范雨欣，徐瑞雯，張曉祎，朱研潔，代向陽，孫彥君, ，李 孟, ，馮衛(wèi)生, *，陳 輝, *

1.河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，河南 鄭州 450046

2.呼吸疾病中醫(yī)藥防治省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，河南 鄭州 450046

茄科（Solanaceae）枸杞屬LyciumL.植物全世界約有80 種，我國(guó)有7 種3 變種，其中寧夏枸杞L.barbarumL.和中華枸杞L.chinenseMill.為我國(guó)枸杞屬重要的2 個(gè)種[1]。中華枸杞，又名枸杞、狗奶子、狗牙根，主要分布在我國(guó)東北、華北、華中、華南和西南地區(qū)，最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，其果實(shí)（中藥稱枸杞子），藥用功能與寧夏枸杞類似，用于虛勞精虧、腰膝酸痛、眩暈耳鳴、內(nèi)熱消渴等癥的治療[2-4]；枸杞根皮為《中國(guó)藥典》2020年版地骨皮藥材來源之一，是臨床上治療內(nèi)熱消渴等癥的常用中藥[4]。目前，關(guān)于枸杞屬植物的研究報(bào)道多集中于寧夏枸杞，而關(guān)于中華枸杞的研究報(bào)道較少，且主要集中于其根皮（中藥稱地骨皮）[5]。

糖尿病在中醫(yī)又稱消渴病，是以高血糖為特征的慢性代謝性疾病。α-葡萄糖苷酶是體內(nèi)將淀粉轉(zhuǎn)化為葡萄糖的關(guān)鍵酶，而抑制α-葡萄糖苷酶是控制餐后血糖升高的有效途徑[6]。目前，從天然產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)新型α-葡萄糖苷酶抑制劑已成為抗糖尿病藥物研究的一個(gè)熱點(diǎn)領(lǐng)域[7]。本課題組前期已對(duì)寧夏枸杞果實(shí)的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，部分化合物顯示出較強(qiáng)的α-葡萄糖苷酶抑制作用[8]。已有文獻(xiàn)研究表明，中華枸杞果實(shí)醇提物對(duì)糖尿病小鼠具有顯著的降血糖效果，并對(duì)α-葡萄糖苷酶亦表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用[9]，但缺乏相應(yīng)的化學(xué)成分研究基礎(chǔ)。為進(jìn)一步完善中華枸杞的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，促進(jìn)枸杞屬藥用植物資源的開發(fā)利用，本實(shí)驗(yàn)對(duì)中華枸杞果實(shí)醋酸乙酯部位進(jìn)行化學(xué)成分研究，共分離得到11個(gè)化合物，分別鑒定為7-O-(6-O-3-羥基異丁?；?β-D-吡喃葡萄糖基)-6-甲氧基香豆素 [7-O-(6-O-3-hydroxyisobutyroyl-β-D-glucopyranosyl)-6-methoxycoumarin，1]、東莨菪苷（scopolin，2）、東莨菪素（scopoletin，3）、反式對(duì)香豆?；?β-D-葡萄糖苷（trans-p-coumaroyl β-D-glucoside，4）、cassoside I（cassoside I，5）、對(duì)羥基苯乙酮-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4-hydroxy-acetophenone-4-O-β-D-glucopyranoside，6）、苯甲醇吡喃葡萄糖苷（benzyl alcohol glucopyranoside，7）、苯乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷（phenethyl-β-D-glucopyranoside，8）、柚皮素-7-Oβ-D-葡萄糖苷（naringenin-7-O-β-D-glucoside，9）、5-O- 對(duì)香豆酰奎尼酸甲酯（ methyl 5-O-pcoumaroylquinic acid，10）、綠原酸甲酯（methyl chlorogenate，11）。其中化合物1 為1 個(gè)新化合物，命名為枸杞苷E；化合物10 和11 為首次從枸杞屬植物中分離得到，化合物4～11 為首次從中華枸杞中分離得到，并評(píng)價(jià)了部分化合物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性。

