周昕萌 廖青青 謝娜 黃燦華，3 孫曉東 張媛媛，2

作者單位：610041 成都 1.四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院；2.四川大學(xué)華西藥學(xué)院；3.四川大學(xué)華西醫(yī)院生物治療國家重點實驗室

腫瘤蛋白生物標(biāo)志物領(lǐng)域2023 年共發(fā)表研究論文5 783篇，與2022年的8 325篇和2021年的11 062篇相比，數(shù)量呈下降趨勢，表明腫瘤蛋白生物標(biāo)志物研究進(jìn)入科技文獻(xiàn)增長第四階段，逐漸趨于穩(wěn)定，也表明需要尋找新的前沿?zé)狳c來推動領(lǐng)域的發(fā)展。這些研究論文收錄于較為重要期刊（JCR 影響因子＞10）的數(shù)量為415 篇，占比7.18%，相比2022 年（5.92%）和2021 年（6.15%）略有增加，表明2023 年的研究成果質(zhì)量有所提升。其中，2023 年取得了3 項突破性進(jìn)展：惡性胰腺囊性腫瘤（pancreatic cystic neoplasm，PCN）的糖蛋白生物標(biāo)志物研究，腺病毒E1B 19 kDa 相互作用蛋白3（adenovirus E1B 19 kDa interacting protein 3，BNIP3）作為多種實體瘤治療預(yù)后標(biāo)志物的研究，以及循環(huán)游離DNA（circulating free DNA，cfDNA）突變和血清蛋白標(biāo)志物組合用于肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）早期篩查的研究。本文按照生物標(biāo)志物的蛋白定位，選取了較重要的、研究內(nèi)容相關(guān)度較高的成果進(jìn)行分類盤點。

1 細(xì)胞膜定位的腫瘤蛋白生物標(biāo)志物

2023年，在針對細(xì)胞膜定位腫瘤蛋白生物標(biāo)志物的研究中，細(xì)胞程序性死亡-配體1（programmed cell death1 ligand 1，PD-L1）、細(xì)胞程序性死亡受體1（programmed cell death protein 1，PD-1）、內(nèi)皮糖蛋白（endoglin，ENG）和分化簇14（cluster of differentiation 14，CD14）在表征腫瘤治療反應(yīng)、預(yù)后等方面的作用取得較大突破（表1）。

表1 細(xì)胞膜定位的腫瘤蛋白生物標(biāo)志物

PD-L1 是一種重要的免疫抑制分子，可結(jié)合PD-1阻止T 細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的免疫殺傷［1］。一項包含24 152 例接受PD-L1/PD-1 檢查點抑制劑治療的非小細(xì)胞肺癌患者的研究顯示，腫瘤組織的PD-L1 表達(dá)和腫瘤突變負(fù)荷（tumor mutational burden，TMB）可用于預(yù)測檢查點抑制劑治療效果，兩者組合的比值比（odds ratio，OR）（OR=0.04）比單獨PD-L1 或TMB 的OR（PD-L1：OR=0.19；TMB：OR=0.37）低［2］。一項研究揭示了PD-L1在HCC中降解的新機制，即細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶5（cyclin-dependent kinase 5，CDK5）介導(dǎo)PD-L1 的T290 磷酸化可促進(jìn)PD-L1 的自噬降解，同時提示了CDK5 抑制劑與PD-L1/PD-1 阻斷劑聯(lián)合治療HCC 的臨床應(yīng)用價值，并將PD-L1 的T290 磷酸化水平作為新的HCC 預(yù)后指標(biāo)［3］。一項表征基底細(xì)胞腫瘤（basal cell carcinomas，BCC）樣本免疫蛋白表達(dá)的研究發(fā)現(xiàn)，PD-1 可作為評估BCC 中PD-1 阻斷藥物對腫瘤消退作用的候選生物標(biāo)志物［4］。另有一項關(guān)于接受抗PD-1 治療的錯配修復(fù)缺陷型（mismatch repair-deficient，MMR-d）原發(fā)性結(jié)直腸癌患者的免疫結(jié)構(gòu)及腫瘤微環(huán)境（tumor microenvironment，TME）的研究，發(fā)現(xiàn)PD-L1+細(xì)胞10 μm 范圍內(nèi)的PD-1+細(xì)胞平均數(shù)量與無進(jìn)展生存期（progression-free survival，PFS）高度相關(guān)，提示PD-1+細(xì)胞到PD-L1+細(xì)胞的接近度可作為預(yù)測MMR-d 結(jié)直腸癌中PD-1 阻斷治療有效性的指標(biāo)［5］。

