張萬(wàn)林,李一村,楊宏宇,

(1.遵義醫(yī)科大學(xué) 口腔醫(yī)學(xué)院,貴州 遵義 563099;2.北京大學(xué)深圳醫(yī)院 口腔醫(yī)學(xué)中心,口腔頜面外科,廣東 深圳 518036)

口腔鱗狀細(xì)胞癌(簡(jiǎn)稱口腔鱗癌)是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,占口腔部位惡性腫瘤病例的90%以上[1]。口腔鱗癌是一種對(duì)人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅的疾病。據(jù)2020年全球185個(gè)國(guó)家的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù),每年口腔癌的發(fā)病數(shù)量超過(guò)37萬(wàn)例,死亡人數(shù)超過(guò)17萬(wàn)例,嚴(yán)重威脅了人類的健康[2]。多數(shù)口腔鱗癌患者在初診時(shí)已經(jīng)進(jìn)展到中晚期,手術(shù)切除配合放射治療和化學(xué)治療是主要的治療方式[3]。目前,以順鉑為基礎(chǔ)的化療方案是臨床上的首選治療策略,在多數(shù)患者中可見(jiàn)到較為顯著的治療效果[4]。然而,部分患者表現(xiàn)出對(duì)順鉑化療的耐藥性,這成為了嚴(yán)重影響患者5年生存率的關(guān)鍵因素[5]。因此,研究和克服順鉑相關(guān)的化療耐藥性,已成為口腔鱗癌治療領(lǐng)域中迫切需要解決的問(wèn)題。順鉑耐藥機(jī)制涉及復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程,如DNA損傷及修復(fù)、上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、藥物代謝以及細(xì)胞凋亡途徑的改變等[6]。目前口腔鱗癌細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥的具體分子機(jī)制尚未完全闡明。

RNA-Seq技術(shù),作為近年來(lái)高通量測(cè)序技術(shù)的主要代表,能夠在較短時(shí)間內(nèi)全面檢測(cè)和量化組織或細(xì)胞中數(shù)以萬(wàn)計(jì)的基因表達(dá)水平,進(jìn)而深入解析藥物作用引起的組織或細(xì)胞表型及其功能變化[7]。本研究利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)結(jié)合生物信息學(xué)分析,挖掘與順鉑抗藥性密切相關(guān)的候選基因及其潛在信號(hào)傳導(dǎo)途徑,旨在為口腔鱗狀細(xì)胞癌的抗藥性機(jī)理研究提供新的視角和策略。

1 資料與方法

1.1 構(gòu)建耐藥細(xì)胞模型 如圖1所示,從野生型(Wild type)口腔鱗癌細(xì)胞系HN6-WT(獲贈(zèng)于北京大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院)出發(fā),實(shí)驗(yàn)組以低濃度(1 μmol/L)順鉑進(jìn)行處理。與此同時(shí),對(duì)照組加入等量的順鉑溶劑(無(wú)菌水)。每日監(jiān)測(cè)兩組細(xì)胞狀態(tài),分別每3 d更換1次培養(yǎng)基。在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間點(diǎn)進(jìn)行細(xì)胞傳代,以進(jìn)入下一階段培養(yǎng)。隨后,將實(shí)驗(yàn)組的順鉑濃度升至1.5 μmol/L進(jìn)行處理,每天觀察細(xì)胞狀態(tài),于適當(dāng)時(shí)間去除順鉑后,每3 d更換1次培養(yǎng)基。這一過(guò)程持續(xù)14 d。隨后,依此類推,逐步提高順鉑濃度,直至達(dá)到4 μmol/L。在此期間,對(duì)照組同步處理及傳代后標(biāo)記為HN6-WT_Control。在擴(kuò)大培養(yǎng)后,將兩組細(xì)胞凍存于-80 ℃以進(jìn)行保種。