1 儀器與材料

Bruker AVANCE Ⅲ 500 MHz 型核磁共振儀譜用超導(dǎo)核磁共振儀（TMS 做內(nèi)標(biāo)，德國(guó)Bruker 公司）；TripleTOF 6600 型高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用儀（AB SCIEX）；Autopol IV 全自動(dòng)旋光儀（美國(guó)，魯?shù)婪蚬荆籐C52 型高壓制備液相色譜儀（賽譜銳思北京科技有限公司，SP-5030 型半制備型高壓輸液泵，UV200 型紫外檢測(cè)器，Easychrom 型色譜工作站）；色譜柱為YMC-Pack ODS-A（250 mm×20 mm，5 μm）；Thermo EVO 300 紫外分光光度計(jì)和Thermo Nicolet IS10 紅外光譜儀（美國(guó)，Thermo Scientific）；薄層色譜硅膠GF254、柱色譜硅膠（200～300 目，青島海洋化工廠）；大孔吸附樹脂D101（西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司）；ODS填料（日本YMC 公司）；色譜純及分析純?cè)噭ㄌ旖蛩挠丫?xì)化學(xué)品有限公司）；α-葡萄糖苷酶來源于釀酒酵母（Sigma 公司，貨號(hào) G5003，批號(hào)BCBX8794）；底物對(duì)硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG，Sigma 公司，貨號(hào) N1377，批號(hào)BCBP4536V）；陽性對(duì)照槲皮素（quercetin，Sigma公司，貨號(hào)PHR1488）。

中華枸杞于2021 年11 月采自吉林省白山市撫松縣，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院陳隨清教授鑒定為茄科枸杞屬植物中華枸杞L.chinenseMill.的干燥成熟果實(shí)。憑證樣本（20211106A）存放于河南中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)研究室。

2 方法

2.1 提取與分離

中華枸杞干燥果實(shí)30.0 kg，用95%乙醇加熱回流提取3 次，每次2.0 h，合并提取液，減壓濃縮，得到總浸膏10.0 kg?？偨嘟?jīng)大孔吸附樹脂D101柱色譜分離，依次用水、95%乙醇-水進(jìn)行洗脫，得到95%乙醇-水洗脫部位1.0 kg。95%乙醇-水洗脫部位水溶后，使用醋酸乙酯萃取，得到醋酸乙酯部位158.0 g。醋酸乙酯部位使用硅膠柱色譜分離，依次用石油醚-醋酸乙酯（1∶0、50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1）、二氯甲烷-甲醇（30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、0∶1）梯度洗脫，合并相同或相似后，得到10 個(gè)組分（G1～G10）。

G6（5.0 g）經(jīng)ODS 柱色譜分離，依次用甲醇-水（10%、30%、50%、70%、100%）梯度洗脫，得到5 個(gè)亞組分（G6-1～G6-5）。G6-2（30%甲醇-水洗脫部位，2.7 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用二氯甲烷-甲醇（100∶1→0∶1）梯度洗脫，合并得到3 個(gè)流分（G6-2-g1～G6-2-g3）。G6-2-g2（1.9 g）經(jīng)半制備液相色譜，用40%甲醇-水洗脫，得到化合物3（1080.0 mg，tR＝13.4 min）。

G7（15.0 g）經(jīng)ODS 柱色譜分離，依次用甲醇-水（10%、30%、50%、70%、100%）梯度洗脫，得到5 個(gè)亞組分（G7-1～G7-5）。G7-1（10%甲醇-水洗脫部位，0.7 g）經(jīng)半制備液相色譜，用10%甲醇-水洗脫，得到化合物6（9.1 mg，tR＝20.9 min）。G7-2（30%甲醇-水洗脫部位，4.0 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用二氯甲烷-甲醇（100∶1→0∶1）梯度洗脫，合并得到7 個(gè)流分（G7-2-g1～G7-2-g7）。G7-2-g5（415.0 mg）經(jīng)半制備液相色譜，用36%甲醇-水洗脫，得到化合物1（2.2 mg，tR＝33.0 min）、5（4.2 mg，tR＝27.3 min）、7（6.8 mg，tR＝17.4 min）、8（4.2 mg，tR＝38.7 min）。G7-2-g6（108.0 mg）經(jīng)半制備液相色譜，用34%甲醇-水洗脫，得到化合物9（4.1 mg，tR＝22.9 min）。G7-2-g7（212.0 mg）經(jīng)半制備液相色譜，用24%甲醇-水洗脫，得到化合物2（4.2 mg，tR＝14.4 min）和4（10.2 mg，tR＝19.6 min）。