一項關(guān)于惡性周圍神經(jīng)鞘瘤（malignant peripheral nerve sheath tumors，MPNST）的研究發(fā)現(xiàn)，ENG 在MPNST 組織和患者血漿中高表達(dá)，應(yīng)用ENG 單克隆抗體可有效抑制腫瘤生長和血管生成證實了ENG 在促進(jìn)MPNST 進(jìn)展中的關(guān)鍵作用，表明其可能成為MPNST一種新的生物標(biāo)志物和潛在的治療靶點［6］。

在一項關(guān)于食管鱗狀細(xì)胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）診斷生物標(biāo)志物的研究中，研究人員利用超快速細(xì)胞外小泡分離方法提取高純度細(xì)胞外小泡（extracellular vesicles，EVs），鑒定出膜蛋白EV-CD14是ESCC中顯著差異表達(dá)的蛋白。該研究還采用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測了60 例臨床樣本中的循環(huán)EV-CD14 水平，實現(xiàn)了ESCC 的快速篩查和檢測（敏感度為95%，特異度為90%），表明EV-CD14 可作為ESCC的潛在診斷生物標(biāo)志物［7］。

2 細(xì)胞質(zhì)定位的腫瘤蛋白生物標(biāo)志物

2023年，在細(xì)胞質(zhì)定位的腫瘤蛋白生物標(biāo)志物研究中，發(fā)現(xiàn)了波形蛋白（vimentin）、tRNA 甲基轉(zhuǎn)移酶61B（tRNA methyltransferase 61B，TRMT61B）、開放閱讀框1 蛋白（open reading frame 1 protein，ORF1p）、磷脂酰肌醇-聚糖生物合成L類（phosphatidylinositol-glycan biosynthesis class L，PIGL）和BNIP3 在腫瘤診斷、復(fù)發(fā)預(yù)測及表征預(yù)后等方面的作用（表2）。其中，針對vimentin在原發(fā)性FIGO ⅠB期子宮內(nèi)膜癌中的研究結(jié)果顛覆了其與侵襲性癌癥預(yù)后呈負(fù)相關(guān)的既往認(rèn)知。發(fā)表在EBioMedicine期刊的一項針對原發(fā)性FIGO ⅠB期子宮內(nèi)膜癌的研究中，提出低vimentin 水平與較差的無復(fù)發(fā)生存率相關(guān)［8］。該研究發(fā)現(xiàn)在非復(fù)發(fā)性腫瘤的上皮細(xì)胞中vimentin 高表達(dá)，vimentin 作為術(shù)前篩查指標(biāo)可有效識別具有復(fù)發(fā)風(fēng)險的患者并指導(dǎo)完善治療策略。但既往也有研究表明，vimentin 與侵襲性癌癥患者不良預(yù)后有關(guān)［9］。因此，vimentin 在不同癌種中的作用可能不一致，值得繼續(xù)深入探索。