圖1 口腔鱗癌耐藥細(xì)胞系模型的構(gòu)建過(guò)程示意

1.2 耐藥細(xì)胞模型的鑒定 使用96孔板每孔接種5 000個(gè)對(duì)照組HN6-WT_Control細(xì)胞。與此同時(shí),使用96孔板每孔接種5 000個(gè)在方法1.1中誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)組HN6-R細(xì)胞。二者在孵育12 h使細(xì)胞貼壁后,用梯度藥物濃度的順鉑處理細(xì)胞。放培養(yǎng)箱(37℃,5%CO2)孵育24 h和48 h后,加入10% Cell Counting Kit-8(CCK8)溶液,再孵育2 h。使用酶標(biāo)儀微孔板讀取器在450 nm處測(cè)量光密度值(OD值),使用軟件GraphPad Prism 8.0.2分別計(jì)算IC50。為評(píng)估在順鉑誘導(dǎo)前后細(xì)胞耐藥性的動(dòng)態(tài)變化,本研究采納了t檢驗(yàn)以進(jìn)行精確的統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)于2個(gè)細(xì)胞群體,即HN6-WT_Control(非順鉑耐藥型)和HN6-R(順鉑耐藥型),計(jì)算了其平均細(xì)胞存活率,并運(yùn)用t檢驗(yàn)對(duì)這兩群體之間的潛在差異進(jìn)行比較。在設(shè)定顯著性水平為0.05的前提下,將基于t檢驗(yàn)結(jié)果,以P<0.05的閾值為依據(jù),判定HN6-R在順鉑敏感性上是否發(fā)生了顯著變化。

1.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-Seq) 分別選取液氮罐凍存的順鉑耐藥細(xì)胞3例,非順鉑耐藥細(xì)胞3例,放入干冰箱內(nèi)寄于杭州聯(lián)川生物技術(shù)股份有限公司進(jìn)行RNA提取及轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析。

1.4 差異表達(dá)基因的篩選 利用DESeq軟件對(duì)各個(gè)樣本基因的counts數(shù)目進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理后,計(jì)算基因表達(dá)的差異(log2FC),并對(duì)差異進(jìn)行顯著性檢驗(yàn),選取|log2FC|>1,adjustedPvalue<0.05的基因作為表達(dá)具有顯著差異的基因。利用軟件GraphPad Prism 8.0.2作圖,其中l(wèi)og2FC>1的為表達(dá)上調(diào)基因,log2FC<-1的為表達(dá)下調(diào)基因。

1.5 使用GSEA軟件對(duì)差異基因作用的信號(hào)通路富集分析 通過(guò)Gene Set Enrichment Analysis(GSEA)軟件(4.2.3版)富集RNA-Seq檢測(cè)獲得的基因表達(dá)數(shù)據(jù),參考基因集使用分子特征數(shù)據(jù)庫(kù)(MSigDB)中的50個(gè)標(biāo)志性基因集(h.all.v2023.2.Hs.symbols.gmt)作為對(duì)照基因集,置換檢驗(yàn)的置換次數(shù)被設(shè)定為1 000次,P<0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.6 關(guān)鍵差異基因表達(dá)的驗(yàn)證 收集HN6-WT_Control和HN6-R兩組細(xì)胞后置于冰上,加入TRIzol裂解液冰上靜止裂解細(xì)胞,提取細(xì)胞總RNA,反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄為cDNA,以cDNA為模板進(jìn)行qRT-PCR,反應(yīng)體系為20 μL：ChamQ SYBR qPCR Master Mix(Without ROX) 10 μl,cDNA 1 μL,上下游引物各0.4 μL,DEPC水8.2 μL;反應(yīng)程序?yàn)?5 ℃ 30 s;95 ℃ 10 s;60 ℃ 30 s,循環(huán)40次;引物序列見(jiàn)表1。