G8（13.0 g）經(jīng)ODS 柱色譜分離，依次用甲醇-水（10%、30%、50%、70%、100%）梯度洗脫，得到5 個(gè)亞組分（G8-1～G8-5）。G8-2（30%甲醇-水洗脫部位，1.7 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用二氯甲烷-甲醇（100∶1→0∶1）洗脫，得到6 個(gè)流分（G8-2-g1～G8-2-g6）。G8-2-g4（15.0 mg）經(jīng)半制備液相色譜，用35%甲醇-水洗脫，得到化合物10（3.8 mg，tR＝31.9 min）。G8-2-g5（111.0 mg）經(jīng)半制備液相色譜，用38%甲醇-水洗脫，得到化合物11（13.6 mg，tR＝31.1 min）。

2.2 化合物1 的酸水解及糖的鑒定

化合物1（1.2 mg）溶于2.0 mol/L 鹽酸溶液3.0 mL 中，在90 ℃水浴加熱2.5 h。將混合物干燥后，以醋酸乙酯和水進(jìn)行萃取。水層濃縮干燥得到糖部分。糖部分加入1 mL 吡啶、1 mgL-半胱氨酸甲酯鹽酸鹽，在60 ℃水浴加熱1.5 h，然后加入0.02 mL鄰甲苯異硫氰酸酯，在60 ℃水浴再加熱1.5 h，得到糖部分的衍生物。通過LC-MS [Kinetex C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，2.6 μm）]，經(jīng)0.1%甲酸水（A）-甲醇（B）梯度洗脫（0～20 min，5%～95% B），柱溫40 ℃，體積流量為0.3 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL，比較水解產(chǎn)物糖部分衍生物（tR＝12.47 min，m/z447.152 0 [M＋H]+）和其標(biāo)準(zhǔn)糖衍生物（tR＝12.47 min，m/z447.152 3 [M＋H]+）的保留時(shí)間和質(zhì)譜數(shù)據(jù)，確定水解產(chǎn)物糖部分為D-葡萄糖[10]。

2.3 α-葡萄糖苷酶抑制活性篩選

采用PNPG 法[8]篩選化合物1、4、6、7、9～11 對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用，槲皮素為陽性對(duì)照藥。將實(shí)驗(yàn)組樣品（50 μmol/L）與酶溶液（0.025 U/mL）、磷酸鹽（PBS）緩沖液（0.1 mol/L，pH 6.8）、底物PNPG 溶液（1 mmol/L）依次加入96 孔酶標(biāo)板中，充分混勻，設(shè)置3 孔重復(fù)。同時(shí)設(shè)置不含藥物的空白對(duì)照和槲皮素陽性對(duì)照。37 ℃溫育50 min，酶標(biāo)儀測(cè)定405 nm 處的A值，計(jì)算得出α-葡萄糖苷酶活性的抑制率。