表2 細(xì)胞質(zhì)定位的腫瘤蛋白生物標(biāo)志物

長散布元件-1（long interspersed element-1，LINE-1）是一種蛋白質(zhì)編碼轉(zhuǎn)座元件，主要編碼開放閱讀框1蛋白（open reading frame 1 protein，ORF1p）和ORF2p［12-13］。在人類多種癌癥中LINE-1 ORF1p 過表達(dá)［12］。2023年，一項研究揭示了循環(huán)LINE-1 ORF1p 是一種多癌蛋白生物標(biāo)志物，在多種胃腸道腫瘤、婦科惡性腫瘤甚至高危前體病變組織中普遍表達(dá)［14］。該研究應(yīng)用自主開發(fā)的個體計數(shù)平臺的分子珠信號放大技術(shù)，將血漿中ORF1p 的可檢測濃度擴展至飛摩爾級別。循環(huán)LINE-1 ORF1p 與卵巢癌生物標(biāo)志物碳水化合物抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）、人附睪蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）聯(lián)合的多變量模型比僅聯(lián)合使用CA125 和HE4（在98%特異度下靈敏度分別為91%和59%）顯示出更高的診斷性能，這賦予了循環(huán)LINE-1 ORF1p 作為檢測指標(biāo)的應(yīng)用前景［14］。

目前HCC的系統(tǒng)性治療已經(jīng)取得了顯著進(jìn)展，但是其療效在晚期HCC患者中仍表現(xiàn)出高度異質(zhì)性［15］。YU 等［16］研究探討了臨床上適合樂伐替尼（Lenvatinib）和PD-1阻斷劑聯(lián)合治療的HCC患者的分子表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)相比正常組織，腫瘤組織中總磷脂酰肌醇-聚糖生物合成L 類（phosphatidylinositol-glycan biosynthesis class L，PIGL）水平以及核定位水平顯著降低。該研究還顯示，樂伐替尼治療后具有較低水平Y(jié)81 處磷酸化的PIGL 的患者對隨后PD-1 阻斷劑治療更加敏感，且樂伐替尼通過抑制PIGL-Y81 的磷酸化促進(jìn)其入核，降低趨化因子配體2（chemokine ligand 2，CCL2）和CCL20 的表達(dá)，從而抑制腫瘤免疫微環(huán)境的重塑以及腫瘤細(xì)胞對免疫檢查點抑制劑（immune checkpoint inhibitor，ICI）作用的逃逸。因此，樂伐替尼治療后的PIGL-Y81磷酸化水平可能作為評估PD-1/PD-L1阻斷治療有效性的潛在生物標(biāo)志物。

BNip3 是一種受缺氧調(diào)節(jié)的關(guān)鍵線粒體自噬受體，其缺失表現(xiàn)出的線粒體自噬抑制促進(jìn)了原發(fā)性乳腺腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移［17］。然而，在黑色素瘤細(xì)胞中，BNIP3的缺失阻礙了缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）調(diào)控的糖酵解過程，從而抑制腫瘤生長［18］。這說明BNIP3在腫瘤進(jìn)展及治療中的具體作用機制仍不確定。最近，一項合作研究［19］發(fā)現(xiàn)，BNIP3與包括乳腺浸潤性癌（breast invasive cancer，BRCA）在內(nèi)的4種癌癥的不良預(yù)后顯著相關(guān)（PBRCA=0.017），提示BNIP3 可作為一種潛在的臨床治療預(yù)后標(biāo)志物。該研究還采用基因集富集分析技術(shù)，鑒定出BNIP3 相互作用蛋白——組蛋白去乙酰化酶（histone deacetylases，HDACs）以及多種相關(guān)信號通路（如ncRNA 3′端加工），為進(jìn)一步探究靶向BNIP3 的腫瘤免疫治療新方法提供理論基礎(chǔ)。由于HDACs 在不同刺激下可介導(dǎo)不同的生物學(xué)過程，這在一定程度上解釋了BNIP3 在不同癌種中對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移發(fā)揮不同作用［19］。

3 細(xì)胞核定位的腫瘤蛋白生物標(biāo)志物

位于細(xì)胞核的去乙?；?（sirtuin 1，SIRT1）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子p21、組蛋白賴氨酸三甲基轉(zhuǎn)移酶2（SET domain containing 2，SETD2）以及剪接因子3b亞基4（splicing factor 3b subunit 4，SF3B4）作為腫瘤生物標(biāo)志物的研究在2023年取得了顯著進(jìn)展（表3）。

