祁曉玲,張 煒,楊鳳梅

青海省藥品檢驗(yàn)檢測院，青海省中藏藥現(xiàn)代化研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國家藥品監(jiān)督管理局中藥（藏藥）質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，西寧810016

六味能消制劑分為丸劑、膠囊劑、片劑3 種劑型。其處方由藏木香、干姜、訶子、大黃、寒水石、堿花6 味藥材組成。其主要功效為助消化、消腫、理氣和胃，用于食物中毒癥、積食不化、胃痛、胸腹腫脹、大便干燥的治療，還可用于高脂血癥及肥胖癥的治療。大黃為該處方中重要的藥味之一，收載于《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）2020年版一部，為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatumL.、唐古特大黃Rheum tanguticumMaxim. ex Balf. 或藥用大黃Rheum officinaleBaill. 的干燥根和根莖；具有瀉下攻積、清熱瀉火、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)、利濕退黃的功效［1］。近年來，大黃藥材資源無法滿足日益增長的市場需求，使得市場中出現(xiàn)用同屬不同種其他植物的根部冒充大黃的現(xiàn)象，存在非藥用大黃代替大黃投料的情況，如藏邊大黃、河套大黃、華北大黃、天山大黃、信州大黃、土大黃等，這些品種《中國藥典》未收藏，不可作為大黃藥用。偽品大黃來源廣、價(jià)格低，雖與大黃為同科植物，但其含土大黃苷，結(jié)構(gòu)為二苯乙烯苷類，幾乎無瀉下作用，甚至?xí)l(fā)不良反應(yīng)，故不可代替大黃藥用［2］。為了全面評(píng)價(jià)六味能消丸（膠囊、片）的產(chǎn)品質(zhì)量和現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的可行性，警示六味能消丸（膠囊、片）存在的安全風(fēng)險(xiǎn)，本研究建立了用薄層色譜法（ thin layer chromatography，TLC）、高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）對(duì)六味能消制劑中土大黃苷成分進(jìn)行初篩及用高效液相色譜法-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS）對(duì)檢出土大黃苷的陽性樣品進(jìn)行進(jìn)一步確證的方法［3-7］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Ultimate3000-TSQ Quantum Ultra 型液質(zhì)聯(lián)用儀（三重四極桿，美國THERMO 公司）；島津LC-20ATVP 型高效液相色譜儀（二極管陣列檢測器，日本島津公司）；SQP 型百分之一電子天平、SQP 型萬分之一電子天平、MSA225-1CE-DI 型十萬分之一電子天平（德國Sartrious 公司）；DT-1028-CH 型超聲波提取器（ 德國 BANDELIN 公司）；LINOMAT 5 型半自動(dòng)點(diǎn)樣儀、TLC VISUALIZER薄層數(shù)碼成像儀（瑞士卡瑪公司）；硅膠G 板（德國默克公司）。

1.2 試藥

土大黃苷對(duì)照品（批號(hào)110794-201909，中國食品藥品檢定研究院，供檢查用，批號(hào)R05J9F65074，HPLC 測定質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，上海源葉生物科技有限公司）；甲醇、乙腈為色譜純，均購自德國默克公司；水為超純水（用Milli-Q 超純水機(jī)自制）；其他試劑均為分析純。六味能消丸（膠囊、片）均為市售樣品，涉及4 家企業(yè)，共101 批次。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC 法初步篩查

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取土大黃苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL 含0.2 mg 土大黃苷的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率為300 W，頻率為35 kHz）40 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取濾液5 mL 備用，其余濾液揮干，殘?jiān)蛹状? mL 使溶解，作為供試品溶液。

2.1.3 對(duì)照藥材溶液的制備 取大黃對(duì)照藥材0.5 g，按照2.1.2 項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。

2.1.4 陰性對(duì)照溶液的制備 取原料藥材，按處方制得缺大黃的六味能消丸（膠囊、片）陰性樣品。取1 g，按照2.1.2 項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成大黃陰性溶液。

2.1.5 模擬制劑溶液的制備 取原料藥材，按處方、工藝制得六味能消丸（膠囊、片）模擬制劑樣品。取1 g，按照2.1.2 項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成模擬制劑溶液。