表1 各目的基因的引物序列

2 結(jié)果

2.1 耐藥模型的構(gòu)建 通過(guò)使用藥物濃度遞增法逐步誘導(dǎo)使口腔鱗癌細(xì)胞系HN6-WT對(duì)順鉑耐藥性增加,從而建立起順鉑耐藥細(xì)胞系模型。如圖2所示,利用CCK8實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)非耐藥細(xì)胞(HN6-WT_Control)與順鉑耐藥細(xì)胞(HN6-R),不同濃度(0～10 μmol/L)順鉑處理24 h與48 h的細(xì)胞活性,并依次計(jì)算IC50值。結(jié)果顯示順鉑處理24 h時(shí)HN6-WT_Control的IC50為8.951 μmol/L,而HN6-R的IC50為19.17 μmol/L。順鉑處理兩組細(xì)胞48 h時(shí),HN6-WT_Control的IC50為0.143 μmol/L,HN6-R的IC50為2.133 μmol/L。在2個(gè)順鉑處理時(shí)間點(diǎn),HN6-R的IC50都顯著高于HN6-WT_Control。并且,如圖3A所示HN6-WT_Control與HN6-R在不同濃度的順鉑處理24 h時(shí)呈現(xiàn)的細(xì)胞存活率結(jié)果,其中在2、4、6、8 μmol/L的順鉑處理24 h時(shí)兩組細(xì)胞存活率存在明顯差異(P<0.05),加入順鉑48 h后兩組細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)設(shè)置的所有濃度(0.4、2、3、6、10 μmol/L)藥物作用上均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(圖3B)?？梢缘贸鯤N6-R相比HN6-WT_Control對(duì)順鉑更加不敏感。以上結(jié)果說(shuō)明HN6-R的順鉑耐藥性顯著高于HN6-WT_Control,口腔鱗癌順鉑耐藥細(xì)胞株已經(jīng)成功建立(圖4)。

圖2 順鉑耐藥細(xì)胞與非順鉑耐藥細(xì)胞24 h與48 h測(cè)定的IC50

圖3 順鉑耐藥細(xì)胞與非順鉑耐藥細(xì)胞24 h與48 h細(xì)胞存活率差異對(duì)比

圖4 光鏡下非順鉑耐藥細(xì)胞與順鉑耐藥細(xì)胞形態(tài)學(xué)對(duì)比

2.2 通過(guò)RNA-Seq測(cè)序分析耐藥細(xì)胞與非耐藥細(xì)胞間差異基因 為了深入探究順鉑耐藥的口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系與非耐藥細(xì)胞系之間的基因表達(dá)差異,本研究分別對(duì)耐藥株和非耐藥株進(jìn)行了RNA測(cè)序(RNA-Seq)分析,每個(gè)條件下設(shè)立了3個(gè)生物學(xué)重復(fù)實(shí)驗(yàn),以確保結(jié)果的可靠性和重現(xiàn)性。通過(guò)高通量的RNA-Seq數(shù)據(jù),運(yùn)用生物信息學(xué)工具和算法進(jìn)行了綜合分析,設(shè)定對(duì)數(shù)比值(log2FC)的絕對(duì)值大于1且矯正P值(adjustedPvalue)小于0.05作為顯著性差異表達(dá)基因的篩選標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)過(guò)篩選,識(shí)別出216個(gè)差異表達(dá)基因。在這些基因中,有55個(gè)基因的表達(dá)在耐藥株中顯著下調(diào),而161個(gè)基因的表達(dá)則上調(diào)(圖5)。

圖5 差異表達(dá)基因火山圖

2.3 GSEA富集分析 為了確定在順鉑耐藥細(xì)胞與非順鉑耐藥細(xì)胞之間激活信號(hào)通路的差異,本研究采用基因集富集分析(GSEA)軟件進(jìn)行了系統(tǒng)的分析。通過(guò)計(jì)算各信號(hào)通路的富集分?jǐn)?shù)(Enrichment Score, ES)并進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化,對(duì)激活的信號(hào)通路進(jìn)行了排序。在非耐藥細(xì)胞群中,識(shí)別出20條顯著激活的信號(hào)通路(P<0.05)。其中排名前五分別為PI3K-AKT-mTOR信號(hào)通路、刺猬信號(hào)通路、氧化磷酸化通路、活性氧通路和MYC目標(biāo)基因集合V1(圖6A)。而在順鉑耐藥細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)同樣有20條信號(hào)通路被激活,其中最為顯著的五條信號(hào)通路為：IL6/JAK2/STAT3信號(hào)通路、TNF-α和NF-κB信號(hào)通路、低氧通路、干擾素-γ應(yīng)答和干擾素-α應(yīng)答信號(hào)通路等(圖6B)。本研究特別關(guān)注那些在順鉑耐藥細(xì)胞中顯著激活的信號(hào)通路,這些通路在多種生物學(xué)過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色,包括調(diào)控炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞生長(zhǎng)與死亡、巨噬細(xì)胞與自然殺傷細(xì)胞的活化(如干擾素-γ和α)以及細(xì)胞對(duì)低氧環(huán)境的適應(yīng)性反應(yīng)。這些結(jié)果指示了耐藥與非耐藥細(xì)胞在信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)上存在根本性的差異,為后續(xù)針對(duì)耐藥機(jī)制的研究提供了重要的生物學(xué)信息。