表3 細(xì)胞核定位的相關(guān)腫瘤蛋白生物標(biāo)志物

細(xì)胞周期G2 檢驗點激酶WEE1（WEE1 G2 checkpoint kinase）通過磷酸化CDK1/2 的Tyr15 位點引起細(xì)胞周期停滯［20］。目前靶向WEE1 已成為一種有前途的抗癌策略。選擇性WEE1 抑制劑MK-1775的治療效果正在多個臨床試驗中進(jìn)行評估，但目前仍缺乏用于預(yù)測治療反應(yīng)的生物標(biāo)志物。一項研究表明，SIRT1表達(dá)水平是MK-1775 抗腫瘤敏感性的關(guān)鍵決定因素［21］。該研究分析了包含1 001 種人類癌細(xì)胞系的藥物基因組學(xué)數(shù)據(jù)集，發(fā)現(xiàn)SIRT1 表達(dá)與MK-1775 的半抑制濃度呈負(fù)相關(guān)（P＜0.001），提出SIRT1可作為預(yù)測WEE1抑制劑抗腫瘤敏感性的潛在生物標(biāo)志物［21］。

p21 是一種細(xì)胞周期調(diào)控蛋白，主要通過抑制細(xì)胞周期進(jìn)程阻礙細(xì)胞生長，從而發(fā)揮抗腫瘤作用［22］。最近一項研究發(fā)現(xiàn)，p21 可利用短期禁食加強化療的有效性［23］。該研究發(fā)現(xiàn)，在禁食狀態(tài)下，結(jié)腸癌細(xì)胞對奧沙利鉑的敏感性增強，同時非腫瘤細(xì)胞在化療毒性作用中受到保護(hù)，而p21 的正常表達(dá)增強了禁食與化療組合治療對腫瘤細(xì)胞的殺傷力以及對正常細(xì)胞的保護(hù)作用。因此，p21 可以作為一個潛在的腫瘤標(biāo)志物用于確定增強化療有效性的安全干預(yù)措施。

SETD2 是唯一催化組蛋白H3 在賴氨酸36 位點三甲基化的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶，在DNA 修復(fù)和腫瘤發(fā)生等多個生物學(xué)過程中起到關(guān)鍵作用。最近有研究顯示，腫瘤細(xì)胞中SETD2的失活可增強ICIs治療敏感性，攜帶SETD2突變的患者在接受ICIs治療時展現(xiàn)出更高的總體生存（overall survival，OS）率，表明SETD2 突變可作為評估ICIs 治療有效性的腫瘤生物標(biāo)志物，并有助于篩選ICIs治療的合適人群［24］。

SF3B4參與細(xì)胞周期調(diào)控和免疫缺陷等生物學(xué)過程，并與多種癌癥的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［25］。一項研究探討了HCC 的TME 中SF3B4 與免疫細(xì)胞之間的關(guān)聯(lián)［26］。該研究分析了HCC 患者的單細(xì)胞RNA測序數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)SF3B4在髓系衍生抑制性細(xì)胞中的表達(dá)明顯升高，并與HCC患者的不良預(yù)后有關(guān)；與健康個體和肝硬化患者相比，HCC患者血清EV-SF3B4水平顯著升高，其對早期HCC的診斷準(zhǔn)確性優(yōu)于甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP），表明EV-SF3B4 有潛力成為HCC新的非侵入性診斷生物標(biāo)志物，并可用于指導(dǎo)臨床預(yù)測預(yù)后。

義7-6塊直井長縫日均產(chǎn)液量為30.3t，日均產(chǎn)油量為18.8t；常規(guī)壓裂日均產(chǎn)油量為12.9t；直井長縫壓裂日均產(chǎn)油量為常規(guī)壓裂日均產(chǎn)油量的1.92倍。

4 分泌型腫瘤蛋白生物標(biāo)志物

在分泌型蛋白的研究方面，C反應(yīng)蛋白（C reactive protein，CRP）、金屬蛋白酶組織抑制劑1（tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP1）、血管生成素樣蛋白4（angiopoietin-like 4，ANGPTL4）、基底膜（basement membrane，BM）蛋白、AFP、血漿前胃泌素釋放肽（plasma progastrin-releasing peptide，ProGRPp）和免疫球蛋白M（immunoglobulin M，IgM）作為腫瘤蛋白生物標(biāo)志物相關(guān)領(lǐng)域在2023年取得較大突破（表4）。