2.1.6 色譜條件及結(jié)果 吸取上述制備的供試品溶液、陰性對(duì)照溶液、模擬制劑溶液、大黃藥材溶液、土大黃苷對(duì)照品溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-甲酸-水（10∶3.5∶0.2∶0.3）為展開劑，展開，取出，晾干，置于紫外光燈365 nm 處檢視。用以上方法檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，A 企業(yè)生產(chǎn)的共13 個(gè)批次六味能消丸中有12 個(gè)批次樣品在與土大黃苷對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上檢出相應(yīng)的斑點(diǎn)。其余3 個(gè)企業(yè)的六味能消丸（膠囊、片）中均未檢出土大黃苷，且陰性樣品無干擾。見圖1。

圖1 六味能消制劑薄層色譜圖-365 nm（默克板，26 ℃，40%）Fig. 1 TLC chromatograms of Liuwei Nengxiao preparationsunder 365 nm（Merck，26 ℃，40%）

2.1.7 TLC 考察

2.1.7.1 展開劑的選擇 本實(shí)驗(yàn)共考察了2 種展開劑，展開劑1 為甲苯-甲酸乙酯-丙酮-甲醇-甲酸（30∶5∶5∶20∶0.1），展開劑2 為二氯甲烷-甲醇-甲酸-水（10∶3.5∶0.2∶0.3），結(jié)果用展開劑1 斑點(diǎn)分離較差，相較而言，用第2 種展開劑斑點(diǎn)分離較好，且陰性樣品在與土大黃苷對(duì)照品相應(yīng)的位置上無干擾，見圖2。故將展開劑2 作為本方法的展開劑。

圖2 展開劑的比較（26 ℃，40%）Fig.2 Comparison of developing solvents（26 ℃，40%）

2.1.7.2 點(diǎn)樣量的選擇 吸取土大黃苷對(duì)照品溶液（0.2 mg·mL-1），分別點(diǎn)樣1、2、5、8、10 μL，條帶寬度約為8 mm；吸取供試品溶液（批號(hào)2020030101），分別點(diǎn)樣1、2、5、8、10 μL，條帶寬度約為8 mm，結(jié)果表明，對(duì)照品和供試品點(diǎn)樣量均為10 μL，薄層斑點(diǎn)清晰，分離效果較好。見圖3。

圖3 供試品薄層色譜圖-365 nm（默克板，26 ℃，40%）Fig.3 TLC chromatograms of samples-under 365 nm(Merck，26 ℃，40%)

2.1.7.3 耐用性考察 分別用青島海洋化工廠、德國默克公司的硅膠G 薄層板進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，不同廠家生產(chǎn)的硅膠G 薄層板斑點(diǎn)均顯現(xiàn)清晰。見圖4。

圖4 六味能消制劑薄層色譜圖-365 nm（青島海洋板，24 ℃，35%）Fig.4 TLC chromatograms of Liuwei Nengxiao preparations-under 365 nm (plate: Qingdao Ocean，24 ℃，35%)

2.1.7.4 檢測限 吸取土大黃苷對(duì)照品溶液（0.2 mg·mL-1），分別點(diǎn)樣1、2、5、8、10 μL（即0.2、0.4、1.0、1.6、2.0 μg），條帶寬度約為8 mm；吸取供試品溶液（批號(hào)2020030101），分別點(diǎn)樣1、2、5、8、10 μL（即0.1、0.2、0.5、0.8、1.0 mg），按照2.1.6 項(xiàng)下條件檢視，以人眼可檢視到的最低斑點(diǎn)點(diǎn)樣量計(jì)［8］，得到土大黃苷的檢測限(limit of detection, LOD)為0.2 μg，見圖5。但由于人眼對(duì)于不同顏色的辨識(shí)存在一定差異，不同操作人員可能得出不同的結(jié)果，故在實(shí)際操作中，仍需用HPLC-MS 進(jìn)行進(jìn)一步確證。

圖5 LOD 薄層色譜圖-365 nm（默克板，26 ℃，40%）Fig.5 TLC chromatograms of LOD-under 365 nm(Merck，26 ℃，40%)

