◎ 鄭 敏，黃 強(qiáng)，舒 婷

（江西醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，江西 上饒 334000）

高脂血癥（Hyperlipidemia，HLP）是一種由于體內(nèi)脂類(lèi)代謝異常所引起的代謝性疾病，主要表現(xiàn)為一項(xiàng)或多項(xiàng)生化指標(biāo)異常，如血漿中的總膽固醇（Total Cholesterol，TC）高于正常值上限、甘油三酯（Triglyceride，TG）高于正常值上限、低密度脂蛋白膽固醇水平（Low-Density Lipoprotein Cholesterol，LDL-C）高于正常值上限、高密度脂蛋白膽固醇（High-Density Lipoprotein Cholesterol，HDL-C）水平低于正常值上限等[1]。高脂血癥是目前公認(rèn)的誘發(fā)脂肪肝、動(dòng)脈粥樣硬化以及心腦血管疾病的重要病因[2]。同時(shí)，高脂血癥已成為冠心病發(fā)生最常見(jiàn)的危險(xiǎn)因素之一[3]，是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的殺手[4]。目前，臨床上主要通過(guò)藥物、適當(dāng)運(yùn)動(dòng)以及日常膳食調(diào)控等對(duì)高脂血癥患者進(jìn)行治療，有多種治療高脂血癥的藥物，主要為他汀類(lèi)、貝特類(lèi)等[5]，但這些藥物的長(zhǎng)期使用會(huì)給患者帶來(lái)肝臟毒性、肝功能損傷、藥物劑量依賴(lài)性等許多不良反應(yīng)[6]。因此，選擇來(lái)源豐富且不良反應(yīng)小的天然產(chǎn)物用于治療高脂血癥具有廣闊的市場(chǎng)與優(yōu)勢(shì)。茶是我國(guó)的國(guó)民飲料，也是世界上僅次于水消耗最多的液體。近年來(lái)，茶因其所呈現(xiàn)的降脂功效備受人們的關(guān)注[7]，且其采用沖泡的方式進(jìn)行服用，方便簡(jiǎn)單，深受消費(fèi)者認(rèn)同，因此開(kāi)發(fā)具有降脂保健功效的茶飲具有廣闊的前景[8-10]。

三清山白茶產(chǎn)于世界自然遺產(chǎn)地——三清山，是江西省名牌農(nóng)產(chǎn)品，該茶是一種不可多得的綠茶品種[11]。近年來(lái)，三清山白茶產(chǎn)量大且銷(xiāo)量廣，然其降脂保健功效尚未知。本研究以三清山白茶為實(shí)驗(yàn)材料，基于高脂血癥小鼠模型研究三清山白茶的降脂效果，以期為三清山白茶的功效研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為三清山白茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

C57BL/6 雄性小鼠，6～8 周，25 只，購(gòu)于斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，許可證為SCXK（京）2019-0010。購(gòu)入小鼠后置于SPF 級(jí)動(dòng)物房進(jìn)行分籠飼養(yǎng)，小鼠自由進(jìn)食和自由飲水，動(dòng)物房溫度設(shè)定為20～25 ℃，相對(duì)濕度控制在50%～60%。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d 后測(cè)定各小鼠體重，并按體重進(jìn)行隨機(jī)分組開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

1.2 材料與試劑

三清山白茶，購(gòu)于江西三山實(shí)業(yè)有限公司；非諾貝特，購(gòu)于辰欣藥業(yè)股份有限公司；TC、TG、LDL-C、HDL-C 測(cè)定試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所；普通飼料（Co60 輻照小鼠維持飼料），由斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司提供；高脂飼料（D12079B），由小黍有泰（北京）生物科技有限公司提供。

1.3 儀器與設(shè)備

Allegra 21R 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)BECKMAN）；ML204 型電子天平（梅特勒）；移液槍?zhuān)ǖ聡?guó)Eppendorf）；Infinite M200 Pro Nano 酶標(biāo)儀（TECAN）；MD1000 正置顯微鏡（徠卡顯微系統(tǒng)有限公司）；Multiskan GO全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（賽默飛）；TKD-TSB 組織脫水機(jī)（湖北康強(qiáng)醫(yī)療器械有限公司）；TB-718D 石蠟包埋機(jī)（湖北泰維科技實(shí)業(yè)有限公司）；RM2235 石蠟切片機(jī)（徠卡顯微系統(tǒng)有限公司）；PPTHK-21B 攤片烤片機(jī)（徠克公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 茶樣干粉制備