A：非順鉑耐藥細(xì)胞HALLMARK富集Top20信號(hào)通路;B：順鉑耐藥細(xì)胞HALLMARK富集Top20信號(hào)通路。圖6 非順鉑耐藥細(xì)胞和順鉑耐藥細(xì)胞HALLMARK富集通路

2.4 信號(hào)通路中差異基因的表達(dá) 在順鉑耐藥細(xì)胞中,發(fā)現(xiàn)了5個(gè)主要的信號(hào)通路,它們分別是IL6/JAK2/STAT3信號(hào)通路、TNF-α和NF-κB信號(hào)通路、低氧通路、干擾素-γ應(yīng)答和干擾素-α的應(yīng)答信號(hào)通路。在這5個(gè)信號(hào)通路中,進(jìn)一步篩選出了前20個(gè)差異基因進(jìn)行展示。圖7展示了這些差異基因在各個(gè)信號(hào)通路中的分布情況。在篩選出的前20個(gè)差異基因中,發(fā)現(xiàn)CXCL10和CXCL11基因在多個(gè)信號(hào)通路中均起著關(guān)鍵基因的作用。這些信號(hào)通路包括IL6/JAK2/STAT3信號(hào)通路、TNF-α和NF-κB信號(hào)通路、干擾素-γ應(yīng)答和干擾素-α的應(yīng)答信號(hào)通路。此外,CXCL10和CXCL11基因在其中4個(gè)信號(hào)通路中的富集程度均排名前5(圖8)。這些結(jié)果表明,CXCL10和CXCL11基因可能在口腔鱗癌細(xì)胞順鉑耐藥機(jī)制中扮演著重要的角色。另外,還發(fā)現(xiàn)了一些其他基因在特定的信號(hào)通路中扮演了關(guān)鍵的耐藥作用。例如,CXCL9、CXCL1和CSF2基因在IL6/JAK2/STAT3信號(hào)通路中起重要作用(圖8A);NR4A3、EGR3和CXCL1在TNF-α和NF-κB信號(hào)通路中起關(guān)鍵作用(圖8B);CXCL9、CFB和DDX60在干擾素-γ應(yīng)答與腫瘤細(xì)胞耐藥中起調(diào)控作用(圖8C);與低氧相關(guān)的基因IGFBP3、MT1E、LOX、INHA和ATF3也參與了順鉑耐藥的機(jī)制(圖8D);基因DDX60、IFIT2和OASL調(diào)控了干擾素-α的應(yīng)答信號(hào)通路與順鉑耐藥的相關(guān)性(圖8E)。

2.5 關(guān)鍵差異基因的mRNA表達(dá)體外驗(yàn)證 為了驗(yàn)證RNA-Seq結(jié)果,本研究對(duì)上述信號(hào)通路中篩選的關(guān)鍵差異表達(dá)基因進(jìn)行了體外驗(yàn)證。采用了qRT-PCR方法在HN6-WT_Control和HN6-R兩組細(xì)胞中分別驗(yàn)證了CXCL10、CXCL11、NR4A3和IGFBP3關(guān)鍵基因的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,在HN6-R細(xì)胞系中,CXCL10、CXCL11、NR4A3和IGFBP3基因的表達(dá)較高,且兩組之間的表達(dá)情況具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),與測(cè)序數(shù)據(jù)的趨勢(shì)一致(圖9)。

A ：HN6-WT_Control和HN6-R中CXCL10的mRNA表達(dá)量比較;B：HN6-WT_Control和HN6-R中CXCL11的mRNA表達(dá)量比較;C：HN6-WT_Control和HN6-R中NR4A3的mRNA表達(dá)量比較;D：HN6-WT_Control和HN6-R中IGFBP3的mRNA表達(dá)量比較;*：P<0.0001;#：P<0.0001。圖9 關(guān)鍵差異基因的mRNA表達(dá)