2.2 HPLC 法初步確認(rèn)

2.2.1 色譜條件 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱Agilent Extend-C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流動(dòng)相為甲醇-水（30∶70）；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為25 ℃；進(jìn)樣量為10 μL；檢測波長為324 nm（將配制好的土大黃苷對(duì)照品溶液進(jìn)行吸收波長掃描，結(jié)果土大黃苷在（324±2）nm 波長處有最大吸收，故選擇324 nm 為檢測波長）。見圖6。

圖6 土大黃苷的紫外吸收?qǐng)DFig.6 UV absorption spectrum of rhaponticin

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取土大黃苷對(duì)照品18.14 mg，置于100 mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液3 mL，置于50 mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻即得（每1 mL 約含土大黃苷10.66 μg）。

2.2.3 供試品溶液的制備 取2.1.2 項(xiàng)下供試品溶液的備用濾液，即得。

2.2.4 大黃藥材溶液的制備 取大黃對(duì)照藥材、各廠家提供的大黃1 g，按照2.1.3 項(xiàng)下對(duì)照藥材溶液的制備方法制備，即得。

2.2.5 陰性對(duì)照溶液的制備 取2.1.4 項(xiàng)下陰性對(duì)照溶液的備用濾液，即得。

2.2.6 模擬制劑溶液的制備 取2.1.5 項(xiàng)下模擬制劑溶液的備用濾液，即得。

2.2.7 提取溶劑的選擇 分別考察了2 種常用的提取溶劑甲醇、乙醇，取供試品（批號(hào)2020030101），按照2.1.2 項(xiàng)下溶液制備方法制備，注入高效液相色譜儀，結(jié)果顯示，用甲醇提取的供試品色譜峰峰面積為4 021 589，理論塔板數(shù)為8 474；用乙醇提取的供試品峰面積為1 845 996，理論塔板數(shù)為4 480，用甲醇提取的供試品色譜峰峰面積和理論塔板數(shù)均較高，故選擇甲醇作為提取溶劑。

2.2.8 專屬性考察 按照2.2.1 項(xiàng)下色譜條件，分別精密吸取上述溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測得陽性樣品中呈現(xiàn)與土大黃苷對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰，且陰性無干擾。見圖7 至圖10。再用二極管陣列檢測比較相應(yīng)色譜峰在200～400 nm 波長范圍內(nèi)的紫外-可見吸收光譜，測得土大黃苷對(duì)照品與陽性樣品吸收光譜在（324±2） nm 處均有最大吸收，由此可判斷二者為同一物質(zhì)。見圖6、圖11。

圖7 土大黃苷對(duì)照品的HPLC 圖Fig.7 HPLC chromatogram of rhaponticin reference

圖8 大黃對(duì)照藥材的HPLC 圖Fig.8 HPLC chromatogram of Rheum palmatum

圖9 陰性樣品HPLC 圖Fig.9 HPLC chromatogram of negative sample

圖10 陽性樣品的HPLC 圖Fig.10 HPLC chromatogram of positive sample

圖11 陽性樣品的紫外吸收?qǐng)DFig.11 UV absorption spectrum of positive sample

2.2.9 線性考察 精密吸取不同質(zhì)量濃度的土大黃苷對(duì)照品溶液（2.13、4.26、8.53、12.79、17.06、21.32 μg·mL-1）10 μL，分別在2.2.1項(xiàng)下色譜條件下測定，以土大黃苷對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x，μg·mL-1），以峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸，土大黃苷在2.13～21.32 μg·mL-1范圍內(nèi)回歸方程為y=39 904x-747.42（r=0.999 9），表明線性關(guān)系良好。

2.2.10 LOD 取2.2.2 項(xiàng)下的土大黃苷對(duì)照品儲(chǔ)備液，逐步稀釋成85.33 ng·mL-1的對(duì)照品溶液。吸取上述溶液10 μL，注入液相色譜儀，計(jì)算得信噪比為3∶1，確定85.33 ng·mL-1為儀器檢出限，故方法LOD 為4.266 μg·g-1。