將三清山白茶粉碎80目，取茶葉與水按1∶10（w/v）的比例置于100 ℃沸水中浸提30 min，浸提結(jié)束后過(guò)濾減壓濃縮。一次浸提結(jié)束后將茶渣按照相同的方法再提取一次，將兩次濾液混合置于-80 ℃下預(yù)冷12 h 后真空干燥30 h，收集干粉并貯存于-20 ℃冰箱，備用[11]。

1.4.2 動(dòng)物模型構(gòu)建及分組給藥

25 只C57BL/6 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d 后，稱(chēng)量小鼠體重并根據(jù)體重隨機(jī)分為空白對(duì)照組、高脂模型組、三清山白茶低劑量組、三清山白茶高劑量組和陽(yáng)性藥物（非諾貝特）組共5 組，每組5 只小鼠。空白對(duì)照組采用普通飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，其他組均采用高脂飼料進(jìn)行喂養(yǎng)。陽(yáng)性藥物組和三清山白茶低劑量組的給藥劑量根據(jù)人的等效劑量換算所得，三清山白茶高劑量組給藥劑量為低劑量組的4 倍，空白對(duì)照組和高脂模型組則采用等量蒸餾水進(jìn)行灌胃。各組小鼠灌胃的藥物及給藥劑量如表1 所示，每次小鼠的灌胃量均按0.01 mL·g-1計(jì)算得到，各小鼠每天進(jìn)行一次灌胃，連續(xù)灌胃35 d，各小鼠每周稱(chēng)重2 次，記錄小鼠體重變化情況[12]。

表1 小鼠灌胃藥物名稱(chēng)及相應(yīng)給藥劑量表

1.4.3 血液生化指標(biāo)的測(cè)定

末次給藥后，所有小鼠禁食10 h，采用異戊巴比妥鈉進(jìn)行腹腔注射麻醉，經(jīng)動(dòng)脈取血。血液樣本分兩部分，一部分制備得到小鼠血漿，用于檢測(cè)LDL-C和HDL-C，另一部分離心分離制備得到小鼠血清，用于檢測(cè)TC 和TG，測(cè)定均嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。根據(jù)測(cè)定得到的TC、HDL-C 濃度計(jì)算各小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)（Atherosclerosis Index，AI）值，計(jì)算公式為

式中：c(TC) 為總膽固醇的濃度，mmol·L-1；c(HDL-C)為高密度脂蛋白的濃度，mmol·L-1。

1.4.4 小鼠肝臟病理切片制備

采血后的小鼠，解剖分離得到肝臟組織，在中性福爾馬林溶液中固定48 h，流水狀態(tài)下沖洗1 h，脫水，石蠟包埋并切片。切片經(jīng)HE 染色后，顯微鏡下觀察并拍照。

1.4.5 數(shù)據(jù)處理與分析

采用Excel 2016 和SPSS 分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)算數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組的樣本數(shù)為5（n=5）。

2 結(jié)果與分析

2.1 三清山白茶對(duì)小鼠體重的影響

肥胖可引起高脂血癥的發(fā)生，隨著人體肥胖程度的增加，高脂血癥的發(fā)生率呈明顯上升趨勢(shì)，且高脂血癥容易誘發(fā)心血管疾病的發(fā)生[13]。因此，控制體重是降低高脂血癥發(fā)生率的重要手段。由表2 可知，高脂模型組小鼠體重隨著喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐步上升，且明顯高于空白對(duì)照組，說(shuō)明此次小鼠的高脂模型建模成功。另外，第4 周開(kāi)始，低劑量組、高劑量組、陽(yáng)性藥物組的小鼠體重均比高脂模型組低，尤其是高劑量組小鼠體重明顯下降，說(shuō)明高劑量三清山白茶飼養(yǎng)對(duì)小鼠的體重有較好的控制作用。另外，低劑量和高劑量三清山白茶飼養(yǎng)對(duì)小鼠體重的控制效果均優(yōu)于陽(yáng)性藥組。

表2 三清山白茶對(duì)小鼠體重的影響表

2.2 三清山白茶對(duì)小鼠血液生化指標(biāo)的影響

由表3 可知，高脂模型組小鼠的血液TC、TG、LDL-C 含量與空白對(duì)照組比較分別增加了25.41%、124.10%、75.89%，而HDL-C 含量降低了50.00%。說(shuō)明經(jīng)過(guò)高脂飼料喂養(yǎng)后，小鼠血液TC、TG、LDL-C 指標(biāo)明顯升高，HDL-C 指標(biāo)明顯降低，再次驗(yàn)證本次高脂血癥小鼠造模成功。與高脂模型組對(duì)比，三清山白茶和陽(yáng)性藥物組的小鼠血清中TC、TG、LDL-C 含量均降低，HDL-C 含量均升高，說(shuō)明三清山白茶和陽(yáng)性藥物都能夠改善高脂模型小鼠的血脂水平。