表4 分泌型腫瘤蛋白生物標(biāo)志物

CRP是一種急性時相反應(yīng)蛋白，已被證明與多種癌癥預(yù)后密切相關(guān)［27］。一項首次采用不同癌癥患者組成的兩個大型獨立隊列（發(fā)現(xiàn)隊列n=562，驗證隊列n=474）的多中心回顧性研究數(shù)據(jù)顯示，ICI治療后，前3個月CRP水平持續(xù)正常者的客觀應(yīng)答率最高（41%），同時具有最高的中位OS（24.5個月）以及中位PFS（8.2個月）［28］。這說明ICI治療后的早期CRP動力學(xué)可以作為評估治療反應(yīng)、腫瘤進(jìn)展以及生存率的生物標(biāo)志物。

TIMP1 是一種分泌型蛋白，其在血液中的表達(dá)水平增高與多種癌癥不良預(yù)后有關(guān)［29］。一項研究通過分析小鼠及人肺癌樣本，發(fā)現(xiàn)TIMP1在侵襲性癌癥中特異性高表達(dá)，并與促炎性TME 相關(guān)［30］。該研究還發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中TIMP1 的mRNA 和蛋白表達(dá)水平與生存率呈負(fù)相關(guān)。這說明TIMP1 可能作為肺癌檢測和評估預(yù)后的生物標(biāo)志物。

ANGPTL4 是一種分泌型糖蛋白，在分泌過程中可被裂解為N-末端螺旋卷曲片段（N-terminal coiledcoil fragment，nANGPTL4）和C-末端纖維蛋白原樣結(jié)構(gòu)域（C-terminal fibrinogen-like domain，cANGPTL4）。發(fā)表于JExpMed的一項研究通過追蹤腫瘤患者的ANGPTL4 及其裂解片段，發(fā)現(xiàn)全長ANGPTL4 和cANGPTL4 主要位于腫瘤組織中并與腫瘤進(jìn)展呈正相關(guān)，而nANGPTL4 存在于體循環(huán)中并抑制腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移［31］。該研究強調(diào)了ANGPTL4及其裂解片段對腫瘤調(diào)控的空間特異性，并提出nANGPTL4 可作為一種新的評估腫瘤進(jìn)展的生物標(biāo)志物。

BM 蛋白作為細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）的重要組成之一，通過控制細(xì)胞生長和遷移，限制腫瘤侵襲和擴散。一項關(guān)于叢狀神經(jīng)纖維瘤（plexiform neurofibroma，pNF）ECM 動力學(xué)特征的研究發(fā)現(xiàn)，BM蛋白可作為疾病診斷和評估治療反應(yīng)的生物標(biāo)志物，pNF 中過表達(dá)的轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）通過促進(jìn)施萬細(xì)胞（Schwann cell）產(chǎn)生和沉積BM 蛋白調(diào)控ECM 重塑，提出靶向TGF-β1或許是pNF潛在的有效治療策略［32］。

AFP是常用的HCC診斷和預(yù)后評估生物標(biāo)志物，在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡以及免疫抑制中發(fā)揮作用［33］。最近一項研究利用單細(xì)胞能量代謝分析翻譯抑制等技術(shù)發(fā)現(xiàn)了AFP 在HCC 中拮抗先天免疫反應(yīng)的新機制［34］。該研究顯示，與臍帶血來源的正常AFP 相比，腫瘤來源的AFP能夠結(jié)合更多的多不飽和脂肪酸，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝途徑抑制樹突狀細(xì)胞功能，這為HCC，特別是AFP 高表達(dá)HCC 患者開發(fā)ICI 聯(lián)合治療手段提供了依據(jù)。