2.2.11 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取2.2.2 項(xiàng)下的土大黃苷對(duì)照品（質(zhì)量濃度約為10.66 μg·mL-1），按照2.2.1 項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5 次，測得土大黃苷保留時(shí)間的RSD 值為0.29%，峰面積的RSD 值為0.47%，結(jié)果表明精密度良好。

2.2.12 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一份供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h，按照2.2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定峰面積，測得土大黃苷峰面積的RSD 值為0.31%，表明供試品中土大黃苷在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.13 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一份供試品，精密稱取6 份，按照2.1.2 項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按照2.2.1項(xiàng)下色譜條件測定，測得土大黃苷含量平均值為0.039%，RSD 值為0.16%，表明實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性良好。

2.2.14 加樣回收實(shí)驗(yàn) 取陰性樣品1.0 g，精密稱定，共6 份，分別精密加入質(zhì)量濃度為26.08 μg·mL-1的土大黃苷對(duì)照品溶液50 mL，超聲處理（功率為300 W，頻率為35 kHz）40 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣10 μL，測定，計(jì)算回收率，結(jié)果表明本方法的準(zhǔn)確度良好。見表1。

表1 土大黃苷的加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （n=6）Tab.1 Results of rhaponticin recovery test (n=6)

表2 六味能消制劑中土大黃苷的檢查結(jié)果Tab.2 Results of rhaponticin in Liuwei Nengxiao preparations

2.2.15 耐用性實(shí)驗(yàn) 由于不同生產(chǎn)廠家的高效液相色譜儀和色譜柱存在性能上的差異，為考察方法的可行性及通用性，對(duì)供試品還進(jìn)行了耐用性實(shí)驗(yàn)：①用不同廠家生產(chǎn)的色譜柱；②在不同的儀器上測定。結(jié)果表明耐用性較好。見圖12、圖13。圖12、圖13 分別為Waters e2695-2998 型高效液相色譜儀、Waters X-Bridge C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱所得色譜圖。

圖12 土大黃苷對(duì)照品的HPLC 圖Fig.12 HPLC chromatogram of rhaponticin reference

圖13 陽性樣品的HPLC 圖Fig.13 HPLC chromatogram of positive sample

2.2.16 樣品測定 取六味能消丸（膠囊、片）樣品適量，按照2.1.2 項(xiàng)下方法制成供試品溶液，用2.2.1項(xiàng)下色譜條件測定，結(jié)果在4 家企業(yè)共101 批次樣品中，A 企業(yè)生產(chǎn)的12 個(gè)批次樣品中檢出土大黃苷色譜峰，且紫外吸收光譜一致，呈陽性檢出，該結(jié)果與TLC 檢測結(jié)果一致。其余3 個(gè)企業(yè)樣品中均未檢出土大黃苷色譜峰。

2.3 HPLC-MS 方法驗(yàn)證

2.3.1 色譜條件

Thermo Hypersil GOLD AQ C18（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）；以乙腈（A）-1 mL·L-1甲酸溶液（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫（0～6 min，20% A～44% A）；流速為0.3 mL·min-1；柱溫為35 ℃。

2.3.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源（electrospray Ionization，ESI），離子源溫度為110 ℃；毛細(xì)管溫度為250 ℃；鞘氣流速為20 L·min-1；輔助氣流速為10 L·min-1；噴霧電壓為3 500 V；錐孔電壓為40 V；碰撞能量（collision energy，CE）為30 V；正離子掃描模式，掃描模式分為Full Scan（一級(jí)全掃描）和Product Scan（二級(jí)全掃描）；一級(jí)全掃描質(zhì)量范圍m/z400～500，二級(jí)全掃描質(zhì)量范圍m/z100～300。

2.3.3 對(duì)照品溶液的制備

同2.2.2 項(xiàng)下對(duì)照品溶液制備方法。

2.3.4 供試品溶液的制備

取2.1 項(xiàng)下TLC 和2.2 項(xiàng)下HPLC 法檢出土大黃苷的供試品溶液，即得。

2.3.5 陽性對(duì)照溶液的制備

取2.1 項(xiàng)下TLC 和2.2 項(xiàng)下HPLC 法未檢出土大黃苷的樣品1 g，加入0.2 mg·mL-1土大黃苷甲醇溶液2.5 mL，同2.1.2 項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，取濾液，即得。