3 討論

本課題組成功建立了口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系HN6的耐藥株,并應(yīng)用轉(zhuǎn)錄組學(xué)高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)其基因表達(dá)譜進(jìn)行了詳細(xì)分析,以辨識(shí)和比較與藥物耐藥性相關(guān)的基因表達(dá)模式。經(jīng)測(cè)序分析,與非耐藥株相比,耐藥株中廣泛的基因表達(dá)發(fā)生了變化。推斷這些差異表達(dá)的基因可能與順鉑耐藥有關(guān),并且基因表達(dá)的變化揭示了耐藥株的耐藥機(jī)制。對(duì)表達(dá)差異的基因進(jìn)行富集分析,發(fā)現(xiàn)與順鉑耐藥相關(guān)的信號(hào)通路,包括IL6/JAK2/STAT3信號(hào)通路、TNF-α和NF-κB信號(hào)通路、低氧通路、干擾素-γ應(yīng)答和干擾素-α的應(yīng)答信號(hào)通路。這些信號(hào)通路涉及的關(guān)鍵差異基因有CXCL10、CXCL9、CXCL11、CXCL1、CSF2、NR4A3、EGR3、CFB、IGFBP3、MT1E、LOX、INHA、ATF3、DDX60、IFIT2、OASL等。其中,CXCL10、CXCL11在其中4條通路都起關(guān)鍵作用,CXCL10、NR4A3和IGFBP3是5條通路中排名指標(biāo)分?jǐn)?shù)位居第一。因此,將CXCL10、CXCL11、NR4A3和IGFBP3基因作為本研究的關(guān)鍵耐藥基因進(jìn)行探討。

CXCL10和CXCL11屬于C-X-C趨化因子家族,是一類趨化蛋白(chemokines),主要由免疫細(xì)胞如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及非免疫細(xì)胞如內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生。它們通過(guò)結(jié)合CXCR3受體,該受體廣泛表達(dá)在免疫細(xì)胞上,包括T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等,引導(dǎo)免疫細(xì)胞向炎癥和感染區(qū)域遷移,參與免疫應(yīng)答、抗病毒免疫等生理過(guò)程。在與CXCR3結(jié)合后,CXCL10和CXCL11可能誘導(dǎo)免疫細(xì)胞遷移到炎癥部位,發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)的效應(yīng)[8]。在腫瘤微環(huán)境中,CXCL10和CXCL11基因主要調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞活動(dòng),同時(shí)在腫瘤微環(huán)境中引發(fā)炎癥反應(yīng)[9-10]。在腫瘤微環(huán)境中的作用方面,它們的表達(dá)水平可能隨免疫細(xì)胞浸潤(rùn)而變化,這與腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性可能存在關(guān)聯(lián)[11]。這是因?yàn)槊庖呒?xì)胞的存在可能改變腫瘤微環(huán)境,從而影響順鉑化療的效果。這一調(diào)控過(guò)程可能與腫瘤對(duì)順鉑等治療的反應(yīng)有關(guān),但具體的機(jī)制仍需要深入研究。此前,已有研究證明CXCL9、CXCL10、CXCL11/CXCR3 軸調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞遷移、分化和激活,從而抑制腫瘤(旁分泌軸)。并討論了它們?cè)诎┌Y治療中的潛在作用。該軸通過(guò)自分泌軸誘導(dǎo)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[9]。臨床前研究將軸定義為癌癥治療的一個(gè)有希望的目標(biāo)。頭頸鱗狀細(xì)胞癌已被證明表達(dá)多種趨化因子及其受體,這可能會(huì)促進(jìn)化療耐藥性[12]。在 mRNA 水平上,大多數(shù)頭頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系表達(dá)CCL5、CCL20、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL10和CXCL11[13]。這與本文分析的結(jié)果相符合。另有研究表明TR3 調(diào)節(jié)卵巢癌的鉑耐藥性[14],其中TR3(也稱Nur77)是一種核孤兒受體,是NR4A1編碼的立早基因產(chǎn)物,屬于類固醇/甲狀腺受體視黃酸受體超家族成員[15]。TR3廣泛參與各種生命活動(dòng)過(guò)程,如細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡和自噬等調(diào)控被認(rèn)為是良好的抗腫瘤藥物設(shè)計(jì)靶標(biāo)[16]。NR4A家族包含3個(gè)成員： TR3(NR4A1)、Nurr1(NR4A2)和Nor-1(NR4A3)[17],據(jù)此猜測(cè)NR4A3在腫瘤順鉑耐藥方面也扮演一個(gè)重要角色。NR4A3,即核受體亞家族4A成員3,是核受體超家族的一員,其編碼的核受體蛋白參與多個(gè)細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程,包括細(xì)胞凋亡、分化和代謝的調(diào)控。NR4A3的表達(dá)廣泛分布于多種組織和細(xì)胞類型,其受體活性受到內(nèi)外部刺激的調(diào)節(jié)。在細(xì)胞內(nèi),NR4A3通過(guò)與核激活子結(jié)合,參與調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄,影響細(xì)胞的生理狀態(tài)[18]。NR4A3不僅涉及到細(xì)胞生存和凋亡的調(diào)節(jié),其可能作為介導(dǎo)者參與細(xì)胞對(duì)順鉑引起的DNA損傷作出的應(yīng)答,由此影響細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。有文獻(xiàn)報(bào)道表明,NR4A3可能通過(guò)調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄活性,對(duì)DNA修復(fù)途徑相關(guān)的生物學(xué)過(guò)程施加調(diào)控影響[19]。IGFBP3是胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白家族的一種,與細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡調(diào)控有關(guān)[20]。主要功能是結(jié)合和調(diào)節(jié)胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)的生物活性。IGFBP3的表達(dá)受到多種生長(zhǎng)因子和激素的調(diào)控,其受體活性直接影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡和代謝。在細(xì)胞膜表面,IGFBP3通過(guò)與其受體結(jié)合,調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)IGF的響應(yīng),從而影響細(xì)胞生物學(xué)功能。有研究表明IGFBP3可能調(diào)控細(xì)胞周期,影響細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性[21-22]。另有研究報(bào)道IGFBP3的過(guò)度表達(dá)與OSCC患者的腫瘤大小增加和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),表明IGFBP3可能增強(qiáng)口腔鱗癌的惡性程度[23-24]。這提示IGFBP3可能在口腔鱗癌順鉑化療耐藥機(jī)制中也可能存在一定作用。

