分析

圖6 藥物-疾病-核心交集靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)

2.7 川芎-丹參對SCI大鼠脊髓組織ROS、MDA水平的影響 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠脊髓ROS及MDA表達(dá)升高(P<0.01);與模型組比較,川芎-丹參各劑量組ROS均降低(P<0.01);川芎-丹參高、中劑量組MDA均降低(P<0.01);其中川芎-丹參高劑量組差異最為顯著。見表2。

表2 川芎-丹參對SCI大鼠脊髓組織ROS、 MDA表達(dá)的影響

2.8 川芎-丹參對SCI大鼠脊髓組織PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表達(dá)的影響 PI3K及AKT蛋白表達(dá)組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05);與假手術(shù)組比較,模型組大鼠脊髓p-PI3K、p-AKT顯著降低(P<0.01);與模型組比較,川芎-丹參各劑量組p-PI3K、p-AKT均升高(P<0.01);其中川芎-丹參高劑量組差異最為顯著。見表3,圖7。

表3 川芎-丹參對SCI大鼠脊髓組織PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表達(dá)的影響

圖7 各組大鼠脊髓組織PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表達(dá)電泳條帶

3 討論

《靈樞經(jīng)·寒熱病》曰:“身有所傷,血出多,及中風(fēng)寒,若有所墮墜,四支懈惰不收,名曰體惰。”中醫(yī)理論認(rèn)為SCI當(dāng)屬于“體惰”和“痿證”范疇。SCI血絡(luò)受損,血不循經(jīng)而溢出脈外,離經(jīng)之血成為瘀血。在此病理狀態(tài)下,陽氣不能交會(huì)于四肢,而且氣血不能輸布四肢以濡養(yǎng)筋脈,從而導(dǎo)致四肢麻木,痿軟無力甚至截癱。“氣滯血瘀”是SCI的主要病機(jī),“行氣活血”是其主要治則。川芎被稱為血中之氣藥,走行力強(qiáng)。其有效成分川芎嗪可改善SCI繼發(fā)的微循環(huán)障礙,抑制炎癥反應(yīng)以及神經(jīng)細(xì)胞凋亡等[13-15]。丹參具有活血祛瘀,涼血消癰的功效,也是活血化瘀的重點(diǎn)藥物,PI3K/AKT、缺氧誘導(dǎo)因子1-α(Hypoxia Inducible Factor-1,HIF-α)/血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、細(xì)胞因子信號傳送阻抑物3(Suppressor of Cytokine Signaling 3,SOCS3)/STAT3等多條通路可被丹參有效活性成分丹參酮ⅡA激活[16-18],進(jìn)而抑制炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等,改善微循環(huán)障礙。川芎、丹參臨床治療SCI時(shí)常相須為用,共同發(fā)揮活血化瘀之功,探究二者配伍后作用靶點(diǎn)、調(diào)控機(jī)制,將為SCI治療提供新的治療思路及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)數(shù)據(jù)分析,川芎-丹參治療SCI具有相關(guān)作用靶點(diǎn)484個(gè)。通過PPI網(wǎng)絡(luò)圖發(fā)現(xiàn),各靶點(diǎn)間存在大量交互關(guān)系,APP、PI3K、MAPK1/3、AKT1是最重要靶點(diǎn)蛋白。淀粉樣前體蛋白(Amyloid Precursor Protein,APP)是一種膜內(nèi)在蛋白,廣泛存在神經(jīng)元的突觸中,其可被β淀粉樣前體蛋白切割酶1(Beta-site Amyloid Precursor Protein Cleaving Enzyme 1,BACEL)和γ分泌酶分解產(chǎn)生β淀粉樣蛋白(Amyloid β,Aβ)[19]。研究表明SCI小鼠損傷早期APP、BACE1和γ-分泌酶和Aβ的水平明顯增加[20],進(jìn)一步對SCI小鼠應(yīng)用DAPT(γ-分泌酶抑制劑)發(fā)現(xiàn),Aβ形成顯著減少,進(jìn)而影響SCI小鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)。MAPK1、MAPK3在MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中扮演了重要角色,可使絲氨酸、蘇氨酸和絡(luò)氨酸去磷酸化,抑制AMPK激活[21]。抑制SCI小鼠MAPK1/MAPK3表達(dá)后,可抑制炎癥通路激活、減輕炎癥反應(yīng)以及神經(jīng)細(xì)胞凋亡[22]。AKT1是PI3K下游主要的效應(yīng)物,參與調(diào)控PI3K/AKT[23]。研究發(fā)現(xiàn),促進(jìn)AKT激活,可提高抗凋亡蛋白表達(dá),抑制促凋亡蛋白表達(dá),減少SCI后神經(jīng)細(xì)胞凋亡[24-25]。