2.3.6 陰性對(duì)照溶液的制備

取2.1 項(xiàng)下TLC 和2.2 項(xiàng)下HPLC 法未檢出土大黃苷的供試品溶液，即得。

2.3.7 空白試劑溶液的制備

取甲醇作為空白試劑溶液。

2.3.8 測定條件

按照上述色譜及質(zhì)譜條件，分別精密吸取上述溶液各5 μL，注入液質(zhì)聯(lián)用儀，測定，即得。供試品溶液一級(jí)全掃描（full scan）和二級(jí)全掃描（product scan）總離子流圖中，不得出現(xiàn)與土大黃苷對(duì)照品保留時(shí)間相同的離子峰。若供試品總離子流圖中出現(xiàn)與土大黃苷對(duì)照品保留時(shí)間相同的離子峰，則核對(duì)供試品一、二級(jí)質(zhì)譜圖是否與土大黃苷對(duì)照品一致，如完全一致，則判定檢出土大黃苷。

2.3.9 LC-MS/MS 分析

2.3.9.1 LC-MS/MS 裂解規(guī)律 按照上述色譜及質(zhì)譜條件測定分析，土大黃苷對(duì)應(yīng)的一級(jí)總離子流圖中檢出分子離子峰［M+H］+（m/z=421.2）及［M+Na］+（m/z=443.1），經(jīng)對(duì)［M+H］+（m/z=421.1）準(zhǔn)分子離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜子離子掃描，檢出碎片離子峰［M-glu+H］+（m/z=259.1）及m/z=227.0、199.1、181.1、135.0、107.1，其中m/z=259.1和m/z=199.1 豐度比較高，選定為定性離子對(duì)。

2.3.9.2 LC-MS/MS 測定結(jié)果 一級(jí)全掃描（full scan）：按上述方法測定，土大黃苷對(duì)照品一級(jí)全掃描總離子流圖中在保留時(shí)間為2.5 min 時(shí)檢出分子離子峰［M+H］+（m/z=421.2）；供試品溶液、陽性對(duì)照溶液均檢出與土大黃苷對(duì)照品保留時(shí)間相同的分子離子峰［M+H］+（m/z=421.2）；陰性對(duì)照溶液未檢出與土大黃苷對(duì)照品保留時(shí)間相同的離子峰。見圖14至圖18。

圖14 土大黃苷對(duì)照品的一級(jí)TIC 圖及質(zhì)譜圖Fig.14 The full scan of TIC and mass spectra of rhaponticin reference

圖15 供試品（批號(hào)2020030101）的一級(jí)TIC 圖及質(zhì)譜圖Fig.15 The full scan of TIC and mass spectra of sample (lot number 2020030101)

圖16 陽性對(duì)照溶液的一級(jí)TIC 圖及質(zhì)譜圖Fig.16 The full scan of TIC and mass spectra of positive control

圖17 陰性對(duì)照溶液的一級(jí)TIC 圖Fig.17 The full scan of TIC and mass spectra of negative control

圖18 空白試劑溶液的一級(jí)TIC 圖Fig.18 The full scan of TIC and mass spectra of blank reagent

圖19 土大黃苷對(duì)照品的二級(jí)TIC 圖及質(zhì)譜圖Fig.19 The product scan of TIC and mass spectra of rhaponticin reference

二級(jí)質(zhì)譜（Product Scan）：對(duì)土大黃苷對(duì)照品、供試品、陽性對(duì)照溶液進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，均檢出保留時(shí)間為2.5 min 的分子離子峰，且二級(jí)質(zhì)譜碎片質(zhì)量分?jǐn)?shù)和豐度比基本一致，主要二級(jí)碎片離子均包括［M-glu+H］+（m/z=259.1）及m/z=227.0、199.1、181.1、135.0、107.1。見圖20 至圖22。