表3 各組小鼠的血液生化指標(biāo)水平表 單位：mmol·L-1

與高脂模型組對(duì)比，三清山白茶高劑量組小鼠血清中TC、TG、LDL-C 的含量分別降低了30.67%、35.48%、40.10%，HDL-C 含量增加了88.07%，說(shuō)明高劑量組對(duì)小鼠血液生化指標(biāo)的改善效果優(yōu)于陽(yáng)性藥物組。與高脂模型組對(duì)比，三清山白茶低劑量組小鼠血清中TC、TG、LDL-C 的含量也有明顯降低，HDL-C 的含量也有所增加，只是改善的效果不如陽(yáng)性藥物。因此，可以得出三清山白茶高劑量喂養(yǎng)對(duì)高脂血癥小鼠血脂有明顯改善且效果優(yōu)于陽(yáng)性藥物非諾貝特的結(jié)論。

2.3 三清山白茶對(duì)小鼠AI 的影響

由圖1 可知，高脂模型組小鼠的AI 指數(shù)高于空白對(duì)照組，再次驗(yàn)證本次實(shí)驗(yàn)高脂血癥小鼠造模成功。另外，相較于高脂模型組的AI，經(jīng)陽(yáng)性藥物、三清山白茶喂養(yǎng)后的各組小鼠的AI 明顯更低；而與陽(yáng)性藥物相比，高劑量組AI 的降低效果更好。由此說(shuō)明三清山白茶高劑量組對(duì)高脂血癥小鼠動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生率具有較好的防治效果。

圖1 三清山白茶對(duì)小鼠AI 的影響圖

2.4 三清山白茶對(duì)小鼠肝組織形態(tài)的影響

小鼠肝組織HE 染色鏡檢結(jié)果如圖2 所示?？瞻讓?duì)照組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞核清晰可見(jiàn)，細(xì)胞排列整齊且結(jié)構(gòu)清晰，幾乎沒(méi)有脂肪沉積。高脂模型組肝組織脂肪明顯可見(jiàn)，肝組織結(jié)構(gòu)異常，肝細(xì)胞有明顯的脂滴蓄積并伴有腫脹現(xiàn)象，細(xì)胞核在細(xì)胞的中間位置，細(xì)胞質(zhì)呈氣球樣狀態(tài)。與高脂模型組對(duì)比，灌胃低、高劑量三清山白茶及陽(yáng)性藥后，小鼠肝細(xì)胞損傷有不同程度的改善，其中高劑量組的改善情況優(yōu)于低劑量組和陽(yáng)性藥組，高劑量組小鼠肝細(xì)胞變性及腫脹程度明顯降低，肝細(xì)胞恢復(fù)情況較好，脂滴蓄積明顯減少。以上結(jié)果進(jìn)一步表明三清山白茶能改善高脂血癥小鼠的肝臟病變，有效減少小鼠肝臟脂肪堆積、促進(jìn)肝細(xì)胞恢復(fù)。

圖2 小鼠肝臟組織病理形態(tài)變化圖（200×）

3 結(jié)論

通過(guò)建立高脂血癥小鼠模型，研究了三清山白茶的降脂效果。研究結(jié)果表明，對(duì)小鼠喂養(yǎng)高脂飲食后，血清中TG、TC、LDL-C 濃度明顯提高，HDL-C 濃度明顯降低，通過(guò)計(jì)算發(fā)現(xiàn)AI 明顯升高，說(shuō)明高脂血癥小鼠建模成功。通過(guò)低劑量組、高劑量組三清山白茶對(duì)小鼠進(jìn)行干預(yù)性飼養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)三清山白茶可以降低高脂血癥小鼠血清中TG、TC、LDL-C 的含量，提高小鼠血清中HDL-C 的含量，改善肝損傷。特別是三清山白茶高劑量組，其對(duì)高脂血癥小鼠的降脂效果和改善肝損傷效果遠(yuǎn)優(yōu)于陽(yáng)性藥非諾貝特。

綜上所述，三清山白茶可在一定程度上改善高脂飲食所引起的高脂血癥。本研究結(jié)論可為三清山白茶降脂機(jī)制的進(jìn)一步研究、三清山白茶的功效研究提供有價(jià)值的參考信息，也為三清山白茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供技術(shù)支撐。