神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的通用生物標(biāo)志物嗜鉻粒蛋白A（chromogranin A，CgA）在肺類癌（lung carcinoids，LCs）中的低特異度和低靈敏度使其臨床有效性受到極大限制［35-36］。一項研究探究了ProGRPp 能否作為優(yōu)于血漿CgA（plasma CGA，CGAp）的LCs 生物標(biāo)志物，結(jié)果顯示，ProGRPp 在區(qū)分LCs 伴活動性疾病與良性肺部疾病的特異度優(yōu)于CGAp（96.2%vs73.3%），而且在治療過程中ProGRPp 的水平變化能夠反映疾病進(jìn)程，但CGAp 無法預(yù)測治療反應(yīng)，因此提出ProGRPp 是優(yōu)于CGAp 的LCs 新興生物標(biāo)志物，其在診斷和監(jiān)測中均具有潛在的臨床應(yīng)用價值［37］。

眼附屬器結(jié)外邊緣區(qū)淋巴瘤（ocular adnexal extranodal marginal zone lymphoma，OA-EMZL）是EMZL 的常見亞型，通常預(yù)后較好，但由于其與其他眼眶疾病具有相似的臨床特征，鑒別診斷較為困難［38-39］。最近在一項關(guān)于鑒別用于指導(dǎo)OA-EMZL術(shù)前決策的生物標(biāo)志物研究中發(fā)現(xiàn)編碼IgM重鏈恒定區(qū)的免疫球蛋白重鏈μ是與EMZL 相關(guān)性最強的差異表達(dá)基因［40］。該研究顯示，相比病例對照組，IgM 在診斷EMZL 方面顯示出高于其他免疫球蛋白的診斷潛力，曲線下面積（area under the curve，AUC）為0.81。為增加臨床實用性，該研究還基于限制性立方曲線和接受者操作特性曲線分析所得的IgM 診斷臨界值建立了初步EMZL診斷模型，也發(fā)現(xiàn)其可作為OA-EMZL 有潛力的實用術(shù)前診斷方法。

5 腫瘤蛋白生物標(biāo)志物組合

腫瘤蛋白生物標(biāo)志物的一系列研究主要集中于非侵入性的血液生物標(biāo)志物聯(lián)合診斷方法，這方面的成果占比大，影響力大，熱點問題集中于HCC 的早期檢測（表5）。

表5 腫瘤蛋白生物標(biāo)志物組合

原發(fā)性硬化性膽管炎（primary sclerosing cholangitis，PSC）患者具有較高的膽管癌（cholangiocarcinoma，CCA）患病風(fēng)險，對其進(jìn)行早期CCA 風(fēng)險監(jiān)測有助于降低死亡率［41］。一項國際多中心回顧性研究確定了針對CCA 相對全面的包括預(yù)測和診斷在內(nèi)的不同EVs 蛋白生物標(biāo)志物組合［42］。該研究共納入56 例健康個體和204例包含5種不同疾病類型或階段的患者血清樣本，隨訪時間長達(dá)5 年，提出血清CRP/纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）/鐵蛋白輕鏈蛋白（ferritin light chain protein，F(xiàn)RIL）組合可用于伴發(fā)性PSC-CCA 的早期診斷（訓(xùn)練集：AUC=0.856；測試集：AUC=0.907），而CRP/FIB/FRIL/多聚免疫球蛋白受體（polymeric immunoglobulin receptor，PIGR）組合在預(yù)測PSC 發(fā)展為CCA 方面比傳統(tǒng)生物標(biāo)志物CA19-9 顯示出更高的價值（CRP/FIB/FRIL/PIGR：OR=24.5；CA19-9：OR=2.2）［42］。