圖20 供試品（批號(hào)2020030101）的二級(jí)TIC 圖及質(zhì)譜圖Fig.20 The product scan of TIC and mass spectra of a sample (lot number 2020030101)

圖21 陽性對(duì)照溶液的二級(jí)TIC 圖及質(zhì)譜圖Fig.21 The product scan of TIC and mass spectra of positive control

圖22 土大黃苷對(duì)照品的定性離子掃描TIC 及質(zhì)譜圖Fig.22 The MRM of TIC and mass spectra of rhaponticin reference

定性離子對(duì)選擇掃描（MRM）：對(duì)土大黃苷對(duì)照品、供試品、陽性對(duì)照溶液進(jìn)行定性離子選擇掃描，分子離子峰m/z=421.2，二級(jí)質(zhì)譜碎片離子m/z=259.1和m/z=199.1。結(jié)果均檢出保留時(shí)間為2.5 min 的分子離子峰，且選擇碎片離子豐度比基本一致。見圖23 至圖24。

圖23 供試品（批號(hào)2020030101）的定性離子掃描TIC 及質(zhì)譜圖Fig.23 The MRM of TIC and mass spectra of a sample (lot number 2020030101)

圖24 陽性對(duì)照溶液的定性離子掃描TIC 及質(zhì)譜圖Fig.24 The qualitative ion scan and mass spectra of positive control

2.3.9.3 液質(zhì)聯(lián)用法驗(yàn)證的結(jié)果 根據(jù)建立的液質(zhì)聯(lián)用方法，12 個(gè)批次的供試品全部檢出與土大黃苷對(duì)照品保留時(shí)間相同的分子離子峰，一、二級(jí)質(zhì)譜圖基本一致，碎片離子質(zhì)量分?jǐn)?shù)和豐度比基本一致；同時(shí)用定性離子對(duì)選擇掃描進(jìn)一步驗(yàn)證，也均檢出相應(yīng)的分子離子峰，呈陽性檢出，結(jié)果與薄層色譜、液相色譜結(jié)果一致。

對(duì)此次六味能消制劑抽檢涉及的各廠家提供的大黃藥材用了相同的液質(zhì)方法進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果各廠家的大黃藥材中均未檢出與土大黃苷相應(yīng)的離子峰。

3 討論

3.1 樣品檢測結(jié)果分析

用所建立的方法對(duì)4 個(gè)企業(yè)101 批次六味能消丸（膠囊、片）進(jìn)行檢測，其中A 企業(yè)生產(chǎn)的12 批次六味能消丸中檢出土大黃苷。結(jié)果表明，部分企業(yè)在生產(chǎn)六味能消制劑過程中存在大黃藥材未按處方規(guī)范投料的問題，表明A 企業(yè)的大黃藥材質(zhì)量可能存在嚴(yán)重問題。生產(chǎn)企業(yè)一方面可能由于價(jià)格等因素，為追求利益，降低生產(chǎn)成本而使用偽大黃投料；另一方面對(duì)藥材的質(zhì)量重視不夠，未按《中國藥典》或企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)對(duì)購進(jìn)的大黃進(jìn)行全檢，用含土大黃苷的非藥用大黃代替大黃投料。生產(chǎn)企業(yè)在投料中使用非藥用大黃投料，勢必將造成質(zhì)量和安全風(fēng)險(xiǎn)，影響藥品療效。

3.2 意見與建議

由于現(xiàn)行六味能消丸（膠囊、片）標(biāo)準(zhǔn)中無針對(duì)大黃中土大黃苷的薄層鑒別或含量測定等檢驗(yàn)項(xiàng)目，造成部分生產(chǎn)企業(yè)對(duì)大黃藥材質(zhì)量不夠重視，故存在以次充好的可能性。因此，建議在現(xiàn)行六味能消丸（膠囊、片）的標(biāo)準(zhǔn)中增加土大黃苷檢查項(xiàng)，以保證該品種生產(chǎn)規(guī)范、質(zhì)量可控，防止有問題的藥品流入市場。本研究建立的方法已申報(bào)國家藥品監(jiān)督管理局，擬作為六味能消丸（膠囊、片）中土大黃苷檢查項(xiàng)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法。