抑制率＝1－A樣品/A空白

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，[α]20D?117.6°（c0.04，MeOH）。紫外光譜（UV）顯示該化合物在207、226、288 和338 nm 處有特征吸收。紅外光譜（IR）顯示有羥基（3 411 cm?1）和羰基（1 719 cm?1）的特征吸收。HR-ESI-MS 譜給出準(zhǔn)分子離子峰m/z441.139 2 [M＋H]+（計(jì)算值為441.139 1），確定化合物1 的分子式為C20H24O11。1H-NMR 譜中（表1），低場(chǎng)區(qū)顯示1 組香豆素上順式烯烴質(zhì)子的特征信號(hào)δH7.96 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-4), 6.33 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-3)；2 個(gè)孤立的芳香環(huán)質(zhì)子信號(hào)δH7.30 (1H, s,H-5)，7.14 (1H, s, H-8)，以上提示香豆素母核C-6位和C-7 位被取代。1 個(gè)糖端基質(zhì)子信號(hào)δH5.15(1H, d,J= 7.3 Hz, H-1′)；1 個(gè)甲氧基質(zhì)子信號(hào)δH3.82 (3H, s, 6-OCH3)；1 個(gè)次甲基質(zhì)子信號(hào)δH2.52(1H, m, H-2′′)；1 個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)δH1.02 (3H, d,J=7.0 Hz, H-4′′)。13C-NMR 譜中共顯示20 個(gè)碳信號(hào)，結(jié)合HSQC，歸屬為1 個(gè)羰基碳δC174.3 (C-1′′)；1組香豆素母核上的碳δC160.4～112.3 (C-2～10)；1個(gè)甲氧基碳δC56.0 (6-OCH3)；1 個(gè)次甲基碳δC42.1(C-2′′)；1 個(gè)甲基碳δC13.4 (C-4′′)。除去以上碳信號(hào)，化合物1 的結(jié)構(gòu)中還剩7 個(gè)碳信號(hào)，結(jié)合HMBC 譜（圖1），推測(cè)這7 個(gè)碳信號(hào)為1 組葡萄糖基上的碳δC99.2～63.4 (C-1′～6′) 和1 個(gè)連氧亞甲基碳δC63.2(C-3′′)。對(duì)化合物1 的以上信息分析，發(fā)現(xiàn)其與已知化合物7-O-(6-O-syringoyl-β-D-glucopyranosyl)-6-methoxycoumarin[11]相似，提示化合物1 為1 個(gè)香豆素葡萄糖苷類化合物，不同之處在于，化合物1缺少了1 組紫丁香?；╯yringoyl）信號(hào)，而在高場(chǎng)區(qū)出現(xiàn)了1 組3-羥基異丁?；盘?hào)。

圖1 化合物1 的1H-1H COSY ()、HMBC () 和NOESY () 關(guān)鍵相關(guān)Fig.1 Key 1H-1H COSY (), HMBC () and NOESY () correlations of compound 1

表1 化合物1 的1H-和13C-NMR 數(shù)據(jù) (500/125 MHz,DMSO-d6)Table 1 1H- and 13C-NMR data of compound 1 (500/125 MHz, DMSO-d6)

化合物1 的HMBC 譜中，H-4′′與C-1′′、C-3′′存在明顯3 鍵遠(yuǎn)程相關(guān)，H-2′′、H-3′′與C-1′′存在明顯相關(guān)，結(jié)合1H-1H COSY 譜（圖1），證實(shí)化合物1 中存在1 個(gè)3-羥基異丁?；?。葡萄糖基上H-6′與C-1′′存在明顯遠(yuǎn)程相關(guān)，說明葡萄糖基C-6′位與C-1′′位通過酯鍵相連；葡萄糖端基H-1′與香豆素母核C-7 存在明顯相關(guān)，提示香豆素C-7 位被葡萄糖基取代。此外，HMBC 譜中，C-6-OCH3與C-6 有明顯遠(yuǎn)程相關(guān)，進(jìn)一步結(jié)合NOESY 譜中H-5 與H-4以及H-5 與C-6-OCH3的NOE 相關(guān)，證明香豆素母核C-6 位被甲氧基取代。從以上信息，確定了化合物1 的平面結(jié)構(gòu)（圖2）。根據(jù)葡萄糖基端基質(zhì)子的偶合常數(shù)（JH-1′= 7.3 Hz）可確定其相對(duì)構(gòu)型為β 構(gòu)型。將化合物1 進(jìn)行酸水解及衍生化實(shí)驗(yàn)，確定葡萄糖基絕對(duì)構(gòu)型為D型。由于化合物1 酸水解產(chǎn)物中3-羥基異丁酸含量較少，其C-2′′位的構(gòu)型尚未確定。綜上，化合物1 的結(jié)構(gòu)鑒定為7-O-(6-O-3-羥基異丁酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-6-甲氧基香豆素。經(jīng)Scifinder 數(shù)據(jù)庫檢索未見報(bào)道，確定為新化合物，命名為枸杞苷E（lyciumoside E）。

圖2 化合物1 的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.2 Chemical structure of compound 1