AFP是HCC患者肝移植（liver transplant，LT）后復(fù)發(fā)的重要預(yù)測標(biāo)志物，其水平超過1 000 ng/mL提示術(shù)后有高復(fù)發(fā)風(fēng)險［43］。但是，即使AFP≤1 000 ng/mL，仍有接近20%的患者在LT 后5 年內(nèi)出現(xiàn)HCC 復(fù)發(fā)［44］。一項關(guān)于評估預(yù)測LT 術(shù)后復(fù)發(fā)情況的生物標(biāo)志物研究，通過前瞻性研究證明了甲胎蛋白異質(zhì)體3（AFP bound to Lens culinaris agglutinin，AFP-L3）和去γ-羧基凝血酶原（des-gamma-carboxyprothrombin，DCP）在預(yù)測早期HCC 復(fù)發(fā)的表現(xiàn)優(yōu)于AFP［45］。該研究顯示，AFP-L3≥15%及DCP≥7.5 ng/mL 的雙陽性標(biāo)準(zhǔn)不僅具有更強的預(yù)測能力，而且顯著降低了單用任一生物標(biāo)志物所引起的高假陽性率。因此，該研究將AFP-L3≥15%及DCP≥7.5 ng/mL 的雙陽性指標(biāo)作為預(yù)測LT 后HCC復(fù)發(fā)的強有力生物標(biāo)志物組合。

HCC 的早期識別能顯著提高其治療效果并改善患者預(yù)后［46］。一項關(guān)于早期HCC診斷方法的大規(guī)模、多中心、回顧性3期研究，將與HCC相關(guān)的3個cfDNA突變位點和AFP、AFP-L3 以及DCP 組合形成HCC 聯(lián)合診斷方法（以下簡稱為“聯(lián)合方法”），發(fā)現(xiàn)其區(qū)分HCC 和肝硬化的準(zhǔn)確性明顯優(yōu)于AFP（聯(lián)合方法：AUC=0.86；AFP：AUC=0.72）［47］。該研究還發(fā)現(xiàn)，對于BCLC 分期分別為0 期和A 期的HCC 患者，聯(lián)合方法仍然具有相對較高的準(zhǔn)確性（分別為60.00% 和83.33%）。這說明在HCC 非侵入性診斷中，聯(lián)合方法可作為HCC 尤其是早期HCC 的診斷標(biāo)志物組合，有助于降低傳統(tǒng)檢測方法的漏檢率。

最近一項合作研究開發(fā)了一種新的HCC 早期診斷組合（P4組合），該組合包括4種血清蛋白生物標(biāo)志物，即透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白2（hyaluronan binding protein 2，HABP2）、CD163、AFP 和PIVKA-Ⅱ［48］。該研究顯示，P4 組合在診斷HCC 方面具有高于傳統(tǒng)生物標(biāo)志物AFP、PIVKA-Ⅱ以及AFP+PIVKA-Ⅱ的準(zhǔn)確性（HCC/肝硬化：AUC=0.979；HCC/健康人群：AUC=0.992），尤其是在HCC 早期階段（如TNMⅠ期、BCLC 0-A期和CNLCⅠ期），P4組合的診斷敏感度顯著高于AFP+PIVKA-Ⅱ。此外，P4 組合還能有效預(yù)測肝硬化向HCC 轉(zhuǎn)化（AUC=0.890），并且早于影像學(xué)診斷3.6～20.1 個月（中位時間為11.4 個月）［48］。這說明P4 組合可作為HCC 特別是早期HCC 的診斷血清生物標(biāo)志物組合，也用于HCC高危人群的篩查。

另一項回顧性Ⅱ期研究創(chuàng)新性地開發(fā)出了一種HCC EVs表面蛋白檢測方法，其可用于區(qū)分早期HCC和高危肝硬化［49］。該方法基于4種HCC EVs特異性標(biāo)志物，即上皮細(xì)胞黏附分子（epithelial cellular adhesion molecule，EpCAM）、葡聚糖3 蛋白（glypican 3 protein，GPC3）、CD147 和ASGPR1，主要對血漿樣本中的HCC EVs進(jìn)行亞群分析定量，其中將與HCC EVs高度相關(guān)的三個亞群（EpCAM+CD63+、GPC3+CD63+、CD147+CD63+）整合形成HCC EVs ECG 評分，結(jié)果顯示，其在區(qū)分早期HCC 與肝硬化方面具有較高準(zhǔn)確性（訓(xùn)練隊列：AUC=0.95；驗證隊列：AUC=0.93），且優(yōu)于AFP（AUC：0.94vs0.79）。因此認(rèn)為，HCC EVs ECG 評分可作為HCC 早期篩查的有效生物標(biāo)志物，有助于識別可治愈的HCC患者。