對關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集分析,發(fā)現(xiàn)川芎-丹參治療SCI主要涉及細(xì)胞對氮化合物的反應(yīng)、激酶活性調(diào)節(jié)、離子平衡、對創(chuàng)傷的反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、跨突觸信號等生物學(xué)過程。涉及蛋白激酶活性、磷酸轉(zhuǎn)移酶活性、激酶結(jié)合等分子功能;涉及膜閥、受體復(fù)合物、樹突、軸突等細(xì)胞組分。通過KEGG富集分析,篩選得到了126條通路,在查閱相關(guān)資料和閱讀文獻(xiàn)后,發(fā)現(xiàn)PI3K/AKT、cAMP、MAPK等通路在川芎-丹參治療SCI中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。PI3K/AKT信號通路參與細(xì)胞凋亡、自噬及增殖等多個(gè)表型。該通路激活后,磷酸肌醇三磷酸可被p-PI3K催化,進(jìn)而作用于AKT并使其活化[23]。環(huán)磷酸腺苷(Cyclic Adenosine Monophosphate,cAMP)廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,cAMP表達(dá)抑制可減少脊髓斷端軸突增長[26]。使用cAMP衍生物可以促使SCI大鼠神經(jīng)干細(xì)胞分化和神經(jīng)細(xì)胞增殖,這些對神經(jīng)恢復(fù)尤為關(guān)鍵[27-28]。MAPK信號通路是指以MAPK為代表的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,MAPK通過逐級磷酸化,進(jìn)入細(xì)胞核,調(diào)控細(xì)胞炎癥、增殖、凋亡等過程[29]。該通路包括細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(Extracellular Regulated Protein Kinases,ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal Kinase,JNK)和p38MAPK3條信號通路。研究發(fā)現(xiàn),抑制SCI小鼠組JNK通路,可促進(jìn)小鼠行為學(xué)改善,這可能與JNK通路抑制劑下調(diào)凋亡相關(guān)基因表達(dá)、阻止受損神經(jīng)元異常活躍相關(guān)[30-31]。QIAN等[32]發(fā)現(xiàn)抑制p38MAPK信號通路,能夠抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)、炎癥反應(yīng)及減少細(xì)胞凋亡,減少繼發(fā)性損傷階段膠質(zhì)瘢痕增生及增加神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)。

本研究進(jìn)一步探究PI3K/AKT信號通路發(fā)現(xiàn),SCI發(fā)生后,PI3K/AKT信號通路被抑制,而川芎-丹參能激活該通路。PI3K/AKT信號通路是與SCI病理過程密切相關(guān)的重要通路,激活該通路可以通過減少細(xì)胞凋亡、減輕炎癥反應(yīng)和防止膠質(zhì)瘢痕形成來促進(jìn)脊髓損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)[32]。該通路與氧化應(yīng)激反應(yīng)也具有密切的關(guān)系。氧化應(yīng)激是指機(jī)體氧化系統(tǒng)與抗氧化系統(tǒng)失衡,ROS過度累積的一種代謝狀態(tài)。過量產(chǎn)生的ROS激發(fā)鏈?zhǔn)街|(zhì)過氧化反應(yīng),加重炎癥反應(yīng),加快細(xì)胞凋亡[33]。PI3K/AKT信號通路能通過調(diào)節(jié)過氧化物酶體增殖物激活受體α等調(diào)控脂質(zhì)過氧化反應(yīng)[34]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),SCI發(fā)生后,ROS及MDA表達(dá)水平顯著增加,而川芎-丹參能減低ROS及MDA表達(dá)水平,表明其在一定程度上能改善氧化應(yīng)激反應(yīng),減輕脊髓繼發(fā)性損傷,這可能與其調(diào)控PI3K/AKT信號通路相關(guān)。

綜上所述,川芎-丹參配伍治療SCI具有多靶點(diǎn)、多途徑的優(yōu)勢,可能是通過激活PI3K/AKT信號通路,進(jìn)而抑制氧化應(yīng)激反應(yīng),減輕脊髓繼發(fā)性損傷。本研究為進(jìn)一步探究川芎-丹參配伍治療SCI提供了一定的藥理學(xué)基礎(chǔ)。但本研究只對部分網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,其作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步探究。

利益沖突聲明:無。