化合物2：白色粉末，ESI-MSm/z: 355 [M＋H]+，分子式為C16H18O9。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.97 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-4), 7.30 (1H, s, H-5),7.16 (1H, s, H-8), 6.33 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-3), 5.09(1H, d,J= 7.2 Hz, H-1′), 3.82 (3H, s, 6-OCH3),3.70～3.13 (6H, m, H-2′～6′)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6)δ: 160.5 (C-2), 149.9 (C-7), 148.9 (C-9),146.0 (C-6), 144.2 (C-4), 113.3 (C-3), 112.3 (C-10),109.7 (C-5), 103.0 (C-8), 99.6 (C-1′), 77.1 (C-3′), 76.7(C-5′), 73.1 (C-2′), 69.6 (C-4′), 60.6 (C-6′), 56.0(6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[12]，并進(jìn)一步經(jīng)NOESY 譜證實(shí)，故鑒定化合物2 為東莨菪苷。

化合物3：無色針晶（甲醇），ESI-MSm/z: 193[M＋H]+，分子式為C10H8O4。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δ: 7.86 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-4), 7.11 (1H, s,H-5), 6.78 (1H, s, H-8), 6.21 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3),3.92 (3H, s, 6-OCH3)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 164.1 (C-2), 152.9 (C-7), 151.4 (C-9), 147.1 (C-6),146.1 (C-4), 112.5 (C-3, 10), 109.9 (C-5), 103.9 (C-8),56.8 (6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[13]，故鑒定化合物3 為7-羥基6-甲氧基香豆素，又稱東莨菪素。

化合物4：白色粉末，ESI-MSm/z: 349 [M＋Na]+，分子式為C15H18O8。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6)δ: 7.64 (1H, d,J= 15.9 Hz, H-7), 7.58(2H, d,J= 8.3 Hz, H-2, 6), 6.80 (2H, d,J= 8.3 Hz,H-3, 5), 6.39 (1H, d,J= 15.9 Hz, H-8), 5.46 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-1′), 3.70～3.09 (6H, m, H-2′～6′)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 165.4 (C-9), 160.2(C-4), 146.0 (C-7), 130.6 (C-2, 6), 124.9 (C-1), 115.9(C-3, 5), 113.6 (C-8), 94.2 (C-1′), 77.9 (C-5′), 76.5(C-3′), 72.5 (C-2′), 69.5 (C-4′), 60.6 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[14]，故鑒定化合物4 為反式對(duì)香豆?；?β-D-葡萄糖苷。

化合物5：白色粉末，ESI-MSm/z: 371 [M＋H]+，分子式為C17H22O9。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ:7.76 (1H, d,J= 1.6 Hz, H-2), 7.19 (1H, overlapped,H-6), 7.15 (1H, overlapped, H-5), 6.93 (1H, d,J=12.8 Hz, H-7), 5.90 (1H, d,J= 12.8 Hz, H-8), 4.99(1H, d,J= 7.4 Hz, H-1′), 3.92 (1H, m, H-6′a), 3.89(3H, s, 3-OCH3), 3.74 (3H, s, 9-OCH3), 3.71 (1H, m,H-6′b), 3.56～3.37 (4H, m, H-2′～5′)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 168.5 (C-9), 150.0 (C-3), 149.0(C-4), 144.5 (C-7), 130.9 (C-1), 125.8 (C-6), 118.2(C-8), 116.7 (C-5), 115.5 (C-2), 102.3 (C-1′), 78.3(C-3′), 77.9 (C-5′), 74.8 (C-2′), 71.3 (C-4′), 62.5(C-6′), 56.7 (3-OCH3), 51.8 (9-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]，鑒定化合物5 為cassoside I。