PCN 是胰腺癌的前驅(qū)病變，早期識別惡性PCN 有助于改善患者預(yù)后［50］。最近在SignalTransductTarget Ther雜志上發(fā)表了一項關(guān)于篩選具有準(zhǔn)確鑒別惡性PCN 特性的囊腫液糖蛋白生物標(biāo)志物研究［51］。該研究針對兩個獨立隊列共計46 例不同惡性程度PCN 患者的胰腺囊腫液樣本，分別進(jìn)行基于質(zhì)譜的N-糖蛋白組學(xué)分析和基于平行監(jiān)測反應(yīng)的靶向糖蛋白質(zhì)組學(xué)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)相比傳統(tǒng)蛋白標(biāo)志物，N-糖基化的ATP6V0A4（糖型：Asn-367，H6N4F0S0）、CEACAM5（糖型：Asn-197，H5N4F0S0）以及PHKB（糖型：Asn-935，H5N2F0S0；Asn-935，H4N4F0S0；Asn-935，H5N4F0S0）展現(xiàn)出區(qū)分惡性PCN 的高度準(zhǔn)確性。因此認(rèn)為，以上3 種蛋白的5 種糖型可作為識別惡性PCN 的潛在囊腫液生物標(biāo)志物，并提出針對其的單克隆抗體具有治療PCN潛力。

6 小結(jié)與展望

由于臨床常用的診斷方法和傳統(tǒng)生物標(biāo)志物大多存在操作復(fù)雜、準(zhǔn)確性差等問題，因此探究新的、更準(zhǔn)確有效的生物標(biāo)志物用于預(yù)測腫瘤發(fā)生、進(jìn)展及預(yù)后已成為腫瘤防治的研究重點之一。本文從細(xì)胞膜定位、細(xì)胞質(zhì)定位、細(xì)胞核定位、分泌型及其組合等方面的腫瘤蛋白生物標(biāo)志物對2023 年發(fā)表的研究成果進(jìn)行總結(jié)盤點。

在惡性PCN的囊腫液生物標(biāo)志物研究中，糖蛋白質(zhì)組學(xué)分析作為一種新的檢測方法具有顯著優(yōu)勢，如相比基因組變異檢測，其對樣本體積需求更?。ǖ椭?0μL），而且特定糖基化過程選擇性發(fā)生在惡性腫瘤中，使糖蛋白生物標(biāo)志物具有更高的準(zhǔn)確性。因此，糖蛋白組學(xué)分析或許是發(fā)現(xiàn)其他癌癥新的生物標(biāo)志物的可靠方法。

展望未來腫瘤蛋白生物標(biāo)志物的研究，以下方面仍需要進(jìn)一步探索：⑴探究可作為生物標(biāo)志物的蛋白在腫瘤進(jìn)展中的特定作用機制，以作為其診斷依據(jù)并用于分析影響其水平的臨床病理因素；⑵在納入更多樣本量、更多癌種的隊列中驗證生物標(biāo)志物的性能，以消除研究中一些因素（如環(huán)境）帶來的系統(tǒng)誤差，尤其需要納入更多良性疾病樣本來檢測生物標(biāo)志物的特異性；⑶進(jìn)一步確定可作為生物標(biāo)志物的蛋白是否存在正常的生理基線水平，以提高其特異性和臨床實用性；⑷對于具有預(yù)測性的蛋白生物標(biāo)志物，進(jìn)行多中心、更大規(guī)模的前瞻性研究來驗證其臨床普適性；⑸進(jìn)一步探究生物標(biāo)志物作為靶向治療靶點的適用性，開發(fā)其靶向治療藥物并驗證抗腫瘤治療效果。隨著研究技術(shù)、檢測手段和生物標(biāo)志物研究的持續(xù)發(fā)展，相信未來會發(fā)掘出更多有潛力的蛋白生物標(biāo)志物用于難以診斷或難治性腫瘤的檢測及臨床治療。