在順鉑耐藥信號(hào)通路中,已有研究表明β-欖香烯通過(guò)體內(nèi)外抑制JAK2/STAT3 通路減輕口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的順鉑耐藥[25],這與本文的研究結(jié)果相一致。TNF-α 通過(guò) NF-Kappa B通路促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌的侵襲和轉(zhuǎn)移[26],間接說(shuō)明該通路可能參與順鉑耐藥的分子生物學(xué)過(guò)程。腫瘤微環(huán)境由腫瘤細(xì)胞本身、多種基質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)組成,通常以缺氧和免疫抑制為特征[27-29],缺氧與腫瘤細(xì)胞順鉑耐藥的關(guān)系還有待研究。干擾素-γ應(yīng)答和干擾素-α的應(yīng)答信號(hào)通路不僅可以抑制腫瘤發(fā)展,還具有促進(jìn)腫瘤的分子機(jī)制[30],但是其具體機(jī)制尚不清楚,未來(lái)可以通過(guò)設(shè)計(jì)干擾該通路來(lái)實(shí)現(xiàn)耐藥機(jī)制的改變。

綜上所述,以CXCL10、CXCL11、NR4A3和IGFBP3基因?yàn)樾掳悬c(diǎn)降低口腔癌耐藥具有廣泛的研究前景。這些發(fā)現(xiàn)提供了更深入的口腔鱗癌細(xì)胞的順鉑耐藥機(jī)制,并可能為未來(lái)的治療提供新的靶點(diǎn)。然而,仍需要進(jìn)行更多的研究來(lái)驗(yàn)證這些發(fā)現(xiàn),并確定這些基因在順鉑耐藥機(jī)制中的具體作用。以便更好地理解耐藥發(fā)生的生物過(guò)程,并尋找潛在的逆轉(zhuǎn)耐藥的治療靶點(diǎn)。