化合物6：白色粉末，ESI-MSm/z: 299 [M＋H]+，分子式為C14H18O7。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.92 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2, 6), 7.11 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-3, 5), 4.99 (1H, d,J= 7.2 Hz, H-1′′), 3.71～3.17 (6H, m, H-2′～6′), 2.52 (3H, s, H-2′)；13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6)δ: 196.5 (C-1′), 160.0 (C-4),130.8 (C-1), 130.3 (C-2, 6), 115.9 (C-3, 5), 99.8(C-1′′), 77.2 (C-3′′), 76.5 (C-5′′), 73.2 (C-2′′), 69.6(C-4′′), 60.6 (C-6′′), 26.5 (C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[16]，故鑒定化合物6 為對(duì)羥基苯乙酮-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物7：白色粉末，ESI-MSm/z: 293 [M＋Na]+，分子式為C13H18O6。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δ: 7.42 (2H, d,J= 7.4 Hz, H-2, 6), 7.33 (2H,t,J= 7.4 Hz, H-3, 5), 7.27 (1H, t,J= 7.4 Hz, H-4),4.93 (1H, d,J= 11.8 Hz, H-7a), 4.67 (1H, d,J= 11.8 Hz, H-7b), 4.36 (1H, d,J= 7.7 Hz, H-1′), 3.90 (1H,dd,J= 12.0, 8.9 Hz, H-6′a), 3.69 (1H, dd,J= 12.0,5.6 Hz, H-6′b), 3.38～3.23 (4H, m, H-2′～5′)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 139.0 (C-4), 129.3(C-1), 129.2 (C-2, 6), 128.7 (C-3, 5), 103.3 (C-1′),78.1 (C-5′), 78.0 (C-3′), 75.1 (C-2′), 71.8 (C-7′), 71.6(C-4′), 62.8 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[17]，故鑒定化合物7 為苯甲醇吡喃葡萄糖苷。

化合物8：白色粉末，ESI-MSm/z: 285 [M＋H]+，分子式為C14H20O6。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ:7.27 (4H, d,J= 4.4 Hz, H-2, 3, 5, 6), 7.19 (1H, m,H-4), 4.32 (1H, d,J= 7.8 Hz, H-1′), 4.11 (1H, m,H-8a), 3.88 (1H, dd,J= 12.4, 1.7 Hz, H-8b), 3.78(1H, m, H-6′a), 3.68 (1H, dd,J= 12.0, 5.2 Hz, H-6′b),3.39～3.17 (4H, m, H-2′～5′), 2.95 (2H, m, H-7)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 140.1 (C-1), 130.0(C-3, 5), 129.3 (C-2, 6), 127.2 (C-4), 104.4 (C-1′),78.1 (C-3′), 78.0 (C-5′), 75.1 (C-2′), 71.7 (C-4′), 71.6(C-8), 62.7 (C-6′), 37.2 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[18]，故鑒定化合物8 為苯乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷，又稱2-苯乙基-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物9：黃色粉末，ESI-MSm/z: 435 [M＋H]+，分子式為C21H22O10。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ:7.33 (2H, d,J= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.84 (2H, d,J= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 6.22 (1H, s, H-8), 6.20 (1H, s, H-6), 5.40(1H, m, H-2), 4.99 (1H, d,J= 6.9 Hz, H-1′′), 3.89(1H, brd,J= 11.9 Hz, H-6′′a), 3.70 (1H, dd,J= 11.9,4.7 Hz, H-6′′b), 3.49～3.34 (4H, m, H-2′′～5′′), 3.18(1H, dd,J= 17.2, 13.0 Hz, H-3a), 2.77 (1H, dd,J=17.2, 3.3 Hz, H-3b)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ:198.6 (C-4), 167.1 (C-7), 165.0 (C-5), 164.6 (C-9),159.1 (C-4′), 130.8 (C-1′), 129.1 (C-2′, 6′), 116.3(C-3′, 5′), 105.0 (C-10), 101.2 (C-1′′), 98.0 (C-6), 96.9(C-8), 80.6 (C-2), 78.3 (C-5′′), 77.8 (C-3′′), 74.6(C-2′′), 71.1 (C-4′′), 62.3 (C-6′′), 44.2 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[19]，故鑒定化合物9 為柚皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物10：黃色油狀物，ESI-MSm/z: 353 [M＋H]+，分子式為 C17H20O8。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δ: 7.61 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-7′), 7.47 (2H,d,J= 8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.82 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-3′,5′), 6.29 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-8′), 5.29 (1H, m, H-5),4.15 (1H, m, H-3), 3.74 (1H, m, H-4), 3.70 (3H, s,7-OCH3), 2.26～1.97 (4H, m, H-2, 6)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 175.4 (C-7), 168.3 (C-9′), 161.6(C-4′), 146.8 (C-7′), 131.2 (C-2′, 6′), 127.0 (C-1′),116.9 (C-3′, 5′), 115.0 (C-8′), 75.9 (C-1), 72.7 (C-4),72.1 (C-5), 70.4 (C-3), 53.0 (7-OCH3), 38.1 (C-2),37.8 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[20]，故鑒定化合物10 為5-O-對(duì)香豆?？崴峒柞?。

化合物11：黃色油狀物，ESI-MSm/z: 369 [M＋H]+，分子式為 C17H20O9。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δ: 7.53 (1H, d,J= 15.9 Hz, H-3′), 7.05 (1H,d,J= 2.0 Hz, H-5′), 6.95 (1H, dd,J= 8.2, 2.0 Hz,H-9′), 6.79 (1H, d,J= 8.2 Hz, H-8′), 6.22 (1H, d,J=15.9 Hz, H-2′), 5.28 (1H, m, H-3), 4.14 (1H, m, H-5),3.74 (1H, m, H-4), 3.70 (3H, s, 7-OCH3), 2.24～1.98(4H, m, H-2, 6)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ:175.4 (C-7), 168.3 (C-1′), 149.7 (C-7′), 147.2 (C-3′),146.9 (C-6′), 127.6 (C-4′), 123.0 (C-9′), 116.5 (C-8′),115.1 (C-5′), 115.0 (C-2′), 75.8 (C-1), 72.6 (C-4), 72.1(C-3), 70.4 (C-5), 53.0 (7-OCH3), 38.0 (C-6), 37.7(C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[20]，故鑒定化合物11 為綠原酸甲酯。

4 α-葡萄糖苷酶抑制作用

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在終濃度為50.0 μmol/L 時(shí)，化合物11 具有弱的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其抑制率為（15.19±2.20）%，其余化合物（1、4、6、7、9、10）的抑制率均小于5.00%。陽性對(duì)照藥槲皮素在終濃度為10.0 μmol/L 時(shí)，抑制率為（56.00±2.46）%。

5 討論

本研究從中華枸杞果實(shí)醋酸乙酯萃取部位中共分離鑒定了11 個(gè)化合物，包括1 個(gè)新的香豆素葡萄糖苷類化合物，2 個(gè)化合物為首次從該屬植物中分離得到，8 個(gè)化合物為首次從該植物中分離得到，并評(píng)價(jià)了其中7 個(gè)化合物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。盡管這7 個(gè)化合物，只有化合物11 表現(xiàn)出了弱的α-葡萄糖苷酶抑制活性，但其余4 個(gè)本次未進(jìn)行活性測(cè)試的化合物中，化合物2、3 和8 的α-葡萄糖苷酶抑制活性已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[21-22]，其中化合物3 對(duì)α-葡萄糖苷酶的IC50為43.7 μg/mL，強(qiáng)于陽性藥阿卡波糖（IC50為183.5 μg/mL），化合物2對(duì)α-葡萄糖苷酶無抑制活性，化合物8 具有弱的抑制活性。從結(jié)構(gòu)上分析，化合物1～3 均為香豆素類化合物，其主要區(qū)別在于化合物3 中C-7 位為羥基取代，而化合物1 和2 中C-7 上的羥基與葡萄糖結(jié)合成苷。結(jié)合以上活性測(cè)試結(jié)果，推測(cè)香豆素母核上的C-7 位羥基對(duì)于α-葡萄糖苷酶抑制活性具有關(guān)鍵作用。此外，從含量上分析，這11 個(gè)化合物中化合物3 在中華枸杞果實(shí)中含量最高，可能是發(fā)揮降糖活性的主要成分。近期，國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)化合物11在胰島素抵抗的HepG2 細(xì)胞模型也進(jìn)行了降糖活性研究，結(jié)果顯示該化合物在濃度20.0 μmol/L 時(shí)可以提高胰島素抵抗模型細(xì)胞的葡萄糖消耗量[23]，結(jié)合本課題組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，從不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜕暇C實(shí)了該化合物的降糖活性。中華枸杞在我國(guó)野生資源極為豐富，具有較大的研究和開發(fā)價(jià)值。本研究豐富了枸杞屬植物的化學(xué)成分結(jié)構(gòu)類型，同時(shí)也為枸杞屬藥用植物資源開發(fā)利用提供了一定的參考價(jià)值。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突